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树参嫩叶活性成分提取以及对提高獭兔免疫力的试验研究



全 文 :林副产品 Non-timber Forest Products
FOREST SCIENCE AND TECHNOLOGY  47 








 






树参嫩叶活性成分提取以及对提高
獭兔免疫力的试验研究*
陈云奇1,陆志敏2,杨 丽3,王 强3
(1.奉化市林特科技推广总站,浙江 奉化 315500;2.宁波市林业园艺学会,浙江 宁波 315010;
3.浙江大学宁波理工学院,浙江 宁波 315100)
摘要:比较反应釜提取、索氏提取和超声波提取法对树参[Dendropanax dentiger(Harms)Merr.]嫩叶中活性成分的提
取效率,其中超声波提取法获得的提取物中皂苷含量最高为1.85%。不同提取方法获得的提取物经不同月龄的獭兔喂
养试验发现,均能提高獭兔的免疫能力。1月龄獭兔喂服0.1%浓度树参提取物免血清免疫指标改善作用最佳,随着獭
兔月龄的增加,提取物浓度需适当提高。
关键词:树参;Dendropanax dentiger;提取物;提取方法;獭免;免疫力
中图分类号:R284.1        文献标识码:A  文章编号:1671—4938(2017)01—0047—04
DOI:10.13456/j.cnki.lykt.2017.01.014
Active Compounds Extracted from Leaves of Dendropanax dentiger and Study on Boost Immunity for Rex Rabbits
Abstract:Compared with the extraction efficiency of active compounds from leaves of Dendropanax dentiger among reactor,
*宁波市农科教项目:”树参的药理成分分析与栽培技术研究”(2015NK29)。
通讯作者:王强(1970-),教授,从事植物生物提取研究。
解质透出率作用的影响 由图5可以明显看出,XSC
在未干旱处理和干旱处理下对沙拐枣叶片电解质透
出率含量的降低率分别为24.8%和22.47%,而XYC
在两种不同处理下对榆树叶片电解质透出率含量的
降低率分别为33.77%和15.9%;GCHM在未干旱处
理和干旱处理下对刺槐叶片电解质透出率含量的降
低率 分 别 为 13.04% 和 11.05%。而 GSM 则 为
15.22%和8.77%。
2.3.4.3 菌根真菌对不同宿主叶片电解质透出率作
用的影响 菌根真菌对同一生境不同宿主植物电解
质透出率的影响存在差异(图5)。XSC在未干旱处理
和干旱处理下对沙拐枣叶片电解质透出率含量的降
低率分别为24.8%和22.47%,而XYC在两种不同处
理下对榆树叶片电解质透出率含量的降低率分别为
33.77%和15.9%;GCHM在未干旱处理和干旱处理下
对刺槐叶片电解质透出率含量的降低率分别为
13.04%和11.05%,而GSM则为15.22%和8.77%。
3 结论与讨论
接种VA菌根真菌的苗木不论是否干旱胁迫平
均株高、平均根长和叶绿素含量都显著增加,丙二醛
含量、游离脯氨酸和电解质透出率则显著降低,对于4
种抗旱指标的测定,结果显示接种处理后各种叶绿素
含量高于对照,脯氨酸含量升高,丙二醛含量下降,膜
透性降低,这说明菌根真菌接种增强了植物的抗旱
性,促进渗透调节物质脯氨酸的合成,使得膜质过氧
化产物丙二醛含量降低,对细胞膜损伤减轻,膜透性
降低,维持干旱下植物正常的生理生化活动。
参考文献:
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的影响[J].土壤通报,2001,32(3):99-101.
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sonication and soxhlet extraction techniques,the content of saponin(1.85%)was higher in the extracts by the sonication
technique.The feeding test of Rex rabbits in different month-age was found that the extracts obtained from different ex-
traction methods were al can improve immunity of Rex rabbits.0.1%extracts had the best effect on the serum immuno-
logical indexes of 1-month-old Rex rabbits and the content of extracts could be raised according to the increased month-age
of Rex rabbits.
