全 文 ：西北林学院学报 2 9 9 5, 1 0 ( 3 ) : l ~ 7
Jou rn
a l of N
o r t h w e s t F o r e at r y oC ll
e g e
河北杨体细胞抗盐性突变体离体筛选的研究
李周岐 周志华 郭军战 刘西平 毕春霞
(西北林学院林学系 , 7 12 1 0 , 陕西杨陵 ; 第一作者男 , 32 岁 , 讲师 )
摘 要 以 河北杨优树无性 系一年生枝条为外植休诱导愈伤组织 , 建立 了河北杨体细胞
杭盐性 突变休离体筛选 的实验 来统 , 并以 N a CI 为选择剂 , 从未 经诱变处理及 6O oC 下一射
线或 E M S 诱变处理的愈伤组织材料 中 , 通过一 步和 多步选择程序进行 了杭性愈伤组织
的筛选 。 共得到 7 个杭性 变异系 , 并均已分化 出完整植株 。
关键词 河北杨 ; 杭盐性 ; 实验系统 ; 变异 系 ; 离休 筛选
分类号 5 7 2 2 · 3 6
河北杨 (尸妙 ul “ : h o加ie ” 515 H u e t c ho w ) 是我国华北北部和西北大部分地 区的主要造林树
种之一 , 其分布 区也是我国盐渍土分布比较集中的地区之一 〔, , ,培育抗盐河北杨新品种具有
重要的实践意义 。 植物体细胞突变体离体筛选技术的发展和完善 , 为植物改良开辟了一条新
的途径 〔2 , . 为此 , 本研究以河北杨优树无性系一年生枝条为外植体诱导愈伤组织 , 进行了体细
胞抗盐性突变体离体筛选的研究 。
1 材料和方法
1
.
1 供试材料
以河北杨优树 S一 1 31 的无性系后代作为采样植株 。
1
.
2 试验方法
1
.
2
.
1 培养基和培养 条件 脱分化培养基和继代培养基以 M S 为基本培养 基 , 再分化培养
基和生根培养基以 12/ M S 为基本培养基 , 以所选最适继代培养基为扩繁培养基 , 以含不同浓
度 N a CI 的扩繁培养基为选择培养基 。
诱导愈伤组织采 用暗培养和光照培养 , 其它均采用光照培养 , 以 日光灯 为光源 , 照度
3 0 0 0 L x
, 每 日光照 1 2士 l h , 温度 1 5士 1℃ 。
1
.
2
.
2 愈伤组织的诱导和继代 采上述植株一年生枝条 , 用 0 . 1%的 H g 1C 2 消毒 , 以含形成
层的韧皮部为外植体接入脱分化培养基 , 2 d1 时统计出愈伤组织情况 。 将来自光照培养条件
下诱 2 培养基上的愈伤组织接种在不同继代培养基上 , 观察生长情况 。
1
.
2
.
3 愈伤组 织 生长进程的浏定 取 50 块愈伤组织 (4 一 s m m , 、 以下同 ) 称重并接在扩繁培
养基上 , 以后每天定时称重 1次 , 直到第 2 d8 〔 3 , 。
1
.
2
.
4 N a CI 对愈伤组 织存活 率及生长影响的 测 定 取分割后的愈伤组织接在选择培养基
收稿 日期 1 9 9 4一 1 1一 0 8
该研究为 国家 “ 七五 ”攻关项 目
2 西北林学院学报 01 卷
上 , 每天观察愈伤组织的生长状况 , Z ld 时统计存活率和鲜重 。
1
· “ · 5 “ 。 oC卜射线诱变适宜剂贡的确享 扩 繁培养飞州的声伤组织 , 用不 同剂量的“ C oT 一射线照射 , 照射量率为 4 . 3 6 1 0 6 x l0 一 ` C k/ g · s 处理后第 24d 调查存活率及停止生长率并称
重 。 · 1
.
2
.
6 甲墓磺酸乙醋 ( E M )S 诱变运宜剂童的确定 扩繁培养 8d 的愈伤组织 , 用不同浓度的
E M S 分别处理不同时间〔5 ·` , , 处理后第 1 d4 调查存活率并称重 。
1
.
