全 文 ：紫叶稠李组培诱导及增殖体系的建立
郑璐 ,黄立华 ,王占龙 ,龙忠伟 ,朱虹
(辽宁省干旱地区造林研究所 ,辽宁 朝阳 122000)
摘 要:以紫叶稠李的侧芽为试验材料 ,对其进行不定芽的诱导和芽的继代增殖 ,通过正交试验 ,经极差
与方差的分析得出结论:紫叶稠李不定芽诱导培养基添加激素种类及其浓度的最佳水平组合为:6-BA
1.5mg/L+IBA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L ,诱导率高达 97.5%。紫叶稠李的继代增殖培养基的最佳水
平组合为:6-BA 1.5mg/L+IBA 0.05mg/L+NAA 0.2mg/L ,增值倍数可达 4.2倍 。能在短期内快速
繁殖出大量苗 ,为工厂化育苗提供参考。
关键词:紫叶稠李;组培;诱导与增殖
紫叶稠李(Prunus virginiana )隶属于蔷薇科李
属 , 落叶乔木 , 株高可达 10 m 以上 , 圆冠达 7m[ 1] 。
嫩叶鲜绿 ,老叶紫红;总状花序 , 花瓣白色;核果成熟时
黑色。其适应性强 , 喜光 、抗寒、耐干旱。苗木长势良
好 , 枝叶繁茂 , 是集观花 、观叶 、观果于一身的北方四季
有景可赏的园林绿化彩叶树种。目前国内多采用播种 、
嫁接和扦插繁殖方法 ,成活率较低。为解决紫叶稠李种
苗能在短期内大量扩繁 、促进紫叶稠李资源稳定和有效
利用 ,现建立紫叶稠李组织培养诱导及增殖体系。
1 材料与方法
1.1 试验材料
在辽宁省干旱地区造林研究所试验园 ,采集紫叶
稠李当年形成的越冬枝条 ,在室温(20℃)水培 ,待抽出
新嫩枝 ,取其带顶芽和侧芽的茎段 ,然后将外植体用流
水冲洗 2h 后 ,放入大烧杯中 , 用加有少量洗涤剂的水
振荡冲洗 5min ,再用水冲洗干净 ,置于无菌室超净工
作台上 ,先用 70%酒精表面消毒 30s ,倒去酒精 ,用无
菌水冲洗 3次 ,再加入 0.1%HgCl2 消毒 10min ,消毒
后用无菌水冲洗 5次 ,放在装有无菌滤纸的培养皿中 ,
吸干水分后切取顶芽和侧芽接种。
1.2 试验方法
分别采用正交试验方法测定不同浓度比例的激素
对紫叶稠李不定芽的诱导和继代芽分化的影响。本试
验以MS 培养基为基本培养基 , 附加不同浓度的激素
(NAA 、6-BA 、IBA), 蔗糖为 20 ～ 30g/L ,琼脂为 6 ～
7g/L , pH 值为 5.8 , 培养温度为 25 ±1℃,光照时间为
10 ～ 12 h/d ,光照强度 1 000 ～ 1 500 lx 。
1.2.1 不定芽的诱导培养基的筛选
在植物组织培养中 ,培养基是否合适 ,植物激素的
配比是最重要的。用正交试验对筛选出的植物激素浓
度进行优化 ,选用正交表 L9(34)[ 2]设置本试验 ,因素一
水平设计如表 1。
表 1 不同浓度比例的激素对紫叶稠李不定芽诱导影响的设计
水 平
因 素
A
6-BA/(mg· L-1)
B
IBA/(m g· L-1)
C
NAA/(mg· L -1)
1 0.5 0 0.05
2 1.0 0.1 0.1
3 1.5 0.2 0.3
1.2.2 芽的继代增殖培养基的筛选
表 2 不同浓度比例的激素对紫叶稠李继代芽分化影响的设计
水 平
因 素
A
6-BA/(mg· L-1)
B
IBA/(m g· L-1)
C
NAA/(mg· L -1)
1 0.5 0.05 0
2 1.0 0.1 0.1
3 1.5 0.2 0.2
组内离差平方和 Lω=LT -Lb=111.45-74.91=36.54
组间均方 S2b = Lba-1=74.91/(2-1)=74.91
组内均方 S2ω= Lωa(m-1)=36.54/2×(3-1)=9.14
均方比 F=S2b
S 2ω
=74.91/9.14=8.20
同法计算地径均方比 F=1.54