Key words:Dendropanax dentiger;extracts;extraction techniques;Rex rabbits;immunity
  树参[Dendropanax dentiger (Harms)Merr.]
为五加科(Araliaceae)树参属(Dendropanax)植物,常
绿阔叶林或灌丛,分布于我国长江以南各省区,在海
拔几十米至1 800m都能生长,原料易得,资源丰富,
有着悠久的民间药用历史。《中华本草》记载:树参具
有舒筋活络、壮筋骨、祛风除湿、活血等功效,常用于
风湿性及类风湿性关节炎、臂丛神经炎、瘫痪、偏头
痛、扭伤、痈疖、月经不调、麻痹后遗症等疾病的治疗。
但目前国内外学者还未有对树参嫩叶提取物及其活
性成份对提高动物免疫力的研究报道。
1 试验材料
1.1 供试材料
供试材料于2015年5月中旬采自浙江省奉化市
溪口森林公园内,将树参当年生嫩梢采回实验室,去
除杂质与枝条、风干、粉碎,过45~60目筛,得到树参
叶粉末待用。
1.2 供试仪器与试剂
TCD-50型超声波多功能提取罐(宁波振国制药
设备有限公司)、TSZS-50L双层玻璃反应釜(郑州探
索者实验室设备有限公司)、SXT-02型索氏提取器
(郑州宏朗仪器设备有限公司)。试验中用到的石油
醚、乙酸乙酯、正丁醇、香草醛、冰乙酸、高氯酸等均为
分析纯(购自宁波奥博科学仪器有限公司),纯净水
(杭州娃哈哈集团有限公司)。
1.3 试验动物
实验用1月龄、2月龄、3月龄獭兔由浙江省慈溪
市龙山荣兴养兔场提供。
2 试验方法
2.1 反应釜提取法
取1 000g树参叶粉末装入反应釜中加入蒸馏
水,100℃下机械搅拌提取150~180min,过滤得滤
液,滤渣中再加入蒸馏水,继续提取,2次提取滤液合
并得到树参叶提取液,在压力为450~500Pa的条件
下,浓缩至初始体积的1/10,浓缩液等体积石油醚萃
取3次,每次30~45min;浓缩液用等体积乙酸乙酯
萃取3次,每次30~45min;浓缩液用等体积正丁醇
萃取3次,每次30~45min。正丁醇萃取相在450~
500Pa条件下减压浓缩至近干,105℃下干燥24h,得
到黄色的树参叶活性成分,用香草醛-冰乙酸-高氯
酸显色法测定树参叶活性成份中皂苷含量。
2.2 超声波提取法
将处理好的树参叶粉末1 000g装入超声萃取釜
中加入蒸馏水,于45~50℃气升式搅拌条件下,用超
声波功率为120W,超声频率为32kHz,它激式超声
发声,径向振动柱状换能器,间隔2min超声1次,每
次超声4min,超声提取60~72min,过滤,得到树参
叶提取液。提取液与上述方法一样进行减压浓缩,石
油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,正丁醇萃取相减压浓缩
至近干,105℃下干燥24h,得到黄色树参叶活性成
份,用香草醛-冰乙酸-高氯酸显色法测定树参叶活
性成份中皂苷含量。
2.3 索氏提取法
将处理好的树参叶粉末1 000g装入索氏提取器
中,用质量百分浓度70%~80%乙醇水溶液20~40L
回流提取4~6h,过滤,得到树参叶提取液,减压浓缩
55~70min,至无醇味,用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃
取,减压浓缩正丁醇萃取相至近干,105℃下干燥24
h,得到黄色树参叶活性成份,用香草醛-冰乙酸-高
氯酸显色法测定树参叶活性成份中皂苷含量。
2.4 獭兔提高免疫力试验方法
在浙江省慈溪市龙山荣兴养兔场,用3种不同提
取方法获得的树参提取物,每种提取物按0.1%、
0.2%、0.5%不同浓度配制成水溶液(清水作为对
照),选择1月龄、2月龄、3月龄獭兔各50只,每天1
次,每次10mL,连续喂养15d。结束后第3天抽取獭
兔血液测定血清总蛋白、抗体水平、白蛋白、球蛋白和
血清免疫球蛋白IgG、IgM浓度水平(血清免疫指标测
定委托浙江大学附属儿童医院完成)。
3 试验结果
3.1 不同提取法对有效成分的影响
从表1中可以看出,树参叶中活性成分含量为
2.4%~2.5%,3种提取法结果基本一致。活性成分
中皂苷含量有差别,超声波提取法提取的皂苷含量最
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高,为1.85%,索氏提取法其次为1.56%,反应釜提取
法最低为1.51%。皂甙主要成分为:β-胡萝卜苷、芥
子醛葡萄糖苷、丁香苷、杜仲树脂醇双吡喃葡萄糖苷、
丁香树脂醇双吡喃葡萄糖苷和丁香酚-芸香糖苷。
表1 不同提取法树参有效成分
方法 树参叶粉末/g 树参叶活性成分/g 皂苷/g
反应釜提取法 1 000  24  15.12
超声波提取法 1 000  25  18.54
索氏提取法 1 000  25  15.59
3.2 反应釜提取法获得的树参提取物对獭兔血清免
疫活性水平的影响
反应釜提取法获得的提取物对1月龄、2月龄、3
月龄獭兔血清影响见表2。
表2 反应釜提取树参叶提取物饲喂对獭兔血清样本数据
处理
组别\
参数
血清
总蛋白
(g/L)
抗体
水平
(pg/mL)
白蛋白
(g/L)
球蛋白
(g/L)
IgG
(g/L)
IgM
(g/L)