2
.
7 抗性愈伤组织的分 离
1
.
2
.
7
.
1 自发突变 把分割后的愈伤组织接在选择培养基上 , 作为选择一代的开始 。 Z ld 后调
查存活率并选取存活的愈伤组织转移到高一级浓度的选择培养基上 (l . 8%浓度上存活的愈伤
组织继续转到 1 . 8 % )进行第二代选择 。 同法再进行第三 、 四 、五代选择 。 为了剔除嗜性细胞并
进行扩繁 , 每选择两代 , 在无盐培养基上培养一代 . 以在 1 . 8 %选择培养基上稳定存活的块系
作为抗 N a CI 变异系 , 以 L x 表示 。
1
.
2
.
7
.
2 物理诱变 在扩繁培养基上培养 d7 的愈伤组织 , 用 7 . 4 c k/ g 的 `。 co 了一射线进行处
理 , 再培养 7d 后 , 接种在选择培养基上 , 以后的分离过程同自发诱变 .
1
.
2
.
7
.
3 化学诱变 在扩繁培养基上培养 7d 的愈伤组织 , 用 0 . 2 % 、 0 . 2 % 、 0 . 1% ( w / v )的
EM S 分别处理 h3 、 h6 、 1h2 。 再培养 7d 后调查存活率并将存活愈伤组织块转移到含 1 . 8% N a CI
的选择培养基上分离抗性变异系 。
1
.
2
.
8 杭性愈伤组织的扩繁和再分化 在上限培养基上分离的抗 N a CI 变异 系 , 经交替培
养 , 一旦稳定 , 即转入扩繁培养基中扩繁 , 并在无选择压力条件下 同步繁殖亲本愈伤组织系
作为对照系 , 以 W 。表示 。
将变异系及对照系的愈伤组织转移到再分化培养基上诱导不定芽 , 4 周时在相同培养基
上转移一次 , 再过 3 周后调查分化情况 。 当芽苗长到 2~ c3 m 时 , 从基部切下 , 直插于生根培
养基生根 。
2 结果分析
2
.
1 愈伤组织的诱导和继代
接种后第 5d , 光照培养条件下的材料开始出现愈伤组织 , 在暗培养条件下 , 到第 9d 才开
始出现愈伤组织 。 愈伤组织出现的早晚与培养基不同无关 。 培养 Z ld 时的调查情况见表 l 。 由
表可见 ,采用诱 2 培养基 , 在光照条件下诱导愈伤组织 , 不仅愈伤组织出现早 , 诱导率高 , 而
且质量好 , 适于进一步扩繁培养 。
表 1 愈伤组织的诱导情况
T a b l e 1 T h e e ffc r s o f ca ll i jo d u e t io n
编号 培养基组成 培养条件 外植体数 出愈伤组织块数
愈伤组织
质 最
出 愈 率
( % )
M S + 2
.
4 一 D Z m g · L
+ K T Zm g
.
L
一
t
2 3
4 5
黄绿色 、较紧密
浅黄色 、疏松
黄绿色 、 较紧密
1 7
1 5
光暗
M S + B A O
.
3m g
· L 一 I +
N A A O
.
07 m g
,
L
l
+ 2
.
4
一 D () Z m g . L ’ 十 2 . 5 %
S u
e
ro 肥 浅黄色
、疏松
3 期 李周岐等 河北杨体细胞抗盐性突变体离体筛选的研究
愈伤组织在 5种继代培养基上的生长表现由表 2 可以看出 , 在继 2 培养基上愈伤组织生
长速度适中且质量好 。 以后的试验结果也证明 , 在继 2 培养基上继代培养 la 以上的愈伤组织
仍具有较强的分化能力 。 故以此作为扩繁培养基 .… T儿e Z 烹e f念黔竺悠咒艺煞 。 。 ult uer
编号 培 养 基 组 成 培 养 效 果
继 l 生长慢 , 结构紧密 , 黄绿 色
继 2 生长中等 , 结构较紧密 , 黄绿色
继 3 开始周三生长很快
, 结构松散 , 淡黄色第四周有死
亡出现
继 4
M s + 2
.
