全 文 ：　２０１６年　第４５卷　第５期 中 国 南 方 果 树
沙 梨 种 子 组 织 培 养 技 术 研 究
涂俊凡，秦仲麒，李先明，伍　涛，杨夫臣，朱红艳，刘　政
（湖北省农业科学院果树茶叶研究所／湖北省农业科技创新中心果树茶叶分中心，武汉，４３００６４）
　收稿日期：２０１６－０６－２７；修回日期：２０１６－０８－０３
基金项目：国家现代农业产业技术体系建设专项资金项目（ＣＡＲＳ－２９－１７）；国家科技支撑计划（２０１３ＢＡＤ０２Ｂ０１－３）；湖北省
农业科技创新中心资助项目（２０１１－６２０－００５－００３－０１）；湖北省科技支撑计划项目（２０１５ＢＢＡ２０９）；湖北省农业科
学院青年科学基金项目（２０１４ＮＫＹＪＪ１）资助。
作者简介：涂俊凡，女，副研究员，主要从事梨育种及组织培养技术研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：４９１９８５９７７＠ｑｑ．ｃｏｍ
通信作者：秦仲麒。电话：（０２７）８７７７０２５１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｏｎｇｑｉｑｉｎ＠１６３．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．１３９３８／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－１４３１．２０１６０３１８
摘　要　以“翠冠×圆黄”“翠冠×华梨２号”“丰水×圆黄”“丰水×华梨２号”等４个杂交组合沙梨
果实为试材，经２℃冷藏后，采用组织培养法，研究了消毒方法、种皮、不同浓度６－苄氨基腺嘌呤（６－
ＢＡ）和吲哚丁酸（ＩＢＡ）组合、暗培养时间对沙梨种子萌发及生长的影响。结果表明，沙梨杂交果实
冷藏后根据果实不同情况采用不同方法消毒处理，可提高种子组织培养效率。４个组合沙梨杂交
种子去种皮后接种在 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．０５ｍｇ·Ｌ－１的培养基中暗培养７ｄ后，转
入光照１４ｈ、黑暗１０ｈ条件下培养，发芽率为６０％～８６．６７％，苗健壮，生长速度快。
关键词　沙梨；种子；组织培养；发芽率
　　梨（Ｐｙｒｕｓ）属于蔷薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）梨亚
科（Ｐｏｍｏｉｄｅａｅ）梨属植物。湖北省是沙梨生
产大省，２０１３年湖北省梨种植面积３．９４万
ｈｍ２，占全国栽培面积的３．５４％，居全国第
１１位，梨产业是我省农业发展增效、农民增
收致富的重要产业，在我省农村经济发展中
占有重要地位。选育优良品种是梨产业持续
健康发展的重要因素。杂交育种仍然是选育
新品种的重要手段。沙梨杂交种子受后熟及
休眠影响，导致种子萌芽率不高［１－３］。
本文在前人研究的基础上，进一步对沙
梨种子组织培养技术进行研究，旨在优化组
培条件，为沙梨杂交育种及化学诱变育种提
供技术支持。
１　材料与方法
１．１　试验材料
试验于２０１４年１月至２０１５年１２月在
湖北省农业科学院果树茶叶研究所进行。以
“翠冠×圆黄”“翠冠×华梨２号”“丰水×圆
黄”“丰水×华梨２号”等４个杂交组合沙梨
果实为试验材料，７月中旬至８月中旬采集
成熟期果实，５０％多菌灵可湿性粉剂８００倍
液浸果后晾干。在２℃冷藏条件下，贮藏至
第二年的１月。
１．２　试验方法
１．２．１　贮藏后果实及种子消毒处理 丰水
×圆黄杂交果实贮藏后依据果实外观品质分