对照 62.79  170.21  38.26  30.15  3.928 0.223 7
0.1% 67.28  179.64  32.11  34.58  4.357 0.244 8
0.2% 65.93  177.08  34.16  33.29  4.361 0.235 9
0.5% 64.25  176.19  35.22  33.31  4.355 0.236 2



对照 62.18  169.32  38.56  28.54  3.122  0.235
0.1% 65.79  175.36  33.56  32.54  4.228 0.243 7
0.2% 67.13  177.18  34.12  34.19  4.435 0.241 8
0.5% 66.39  173.39  34.27  33.06  4.392  0.392



对照 62.17  171.26  38.16  30.59  3.874 0.224 3
0.1% 65.18  175.17  33.39  32.16  4.228 0.243 1
0.2% 66.25  177.05  34.65  33.25  4.232 0.245 6
0.5% 67.18  178.14  35.12  34.29  4.335 0.247 7
树参活性物质不同浓度比对照均对1月龄獭兔
的血清总蛋白、抗体水平、球蛋白、IgG、IgM 含量有提
高,白蛋白下降,说明树参活性物质对1月龄獭兔的
免疫能力有明显提高。浓度为0.1%对2月龄獭兔血
清总蛋白、抗体水平、球蛋白、IgG、IgM 影响效果最明
显,比 对 照 分 别 提 高 7.15%、5.54%、14.69%、
10.92%和9.43%。随着浓度增加而免疫激活作用下
降。白蛋白下降也是0.1%浓度组为最高(16.07%)。
说明喂服浓度为0.1%组对1月龄獭兔免疫增强效果
最佳。浓度为0.2%组对2月龄獭兔血清总蛋白、抗
体水平、球蛋白、IgM 影响效果最明显,分别提高
7.96%、4.64%、19.80%和 42.06%,0.1%、0.2%、
0.5%不同浓度IgG对提高影响不大。喂服浓度为
0.2%组对2月龄獭兔免疫力增强效果最明显。浓度
0.5%组对3月龄獭兔血清总蛋白、抗体水平、球蛋
白、IgM影响效果最明显,比对照分别提高8.06%、
4.02%、12.10%和10.43%,白蛋白的下降还是0.1%
的浓度效果最好,比对照下降12.5%。喂服浓度为
0.5%组树参提取物对3月龄獭兔免疫增强效果最
好。如果要促进獭兔的白蛋白下降,0.1%浓度组树
参提取物就能达到最佳效果。
3.3 超声波提取法获得的树参提取物对獭兔血清免
疫活性水平的影响
超声波提取法获得的树参提取物对1月龄、2月
龄、3月龄獭兔血清免疫活性水平影响结果见表3。
表3 超声波提取法树参叶提取物饲喂对獭兔血清样本数据
组别\
参数
血清
总蛋白
(g/L)
抗体
水平
(pg/mL)
白蛋白
(g/L)
球蛋白
(g/L)
IgG
(g/L)
IgM
(g/L)



对照 62.79  170.21  38.26  30.15  3.928 0.223 7
0.1% 67.37  177.62  32.59  33.05  4.413 0.243 5
0.2% 66.18  176.05  33.62  32.18  4.321 0.242 6
0.5% 66.05  175.98  35.07  32.16  4.325 0.241 9



对照 62.18  169.32  38.56  28.54  3.122 0.235 2
0.1% 65.59  175.19  32.57  32.16  4.251 0.241 1
0.2% 67.39  177.62  33.55  34.17  4.277 0.251 8
0.5% 65.28  175.64  33.19  33.82  4.265 0.241 6



