全 文 ：·!#· 中药新药与临床药理 !#年 # 月第 $%卷第 & 期
收稿日期：$%%& ’ !! ’ %
作者简介：赵玲敏 ( !)* ’ +，女，硕士，主要从事医学病毒学研究。通讯作者：杨占秋，男，博士生导师，从事医学病毒学研究。
基金项目：国家自然科学基金资助项目 (编号 ,)#%%!), +。
菘蓝的 &种有效成分及配伍组合抗腺病毒作用的研究
赵玲敏 !，杨占秋 !，方建国 $，汤 杰 $，丁晓华 !，肖 红 !（!- 武汉大学医学院病毒研究所，武汉 &,%%!；$-
华中科技大学同济医学院同济医院药剂科，武汉 &,%%,%）
摘要：目的 从菘蓝中提取出 &种有效成分 (编以代码为 *号，号，#号，)号 +，观察 &种有效成分及其配伍抗腺
病毒活性。方法 通过观察细胞病变效应（./0），噻唑兰（122）比色法检测细胞活性，以确定 &种有效成分及
其配伍抗腺病毒的作用。结果 菘蓝的 &种有效成分及其配伍组合对腺病毒生物合成都有抑制作用。随着药物浓度
的增加，./0逐渐减弱，病毒的抑制率增加。结论 菘蓝的 &种有效成分及其配伍组合能在体外通过抑制生物合成
发挥抗腺病毒作用。
关键词：菘蓝；腺病毒；有效成分；配伍；抗病毒实验
中图分类号：3$#4- 4 文献标识码：5 文章编号：!%%, ’ )#,（$%%4）%, ’ %!# ’ %&
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YG;H;ML B;T MAH:P UG=^:;BM:G; ABT :;A:^:MGPS HNNHUM G; MAH ^:GQG<:UBQ LS;MAHL:L； _:MA MAH :;UPHBLH GN MAH TPD< UG;UH;MPBR
M:G;Z MAH ./0 HNNHUM THUPHBLHT B;T :;A:^:MGPS PBMH NGP X:PDL :;UPHBLHT- 2).>,-$) 2AH NGDP BUM:XH UG=YG;H;ML B;T MAH:P
UG=^:;BM:G; ABXH B;M: ’ BTH;GX:PDL BUM:X:MS ^S :;A:^:M:;< MAH ^:GQG<:UBQ LS;MAHL:L :; X:MPG-
?(@A)+’-： !#$% $%&’$)*%# 9-；5TH;GX:PDL；5UM:XH UG=YG;H;ML；.G=YBM:^:Q:MS；5;M:X:PBQ MHLM
腺病毒是儿童呼吸道感染的常见病毒，可引起咽
’结膜炎、肺炎、脑炎、肠炎等。腺病毒肺炎是婴幼
儿肺炎的严重类型，曾于 !)4#年、!)*,年在我国北
方流行，病死率甚高。抗腺病毒治疗无特效疗法。研
制及开发抗腺病毒的新药显得尤为重要 ‘ ! ’ , a。
菘蓝有清热解毒凉血之功效 ‘ & a，我们提取了菘蓝
的 &种有效成分，并进行配伍组合，对其抗腺病毒作
用进行了初步研究，现将实验结果报道如下。
B 材料与方法
B8 B 细胞 70Y ’ $细胞（人咽癌上皮细胞）为本所
保存。细胞培养基为 I101(7S.QG;H公司 +，常规加
入青、链霉素、小牛血清（三利生物制品厂）配成
!% b的生长液和 $ b的维持液。
B8 C 病毒 腺病毒 5TH;GX:PDL为本所保存，在 70Y ’
$细胞增殖，实验用 !%%% 2.JI4% c =9。
B8 D 药物及其有效成分的提取 菘蓝采自安徽亳州，经
华中科技大学同济医学院附属同济医院中药研究室方
建国副主任药师鉴定为十字花科植物菘蓝（ !#$%
$%&’$)*%# 9-）。将其粉碎成粗粉，)4 b乙醇渗漉法提
取，降压浓缩至无醇味，拌以硅藻土采用系统溶剂分离