为３级：Ⅰ级果实外观完好无破损（代号Ａ）；
Ⅱ级果实外观破损但未腐烂（代号Ｂ）；Ⅲ级
果实腐烂严重（代号Ｃ）。对照为未经贮藏的
成熟果实。消毒方法有两种：①果实在无水
酒精中浸蘸后，在酒精灯上燃烧，放在灭菌后
的托盘上，用无菌解剖刀及镊子切去果肉，取
出种子，在无菌培养皿上剥取种壳、种皮，接
种到种子萌发培养基上。②从果实中取出种
子，流水冲洗后，用７０％乙醇处理３０ｓ，无菌
水冲洗后，再用０．１％ＨｇＣｌ２消毒８ｍｉｎ，种子
消毒之后用无菌水冲洗４～５次，剥去种壳、
种皮，接种到种子萌发培养基上。试验设７
个处理：Ａ、Ｂ、Ｃ果实均采用两种消毒方法，
即处理代号分别为 Ａ１、Ａ２、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２，
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中 国 南 方 果 树 ２０１６年　第４５卷　第５期
对照果实采用第一种消毒方法。每处理１０
粒种子，重复３次。培养基：ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５
ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．０５ｍｇ·Ｌ－１。每天光照
１４ｈ，黑暗１０ｈ，温度（２５±２）℃。暗培养
一周转入光培养。
１．２．２　种皮处理 丰水×圆黄杂交果实在
２℃下贮藏后，已萌动裂开种子和未萌动种
子消毒后直接接种和剥除种壳、种皮后接种
到种子萌发培养基上。
１．２．３　不同生长调节剂处理 翠冠×圆黄、
翠冠×华梨２号、丰水×圆黄、丰水×华梨２
号等４个组合杂交种子消毒后，剥除种壳和
种皮，分别接种到 ＭＳ、ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ·
Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．０５ｍｇ·Ｌ－１、ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０
ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ·Ｌ－１、ＭＳ＋６－ＢＡ
２．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ·Ｌ－１等４种培
养上，每处理１０粒种子，重复３次。４周后
调查不同处理种子发芽率及生长情况。
１．２．４　暗培养时间处理 剥除种壳和种皮
的种子接种到种子萌发培养基上后，分别暗
培养７ｄ、１４ｄ后，在光照１４ｈ，黑暗１０ｈ条
件下培养，对照直接光照培养。
２　结果与分析
２．１　不同消毒方法效果及种子发芽率比较
低温贮藏是打破种子休眠的有效方法。
在果实采后的低温贮藏过程中，部分果实外
观完好无破损，部分果实果皮损坏甚至腐烂，
果实种子的种壳颜色由白色和淡黄色，逐渐
转变为深褐色或黑色。采用不同消毒方法对
不同外观品质的果实进行消毒。结果表明，
丰水×圆黄杂交果实经冷藏后外观完好无破
损的果实用无水酒精浸蘸后燃烧及酒精和升
汞消毒的方法，取种子剥取种壳和果皮，均能
有效去除真菌及细菌污染，种子发芽率分别
为８６．６７％和８３．３３％。果实外观破损但未
腐烂的果实及果实腐烂严重的果实，用酒精
和升汞消毒的方法，能显著降低污染率，减少
种皮表面真菌及细菌污染，果实污染率减至
６．６７％、３６．６７％，发芽率增加至７３．３３％和