出苗量均方比 F=313.75
③查自由度 f1 =a-1 =2-1=1;f2 =a×(m-1)
=2×(3-1)=4
α=0.05 ,F 检验临界值表得知 Fa =7.71
苗高 、出苗量均方比 F>Fa ,故推翻假设 ,即不同
处理方法造成了苗高和出苗量显著性差异。
地径均分比 F
5 结论
5.1 遮阳网在林业育苗中 ,对小粒种子刺五加苗高 、
出苗量有显著性影响 ,尤其是苗木产量遮光处理平均
单位面积出苗 184.7 株 ,全光育苗出苗量仅为 56.7
株 ,增加出苗 2倍多 ,苗高遮光处理的平均值 16.7cm ,
全光育苗仅为 9.6cm ,苗木质量有所提高 ,遮光处理苗
木地径平均 2.5mm , 全光育苗状态 , 地径平均为
2.9mm ,相差仅为 0.4mm ,对苗木质量无大的影响 ,建
议在刺五加育苗中 ,推广遮阳网半遮光育苗。
5.2 遮阳网半遮光对其他种子育苗有无影响尚待试
验。刺五加幼苗时期遮光对于其丰产栽培特别重要 ,
是人工栽培丰产的关键因素 ,必须加以科学的调节和
利用。才能使人工栽培获得丰产。
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第3期(总第 112期) 中 国 林 副 特 产 No.3(GSNO.112)
2011年 6月 Forest By-Product and Speciality in China Jun.2011
DOI :10.13268/j.cnki.fbsic.2011.03.028
2 结果与分析
2.1 不同浓度比例的激素对紫叶稠李不定芽的诱导
的影响
将无菌外植体 ,放人按正交试验所设计的不同浓
度与比例的激素诱导培养基上 ,每组外植体个数为 40
个。7 ～ 10 天后芽开始萌动生长 ,每隔 5d统计 1次 ,共
统计 3次 ,详见表 3 。
表 3 不定芽的诱导培养基正交试验结果
试验号 A B C 接种数/个
产生不定芽
/个
诱导率
/ %
1 1 1 1 40 24 60
2 1 2 2 40 23 57.5
3 1 3 3 40 24 60
4 2 1 2 40 38 95
5 2 2 3 40 32 80
6 2 3 1 40 34 85
7 3 1 3 40 33 82.5
8 3 2 1 40 35 87.5
9 3 3 2 40 39 97.5
T1 177.5 237.5 232.5 T=705
T2 260 225 250
T3 267.5 242.5 222.5
X 1 59.17 79.17 77.5
X 2 86.67 75 83.33
X 3 89.17 80.83 74.17
R 30 5.83 9.16
表 4 方差分析结果
变异来源 自由度 平方和 均方 F 值 F0.05
6BA 2 1662.5 831.25 30.70＊ 19.0
IBA 2 54.17 27.09 0.10 19.0
NAA 2 129.17 64.59 2.39 19.0
e 2 54.16 27.08
∑ 8 1900
从表 3 极差 R 分析表明 ,三因素影响诱导率的主
次关系依次是 6-BA 浓度 > NAA 浓度 > IBA 浓度。
为了进一步判断试验误差与试验条件是否影响试验结
果 ,将正交试验数据进行方差分析(表 4),找出这些因
素中起主导作用的变异来源 ,结果表明 , 6-BA 浓度 F
=30.7>F (2 , 2)=19 ,差异显著 ,而 NAA 、IBA 均不
显著 ,因方差分析 NAA 浓度间差异也不显著 , 用
0.1mg/L浓度也可 , NAA 在此试验中虽没达显著差
异 ,但也不可忽视 ,NAA 可使不定芽粗壮 ,不加 NAA ,
不定芽瘦弱 ,徒长 ,但 NAA 的浓度过高 ,同样出现异
常现象 ,NAA浓度以 0.1 mg/L为宜 ,这与前人的试验
结果相同[ 3] 。这样可以从试验结果(表 3)的平均值大