法，依次以石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇加热回流
萃取，回收溶剂得到 & 种有效成分（编以代码为
*，，# 和 ) 号），得率分别为 !- 4 b，!- ! b，
%- b，!- b。& 种有效成分均为不溶于水的白色
结晶，二甲基亚砜溶解后用 I101 配置成不同浓度
的溶液，使用前经 %- %# 1/B、!4 =:; 消毒灭菌。病
毒唑系天津药业有限公司产品，批号为 %!%,%!。
B8 E 药物细胞毒性测定 在 )* 孔板上，加 ! d !%* c
=9的 70Y ’ $细胞，每孔 #% !9，培养 $& A，细胞长
成单层，加入含药的维持液。, e、4 b .8$孵箱培
养，$ A 后以 122法检测细胞存活率，每一药物浓
度均重复 &孔，同时设正常细胞对照 ‘ 4 a。重复 ,次此
实验。
·!#·中药新药与临床药理 !#年 #月第 $% 卷第 &期
药物
不同药物浓度 $ % & ’()下细胞存活率 & *
表 ! 菘蓝的 + 种有效成分及配伍组合对 ,-. / 0 细胞的毒性作用
注：组 1，组 ，组 2，组 #，组 !! 与对照组病毒唑比较，! ! 3 45 41，药毒性大于病毒唑；6 号，2 号，# 号，组 0，组 7，组 !4 与对照组病
毒唑比较，! ! 3 45 41，药毒性小于病毒唑。各配伍组合组进行比较，2 号的药毒性最小，其次是组 !4，组 7 和 # 号， ! 3 45 4!。
半数毒性浓度（8914）
& %·’(/!
6 号
号
2 号
# 号
组 !
组 0
组 7
组 +
组 1
组 6
组
组 2
组 #
组 !4
组 !!
病毒唑
!05 1
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##5 +
!475 4
##5 #
!4!5 #
##5 0
!4!5 6
#5 +
245 !
25 #
45 #
2!5 6
65 1
25 #
2+5 #
#!5 2
01
#05 +
2#5 0
#15 0
##5 #
##5 #
#65 +
#25 #
#65 2
#5 1
15 6
625 1
25 2
+5 !
65 2
2!5 6
#!5 1
14
#05 4
2#5 0
2#5 0
#15 #
2#5 6
#75 +
#25 0
#15 7
25
45 #
1#5 !
625 1
05 7
+5 7
05 7
25 #
!44
2#5
215 1
225 1
#75 2
2#5 !
#!5 6
#65 +
#!5 6
05 7
45 +
1+5 7
115 7
625 1
05 7
65 2
2!5 7
044
25 !
265 6
265 1
25 2
265 !
#45 !
#15 7
2#5 +
115 7
6#5 !
+05 6
1!5 !
645 1
625 1
1!5
#5
71
65 6
605
265 6
245 !
25 +
25 1
#+5 !
215 +
+25
65 !
05 6
+#5 2
15 #
65 !
145 !
15
144
665 #
15 !
215 7
#5 !
1+5 7
205 7
215 7
615
75 2
675 2
075 #
+!5 0
+65 #
615 2
+65 #
+5 +
675 ++!
1!+5 +1
!+65 ++!
045 4!
1415 47
6!05 #7!
+!5 6!
1265 4+
05 1!!
11#5 1
!225 !1!
7705 4!
+665 00!
205 0+!