4一 D Zm g · L 一 ’ + K T Zm g . L 一 ’ + 3% s u e r ose t . 〕
M S + 4B o
.
3 m g
·
L
一 l
+ N A A o
.
o 7m g
.
L
一 1
+ 2
.
4一 t 旧 .
l m g
·
L
一 ’
+ 2
.
5写 S u e or 二
M S + 2
.
4 一 D o . s m g · L 一 ’ + K T o . Zm g . L 一 ’ + s写 S u -
C r O旧吧
M S + B A O
.
3 m g
·
L
一 ’
+ N A A o
.
0 7 m g
·
L 一 ’ + 2
.
5片 S u - 生长最慢 , 结构紧密 、绿 色 . 少数愈伤块分化出根
C r o旧吧
. . . . . . . . . .` 曰. . . .
继 5 M S + B A O
.
3 m g
.
L
一 l
+ N A A O
.
0 5m g
.
L
一 l十 2 . 4一 D O .
Zm g
.
L 一 ’ 十 2 . 5 沁S uc ~
生长慢 、结构紧密 , 黄绿色
2
.
2 愈伤组织的生长进程
在扩繁培养基上 , 培养 28d 内的 50 块愈伤组织每天的总重及相对生长率见附图 。 相对生
长率可用下式计算 。 即 :
相对生长率 - 二鱼五笔黔奥藉巡重2 x l。。%日组— 7又华千月色
ǎ%)铃事州友卑
132095?。541230
O口87月D.勺J怪,UZ,1ùU`ō城b户匀
ǎJ侧滋联烈坦倾澎。山
由曲线可知 , 愈伤组织培养一周后开始进入速
生期 (指数生长期 ) , 三周后进入缓慢生长期 , 整个
生长过程呈较典型的 S 型曲线 。 相对生长率从 2~
6 d 缓慢增大 , 7~ Z o d 内较为平稳 , 2 1一 2 8d 又逐渐
减小 。 在转移后第 d1 相对生长率最大 , 这是由于在
新换培养基上愈伤组织大量吸水的缘故 . 所以在后
面的试验中 , 诱变处理均在转移培养 7~ 1d0 内进
行 , 培养 21 ~ 22d 时转移继代 。
2
.
3 N a CI 对愈伤组织存活率及生长的影响
将愈伤组织接种于含不同浓度 N a CI 的扩繁培
养基上 , 培养 2 d1 时的鲜重 、 存活率及显著性 见表
3
。 由表 3 可知 , N a CI 含量在 0 . 8% 以下时 , 对愈伤
组织存活率几乎无影 响 , N a CI 含量在 0 . 6%以下
0 2 4 6 8 1 0 1 2 14 1 6 1 8 2 0 2 2 2 42 62 83 0
培养天数 ( d)
附图 愈伤组织生长进程及
相对生长率曲线
F ig
.
T h e p r oc es
o f 『 o w t h a n d R G Of ca l lu s
· 一 · 生长进程曲线 一 相对生长率曲线
时 , 对愈伤组织的生长无 明显抑制 。 N a CI 的半致死剂量约为 1 . 0% 。 1 . 6%和 1 . 8 %培养基上
其存活率已无显著差异 , 且存 活的块 系均是从死亡愈伤组织上增生而来 , 而无整块存活的组
织 。 因此 , 将 1 . 6%定为愈伤组织致死剂量 。
西北林学院学报 1 0 卷
么 4 ` ” C叮一射线对愈伤组织生长的
影响
愈伤组织经不 同剂量 的 ` ” o Cy一
射线处理后培养到第 4 2d时的生长情
况见表 4 。 从表 4 可知 , 低剂量的照射
可使愈伤组织鲜重 生长量增加 , 从
7
·
4 C / k g 起 随着照射剂量 的增大鲜
重逐渐减小 。 试验范围内的各种照射
剂量下均未出现愈块的死亡 , 但均能
造成愈块停止生长 , 停止生长率随照
射剂量的增大而提高 。 考虑到既要提
高突变率 , 又不能使各种次级损伤太
表 3 N a a 浓度对愈伤组织存活率及生长最的影响
T a b l e 3 In f lu e n倪 o f N a C I e on ce n t r a t io 们 on su vr iva l
r a t e a n d 『ow t h a m o u n t o f e a ll u s
.l0一A
N a C I (% )
(W / V )
存活块单块平均鲜重 (妇 鲜重为C K 的 % 存活率(% )
存活率差异显著性
ab0 ( C K )
0
。
2
0
。
4
0
。
6
0
.
