全 文 ：第２４卷第３期 华 夏 医 学 Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．３
２０１１年６月 Ａｃｔａ Ｍｅｄｉｃｉｎａｅ Ｓｉｎｉｃａ
Ｊｕｎ．２０１１
不同采收季节的狗肝菜中多糖含量测定①
傅 鹏１，２②，朱 华１③，邹登峰２，叶 勇３
（１．广西中医学院药学院中药鉴定学教研室，广西 南宁 ５３０００１；
２．桂林医学院药学院生药学教研室，广西 桂林 ５４１００４；
３．广西医科大学药学院，广西 南宁 ５３００２５）
摘要：目的：考察广西产不同采收季节狗肝菜中多糖的含量。方法：采用蒽酮－浓硫酸比色法测定不同
采收季节的狗肝菜中多糖的含量。结果：广西不同采收季节的狗肝菜中多糖含量各不相同，野生品种
狗肝菜以６～８月份产的多糖含量最高，栽培品种狗肝菜以６月份产的为最高。结论：本实验研究可
为广西产狗肝菜质量控制与种植区域划分研究提供科学依据，促进广西民族药资源开发与利用。
关键词：广西产狗肝菜；蒽酮－浓硫酸法；多糖含量
中图分类号：Ｒ９２７．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８－２４０９（２０１１）０３－０３００－０４
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｓｓ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｌｅｃｔｉｎｇ ｓｅａ－
ｓｏｎｓ／ＦＵ Ｐｅｎｇ，ＺＨＵ Ｈｕａ，ＺＯＵ Ｄｅｎｇ－ｆｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．／／Ｇｕａｎｇｘｉ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｎａｎｎｉｎｇ ５３０００１，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｅｓ
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｌｅｃｔｉｎｇ ｓｅａｓｏｎｓ ｏｆ Ｇｕａｎｇｘｉ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｅｓ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ Ａｎｔｈｒｏｎｅ－Ｈ２ＳＯ４ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｇｒｅａｔ ｄｉｆ－
ｆｅｒｅｎｔ ｉｎ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｓｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｌｅｃｔｉｎｇ ｓｅａｓｏｎｓ ｉｎ
Ｇｕａｎｇｘｉ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ ｗｉｌｄ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｅｓ ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｏｌｅｃｔｅｄ
ｉｎ Ｊｕｎｅ、Ｊｕｌｙ ａｎｄ Ａｕｇｕｓｔ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ，ａｓ ｆｏｒ ｐｌａｎｔｉｎｇ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｔｈｅ ｐｄｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
