全 文 ：广西 热 带 农业 2007年第 6期(总第 113期)30
不同培养基对菘蓝叶片组织培养的效应
张丽琼 周 琼 柳 林 屈国胜
(陕西安康学院化学与生命科学系 , 安康 725000)
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菘蓝(Isatis indigotica Fort.)为十字花科(Cruciferae)
菘蓝属植物。以根入药 ,药材名板蓝根。有关菘蓝组织
培养的报道较少 , 本试验以菘蓝无菌苗的子叶和下胚
轴为外植体进行初代培养 , 以初代培养形成的叶片进
行继代培养 , 比较了几种不同培养基对菘蓝叶片组织
培养的效应 ,为菘蓝的组织培养提供参考。
1 材料与方法
1.1 材料
试验用菘蓝种子来自于陕西省宁陕县。
将菘蓝种子浸泡 24 h后剥皮 ,于超净工作台上用
75%酒精处理 30 S , 然后用 0.1%升汞消毒 8 min , 无
菌水冲洗 3～ 5次 ,接种于 MS培养基上。取长出的无
菌苗的子叶和下胚轴进行初代培养。取初代培养形成
的无菌苗植株叶片进行继代培养 。
1.2 培养基和培养条件
初代培养基为 MS+ZT 1.0 mg · L -1+IBA 2.0
mg ·L-1;继代培养基为处理A:MS+NAA 0.1 mg·L-1
+6-BA 5.0mg·L-1;处理B:MS+6-BA 0.5 mg·L-1
+2 , 4-D 0.1 mg ·L -1+IBA 0.2 mg ·L -1;处理 C:
MS+6-BA 1.0 mg·L -1+2 ,4-D 0.1 mg·L-1+IBA
0.2mg·L-1;处理 D:MS+6-BA 1.5 mg ·L-1+2 ,4-D
0.1mg·L -1+IBA 0.2mg·L-1;处理 E:MS+6-BA 2.0
mg·L-1+2 ,4-D 0.1 mg·L -1+IBA 0.2mg·L-1。
培养温度为 25 ℃, 光照时间 12 h/d , 光照强度
1600 LX。
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1.3 培养方法
初代培养:将无菌苗子叶切成约 0.5 ～ 1 cm2小
块 , 下胚轴切成 0.5 cm长的小段 , 斜插于初代培养基
中培养。培养约 50 d后进行继代培养 。
继代培养:将初代培养的无菌苗叶片切成约
0.5 ～ 1 cm2小块 ,斜插于培养基中培养 。
2 结果与分析
2.1 初代培养
培养 15 d后 ,子叶膨大 ,无愈伤组织 ,在伤口处有
气生根生成。下胚轴上端有气生根 ,下端稍有膨大 。培
养约 30 d , 子叶和下胚轴均诱导出无菌苗 , 叶片 3 ～ 5
片/株 ,根系少量或没有 。培养约 50 d ,无菌苗叶片增
多 ,但根系仍少量。
初代培养并无愈伤组织产生 , 这与初代培养基所
加生长调节剂有很大关系 。初代培养基中加入了 ZT
和 IBA 2种激素 , ZT能够刺激细胞分裂 , 促进侧芽发
育 , 而 IBA能够促进生根。在 ZT 1.0 mg·L-1及 IBA
2.0 mg ·L-1的相互作用下 , 菘蓝的子叶不能诱导出
愈伤组织 ,而是直接诱导生成无菌苗。
2.2 继代培养
在初代无菌苗的继代培养中 , 加入了 NAA 、 6-
BA 、2 , 4-D及 IBA几种植物生长调节剂 , 6-BA能促
进细胞分裂 , 2 , 4-D能够诱导愈伤组织 , IBA能促进
生根。由表 1可见 ,5个处理均能诱导出愈伤组织 ,且
愈伤组织均比较好 。
处理A不仅能诱导出愈伤组织 ,而且还能促进丛
生苗的生成 , 说明 NAA配合 6-BA ,能够促进菘蓝叶
片诱导愈伤组织及促进芽的生长 。
处理 B 、处理 C 、处理 D 、处理 E几种培养基差别
在于 6-BA的浓度不同 , 处理 B 、处理 C和处理 D能
够诱导出愈伤组织和少量苗 , 三者相比较 , 处理 D的
无菌苗长势较好 , 处理 B较差 , 处理 C诱导愈伤组织
较快;处理 E仅诱导出愈伤组织 。这说明在 2 , 4-D
0.1mg·L -1和 IBA 0.2 mg ·L-1的条件下 , 6-BA 0.5
mg ·L -1能够促进少量根系和芽的生长 , 6-BA 1.0
mg ·L-1及 1.5 mg ·L-1能够抑制根系的生成 、 促进
芽的生长 , 6-BA 2.0 mg ·L-1既抑制了根系的生成 、
也抑制了芽的生成 。
表 1 不同处理的继代培养愈伤组织情况
天数 处理A 处理B 处理C 处理D 处理E
10 叶片膨大 叶片膨大 叶片膨大较明显 叶片膨大 叶片膨大
13
浅绿色愈伤组织 , 丛
生芽 边缘呈现绿色颗粒状 边缘呈现绿色颗粒状 边缘呈现绿色颗粒状 边缘呈现黄绿色颗粒状
15
浅绿色愈伤组织 , 丛生芽 ,少量根系 浅绿色愈伤组织 黄绿色愈伤组织 黄绿色愈伤组织 绿色愈伤组织
25
浅绿色愈伤组织 , 丛生苗多 ,根系少量
黄绿色愈伤组织 , 少量细黄丛生苗 , 少量
根系
黄绿色愈伤组织 , 少量绿色粗壮丛生苗 ,
无根
绿色或黄绿色愈伤组织 , 少量丛生苗 , 苗
粗 、高 、绿 ,无根
黄绿色愈伤组织
3 小结
进行菘蓝的组织培养 , 可以直接诱导无菌苗 , 亦
可先诱导愈伤组织 ,再诱导分化 ,生成无菌苗 。MS+2T
1.0 mg ·L-1+IBA 2.0 mg·L -1培养基可以使菘蓝子
叶及下胚轴直接生成无菌苗;菘蓝叶片诱导愈伤组织
宜采用 MS+6-BA 2.0 mg ·L-1+2 , 4-D 0.1mg ·L-1
+IBA 0.2 mg· L -1培养基;MS+NAA 0.1 mg · L -1
+6-BA 5.0 mg·L -1不仅能使菘蓝子叶及下胚轴诱
导出愈伤组织 , 而且还能促进丛生苗的生长及少量根
系的生成。
植物生长调节剂的作用是调节植物的生长发育 ,
其不同的种类和浓度对植物的生长发育不同。如初代
培养基与继代培养基使用的激素不同 , 则初代培养基
不能诱导出愈伤组织 , 而是直接分化成苗 , 继代培养
基均诱导出了愈伤组织;继代培养基中 , MS+NAA
0.1 mg ·L-1+6-BA 5.0 mg·L -1能明显促进丛生苗
的生长 ,其余 4个处理的差异仅在于 6-BA的浓度不
同 , 其对菘蓝叶片的作用差异明显 , 从试验结果可看
出 , 6-BA、2 , 4-D和 IBA配合使用 ,高浓度的 6-BA
(1.0～ 2.0 mg ·L-1)会抑制 IBA的生根作用 , 甚至抑
制芽的生长 。