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小叶女贞对小鼠骨髓细胞增殖和IL-1的影响



全 文 :.0 3 2
.中国中医药科技 2以刀年第 1 0卷第 4期
小叶女贞对小鼠骨髓 细胞增殖和 I L一 1的影响
邱世翠 孙丰润 ’ 韩兆东 ’ 张 群 王志强
(山东滨州医学院 · 滨州 5 2仅刃 3’ 滨州 医学院附属医 院 · 滨州 乃仅刃 3
摘 要 目的 :从免疫学方面探讨小叶女贞对小鼠骨健细胞增殖反应和 I L一 l的影响 。 方法 :用 1 0 %小
叶女贞液定期给小鼠连续灌胃 1 5 d, 1次 d/ ,检咧小鼠骨位细胞增殖反应和 IL 一 1的水平 。 结果 : 小叶女 贞
对以上两项免疫学指标均有明显增强作用 ,与对照组相比均有非常显著性差异 ( P < 0 . 0 1 )。 结论 : 小叶女
贞可促进小鼠骨健细胞增殖反应和 IL 一 1的分泌 。
主题词 小叶女 贞/药理学 骨徒细胞 /药物作用 白细胞介素 1/ 药物作用 小鼠
小叶女贞又叫小 白蜡 , 为木犀科女贞属植物小叶女贞
从冲切抓 ,画口` 。 功 . 的果实川 。 和女贞子属于同科同属植
物 。 全国各地均有分布 。 现在多人工栽培作为庭院绿化植
物。 对小叶女贞的研究迄今未见报道 。 根据近缘生物具有
相似性的特点 ,受女贞子药理作用启示 , 笔者对小叶女贞进
行了免疫学方面的初步研究 。
1 材料与方法
1
.
1 药品和试别 小叶女贞采自滨州医学院附属 医院 ,经
查阅有关资料 ,确认为木犀科女贞属植物小叶女贞 乓邓~叨而` 伽 的果实 l1[ 。 水煎液制备 : 取小叶女贞 2加 g , 加
2仪刃nI 水 ,浸泡 h2 ,水煎 2 次 ,每次煮沸 30 而 n ,合并水煎液 ,
浓缩成 2X() 耐 备用 。 R刊旧 一 16 《 )为 c m o 公司产品 江尹L 和
0
〕n A为美国 is g m a 产品 ; M r r 为 Fu JK A 公司产品 ;二甲基亚
矾 ( DMSO )为苏州化工研究所产。
1
.
2 主要仪器 美国产全 自动酶标仪 ( M ul ti s akn ) ; c仇 培养
箱 , 由美国 凡~ : 公 司生产 ; 低速冷冻离心机 (氏 e ik n an ,
U SA ) ;超净工作台由苏州净化设备厂生产 ; 10 目不绣纲网 ;
s ml 离心管。
1
.
3 动物分组与给药 B ABL / C 小鼠 24 只 ,体重 18 ~ 2 9 ,雌
雄兼有 ,购于北京医科大学实验动物中心 。 将动物随机分 2
组 ,每组 12 只 , I 组为生理盐水对照组 ; fl 组为小叶女贞药
物组 。 称取 2X() g小叶女贞加水 2X( 刃 1111 ,加热煎煮最后浓缩为
2( X) 耐备用 。 I 组每天用生理盐水灌 胃 , 1 次d/ , 0 . 5 111】/次 ; n
组每天用小叶女贞液灌胃 : 1次 / d , 0 . 5 n 1L尸次 ,共灌 15d 。
1
.
4 检测指标
1
.
4
.
1 骨髓细胞增殖反应 2[, 3〕 眼球放血 , 颈椎脱臼处死小
鼠 ,无菌操作取小鼠双股骨骨髓细胞 , 用不完全 16 《 )洗涤细
胞两次 , 1姗卿 , 1俪 n ,弃上清 ,用完全 1栩 调细胞至 s x
l护/ d ,加入有丝分裂原 IJ ` ( 10闪犷耐 ) ,取 10 川加入 96 孔细
胞培养板中 ,每组设 12 个复孔 ,置 37 ℃ , 5% C场 培养箱培养
72 h
,终止前 h5 ,掺入 M r l , (5 1玛犷d ) 10沙孔 ,终止培养时 ,每孔
加 l的闰。 砚刃 ,溶解还原产物甲腊溶解缓冲液 ,振荡 10而 n ,于
全自动酶标仪波长 5印unI 处测定其 o 值 , 以 O D 值代表骨
髓细胞活性 。 、
1
.