ｃｏｎｔｅｎｔ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｓｔ ｗｈｅｎ ｉｔ ｗａｓ ｃｏｌｅｃｔｅｄ ｉｎ Ｊｕｎｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｂａｓｉｓ
ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｏｒｉｇｉｎ ｏｆ Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｓｓ ｉｎ ｇｕａｎｇｘｉ，ｗｈｉｃｈ
ｃａｎ ｐｒｏｍｏｔｅ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｎｏｒｉｔｉｅｓ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｉｎ Ｇｕａｎｇｘｉ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｓｓ ｉｎ Ｇｕａｎｇｘｉ；Ａｎｔｈｒｏｎｅ－Ｈ２ＳＯ４ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｙ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
狗肝菜为爵床科植物狗肝菜Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
（Ｌ．）Ｎｅｅｓ的全草，其味苦、性寒，具有清热、凉血、利
尿、解毒等功效，临床常用于治疗热病斑疹、便血、溺
血、小便不利、肿毒疔疮等证［１］。在广西南宁、梧州、
百色、桂林、北海等地分布广泛。据文献报道，狗肝菜
主要含有多糖、有机酸、氨基酸等物质［２］。相关研究
发现狗肝菜多糖能使肝损伤动物血清活性显著降低，
显示狗肝菜多糖具有保肝作用［３－４］。笔者采用了蒽
酮－硫酸比色法比较广西不同季节的狗肝菜中多糖的
·００３·
①
②
③
基金资助：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ．３０８６０３９３）和广西自然科学基金青年基金项目（２０１１ｊＢ４００８６）。
作者简介：傅鹏（１９７８－），男，广西博白人，中药学博士，广西中医学院药学院讲师，研究方向为中药品种，品质与资源开发。
通讯作者。
含量，为更好地控制狗肝菜的质量提供了实验依
据［５－１０］。
１ 材料、仪器与试剂
１．１ 药材
实验采用狗肝菜药材均为广西南宁产的爵床科
植物狗肝菜栽培品种和野生品种，经朱华教授鉴定为
爵床科植物狗肝菜Ｄｉｃｌｉｐｔｅｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ（Ｌ．）Ｎｅｓｓ．
的全草。粉碎成粗粉，按中国药典的要求，过５～６号
筛（８０～１００目）。
１．２ 仪器与试剂
紫外－可见分光光度计 （日本岛津公司 ＵＶ－
２４０１ＰＣ）；９５％乙醇（天津市大茂化学试剂厂，批号：
２００８０８１３），无水乙醇（天津市大茂化学试剂厂，批号：
２００９０９１７），氯仿（广东汕头市西陇化工厂，批号：
０９０３０１２），正丁醇（天津市大茂化学试剂厂，批号：
２００９０７２３），乙醚（天津市大茂化学试剂厂，批号：
２００８０９１０），丙酮（成都市科龙试剂化工厂，批号：
２００８１０１８），蒽酮（国药集团化学有限公司，批号：
２００８０５０６），浓硫酸（广东汕头市西陇化工厂，批号：
２００７０９１３）；以上均为分析纯。
２ 实验方法与结果