小确立最佳提取条件为 A3B3C2 ,即最佳培养条件:6-
BA 浓度为 1.5mg/L , IBA 浓度为 0.2 mg/L , NAA 浓
度为 0.1mg/L 。诱导率高达 97.5%。
2.2 不同浓度比例的激素对紫叶稠李继代芽分化的
影响
将外植体分化芽 ,分别接到继代培养基中 ,使其达
到较高的芽增殖数和有效芽数 , 30天后分化出丛生芽 ,
每月继代 1次 ,继代 3次后 ,观察不同浓度比例的激素
对紫叶稠李继代芽分化的影响及苗高长势 ,见表 5。
表 5 芽的继代增殖培养基正交试验结果
试验号 A B C 苗高/ cm 增殖系数/倍
1 1 1 1 2.03 1.4
2 1 2 2 2.14 2.3
3 1 3 3 3.27 2.3
4 2 1 2 2.90 3.2
5 2 2 3 3.07 3.2
6 2 3 1 3.10 1.7
7 3 1 3 3.82 4.2
8 3 2 1 3.00 2.8
9 3 3 2 3.51 3.2
T1 6.0 8.8 5.9 T=24.3
T2 8.1 8.3 8.7
T3 10.2 7.2 9.7
X1 2.00 2.93 1.97
X2 2.70 2.77 2.9
X3 3.40 2.4 3.23
R 1.4 0.53 1.26
表 6 方差分析结果
变异来源 自由度 平方和 均方 F 值 F0.05
6-BA 2 2.94 1.47 63.91＊ 19.0
IBA 2 0.447 0.224 9.74 19.0
NAA 2 2.587 1.294 56.26＊ 19.0
e 2 0.046 0.023
∑ 8 6.02
从表 5 极差 R分析表明 ,三因素影响诱导分化率
的主次关系依次是 6-BA 浓度 >NAA 浓度> IBA 浓
度。方差分析结果表明(表 6), 6-BA浓度 F=63.91>
F0.05(2 , 2)=19 ,差异显著 ,NAA 浓度 F=56.26>F0.05
(2 , 2)=19 ,差异显著 , NAA 浓度间差异不显著 ,用
0.05 mg/L浓度也可 ,这样可以从试验结果(表 5)确立
最佳提取条件为 A3B1C3 ,即最佳培养条件:6-BA 浓度
为 1.5mg/L , IBA 浓度为 0.05mg/L , NAA 浓度为
0.2mg/L 。即本试验中芽的继代增值倍数最大 、苗长势
最佳的组合是 A3B1C3 ,增值倍数可达 4.2。
3 小结
外植体最好取材室内培养的嫩芽 ,这样更有利于
消毒时间的控制。试验结果表明 ,紫叶稠李不定芽的
诱导培养基添加激素种类及浓度的最佳水平组合为:
6-BA 1.5mg/L+IBA 0.2mg/L +NAA 0.1mg/L ,诱
导率高达 97.5%。
紫叶稠李芽的继代增殖培养基最佳水平组合为:
6-BA 1.5mg/L+IBA 0.05mg/L+NAA 0.2mg/L ,增
值倍数可达 4.2 倍。能在短期内快速繁殖出大量苗。
紫叶稠李不定芽的诱导和芽的继代增殖培养基添加不
同激素种类及浓度对其影响较大 ,这就要求通过正交
试验 ,从大量的不同激素浓度及种类中 ,较少次数的试
验取得最佳水平组合 ,从而节省了大量的实验量 ,极大
地提高了组织培养的工作效率与准确性 ,为快速繁育
紫叶稠李苗开辟了新途径。
参 考 文 献
[ 1] 陈有民.园林树木学[ M ] .北京:中国林业出版社 ,
2001:22-80.
[ 2] 陈华豪 , 丁思统 , 洪伟.林业应用数理统计[ M] .大连:
大连海运学院出版社 , 1996:388.
[ 3] 韩德元.植物生长调节剂原理与应用[ M] .北京:科学
技术出版社 , 1997.
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2011年 郑璐等:紫叶稠李组培诱导及增殖体系的建立 第 3期