8
CDBCJUde
e1
。
0
l
。
Z
0
。
2 54
0
。
2 48
0
。
2 5 2
0
。
2 0 8
0
。
1 4 5
0
。
1 3 3
0
.
1 3 1
0
.
0 7 6
0
.
0 9 0
0
.
0 7 3
1 0 0
1 0 0
1 0 0
1 0 0
9 8
.
1
4 6
。
7
2 6
.
7
2 3
。
3
5
.
0
3
。
3
629
1二4000.…,`Où1且厅r自心,二nl0JgQ口8尸舀`01勺,3几L
4
ō卜ùǎ吕…ù.二且1
大 , 决定以造成 48 . 6%停止生长率的 7 . 4 C k/ g作为突变体筛选时的诱变剂量 。
表 4 `。 oC 7一射线对愈伤组织生长的影响
T a b le 4 In n u e n e e of
` o
CO下一 r叮 5 o n 厂o w t h o f e a l l u s
照射最 ( C k/ g ) 0 1 2 · 9 2 5 · 8 3 8· 7 5 1 · 6 6 4 · 5 7 7 · 4 9 0 · 3 10 3 · 2 1 16 · 1 12 9 · o
7 0 块鲜重 ( g ) 4 1 . 7 5 4 . 7 4 8 . 9 4 6 . 9 4 7 . 6 4 2 . 9 3 4 . 8 3 0 . 5 28 . 7 2 1 . 1 18 . 5
鲜重为 C K 的 % 1 0 0 13 1 . 2 11 7 . 3 11 2 . 5 1 1 4 . 1 1 0 2 . 9 8 3 · 5 7 3 · 1 68 . 8 5 0 . 6 4 4 · 4
停止生长块数 0 5 3 7 1 2 2 2 3 4 3 6 3 8 4 2 5 4
停止生长率 (% ) 0 7 . 1 4 . 3 10 . 0 1 7 . 1 3 1 . 4 4 8 . 6 5 1 . 4 54 · 3 6 0 · 0 7 7· 1
.2 5 EM S 对愈伤组织存活率及生长的影响
愈伤组织经不同浓度 EM S 处理不同时间后培养 14 d 时调查结果见表 5 。 由表 5 可知 . , 与
对照相 比 , 在各处理时间下低浓度的 E M S 可使鲜重生长量增加 , 引起存 活率开始降低和造
成百分之百致死的 EM S 浓度随处理时间的增加而降低 。处理 h6 的半致死浓度约为 0 . 2% , 处
理 1h2 的半致死浓度约为 0 . 1写 , 处理 h3 的半致死浓度在 0 . 2%一。 . 4 %之间 。
表 5 E M S 对愈伤组织存活率及生长量的影响
T a b le 5 I
n
f l u e n c e o f E M S
o n s u r v i v a l
r a t e a n d g
r o w t h
a
rn ou
n r o f e a l lu
s
E M S ( % ) ( W / V )处理时间 项目
0 ( C K )
1 0 0
0
.
1 8 8
1 0 0
0
.
1 4 0
10 0
0
.
1 5 5
0
.
0 2
10 0
0
.
19 0
10 0
0
.
16 2
10 0
0
.
17 4
0
.
0 4
10 0
0
。
2 3 3
10 0
0
.
2 1 0
0
.
0 6
1 0 0
0
.
2 0 1
0
.
0 8
10 0
0
.
1 9 7
10 0
0
.
1 5 8
9 0
.
9
0
.
1 6 9
0
.
1 0
1 0 0
0 15 2
9 3
.
9
0
.
13 9
6 0
.
6
0
.
15 0
0
.
2 0
7 8
.
8
0
.
1 3 5
5 7
.
6
0
.
1 1 1
3 6
.
4
0
.