4
.
2 小鼠腹腔 耐 、 IL 一 1的诱生与检测
1
.
.4 2
.
1 小 鼠腹腔 附 的制备图 向小鼠腹腔注射冷的
1创0 培养液 5耐 ,轻揉腹部 ,取腹腔液离心 ,洗涤细胞 3 次 , 调
细胞浓度为 2 x l护 / d , 加人有丝分裂原 I尸s ( 10叫犷d ) ,置
37 ℃ , 5% C仇 培养箱内诱导 3h6 ,离心取上清为待测 IL 一 l 上
清 。
1
.
4
.
.2 2 IL 一 1检测 .s[ 4 ] 无菌取正常 B月』 / C小鼠胸腺制
成 2 x l护/耐 ,细胞悬液 ,加 C o n A l o闪岁祖 , 取细胞悬液及待测
IL
一 1上清各 10 川,加人 96 孔细胞培养板中 , 置 37 ℃ , 5%
c仇培养箱培养 7h2 ,培养结束前 h5 掺人 M IT ( 5 111岁祖 ) 10沙
孔。 培养 结 束 时 离 心 IO l lpr m , l伍` n , 弃 上 清 , 加 人
10 闰。 M岌 )振荡 5而 n ,静止 20 而 n , 在全 自动酶标仪波长为
492 nm 处测定其 OD 值 , 表示 IL 一 1 的浓度 。
1
.
5 数据处理 `检验 , 结果以 无土 : 表示 。
2 结果 见附表 。
附表 小叶女贞对小鼠骨髓细胞增殖和 IL 一 1产生的影响 (二士 3 )
组别
对照组
药物组
12
12
骨髓细胞增殖
反应 ( o n 值 )
0
.
17 5 士 0 . 0 19
0
.
32 土 0
.
0 50
苍 份
I L一 l ( O D值 )
0
.
20 1
土 0 . 03 3
0
.洲 5 士 0 .倪 2 . ,
与对照组比较 , 二 尸 < 0 . 01
附表显示 : 用药组的骨髓细胞增殖反应和 IL 一 1 的产生
均明显增强 , 与对照组比有非常显著性差异 (尸 < 0 . 0 1 ) 。
3 讨论
本实验研究了小叶女贞对小鼠骨髓细胞增殖反应和 几
一 1 的影响 。 结果小叶女贞组可明显促进骨髓细胞增殖 , 与
对照组相比有非常显著性差异 (尸 < 0 . 01 ) ;小叶女贞可促进
IL 一 1 的分泌 ,与对照组相比有非常显著性差异 ( P < 0 . 01 ) 。
骨髓细胞增殖应归之于集落刺激因子 ( c sF ) 的存在 , 图 “ F
是一组在体内能强烈刺激造血祖细胞增殖 ,分泌并形成细胞
集落的低分子细胞因子 ,它们包括 IL 一 3 ,粒 一 巨噬细胞集落
刺激因子 ( C M 一 c S )F , 巨噬细胞集落刺激因子 ( M 一 巴F ) ,粒
细胞集落刺激因子 ( G 一 CSF ) ,促红细胞生成素任〕气) )及 IL -
1
。 现有证据表明 IL 一 1也能刺激骨髓多能干细胞增殖 ,但其
产生细胞主要是活化的单核 / 巨噬细胞。 本研究结果表明 ,
小叶女贞可通过促进 IL 一 l 的分泌 , 调节骨髓造血功能。 小
叶女贞生长环境要求低 ,果实产量大 , 因不能利用 ,都脱落浪
么刀 3年第 10卷第 4期 中国中医药科技 23 1
费掉 。 本实验提示 ;可以将小叶女贞开发为保健食品或新的
中药材 ,这样既能绿化环境又能获取经济效益 。
参考文献
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生出版社 , 】9 83 : 75
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(收稿 : 2X() 2 一份 一 16)
肠 炎 宁 n 号 对 啧 疡 性 结 肠 炎 治 疗 作 用 的 实 脸 研 究
吕 静 王迎新 1 王静滨 l
(哈尔滨市中医院 ·哈尔滨 巧 0 10 `黑龙江 中医药大学附属一 院 ·哈尔滨 15(X冲 )
1 材料与方法
1
.