２．１ 狗肝菜多糖的提取与精制
称取狗肝菜粗粉５０ｇ，置圆底烧瓶中，加石油醚
（６０～９０℃）１００ｍｌ，浸泡２ｈ，回流提取１ｈ，滤过，滤
渣挥干溶媒；以无水乙醇１００ｍｌ回流提取２次，每次
１ｈ，滤过，滤渣置圆底烧瓶中；加蒸馏水１００ｍｌ回流
提取２次，每次２ｈ，合并滤液，浓缩至５０ｍｌ。Ｓｅｖａｇ
法（氯仿∶正丁醇＝４∶１）除蛋白后加９５％乙醇使含
醇８０％，静置过夜，抽滤，滤渣以乙醚、无水乙醇、丙
酮依次洗涤多次，得精制多糖，６０℃烘干备用。
２．２ 溶液的配制
２．２．１ 样品溶液的配制 精密称取广西不同产地样
品１ｇ，置圆底烧瓶中，加石油醚（６０～９０℃）２０ｍｌ，
浸泡２ｈ，回流提取１ｈ，滤过，滤渣挥干溶媒；以无水
乙醇２０ｍｌ回流提取２次，每次１ｈ，滤过，滤渣置圆
底烧瓶中；加蒸馏水１００ｍｌ回流提取２次，每次２ｈ，
合并滤液，然后定容至２００ｍｌ，为样品液。
２．２．２ 标准液的配制 精密称取１０５℃干燥至恒重
的２５０ｍｇ，蒸馏水溶解后定容至１００ｍｌ。精确吸取
此溶液１ｍｌ，置于２５ｍｌ葡萄糖标准品容量瓶中，稀
释至刻度摇匀（含葡萄糖１００μｇ／ｍｌ），备用。
２．２．３ ０．２％蒽酮－浓硫酸溶液的配制 取蒽酮
０．４ｇ，用浓硫酸溶解并定容至２００ｍｌ，置棕色瓶内放
冰箱中备用。
２．３ 最大吸收波长的选定
精密吸取葡萄糖溶液０．５ｍｌ，置１０ｍｌ具塞试管
中，用蒸馏水补充至２ｍｌ。加入４ｍｌ ０．２％蒽酮－浓
硫酸溶液，摇匀，置沸水浴中加热１０ｍｉｎ，取出置冰
水浴中冷却至室温。另以蒸馏水２ｍｌ同法操作，为
空白对照。用分光光度计在５５０～７００ｎｍ波长处测
定吸光度，确定最大吸收波长为６２５ｎｍ。
２．４ 标准曲线的绘制
分别准确吸取标准溶液０．１５，０．３，０．４５，０．６，０．７５，
０．９，１．０５ｍｌ于具塞试管中，用蒸馏水补充至２ｍｌ。以
蒸馏水作空白，每管加入４ｍｌ ０．２％蒽酮－浓硫酸溶液，
摇匀，沸水加热１０ｍｉｎ，取出置冰水浴中冷却至室温。
于６２５ｎｍ处测定吸光度值（Ａ），经计算得回归方程：
Ａ＝０．０４２６Ｃ＋０．００９８，Ｒ２＝０．９９９７。见图１。
图１ 蒽酮－硫酸法葡萄糖的标准曲线
２．５ 方法学考察
２．５．１ 稳定性 取精制多糖溶液２．０ｍｌ，照２．４标
准曲线制备项下方法，采用蒽酮－硫酸比色法测定吸
收度，并分别于０，１０，２０，３０，４０，６０，７０，８０，９０，１００
ｍｉｎ测定，比较两种方法在１００ｍｉｎ内的稳定性，结
果见表１。
表１ 蒽酮－硫酸比色法稳定性实验结果
时间 ０ １０ ２０ ３０ ４０ ５０ ６０ ７０ ８０ ９０ １００
Ａ ０．５３２１ ０．５１４１ ０．５１１４ ０．５０９９ ０．５０８３ ０．５２２７ ０．５０５６ ０．５０４２ ０．５０３１ ０．５０１９ ０．５１１２
·１０３·
第３期 傅 鹏等：不同采收季节的狗肝菜中多糖含量测定 第２４卷
２．５．２ 精密度 取标准品溶液，照２．４标准曲线方
法测定，连续６次，结果见表２。
表２ 蒽酮－硫酸比色法精密度实验结果
次数 １ ２ ３ ４ ５ ６
Ａ ０．５３２８ ０．５３２１ ０．５３１９ ０．５３１８ ０．５３２５ ０．５３２６
２．５．３ 重现性 取同一批药材粉末６份，精密称定，
按样品溶液的配制项下操作，从２００ｍｌ中取０．２５ｍｌ
样品液于具塞试管中，用蒸馏水补充至２ｍｌ。采用
蒽酮－硫酸比色法测定吸收度，计算各份药材的多糖
含量，比较两种方法的数据重现性，结果见表３。
表３ 蒽酮－硫酸比色法重现性实验结果
编号 Ａ Ｄ Ｍ（μｇ） 含量（％） ＲＳＤ（％）
１ ０．５６８４ ４８００ １００３４００ ２５．４５
２ ０．５４６８ ４８００ １００２２００ ２４．５０
３ ０．５３１１ ４８００ １００１３００ ２３．８０ ２．０６