1 2 2
0
。
4 0
2 7
.
0
0
.
0 7 7
0
.
6 0 0
.
8 0 1
.
0 0
0 0 0
0
.
15 5
0 0 0 0
0
.
18 3 0
.
12 8
注 : 项 目 l 为存活率 ( % ) , 项目 2 为存活块单块鲜重 ( g ) 。
.2 6 从未经诱变处理材料 中分离
在这 一选择过程中 , 每一代选择在 1 . 6%的选择培养基上均有存活的愈伤组织块 。但当进
一步转入 1 . 8%的选择培养基时均全部死亡 , 最后未能得到在 1 . 8 %的选择培养基上稳定存
活的变异系 。 选择过程见表 6 。
3 期 李周岐等 河北杨体细胞抗盐性突变体离体筛选的研究
表 6 未经诱变处理材料选择各代的存活率
T ab.e 6 T h e
su 即 i v al r ate o fe ae h e s阮 t; o np s a罗 fr om th e c al l u s wi th noi nd u e i ngtre atm e nt
第一代 第二代 第三代 第四代 字
选择路线 N aC I (% )
(W /V )
存活率
(% )
N
a
C I (写 )
(W /V )
存活率
(% )
NC a I(写 )
(W /V )
存活率
(% )
N aC I (% )
(W /V )
存活率
(写 )
8 2
。
6
2 2
.
9
5 4
。
2
1 2
。
5
1
。
6
1
.
8
3 6 3 1
.
0 1
.
8 0 一 一 一 一
4 1
.
8 2
.
3 1
。
8 0 一 一 一 一
2
.
7从经物理诱变处理材料中分离
在选择过程中 , 从第三 、 四两条选择路线均未能得到在 1 . 8 %的选择培养基上稳定存活的
变异系 。 在第一 、 二两条选择路线上 , 选择四代后均存活 3 块愈伤组织 , 由于在选择二代与选
择三代之间存活愈伤组织块经在无 N a CI 培养基上扩繁后做过一次分割 , 所以 , 每条选择路
线上存活的 3块愈伤组织 , 就有可能在第二代和第一代属于同一块 , 这样其遗传上就很有可
能相同 , 但在遗传上不同的可能性仍然存在 , 为了利用进一步鉴定 , 各 自分别进行扩繁 , 来 自
第一条选择路线的 3 块分别记为 L ; 、 L Z 、 L 3 , 来自第二 条选择路线上的三块分别记为 L ` 、 L 。 、
L
` 。 在无 N a C I培养基上培养一代后各分割成 5块移入含 1 . 8 % N a CI 的选择培养基 , Z l d 时各
_自的存活率为 , L : 10 0% 、 L 2 8 o % 、 L 3 l o o % 、 L ; 1 0 0 % 、 L 5 6 o % 、 L ` 5 0 % 。 可见具有一定的稳定性 ,
所以做为 6 个抗 N a CI 变异系 。 选择过程见表 7 。
表 7 经物理诱变材料选择各代的存活率
T
; :
b l
e 7 T h
e s u r v i v ; `1 r a t e o f ea e h * l e r io n p a * 罗 f o rn r h e e a l l u s w i t h ph y溢e a l j n d u e i n g t er ca t m e n t
第一代 第二代 第三代 第四代
’ 选择路线 N a a ( % ) 存活率 N a CI ( % ) 存活率 N a CI ( % ) ’ 存活率 N a CI ( % ) 存活率
( W / V ) (% ) (W / V ) ( 写 ) (W / V ) (% ) ( W / V ) (% )
1 1
.
2 2 8
.
8 1
.
4 2 7
.
6 1
.
6 2 4
.
6 1
.
8 2 0
.
0
2 1
.
4 20
.
4 1
.
6 4 0
.
9 1
.
8 2 0
.
7 1
.
8 2 5
.
0
3 1
.
6 6
.
8 1
.
8 3 1
.
6 1
。
8 0 一 一
4 1
.
8 4
.
6 1
.
8 0 一 一 一 . 一
么 8 从经化学诱变处理材料中分离
处于指数生长期〔 2〕的愈伤组织经 E M S
处 理 , 培 养 d7 时 的 存 活 率 及 连 续 两代
1
.
