全 文 ：2.7 　光照及培养方式对原球茎增殖的影响　在每
天 12 h的光照培养条件下 ,原球茎增殖速度快 ,长
势好 ,色绿 ,表面有许多白色的根毛;全黑暗条件下
原球茎增殖较少 ,色白 ,多分化成芽。
2.8 　根状茎诱导成苗及生根培养　增殖的根状茎
顶端及侧端分化出芽;芽生长过程中 ,也同步分化生
　表 3 　不同基质对组培苗生长的影响
基质 栽种株数 成活率(%) 生长情况
全蛭石 30 96.67 叶色绿;根 1-5条 , 并长出新的根尖
蛭石 +珍珠岩(1∶1) 30 96.67 叶色绿 , 但较多叶尖萎蔫;根 1-5条 ,并长出新根尖
蛭石 +腐殖土(1∶1) 29 93.10
叶色绿;根 1-5条 , 较多根变黑死亡 ,少数根尖发出新根
蛭石 +苔藓(2∶1) 30 93.33 叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根1-5条 ,部分根生长
蛭石 +腐殖土(1∶1) 30 93.33
叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根
1-5条 , 多数根尖变黑死亡 ,少数长新根
蛭石 +苔藓(2∶1) 30 96.67 叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根1-5条 ,部分根尖伸长
蛭石 +腐植土 +苔藓(1∶1∶1) 29 86.21
叶色绿 , 部分叶尖萎蔫;根
1-5条 , 多数根变黑死亡 ,极少数生长
长。培养约 30 d后 ,芽长成 1.0 cm左右高的小苗 ,
基部陆续长出辐射状小根 ,且长有白色根毛 ,生根率
达 100%。待组培苗根长到 1.0 ～ 2.0 cm时可炼苗
处理 。
2.9　基质种类对组培苗生长的影响　组培苗在不
同混合基质中的生长情况见表 3。在全蛭石基质
中 ,苗生长得最好 ,叶色绿 ,并长出新根 ,成活率达
96.67%;而蛭石 +腐殖土 +苔藓 ,根生长差 ,死亡较
多 ,成活率仅为 86.12%。
3　讨论
杜鹃兰假鳞茎和种子均能诱导获得原球茎 ,但
假鳞茎易采集易诱导。原球茎的增殖是杜鹃兰快速
增殖的关键。在 B5培养基上增殖速度快 ,原球茎又
粗又长 ,且色绿;不加激素的培养基对原球茎的增殖
生长较好 ,色绿 ,对保持原球茎继代扩繁的遗传稳定
性具有重要意义;添加适宜浓度活性炭 ,能明显促进
增殖生长 ,且长势良好。
由原球茎增殖的完整再生植株 ,可直接炼苗移
栽。移栽采用全蛭石基质较好。
(2006 - 12 - 19收稿
2007 - 04 -02修回)
基金项目:陕西省科学技术计划 [ 2004K18-G12(8)] ;陕西省教育厅自然科学专项课题(06 JK199)作者简介:赵银萍(1963-),女,副教授 ,硕士 ,主要从事植物生理及植物组织培养研究, E-mai l:yinping019@163. com , Tel:029-81209922。
杂交景天组织培养和植株再生
赵银萍 ,胡　洁 ,张九东
(西安文理学院生命科学系 ,陕西西安 710065)
　　摘要　以杂交景天子叶 、胚轴为外植体 , 接种在附加不同激素组合的 MS培养基形成的愈伤组织有红 、绿两种
类型。子叶在 MS+6-BA 1 mg /L+2, 4-D 0. 5 m g /L和 MS+6-BA 1m g /L+NAA 0.5 mg /L培养基上的愈伤组织诱
导率高达 80% ～ 82%。愈伤组织用 M S+6-BA 2 mg /L+NAA 0.5 m g /L可诱导产生丛生不定芽 ,壮苗生根培养基
为 1 /2 MS。组培苗移栽成活率达 80%。
关键词　杂交景天;组织培养;快速繁殖
中图分类号:R282.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)09-1059-03
T issue Culture and Regeneration ofSedum hybridum
ZHAO Yin-ping, HU Jie, ZHANG Jiu-dong
(Department o f L ife Science, Xi’ an Co llege of A rts and Sciences, Xi’ an 710065, China)
Abstrac t　The co ty ledons and hypeco ty l o fS edum hybridum we re used as exp lant to induce ca lluse on MS m edia supp lemented
w ith differen t concentra tion o f ho rm one.The re we re fo rm ed tw o kind of ca lluses, one was red w hile o the rw as g reen.The co ty ledon w as
the idea l exp lant fo r the ca llus induc tion, its induc tion ra te could be reached 80% ～ 82% e ithe r onM Sm edium w ith 6-BA 1mg /L and
2, 4-D 0. 5 mg /L orw ith 6-BA 1mg /L and NAA 0. 5 mg /L.Num erous adventitious buds cou ld fo rm ed from calluses on theMSm edium
1059 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 9期 2007年 9月
DOI牶牨牥牣牨牫牳牰牫牤j牣issn牨牥牥牨牠牬牬牭牬牣牪牥牥牱牣牥牴牣牥牬牳
w ith 6-BA 2mg /L and NAA 0. 5m g /L.The medium for the roo t g row th was 1 /2MS.The tube seed ling which can be successfu lly trans-
p lanted a t 80% surv iva l.