４ ０．４８８２ ４８００ １０００４００ ２１．８７
５ ０．５３９５ ４８００ １００５５００ ２４．０９
６ ０．６２５８ ４８００ １００２６００ ２８．０９
２．５．４ 加样回收率 取狗肝菜粗粉６份，每份约１ｇ，
精密称定，精密加入对照品葡萄糖７０ｍｇ，按样品测定
项下操作，测定吸收度，计算回收率。回收率％＝（测
出量－样品含量）／对照品量×１００％。详见表４。
表４ 蒽酮－硫酸比色法加样回收率实验结果
编号
样品量
（ｍｇ）
对照品
量（ｍｇ）
样品含
量（ｍｇ）
测出量
（ｍｇ）
加样回
收率（％）
平均回
收率（％）
ＲＳＤ
（％）
１ １００３．４ ７０．９２０ ２．３５５ ７４．２７８ １０１．４１
２ １００２．２ ７０．５４０ ２．４２０ ７３．９７９ １０１．４４
３ １００１．３ ７０．５２０ ２．２７５ ７３．８３８ １０１．４８ ９９．５２ ２．１２
４ １０００．４ ７０．２２０ １．８６１ ７０．７２２ ９８．０６
５ １００５．５ ７０．７００ ２．６１８ ７１．４９６ ９７．４２
６ １００２．６ ７０．７６０ ２．８１７ ７１．６７３ ９７．３１
２．６ 不同采收季节的狗肝菜中多糖含量测定
２．６．１ 换算因子的测定 精密称取多糖１０ｍｇ，溶
于２００ｍｌ容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。精密吸取此
溶液２ｍｌ于具塞试管中，按照２．４项下的方法分别
测定吸光度，根据回归方程计算多糖溶液中葡萄糖的
浓度，按下式计算出换算因子ｆ＝Ｗ／（Ｃ·Ｄ）＝
４．０５８。式中，Ｗ 为多糖质量 （μｇ）；Ｃ为样品液中葡
萄糖的浓度（μｇ／ｍｌ）；Ｄ为稀释倍数。
２．６．２ 样品溶液的配制 精密称取南宁产不同季节
的样品１ｇ，置圆底烧瓶中，加石油醚（６０～９０℃）
２０ｍｌ，浸泡２ｈ，回流提取１ｈ，滤过，滤渣挥干溶媒；
以无水乙醇２０ｍｌ回流提取２次，每次１ｈ，滤过，滤
渣置圆底烧瓶中；加蒸馏水１００ｍｌ回流提取２次，每
次２ｈ，合并滤液，然后定容至２００ｍｌ，制成样品液。
２．６．３ 多糖含量的测定 精密吸取各样品溶液
０．５ｍｌ于具塞试管中，按照２．４项下的方法分别测定
吸光度，由回归方程计算样品液中葡萄糖浓度，按公
式：含量（％ ）＝ （Ｃ·Ｄ·ｆ／Ｗ）×１００％，计算各样
品中狗肝菜多糖的含量。其中，Ｃ为样品液中葡萄糖
的浓度；Ｄ为稀释倍数；ｆ为换算因子；Ｗ 为样品质
量（μｇ）。结果见表５。
表５ 不同季节的狗肝菜多糖的含量比较
月份
南宁野
生品多
糖含量
（％）
平均含量
（％）
采集时间
南宁栽
培品多
糖含量
（％）
平均含量
（％）
１７．７１ １１．９７
１ １７．２９ １７．３２±０．３８ ２００９．１．９ １０．６２ １１．２１±０．６９
１６．９５ １１．０３
１３．４３ １０．０４
２ １２．８９ １３．３８±０．４６ ２００９．２．１２ ８．７５ ９．３３±０．６５
１３．８１ ９．２１
１６．７６ １１．２３
３ １５．７７ １６．３３±０．５１ ２００９．３．１６ １０．０６ １０．５０±０．６４
１６．４６ １０．２１
２０．０１ １３．２１
４ １８．４９ １９．２１±０．７６ ２００９．４．１５ １１．８９ １２．６２±０．６７
１９．１２ １２．７５
１９．９６ １６．３３
５ ２１．０８ ２０．２４±０．７４ ２００９．５．１９ １５．５８ １５．９０±０．３９
１９．６９ １５．７９
２１．８６ ２０．７６
６ ２２．９８ ２２．３８±０．５７ ２００９．６．１８ ２０．３２ ２０．３２±０．４４
２２．２９ １９．８９
２５．２３ １９．２６
７ ２４．６８ ２４．７０±０．５２ ２００９．７．９ １８．４２ １９．１５±０．６８