对照 62.17  171.26  38.16  30.59  3.874 0.224 3
0.1% 65.24  173.38  32.16  33.17  4.224 0.231 0
0.2% 66.62  174.25  33.38  33.24  4.259 0.239 0
0.5% 67.19  175.19  34.58  34.42  4.321 0.243 8
与对照相比,不同浓度超声波树参提取物对1月
龄獭兔血清总蛋白、抗体水平、球蛋白、IgG、IgM 含量
有提高,白蛋白下降。浓度0.1%组对1月龄獭兔血
清总蛋白、抗体水平、球蛋白、IgG、IgM 影响最明显,
分别比对照提高7.29%、4.35%、9.62%、12.35%和
8.85%,随提取物浓度提高免疫改善作用趋下降。浓
度0.1%组对白蛋白降低作用也最为明显(14.82%),
说明0.1%浓度组对1月龄獭兔免疫增强作用最佳。
0.2%浓度组对2月龄獭兔血清总蛋白、抗体水平、球
蛋白、IgG、IgM影响效果最为显著,与对照相比分别
提高 了 8.38%、4.9%、19.73%、37% 和 7.06%。
0.1%浓 度 处 理 组 对 白 蛋 白 的 降 低 作 用 最 强
(15.53%)。0.2%浓度组对2月龄獭兔血清免疫增
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强效果最佳。0.5%浓度组对3月龄獭兔血清总蛋
白、抗体水平、球蛋白、IgM 影响效果最为显著,与对
照相比分别提高了8.07%、2.29%、12.52%、11.54%
和8.69%。0.1%浓度处理组对白蛋白的降低作用最
强(15.72%)。0.5%浓度组对3月龄獭兔血清免疫
增强效果最佳。
3.4 索氏提取法获得的树参提取物对獭兔血清免疫
活性水平的影响
索氏提取法获得的树参提取物对1月龄、2月龄、
3月龄獭兔血清免疫活性水平影响结果见表4。
表4 索氏提取法树参叶提取物饲喂对獭兔血清样本数据
组别\
参数
血清
总蛋白
(g/L)
抗体
水平
(pg/mL)
白蛋白
(g/L)
球蛋白
(g/L)
IgG
(g/L)
IgM
(g/L)



对照 62.79  170.21  38.26  30.15  3.928 0.223 7
0.1% 66.01  175.32  33.50  32.76  4.284 0.243 4
0.2% 65.39  174.48  34.15  32.08  4.233 0.241 2
0.5% 64.41  172.59  36.27  31.99  4.216 0.238 8



对照 62.18  169.32  38.56  28.54  3.122 0.235 1
0.1% 65.38  175.02  33.64  33.19  4.256 0.247 6
0.2% 67.32  178.19  35.17  34.28  4.332 0.251 1
0.5% 64.18  176.14  35.55  33.79  4.298 0.250 9



对照 62.17  171.26  38.16  30.59  3.874 0.224 3
0.1% 65.11  174.35  33.56  33.15  4.216 0.233 1
0.2% 66.56  175.89  34.21  33.26  4.258 0.239 1
0.5% 67.19  177.61  36.38  34.19  4.330 0.241 5

与对照相比,不同浓度树参索氏提取物对1月龄
獭兔血清总蛋白、抗体水平、球蛋白、IgG、IgM 含量有
提高,白蛋白下降。浓度0.1%组对1月龄獭兔血清
总蛋白、抗体水平、球蛋白、IgG、IgM 影响最明显,分
别比对照提高5.13%、3%、8.66%、9.06%和8.81%,
随提取物浓度提高免疫改善作用趋下降。浓度0.1%
组对白蛋白降低作用也最为明显(12.44%),说明
0.1%浓度组对 1 月龄獭兔免疫增强作用最佳。
0.2%浓度组对2月龄獭兔血清总蛋白、抗体水平、球
蛋白、IgG、IgM影响效果最为显著,与对照相比分别
提高了8.27%、5.14%、20.11%、38.76%和6.81%。
0.2%浓度组对2月龄獭兔血清免疫增强效果最佳。
0.5%浓度组对3月龄獭兔血清总蛋白、抗体水平、球
蛋白、IgG、IgM影响效果最为显著,与对照相比分别
提高了8.07%、3.71%、11.77%、11.77%和7.67%。
0.5%浓度组对3月龄獭兔血清免疫增强效果最佳。
4 小结
(1)比较不同提取方法获得的树参提取物质量百
分比在2.4%~2.5%,超声波提取法获得的提取物中
皂苷含量最高为1.85%,索氏提取法为1.56%,反应
釜提取法为1.51%。皂甙主要成分为:β-胡萝卜苷、
芥子醛葡萄糖苷、丁香苷、杜仲树脂醇双吡喃葡萄糖
苷、丁香树脂醇双吡喃葡萄糖苷和丁香酚-芸香
糖苷。
(2)不同方法获得的树参提取物对獭兔血清免疫
激活作用结果一致,0.1%浓度组对1月龄獭兔血清
免疫增强效果最佳,0.2%浓度组对2月龄獭兔血清
免疫增强效果最佳,0.5%浓度组对3月龄獭兔血清
免疫增强效果最佳。随着獭兔月龄增加,提取物浓度
适当提高。
(3)通过獭兔试验表明,树参提取物对动物具有
免疫增强作用,可作为饲料添加剂改善动物抗病
能力。
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