４６．６７％。未经冷藏处理的果实直接消毒后
播种，种子发芽率为２６．６７％，且部分组培苗
畸形，生长缓慢（见表１）。
表１　沙梨不同消毒方法效果及种子发芽率
处理 污染率／％ 种子发芽率／％
Ａ１　 ０　 ８６．６７
Ａ２　 ０　 ８３．３３
Ｂ１　 ２６．６７　 ５３．３３
Ｂ２　 ６．６７　 ７３．３３
Ｃ１　 ７６．６７　 ２０．００
Ｃ２　 ３６．６７　 ４６．６７
对照 ０　 ２６．６７
注：Ａ、Ｂ、Ｃ分别表示Ⅰ级果实外观完好无破损、Ⅱ级果
实外观破损但未腐烂、Ⅲ级果实腐烂严重；１、２分别表示两
种消毒方法，１为果实在无水酒精中浸蘸后，在酒精灯上燃
烧，放在灭菌后的托盘上，用无菌解剖刀及镊子切去果肉，
取出种子，在无菌培养皿上剥取种壳、种皮，接种到种子萌
发培养基上。２为从果实中取出种子，流水冲洗后，用７０％
乙醇处理３０ｓ，无菌水冲洗后，再用０．１％ＨｇＣｌ２消毒８
ｍｉｎ，种子消毒之后用无菌水冲洗４～５次，剥去种壳、种皮，
接种到种子萌发培养基上。
２．２　种皮处理对组织培养发芽率的影响
丰水×圆黄杂交果实在２℃下贮藏后，
将其已萌动裂开和未萌动种子进行去种壳、
种皮和不去种壳、种皮的对照处理，接种２周
后观察对其种子萌发的影响。结果表明，已
萌动裂开种子去掉种壳、种皮和不去掉种壳、
种皮，种子在２５℃光照培养条件下，胚根明
显伸长，种子直接进入萌发后的生长状态，发
芽率分别为９０．０％和９３．３％；未萌动种子去
种壳、种皮后的发芽率为８６．６７％，未萌动种
子不去种壳、种皮在培养基上培养２周后未
萌发。剥去种壳、种皮后，接种在在培养基上
能萌发。说明在光照培养条件下，种壳、种皮
对沙梨种子在培养基上萌发抑制明显。
２．３　不同生长调节剂对发芽率及幼苗生长
的影响
４个组合沙梨杂交果实冷藏后，将杂交
种子剥去种壳、种皮后接种到添加不同生长
调节剂的培养基上，４周后调查种子萌发及
生长情况。４个组合沙梨杂交种子在 ＭＳ及
添加不同生长调节剂的培养基上均能萌发生
长。在ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．０５
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　２０１６年　第４５卷　第５期 中 国 南 方 果 树
ｍｇ·Ｌ－１上，４个组合沙梨种子均表现萌芽
整齐，生长较快，翠冠×圆黄组合的种子发芽
率最高，为８６．６７％，组培苗生长健壮，发芽
率最低的组合为翠冠×华梨２号组合的种
子。在 ＭＳ培养基上，种子萌芽较慢，组培苗
健壮。在 ＭＳ＋６－ＢＡ　２ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．２
ｍｇ·Ｌ－１，组培苗较高，部分组培苗玻璃化。
ＭＳ培养基及低浓度的６－ＢＡ、ＩＢＡ能促进沙
梨种子萌发及生长（见表２）。
表２　不同生长调节剂对沙梨种子发芽率及幼苗生长的影响
处理
种子萌芽率／％
Ｃ×Ｙ　 Ｃ×Ｈ　 Ｆ×Ｙ　 Ｆ×Ｈ
苗高／ｃｍ
Ｃ×Ｙ　 Ｃ×Ｈ　 Ｆ×Ｙ　 Ｆ×Ｈ
根长／ｃｍ
Ｃ×Ｙ　 Ｃ×Ｈ　 Ｆ×Ｙ　 Ｆ×Ｈ
ＭＳ　 ８０．００　 ５３．３３　 ７６．６７　 ６３．３３　 １．５７７　 １．３０２　 １．２６６　 １．１０８　 ２．２２８　 １．９４０　 ２．０８７　 １．９５６
ＭＳ１　 ８６．６７　 ６０．００　 ８３．３３　 ７０．００　 １．６２８　 １．４８６　 １．４７２　 １．２４７　 ２．５０６　 ２．１２２　 ２．３２５　 ２．０００