２４．１９ １９．７７
２６．１９ １９．２１
８ ２４．７８ ２５．３５±０．７４ ２００９．８．９ １８．１８ １８．３０±０．８５
２５．０９ １７．５２
２１．７６ １８．２３
９ ２３．０２ ２２．２６±０．６７ ２００８．９．１３ １８．３５ １８．１０±０．３３
２２．０１ １７．７２
２３．９８ １８．１３
１０ ２２．６５ ２３．５６±０．７９ ２００８．１０．５ １６．３６ １７．２０±０．８９
２４．０５ １７．１２
２３．６５ １５．５５
１１ ２１．９５ ２２．８０±０．８５ ２２８．１１．１１ １６．７６ １６．１０±０．６１
２２．８ １５．９９
１９．４６ １３．５６
１２ ２１．０１ ２０．１６±０．７８ ２００８．１２．１６ １２．８８ １３．２３±０．３４
２０．０２ １３．２５
·２０３·
第３期 华 夏 医 学 第２４卷
３ 讨论
从表５可知，南宁产野生狗肝６～８月份多糖含
量最高，平均达２４．１４％，９～１２月份次之，平均在
２２．１９％左右，１月份以后明显下降，与传统夏秋两季
采收相符；最佳采收期确定在其开花前，以叶多、色绿
者为佳。栽培于南宁的狗肝菜花期较早，以６月份的
多糖含量为最高，约２０．３２％，花期过后多糖含量直
线下降；提示狗肝栽培品最佳采收期范围较短，因此，
确定适宜栽培区域狗肝菜最佳采收期并选择其开花
前采收是十分必要的。
参考文献：
［１］国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草（７）［Ｍ］．
上海：上海科学技术出版社，１９９９：４５７－４５８．
［２］江苏新医学院．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海人民出版社，
１９７７：１４２４．
［３］李海燕，王旭深．狗肝菜多糖保肝作用研究［Ｊ］．中药材，
２００６，２９（８）：８３３－８３４．
［４］潘庆登，卢桂香，潘润洁，等．慢性乙型肝炎患者病毒载量
与肝内炎症及纤维化的关系［Ｊ］．广西医学，２０１１，３３（２）：
２０２．
［５］冯小映，周诚，黄恩，等．狗肝菜多糖含量的测定［Ｊ］．中药
材，２００３，２６（９）：６４３－６４４．
［６］孙磊，乔善义，赵毅民．黑骨藤多糖含量测定方法研究
［Ｊ］．中国中药杂志，２００９，３４（１０）：１２４１－１２４４．
［７］钟方晓，任海华，李岩．多糖含量测定方法比较［Ｊ］．时珍
国医国药，２００７，１８（８）：１９１６－１９１７．
［８］徐玉琳，林颖，周诚，等．ＵＶ法测定狗肝菜与红丝线草的
多糖含量［Ｊ］．中药新药与临床药理，２００８，１９（５）：３８７－
３８９．
［９］唐建红，刘川玉，苏涵．车前子不同炮制品多糖含量的测
定［Ｊ］．华夏医学，２００９，２２（３）：４９４－４９６．
［１０］李钟，刘塔斯，杨先国．不同产地与不同采收期玉竹多糖
的含量测定研究［Ｊ］．辽宁中医学院学报，２００４，６（５）：
３５５．
［收稿日期：２０１１－０４－２０］
［责任编辑：高莉丽 英文编辑：郑明慈
櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨櫨
］
作者书写统计学名词及符号须知
根据国家标准中《统计学名词及符号》的有关规定，请作者注意以下规定：样本的算术平均数用珚ｘ
（英小斜）表示，不用珔ｘ（英大写）；标准差用ｓ（英小斜），不用ＳＤ；标准误用ｓ珚ｘ（英小斜），不用ＳＥ或
ＳＥＭ；ｔ检验用ｔ（英小斜），Ｆ检验用Ｆ（英大斜）；卡方检验用χ
２（希小斜），相关系数用ｒ（英小斜）；自
由度用υ（希小斜）；概率用Ｐ（英大斜）；样本数用ｎ（英小斜）。以上符号均用斜体。
（本刊杂志社）
·３０３·
第３期 傅 鹏等：不同采收季节的狗肝菜中多糖含量测定 第２４卷