全 文 ：2015 年 9 月 第 17 卷 第 9 期 中国现代中药 Modern Chinese Medicine Sep. 2015 Vol. 17 No. 9
·中药工业·
△［基金项目］ 广西壮族自治区中医药管理局中医药科技专项(GXYZ1112) ;桂科转(1298009-22) ;南宁市科技攻关与新产品
试制(201101088C)
*［通信作者］ 周小雷，高级工程师，研究方向:天然药物化学;E-mail:zhouxiaolei123@ 163. com
苦石莲胶囊中 Neocaesalpin L的含量测定△
唐炳兰，莫单丹，袁经权，刘振杰，周小雷*
(广西药用植物研究所 天然药物化学组分研究室，广西 南宁 530023)
［摘要］ 目的:建立测定苦石莲胶囊中 Neocaesalpin L 含量的反相高效液相色谱法。方法:色谱柱为伊力特
ODS C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-0. 5%磷酸水梯度洗脱;检测波长为 210 nm;柱温为 30 ℃;流速
为 0. 8 mL·min －1。结果:Neocaesalpin L在 0. 74 ～ 3. 16 μg线性关系良好，r = 0. 999 9，Neocaesalpin L平均回收率为
96. 76%，ＲSD = 1. 59%(n = 9)。结论:该方法简单，专属性强，重复性好，可有效控制苦石莲胶囊的质量。
［关键词］ 苦石莲胶囊;Neocaesalpin L;含量测定;高效液相
Determination of Neocaesalpin L in Caesalpinia minax Capsule
TANG Binglan，MO Dandan，YUAN Jingquan，LIU Zhenjie，ZHOU Xiaolei*
(Natural Medicine Ｒesearch Laboratory of Chemical Composition Institute of Guangxi
Medicinal Plant，Nanning 530023，China)
［Abstract］ Objective:To establish an ＲP-HPLC method for quantitative determination of neocaesalpin L in
Caesalpinia minax capsule. Methods:The separation was performed on a Elite ODS C18 Column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)
acetonitril-0. 5% H3PO4 was used as the mobile phase. The detection wavelength was at 210 nm. The temperature was
maintained at 30 ℃ . The flow rate was 0. 8 mL·min －1 . Ｒesults:The concentration of neocaesalpin L was linear within the
range of 0. 74 － 3. 16 μg (r = 0. 999 9). The average recovery and ＲSD of the method were 96. 76% and 1. 59% (n = 9)．
Conclusion:The method is accurate，specific，reproducible which can effectively be used in quality control of neocaesalpin L
in Caesalpinia minax capsule.
［Keywords］ Caesalpinia minax capsule;Neocaesalpin L;content determination;HPLC
doi:10． 13313 / j． issn． 1673-4890． 2015． 9． 018
苦石莲胶囊是广西药用植物研究所根据民间验
方自制的单方制剂，具有消炎、抗菌、抗病毒、护
肝等功能［1-3］，常用于感冒和肝炎的防治。苦石莲系
豆科云实属植物喙荚云实(南蛇簕)Caesalpinia minax
Hance的种子，性凉，味苦。有清热解毒、化湿、
散瘀止痛之功能，主治风热感冒、痢疾、淋浊、痈
肿、疮癣、跌打损伤、毒蛇咬伤等。为瑶药经典老
班药中“七十二风”中的南蛇风［4-5］。化学成分主
要有二萜类、黄酮类、挥发油成分、植物甾醇类。
现代药理研究表明，其中所含的二萜类化合物具有