765 0+
175 1
! # 药物对腺病毒侵入细胞的阻断作用 用药物预先
处理细胞 + :，用 ;<=洗涤后每孔加入 14 !(的 !444
89>?14 & ’( 的腺病毒，吸附 0 :，加细胞维持液，置
于 7 @、1 * 9A0 孵箱培养，每日观察细胞病变情
况，+2 : 后用 B88 法检测病毒抑制率 C 1 D。重复 7 次
此实验。
! $ 药物对腺病毒直接灭活作用 将药物与 !444
89>? 14 & ’(的腺病毒等量混合，7 @作用 0 :，再将
其接种在长成单层的 ,-. / 0 细胞上，吸附 0 :，加
细胞维持液，置于 7 @、1 * 9A0 孵箱培养，每日
观察细胞病变情况，+2 : 后用 B88法检测病毒抑制
率 C 1 D。重复 7次此实验。
! % 药物对腺病毒增殖的抑制作用 将 !444 89>? 14 &
’(的腺病毒接种在长成单层的 ,-. / 0 细胞上，
吸附 0 :，用 ;<= 洗涤后，每孔加入不同浓度的药
物，每一药物浓度均重复 + 孔，同时设正常细胞
对照和病毒对照。每日观察细胞病变情况，当病
毒对照达到#的细胞病变时，用 B88 法检测病毒
抑制率 C 1 D。重复 7 次此实验。
! & ’种有效成分的配伍 把 +种有效成分进行等比
混合，使最后混合物终浓度与单个有效成分作用于细
胞的终浓度相同。+种有效成分按照数学的排列组合
可以得到 !!种组合，分别为：组 !，6号 E 号；组
0，6 号 E 2 号；组 7， 6 号 E # 号；组 +， 号 E 2
号；组 1，号 E #号；组 6，2号 E #号；组 ，6号
E 号 E 2号；组 2，6号 E 号 E #号；组 #，6号 E
2号 E #号；组 !4，号 E 2号 E #号；组 !!，6号 E
号 E 2号 E #号。把这 !!种组合及 +种有效成分按
照上述的方法进行实验 C 6 D。
! ( 细胞存活率和病毒抑制率的测定 用 B88 法检
测。弃去上层的细胞维持液，每孔加入 1 ’% & ’(
的 B88 74 !(，孵育 + F 6 :，加二甲基亚砜每孔
!14 !(，振荡混匀后，在 14 G’波长下测定吸光度
H值，根据吸光度值计算细胞存活率、病毒抑制率、
治疗指数 C D。
! !) 统计学处理 用统计软件 =;== !!5 1 回归 IJK
%LJMMNOG的 ;LOPNQ计算半数细胞存活率（8914），半数
细胞抑制率（>914）。用统计软件 =;== !!5 1 的 GOGK
.RLR’JQLNS的 9:N / =TURLJ分析比较菘蓝的 +种有效成
分及配伍组合对 ,-. / 0细胞的毒性及对腺病毒增殖
的抑制作用，组内与组间进行两两比较。
* 结果
* ! 菘蓝的 ’种有效成分及配伍对 +,- . *细胞的毒
性作用 菘蓝有效成分对细胞的毒性作用表现为细胞
变小，胞内颗粒增多，折光性差。+种有效成分及配
伍组合对 ,-. / 0细胞的毒性的毒性作用不同。菘蓝
的 +种有效成分及配伍组合对 ,-. / 0细胞的毒性作
用如表 !所示。
* * 菘蓝的 ’种有效成分及配伍组合对腺病毒感染的
预防作用 每日观察细胞病变情况，细胞均出现颗粒
增多，变小变圆，坏死脱落等典型的 9;- 表现，
B88 显示病毒抑制率与病毒对照组一致，结果表明
菘蓝的 +种有效成分及配伍组合对腺病毒感染均无预
防作用。
·!#· 中药新药与临床药理 !#年 # 月第 $%卷第 & 期
组别 不同浓度 $ % & ’( )下细胞病变效应 不同浓度 $ % & ’( )下病毒抑制率 & *
表 ! 菘蓝的 +种有效成分及配伍组合对腺病毒直接灭活作用
, 号
- 号
号
. 号
组 !
组 /
组 0
组 +
组 1
组 ,
组 -
组
组 .
组 !#
组 !!
病毒唑
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不同浓度 $ % & ’( )下细胞病变效应 不同浓度 $ % & ’( )下病毒抑制率 & *组别
表 菘蓝的 + 种有效成分及配伍组合对腺病毒感染的预防作用
表 # 菘蓝的 + 种有效成分及配伍组合对腺病毒增殖的抑制作用
不同浓度 $ % & ’( )下细胞病变效应 不同浓度 $ % & ’( )下病毒抑制率 & *组别
, 号
- 号
号
. 号
组 !