1 动物 雄性 iw astr 大鼠 , 体重 180 一 2 10 9 , BA I J灯 C 小鼠 , 雄性新
西兰白兔 ,体重 3 一 4k g , 由黑龙江中医药大学动物中心提供 。 1众四 细
胞由本校中心实验室提供。
1
.
2 肠炎 n 号 由黄蔑 、 炮姜 、 黄连 、 白花蛇舌草 、 三七 、 白友 、 赤石
脂 、木香等组成 , 由黑龙江中医药大学内科实验室煎制 , 分别按临床
等效剂量及 2 倍的临床等效剂量 , 水煎浓缩成 含生药 。 . 38 酬初 及
。 76 留 d ;柳氮磺胺毗吮 ( S As p ) , 上海福达有限公司 , 将片剂去糖衣 ,
研细 、临用时加蒸馏水配成 45 11等 / d 的混悬液 ;卡介苗 , 上海生物制
品研究所 ;羊毛脂 ,上海嘉定华亭羊毛脂厂 ; M l l ,、 放射菌素 D ,美 国
is 目佃 公司产品 。
1
.
3 清疡性结肠 炎 ( ul c ela 石ve col it , U )C 动物模型制备 抗原制备 :
取兔新鲜结肠粘膜 , 制成粘 膜匀浆 , 一 20 ℃ 冷冻 24 h , 溶冻后 以
加加甲 m 离心 加而 n ,取上清液提纯 ,测定蛋白质含量 ,冰箱保存备用 ,
使用时加人完全福氏佐剂 。 造模方法 l1[ : 大鼠随机分为空白对照组
(A 组 ) 10 只 ,模型组 40 只 ,造模大鼠于一侧足趾 , 腹肌沟注射抗原
sgm
,至等 14d 取血 ,确认抗体产生后 ,将大鼠用氛氨酮麻醉 (。 . 2 n d /
1X() g )
,用 1 . 5%福尔马林液 2时灌肠 , 留置 hl , 用生理盐水洗脱排去 ,
再用抗原液 l时 ( 4mg )不加佐剂灌肠 , 留置 h2 , 然后洗净 。 造模时间
为 Zl d。
1
.
4 分组与 用药 正常大鼠 10 只做正常对照组 ( A 组 ) , 将造模后大
鼠随机分为 4 组 , 每组 10 只 。 模型组 ( B 组 )每 鼠予以生理盐水
1
.
5币F d灌胃 ; 别巧 P 组 ( C 组 )每鼠 1 . 5 n心 d灌胃 ;肠炎宁 n 号低剂量
( D 组 )与高剂量组 ( E 组 )分别以不同浓度药液 (每日每鼠” . 5词 / d
灌胃 , 连续 3W 。
1
.