抗肿瘤、抗病毒等多种生物活性，是其发挥药效的
重要物质基础［6］。本文前期对苦石莲的化学成分做
了系统的研究，发现其富含卡山烷二萜类化合物
Neocaeslpin L。药理研究发现，Neocaeslpin L 有较好
的抗流感病毒和抗疟疾活性［3］，是苦石莲的有效成
分之一。目前文献尚未见到关于高效液相色谱测定
苦石莲含量的报道，为了更好地控制本品质量，本
文采用反相高效液相色谱梯度洗脱法对苦石莲胶囊
中 Neocaeslpin L含量进行测定，并考察该方法的准
确性［7-8］。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
安捷伦 1200 型高效液相色谱仪;KQ-5200 型数
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控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ;
FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器公
司) ;101-1 型电热鼓风干燥箱(上海沪南科学仪器
联营厂) ;W201 型恒温水浴锅(上海申生科技有限
公司)。
1. 2 试药
Neocaesalpin L 对照品(自制，经 NMＲ、HPLC
测定，纯度 ＞ 98%) ;苦石莲胶囊(广西药用植物园
制 药 厂， 批 号 分 别 为 20120407， 20120418，
20120502) ;甲醇、乙腈为色谱纯;其他试剂均为分
析纯;水为超纯水。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:伊力特 ODS C18(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ;流动相:乙腈-0. 5%磷酸水梯度洗脱(乙腈
在 0 ～ 25 min 为 20%→50%，26 ～ 30 min 为 50%→
20%) ;检测波长:210 nm;柱温:30 ℃;流速:
0. 8 mL·min －1;进样量为对照品 7 μL，样品 10 μL。
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取 Neocaesalpin L 对照品 2. 43 mg，置于
10 mL容量瓶中，甲醇定容到刻度，摇匀，制成质量
浓度为 0. 243 mg·mL －1的对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
取苦石莲胶囊内容物约 2 g，精密称定，置具塞
锥形瓶中，精密加入甲醇 40 mL，超声提取 30 min，
过滤，滤渣再加甲醇 40 mL，超声提取 30 min，过
滤。合并 2 次滤液，水浴蒸干，用甲醇溶解并转移
到 10 mL 容量瓶中，并定容至刻度，摇匀，滤过，
取续滤液，即得。
2. 4 系统适应性试验
分别取对照品溶液 7 μL、供试品溶液和不含苦
石莲的阴性溶液 10 μL 进样测定。在选定色谱条件
下，样品中 Neocaesalpin L 与其他组分达到基线分
离，与相邻的色谱峰分离度 ＞ 1. 5，理论塔板数按
Neocaesalpin L峰计算不低于 5000。供试品溶液与对
照品溶液在同一时间出现色谱吸收峰一致，而阴性
在此保留时间上未检出有吸收峰，结果见图 1。
2. 5 线性关系考察
分别精密量取对照品溶液 3、5、7、9、11、
13 μL进样，按 2. 1 色谱条件测定。以进样量(X)为
A． 缺苦石莲的阴性样品;B. Neocaesalpin L对照品;C. 供试品;
1. Neocaesalpin L。
图 1 苦石莲胶囊高效液相色谱图
横坐 标，峰 面 积 (Y)为 纵 坐 标 进 行 回 归，
Neocaesalpin L的回归方程:Y = 1 408. 96X + 3. 283，
r = 0. 999 9。结果表明，Neocaesalpin L 进样量在
0. 739 ～ 3. 159 μg时，进样量与峰面积之间有良好的
线性关系。
2. 6 精密度试验
取同一份 Neocaesalpin L对照品溶液，精密吸取
7 μL，重复进样 6 次，按 2. 1 色谱条件测定峰面积，
计算 Neocaesalpin L对照品 ＲSD =0. 20%(n = 6) ，表
明该试验方法精密度良好。
2. 7 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、
12 h进样 10 μL，测定 Neocaesalpin L 峰面积，
Neocaesalpin L峰面积 ＲSD =1. 14%(n = 6) ，表明供