K ey words　S edum hybridum L.;T issue culture;Rap id propaga tion
　　景天科杂交景天 Sedum hybridum L.可作为镇
静 、促进伤口愈合和消炎制剂的原料 〔1〕。
本实验通过组织培养快速繁殖方法 ,保护日趋
减少的野生资源 。
1 　材料与方法
杂交景天种子采自新疆天山 ,海拔 2700 m。将
萌发 20天的幼苗用 75%酒精漂洗 5 ～ 10 s,再用
0.6%H 2O 2处理 2 ～ 3 m in,无菌水冲洗 4 ～ 5次 ,无
菌滤纸吸干 ,以子叶 、胚轴做外植体。
愈伤组织诱导培养基:(1)MS +ZT 2mg /L +
NAA 0.25 mg /L +2, 4-D 1mg /L;(2)MS +6-BA 1
mg /L+2, 4-D 0.5 mg /L;(3)MS +6-BA 1 mg /L +
NAA 0.5mg /L;(4)MS +ZT 3mg /L。
不定芽分化增殖培养基:MS +6-BA 2 mg /L +
NAA 0.5mg /L。
生根培养基:分化出的丛生苗长至 3.0 ～ 4.0
cm时转入 1 /2M S培养基促使生根 。
所有培养基均加蔗糖 30 g /L,琼脂粉 5.6 g /L,
pH 6.0。培养温度 25℃ ±2℃, 光照 2000 ～ 3000
Lx、14 h /d。
2 　结果与讨论
2.1 　愈伤组织诱导　培养 10 d后 ,子叶边缘及胚
轴开始肿大 ,并出现许多小突起的愈伤组织(图 1)。
愈伤组织生长迅速 ,根据色泽 、质地 ,可分为二种类
型:第一类 ,开始透明状后转为紫红色 、质地疏松的
愈伤组织;第二类 ,开始为黄绿色后转为绿色致密愈
伤组织 。在 BA浓度不变的情况下 ,附加 0.5 mg /L
2, 4-D产生红色疏松愈伤组织 ,而添加 NAA则诱导
出绿色致密愈伤组织 ,并分化出芽。不同外植体的
愈伤组织诱导率 (表 1),以子叶较高。愈伤组织需
每 28 d ～ 30 d继代一次。如不及时继代培养 ,逐渐
褐化死亡。
　表 1　　不同外植体和不同激素组合与愈伤组织诱导
激素(mg /L) 外植体类型 外植体数
形成愈伤组织数
诱导率(%)
愈伤组织形态
颜色 质地 生长势
NAA 0. 25+ZT 2+2, 4-D 1 子叶 45 30 66.7 紫红色 疏松 +++胚轴 45 27 60 紫红色 疏松 +++
BA 1+2, 4-D 0.5 子叶 55 45 82 紫红色 疏松 ++++
胚轴 45 27 60 紫红色 疏松 +++
BA 1+NAA 0.5 子叶 55 44 80 绿色　 致密 ++++
胚轴 48 24 50 绿色　 致密 ++
ZT 3 子叶 48 9 18.7 绿色　 致密 +
胚轴 45 0 0 - - -
2.2　不定芽的分化和试管苗生根　将两种愈伤组
织转入 MS+6-BA 2 mg /L +NAA 0.5 mg /L培养基
培养 , 10 d后即有芽点产生大量丛生芽 (图 2)。不
定芽分化率达 100%。待不定芽长至 2 ～ 3 cm 长
时 ,将健壮芽苗切下放入 1 /2MS基本培养基中诱导
生根 (图 3)。如果两种愈伤组织在愈伤组织诱导培
养基上连续继代培养 ,亦可分别分化出毛状根和绿
色芽 。
2.3　练苗移栽　将培养瓶放入光强 2000 ～ 3000
Lx每天光照 12 ～ 14 h、温度 20 ～ 25℃,待不定根长
到 2 ～ 3 cm长时 ,开盖练苗 ,同时加适量水保湿 。 3
～ 5 d后 ,用 1∶1200菌立灭消毒根系 30 s,栽入中性
营养土中 ,移栽成活率 80%以上 。
图 1　继代培养的红色愈伤组织
图 2　绿色愈伤分化出的丛生芽
图 3　无菌苗生根
3　讨论
在愈伤组织诱导及培养中 ,一般需要外源生长
1060 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 9期 2007年 9月
调节剂 。本研究采用低浓度 NAA +6-BA和 2, 4-D
+6-BA的配合使用具有相似的愈伤组织诱导效果 ,
但低浓度 NAA和 6-BA配比更有利于不定芽的分
化 ,说明在杂交景天培养中 NAA比 2, 4-D更有效 。
罗林会等〔2〕在附加 0.03 mg /L NAA和 0.1 mg /L 6-
BA的 MS培养基上可诱导费菜 Sedum a izoon发生
不定芽增殖及生根 。而本研究的杂交景天在 1 /2
M S培养基上无需附加任何激素 ,试管苗就能生根 ,
且生根率达 100%。
另外 ,笔者利用 HPLC检测出杂交景天绿色愈
伤中有红景天甙 , 含量为干重的 0.28% ～ 0.29%。
红景天甙及其前体甙元酪醇是有生理功能的有效单
体 ,具有养心安神 、滋阴补肾的功能 ,还可用于延缓
机体衰老 。本项研究有望为杂交景天开发利用提供
前景 。
致谢:中国科学院研究生院生物系郑宏春教授鉴定并惠赠实验
材料。
参 考 文 献
[ 1] 孙萍 , 李艳 ,杨秀菊 , 等 .景天总黄酮的微波提取及含量
测定 .数理医药学杂志 , 2003, 16(3):272-273.