5 指标检浏方法 实验完毕后 , 大鼠摘眼球取血后断颈处死 , 迅
速剖取距肛门 2咖 向上结肠 6 一 s cm , 沿纵轴剪开肠段 , 用水冲洗干
净 , 用立体显徽镜观察炎症及溃疡情况 。 根据程度进行评分 (评分标
准 : 0分 :无损伤 ;l 分 :局部充血 , 水肿 ,但未出现溃疡 ;2 分 : 有个别小
溃疡 , 并有轻度炎症 ; 3分 :有多处溃疡和炎症 , 溃疡 < l。 ; 4分 :有多
处溃疡和炎症 , 至少有一处溃疡 > I cln 。 然后 ,剪取部分结肠组织用
10 %福尔马林固定 , 常规石腊切片 , EH 染色、 光镜检查 , 记录演疡形
成情况 (分级标准 :低倍镜下 , 0级 :溃疡 < 14/ 视野 ; 工级 : 溃疡 < 1左
视野 ; 江级 :演疡 < I视野 ; 1 级 :溃疡 > l 视野 ) , 由肛端截取 scln 肠
段 , 置 Zd 蒸馏水浸泡 1俪 n ,浸泡液参照 C毗 . , d 澎2】方法测定 NO
代谢物( N OP ) W硝酸盐含量 ,取结肠浸泡液 1间 , 经 、 拼溶试剂沉淀去
蛋白后 ,取上清液 1闹 (测定管 )加 46 ~ )l/ L对氨基苯磺酸和 35 n l浏 /
L X 蔡胺各 l d , 以燕馏水调零 ,在最大吸收峰波长 5 30 IlU l处读吸光度
(A OD 值 ) , 以亚硝酸钠标准液作对照 ,测定管实际 O D 值 二 测定管
OD 值 一试剂空白管 oD 值 , 单位 ~ 卜毛
。 结肠组织 1刊F 一 。 含童侧
定按文献 a[] 方法进行。
1
.
6 统计学处理 采用 t 检验及 凡面 检验。
2 结果
2
.
1 肠炎宁 1 号对 UC 大鼠的拉状影响 造模大鼠约 16d 后出现毛
色无光泽 ,精神倦怠 , 进食减少 , 18 d左右造模大鼠出现腹泻 ,血便或
粘液便 。 经肠炎宁 1 号及柳氮磺胺毗吮治疗后 , 整体状况及消化道
症状逐渐好转 ,至用药 ZW后 ,其大便基本成形 ,此时 ,模型对照组动
物的大便仍不成形 。
.2 2 肠 炎宁 1 号杭贵疡及对 U C 大鼠结肠组织中 N O 、 用下 一 。 水平
影响 见附表。
附表 实验各组结肠损伤评分 、溃疡分级和对 cU 大鼠结肠
组织中 N O 、 TN F 一 a 水平影响的比较
组别 损伤评分
(云士 , )
演疡分级 _ ~
下万了.丽 ” 沮
帐又,
(王士 : ,而刃 )L
1钊1 , - a
(
u
)
A组 10 0 ’ 蛤 10 0 . 1却二 1 .的土0 . 6 . , 魏 土 l位二
B组 10 3.印 士 0 .位 1 2 3 4 0 .栩1 2 . 9土 1 .2 猫 士 176
C组 10 2 .卯 土 0 . 义 冬 . 2 2 3 3 0 .翻2 2 .名士 1 .4 们 土 212 ’ 份
D组 10 1 .父 土 0 . 61二 6 3 1 0 .双 1扩 1 9土 1 . 1二 拼 土边扩
E组 10 1 .钓 土 0 . 51二 7 2 1 0月别盗扩 2 0* 1 .5么 知 土 l龙扩
与B组瞰 , P < 0 .仍 , ; ; P < 0 . 01 ;与C组比较△ P < 0 .仿 , △△ P < 0 . 01
3 结论 本研究表明 :模型组大鼠粘膜均出现糜烂 . 溃疡 、腺体破坏
等改变 , 说明模型复制成功 , 经肠炎宁 n 号治疗后 ,结肠粘膜仅见充
血 、水肿 、 炎细胞浸润 ,大部分粘膜完全修复 , 肉芽组织增生明显 。 炎
症评分与溃疡形成情况已接近于空白组 , 明显优于对照组 , 表明肠炎
宁 n 号有明显修复溃疡作用 。
肠炎宁 n 号作用下 , 结肠组织中 N O汀N F 一 a 水平降低 , 减轻了
结肠组织中炎性细胞的侵润 , 促进了炎症修复的作用 。 肠炎宁 n 号 ,
根据中医理论遗方用药 ,临床疗效显著 ,能改善 cU 大鼠模型的症状。
有明显的抗溃疡形成和促使溃疡恢复的作用 。
参考文献
1 郑红斌 . 清肠栓对溃疡性结肠炎防治作用的动物实验研究 . 上
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