试液在 12 h内稳定。
2. 8 重复性试验
取同一批号样品内容物约 2 g，精密称定，按
2. 3 项方法制备 6 份供试品溶液，精密吸取 10 μL进
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样，按 2. 1 色谱条件测定峰面积，结果平均质量分
数为 0. 928 7 mg·g －1，ＲSD =1. 85%(n = 6)。
2. 9 加样回收率试验
取已测含量的同一批样品约 1 g，精密称定，共
9 份，分别精密加入样品的 80%、100%、120%的
Neocaesalpin L对照品(质量浓度为 0. 302 mg·mL －1)
各 3 份，按 2. 3 项下方法制备成供试溶液。分别精
密吸取 10 μL进样，测定 Neocaesalpin L峰面积，计
算回收率，Neocaesalpin L 平均回收率 96. 76%，
ＲSD =1. 59%。结果见表 1。
表 1 Neocaesalpin L加样回收率测定结果
序
号
取样量
/ g
样品中含
量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
1 1. 007 4 0. 467 0 0. 392 6 0. 851 9 99. 90 96. 76 1. 59
2 1. 010 6 0. 468 5 0. 392 6 0. 854 7 98. 37
3 1. 009 5 0. 468 0 0. 392 6 0. 850 6 97. 46
4 1. 007 5 0. 467 1 0. 453 0 0. 903 5 96. 14
5 1. 007 5 0. 468 6 0. 453 0 0. 903 1 95. 92
6 1. 010 5 0. 468 5 0. 453 0 0. 899 8 95. 21
7 1. 010 7 0. 468 6 0. 543 6 0. 992 5 96. 38
8 1. 001 1 0. 464 1 0. 543 6 0. 987 0 96. 19
9 1. 010 7 0. 468 6 0. 543 6 0. 986 7 95. 31
2. 10 样品测定
取 3 批 样 品 (批 号 分 别 为 20120407，
20120418，20120502) ，按 2. 3 项下制备方法制备
供试品溶液，每一批制备 3 份，按 2. 1 色谱条件和
方法测定峰面积，按外标法计算 Neocaesalpin L 含
量，结果见表 2。
表 2 苦石莲胶囊中 Neocaesalpin L的含量测定结果
批号 含量 /mg·g － 1 ＲSD(%)
20120407 0. 934 0 0. 57
20120418 0. 919 4 0. 69
20120502 0. 954 3 0. 34
3 讨论
3. 1 指标成分的选择
本试验选择二萜类化合物 Neocaesalpin L作为苦
石莲胶囊的质量控制指标，是因为 Neocaesalpin L在
苦石莲中含量较高，且具有较好的抗流感病毒和抗
疟疾活性。
3. 2 供试品溶液制备方法的优化
本试验对样品超声处理和加热回流 2 种提取方
法进行了考察，结果显示，超声提取的效率优于回
流提取，且超声方法简便快捷，提取完全。提取时
间分别考察了 15、30、60、90、120 min，结果
30 min的提取效率最高。料液比分别考察了 2 ∶20、
2∶40、2∶50、2∶60、2 ∶70、2 ∶80，结果表明，料液比
为 2∶40 时提取率最高，故选择加入甲醇 40 mL。提
取次数分别考察了提取 1、2、3 次，结果显示，提
取 2 次苦石莲中的 Neocaesalpin L成分基本能提取完
全。综上所述，采用超声提取法，提取时间为
30 min，甲醇加入量为 40 mL，提取 2 次，苦石莲中
Neocaesalpin L成分的提取率高，干扰峰减少，重复
性良好。
3. 3 流动相的优化
在选择流动相过程中，本试验曾采取甲醇-磷酸
水、乙腈-磷酸水等度洗脱，但分离效果均不理想，
经反复试验后发现以乙腈-磷酸水梯度洗脱时，能使
Neocaesalpin L和相邻物质达到较好的分离，峰形较
好。检测波长选择方面，对 Neocaesalpin L 在 200 ～
400 nm进行紫外扫描，确定最大吸收波长，结果在
210 nm Neocaesalpin L有最大吸收，故选择检测波长
为 210 nm。
参考文献
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(收稿日期 2015-06-04)
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