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病毒唑
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注： 号，- 号，组 0，组 +，组 - 与对照组病毒唑比较，! ! 9 #2 #1，优于对照药病毒唑；其余组作用不如病毒唑， ! 9 #2 #1。各配伍组合
组进行比较， ! 9 #2 #!， 组 - 作用最好，其次是组 0，组 +， 号。
·!!·中药新药与临床药理 !#年 #月第 $% 卷第 &期
! # 菘蓝的 $种有效成分及配伍组合对腺病毒直接灭
活作用 每日观察细胞病变情况，细胞均出现颗粒增
多，变小变圆，坏死脱落等典型的 #$% 表现，&’’
显示病毒抑制率与病毒对照组一致，表明菘蓝的 (种
有效成分及配伍组合对腺病毒无直接灭活作用。
! $ 菘蓝的 $种有效成分及配伍组合对腺病毒增殖的
抑制作用 实验结果表明，菘蓝的 (种有效成分及配
伍组合对腺病毒的增殖均有抑制作用，表现在随着药
物浓度的增加，细胞变小变圆、颗粒增加、破碎脱落
等典型的 #$% 表现减弱，病毒抑制率增加，并表现
出量效关系。菘蓝的 (种有效成分及配伍组合对腺病
毒增殖的抑制作用如表 (所示。
# 讨论
腺病毒（)*+,-./012）可致终年性、流行性感
染，在冬季可引起小规模爆发性急性呼吸道感染。
腺病毒感染多见于小于 3 岁的婴幼儿，年龄越小越
易感染。腺病毒最常引起的是咽扁桃体炎，其次为
肺炎、胃肠炎、支气管炎及中耳炎等。严重者可并
发肺外脏器损害，包括肝炎、脑炎、结膜炎及凝血功
能异常，预后较差。要鉴别腺病毒感染和细菌感染较
为困难，因此，早期诊断腺病毒感染对指导临床抗病
毒治疗有重要意义 435。抗腺病毒的特异治疗至今滞后，
目前较多使用病毒唑、干扰素、人血丙种球蛋白和聚
肌胞等，但都为广谱抗病毒的治疗方法，针对腺病毒
的特异性药物还待研究和开发 4，65。
菘蓝 7 !#$% $%&’$()%# 89 :为十字花科植物，其根和
叶均可入药，干燥根入药称板蓝根，干燥叶入药称为
大青叶，板蓝根和大青叶的药性基本相同，有泄火、
解毒、凉血等功效，主要分布在华东各省、河南、山
西等地 4 ( 5。临床病例研究证明菘蓝可治疗流行性腮腺
炎、病毒性肠炎、尖锐湿疣、乙型肝炎、甲型流感病
毒、扁平疣等病毒性疾病。还有报道菘蓝有调节免疫
细胞分泌 ;8 < =、’>? < ! 及提高细胞免疫功能的作
用，还有抗活性氧作用、抗炎作用及有抗菌作用 4，6 5。
菘蓝对病毒性疾病的治疗作用可能是菘蓝中所含的嘌
呤、嘧啶及吲哚成分通过干扰病毒 @>) 的合成，以
及通过提高机体的免疫力而发挥作用 4 !A 5。为了寻找
有效治疗腺病毒引起的疾病，我们需要选用对腺病毒
敏感细胞进行实验。传代细胞 B%C < =细胞对腺病毒
敏感，对病毒的敏感性稳定，可经常传代，故我们选
用传代细胞 B%C < =细胞通过体外细胞实验进行了对
菘蓝的 (种有效成分抗腺病毒研究。
用 &’’法测定细胞终点毒性指标，结合形态观
察细胞毒性较简便易行 4 !! 5。通过细胞毒性实验，计
算 ;@DA 等数值对评价药物毒性，指导实验或临床用
药有十分重要意义。我们的目的是从抗腺病毒的吸
附、复制及对病毒直接灭活这几方面，研究抽提的 (
种有效成分及组合抗腺病毒作用及机制。
结果表明，菘蓝的 (种有效成分及配伍组合中，
对 B%C < = 细胞的毒性作用不同， 号的药毒性最
小，其次是 E号、号、6号组合，F号、6号组合和
6号。菘蓝的 (种有效成分及配伍组合对腺病毒感染
均无预防作用，对腺病毒无直接灭活作用，故不能用
来作为腺病毒感染的预防用药。菘蓝的 (种有效成分
及配伍组合对腺病毒增殖均有抑制作用，随着药物浓
度的增加，病毒抑制率增加，并表现出量效关系。菘
蓝的 (种有效成分及配伍组合对腺病毒增殖的抑制效
果， F号、E号、号组合作用最好，其次是 F号、6
号组合，号，E号 号组合。
以上研究表明，菘蓝的 (种有效成分及配伍组合中
有 D种组合对腺病毒增殖的抑制作用都优于病毒唑，但
有效成分还需通过化学分析而进一步明确其分子结构，
其抗腺病毒的作用还需要在动物实验中进一步证实。
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7编辑：龙维富 :