8 % N a C I选择的存活情 况见表 8 。
在连续两代用 1 . 8 % N a CI 选择培养基
选择后 , 经 0 . 2 % E M S 、 h3 处理的材料全部
死亡 , 经 0 . 2 % E M S 、 h6 处理的材料存活 3
块 , 经 。 . 1% EM S 、 12 h 处理的材料 存 活 1
块 。 存活的 4 块均生长很慢 , 生长势很差 。
表 8 经化学诱变处理材料选择各代的存活率
T a b】e s 丁 h e s u r v i v a ! r a t e o f e ac h s e lce t i o n
p : ,黔 a罗 f r o m t h e e a l l u s w i t l l e h e m ie a l jn d u e i n g t r ea tm e n t
第一代 第二代
E M S 浓度及
处理时间 接种数
(块 )
存活率
(% )
接种数
(块 )
存活率
(写 )
0
.
2%
,
3 1
、
0
.
2
, 6 }
1
( )
.
1 %
. 1 2 1
1
2 6 1
1 9 3
1 6 9
4
.
6 12
7
.
8 15
1
.
8 3
2 ( )
.
0
3 3
。
3
在无盐培养基上培养两代后 , 来 自经 h6 处理的 3 块愈伤组织各分割为两块 , 来 自经 1h2 处理
的 l 块愈伤组织未进行分割转移到 1 . 8 % N a CI 的选择培养基上 , 2 d1 时 , 来 自经 h6 处理的 3
6西北林学院学报 0 1卷
个块系中有两个块系全部死亡 , 另一个块系死亡 1 块 , 记为 吞 , 做为抗性变异系保留 。 来自经
12 h 处理的 1块虽然存活 , 但生长势很差 , 记为 L . 。 L , 和 L 。 经两代无盐培养后 , 瓜 死亡 。
2
.
9 经诱变处理与未经诱变处理的比较
在筛选植物细胞突变体时 , 对细胞培养物是否需要做诱变处理各说不一 。 一般认为 , 从
经诱变处理的细胞群体中筛选出突变体的频率可以比未经诱变处理的细胞群体高 . 10 ~ 10
倍 `幻 。 从本研究中可以看出 , 诱变处理能明显提高抗 N a CI 变异系选出率 , 提高的培养数由于
从未经诱变处理的材料中未选出抗性变异系而无法计算 .
2
. ’
1。 一步选择和多步选择的比较
从表 6 、 7 可以看出 , 在多步选择程序中随世代推移 , 愈伤组织存活率较其相应未选择细
胞系呈现了逐渐递增的趋势 。 如表 7 中 , 选择一代 L 6% N a CI 上愈伤组织的存活率为 6 . 8% ,
从 1 . 2 % N a CI 开始 , 经过 1 . 4 % 、 O到 1 . 6% N a CI , 愈伤组织存活率提高到 24 . 6写 , 而且 , 从
经物理诱变处理材料中所选出的 6 个变异系均是从初始选择 N a CI 浓度低于致死浓度的两个
多步选择路线中选出的 , 说明多步选择比一步选择及初始选择 N a CI 浓度高于致死浓度的两
步选择 (第 3 条选择路线 )更适合于河北杨抗盐性突变体的筛选 。
2
·
1 1 抗 N a CI 变异系诱导成苗
L
; 、
L
。 及 W 。在 4 种分化培养基上培养 25 d 时 , 分 4 培养基上 L ` 即分化出一个绿芽 . 培养
7 周时 , L ` 在 4 种分化培养基上均 出现绿芽 , 诱导效果见表 9 。 可以看出 , 以分 4 培养基为最
好 。 以后 , 其它 6 个变异系及对照系在分 4 培养基上也均分化出不定芽 。 绿芽在生根培养基
( l / ZM S+ N A A 0 2m g
·
L
一 ’
+ 1
.
5%庶糖 )上生根块 、 生长 良好 , 并均 已移入大田 。
表 9 几种芽分化培养基的诱导效果
T a bl e g T !、 e e f f ec t o f se v e ar l m ed i a fo r d i f fe er n t i a t i o n o n b u d i n d u e t i on
编号 ’ 培养基组成 出芽数 /接种愈伤组织块数
分 1 1 / ZM S + Zea t i n lm g · L 一 ’ + N A A o . o s m g · L ’ + 2% s u e oser 0
.