ＭＳ２　 ８３．３３　 ６６．６６　 ８０．００　 ７３．３３　 １．７０４　 １．５５５　 １．５２６　 １．３０８　 ２．７１２　 ２．０８４　 ２．１６２　 ２．１２５
ＭＳ３　 ７６．６７　 ６０．００　 ７３．３３　 ６０．００　 １．９６８　 １．８５４　 １．８３２　 １．６２９　 ２．００４　 ２．１５６　 ２．０６８　 １．９８８
注：ＭＳ为培养基，ＭＳ１为 ＭＳ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．０５ｍｇ·Ｌ－１，ＭＳ２为 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．１
ｍｇ·Ｌ－１，ＭＳ３为 ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０ｍｇ·Ｌ－１＋ＩＢＡ　０．２ｍｇ·Ｌ－１。Ｃ×Ｙ为翠冠×圆黄，Ｃ×Ｈ为翠冠×华梨２号，Ｆ×Ｙ为
丰水×圆黄，Ｆ×Ｈ为丰水×华梨２号。
２．４　暗培养时间对发芽率及幼苗生长的
影响
种子剥去种壳、种皮后，接种在培养基上
暗培养７ｄ，再在光照１４ｈ、黑暗１０ｈ条件下
培养，能促进种子萌发，萌芽整齐，苗健壮，叶
片黄绿，光照培养后，叶片转绿；种子接种后
直接在光照１４ｈ、黑暗１０ｈ条件下，发芽慢，
不整齐，叶片深绿；暗培养１４ｄ，苗细长，叶片
黄绿，光照培养后，叶片转绿（见表３）。
表３　暗培养时间对沙梨种子发芽率
及生长势的影响
培养时间／ｄ 种子发芽率／％ 生长势
０　 ８０．００ 发芽慢，苗不整齐，叶片深绿
７　 ８３．３３ 苗健壮，叶片黄绿
１４　 ７６．６７ 苗细长，叶片黄绿
３　结论及讨论
沙梨种子在梨果实自然生长过程中是无
菌的，在贮藏过程中，部分果实由于腐烂及病
原菌的为害，使种子带菌。找到一种快速、高
效的沙梨种子消毒方法，对于提高沙梨种子
组织培养的效率具有重要作用。常用的消毒
剂种类主要有：次氯酸钠、次氯酸钙、过氧化
氢、升汞、抗生素及硝酸银等，其中升汞溶液
被认为是目前消毒效果最好的。本文通过对
贮藏后不同级别果实进行不同的消毒处理，
提高了沙梨种子组织培养的效率，效果较好。
沙梨果实采收后，直接接种到萌芽培养
基上，萌芽率低，且部分组培苗畸形。在２℃
冷藏条件下贮藏至第二年１月，种子完成后
熟及生理休眠［１，４－５］。种子萌芽快，整齐，明显
地提高了育种效率。
沙梨成熟种子由于具有较多的营养积
累，形态上已有胚根和胚芽的分化，因此提供
简单营养的培养基，便可萌发成苗。经冷藏
后的沙梨果实种子在添加６－ＢＡ　０．５ｍｇ·
Ｌ－１及ＩＢＡ　０．０５ｍｇ·Ｌ－１的 ＭＳ培养基上，
苗生长整齐、健壮，能较快地培育出杂种苗。
参　考　文　献
［１］　杨晓平，胡红菊，田　瑞，等．低温处理沙梨果实对其种
子沙藏发芽率的影响［Ｊ］．广西园艺，２００８，１９（３）：１８－１９
［２］　吴翠云，陈　佳，阿依买木，等．低温与激素处理对解除
杜梨种子休眠的研究［Ｊ］．北方园艺，２００９（４）：４７－４９
［３］　曹　霞，柴明良．梨组织培养的回顾与展望［Ｊ］．中国
南方果树，２００５，３４（４）：７３－７６
［４］　王月志，戴美松，张树军，等．早熟沙梨种子萌发的影
响因素分析［Ｊ］．浙江农业科学，２０１２（８）：１１３０－１１３３
［５］　蔺　经，杨青松，李小刚，等．沙梨种子休眠原因与解
除休眠方法的研究［Ｊ］．江西农业大学学报，２００６，２８
（４）：５２５－５２８
（责任编辑：王新娟）
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