[ 2] 罗林会 , 邱宁宏 ,王勤 , 等 .费菜的离体快速繁殖 .特种
经济动植物 , 2003, 6(10):24.
(2007 - 02 -13收稿)
灵芝深层发酵菌丝体多糖含量测定
于浩翰 ,谢　林 ,肖深根 ,刘东波 ,夏志兰*
(湖南农业大学园艺园林学院 ,湖南长沙 410128)
　　摘要　本文以 8个灵芝菌株为研究对象 ,比较不同菌株菌丝体液体发酵产物 、子实体多糖等指标。结果表明:
8个菌株深层发酵产物 , 由于生物学特性不同而有差别 ,各菌株菌丝体生物量与次生代谢产物多糖之间 ,相关性较
小;甜芝菌丝体生物量最大但自溶速度最快 , 灵芝 5760最慢 ,血芝次生代谢产物多糖最高;各菌株菌丝体多糖含量
均高于子实体;以超声波破壁处理后 , 再以热水浸提法提取 ,多糖得率可明显地提高。
关键词　灵芝;液体发酵;多糖;提取工艺;成分测定
中图分类号:R282.72　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)09-1061-03
基金项目:科技部农业科技成果转化资金资助项目(04EFN214300219)*通讯作者:夏志兰(1963-),女 ,副教授 ,硕士研究生导师 ,从事食 、药用菌科研与教学 ,发表论文 40余篇。
　　灵芝为多孔菌科灵芝属的总称。世界上已知约
有 120种 ,各地均有分布 ,以热带及亚热带地区较
多 。国内有 90多种 ,常用有的赤芝 、黄芝 、紫芝 、黑
芝 、血芝 、青芝等 ,多分布于云 、贵 、冀 、吉 、苏 、浙 、闽
等省。灵芝种类多 ,品种 、产地 、生长阶段及培养方
式的不同均可能引起有效成分和产量差异〔1〕。大
量实验证明 ,灵芝深层发酵产物具有抗肿瘤 、减肥 、
抗衰老 、护肝 、抗病毒 、提高免疫力和防治慢性支气
管炎的作用 。由于天然子实体生产周期长 ,受气候
影响大 ,产量及质量不稳定且子实体木质化程度高 ,
多糖提取利用率较低 〔2〕。本项工作对几种灵芝菌株
多糖提取工艺以及灵芝多糖等有效成分进行比较研
究。
1 　材料与方法
1.1 　供试灵芝　灵芝 Ganoderma lucidum 5760、红
芝 、血芝 、灵芝 G8、灵芝 G 9及紫芝 G.sinense、黑芝
G.a trum、甜芝 G.sp.等由湖南农业大学食用菌研究
所提供。
1.2　培养基　液体菌种培养基与深层发酵培养基
配方 〔3〕:麦麸粉 5%,黄豆饼粉 3%, KH 2PO4 0.01%、
MgSO 4 0.09%。
将菌株的斜面菌种接到液体菌种培养基 , 250
m l三角瓶装液量 80 m l, 灭菌前调至 pH 5.5, 于
28℃、150 r /m in转速培养 6 d得液体菌种 。按 10%
接种量接到深层发酵培养基 ,于相同条件下培养 6
d。发酵液经两层纱布过滤 ,菌丝体经蒸馏水冲洗数
次后 ,于 60℃干燥至恒重 ,电子天平称菌丝体干重。
各供试菌株均设三次重复。
1.3　多糖提取　发酵液多糖提取:发酵液于 4000
r /m in离心 10 m in,取上清液 1 m l,加 2倍体积的
95%乙醇 ,放入冰箱中醇析 24 h,得乳白色絮状沉
淀 ,乙醇洗涤两次 ,干燥得灵芝发酵液多糖。
菌丝体或子实体多糖提取〔4〕:①热水浸提法 ,
取灵芝菌粉或子实体粉末 0.2 g,加 40m l蒸馏水于
1061 中药材 Journa l o f Chine seM ed icina lM a teria ls　　第 30卷第 9期 2007年 9月