0 5 6
分 2 1 / ZM S + B A o . 6 m g . L 一 ’ + 2% s u e~ 0
.
0 2 8
分 3 1 / ZM S + Z o t i n o . 3 m g · L 一 ’ + B A o . s m g · L 一 ’ + N A A o . o 4 m g · L 一 ’ + z% s u e r、 e 0 . 1 1 1
分 4 2 / ZM S + z ea t i n 三m g · L 一 ’ + 2 % s u e osr e 0
.
4 4 4
3 结论与讨论
河北杨体细胞抗盐性突变体离体筛选的实验 系统 : 以河北杨一年生枝 条为外植体 , 以
M s + B A o
.
3m g
·
L
一 `
+ N A A O
.
07 m g
·
L
一 `
+ 2
.
4一 D O . Zm g · L 一 ` + 2 . 5%蔗糖为培养基 , 在
光照条件下诱导愈伤组织 。 愈伤组织在培养基 M s + B A o . 3m g · L 一 ’ 十N A A o . 07 m g · L 一 `十
2
.
4 一 D O . l m g · L 一 ` + 2 . 5%蔗糖上进行扩繁和选择 , 每 Z ld 继代一次 。 诱变处理在转移培养 7
一 1 0d 内进行 , 6 o C o了一射 线用 7 7 . 4 C / k g 的剂量 , E M S 处理 6h 用 0 . 2 %的浓度 、 处理 1 2h
用 0 . 1%的浓度 。 以含 1 . 6% N a CI 的选择培养基为上限选择培养基进行突变体分离 。变异体在
培 养 基 l 2/ M S 十 Zea it n l m g · L 一 ` + 2%蔗 糖 上 再 分 化 , 不 定 芽 在 培 养 基 1 2/ M S 十
N A A O
.
02 m g
·
L
’ 十 1 . 5%蔗糖上生根成苗 。
从抗性变异系的分离结果可以看出 , 诱变处理可明显提高抗性变异系选出率 , 多步选择
3期 李周岐等 河北杨体细胞抗盐性突变体离体筛选的研究
优于一步选择 。 抗性变异系虽然经过了多代 N a I C选择培养 , 但仍具有较强的分化能力 , 这就
为进一步进行这项工作提供了很大的有利条件 。
在含致死浓度 N a CI 的选择培养基上 , 存活的愈伤组织是从死亡愈伤组织块上增生而来 ,
说明有个别细胞发生 了变异 , 能 忍耐致死浓度的 N a CI 并通过进一步细胞分裂发展为新 的愈
伤组织 。 当然 , 这种表型变异是遗传变异的结果还是一种生理适应尚需鉴定 。 作者目前正在进
行这方面的工作 。
致谢 本研究是在邱明光 、张公藻 、 翁俊华 、 杨雪彦四位教授指导下完成的 , 在此谨致谢意 。
参 考 文 献
黎立群 . 盐渍 土荃础 知识 . 北京 : 科学出版社 , 1 9 8 9 , 93 ~ 10 5
李周岐 . 高等植物休细胞突变体离体筛选技术及其在林木抗盐育种上的应用 . 陕西林业科技 , 1 9 9 4 , ( 4) : 50 一 5
张 自立 . 俞新大 . 植物细胞和体细胞遗传学技术与原理 . 北京 : 高等教育出版社 , 1 9 9 0 , 191 ~ 2 21
赵茂林 . 组培方法筛选杨树耐碱性盐变异体的研究 . 山西林业科技 , 1 9 89 , “ ) : 19 ~ 2
胡含 . 王恒立 . 植物细胞工程与育种 . 北京 : 北京工业大学出版社 , 19 9。 , 2 09 ~ 2 90
中国科学院植物研究所 . 植物细胞工程应用荃础研究新进展 ( 1 9 8 8) . 北京 : 学术期刊出版社 , 1 9 8 9 , l ~ 5 , 30 ~ 35
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