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不同品种类型菘蓝根中表告依春累积规律研究



全 文 :不同品种类型菘蓝根中表告依春累积规律研究
刘倩倩1,王康才1 * ,罗春红1,邹立思2
(1. 南京农业大学园艺学院,江苏 南京 210095;2. 南京中医药大学中药学院,江苏 南京 210046)
摘要 目的:研究不同品种类型菘蓝根中表告依春的分布,为筛选优质菘蓝品种提供科学依据。方法:HPLC
测定白菜叶型、甘蓝叶型、芥菜叶型与四倍体 4 个品种类型菘蓝主根与侧根中表告依春的含量,并比较了菘蓝根中
木部与皮部表告依春含量的差异。结果:不同品种类型菘蓝主根与侧根中表告依春含量差异显著,4 个品种类型菘
蓝侧根中表告依春含量均高于主根;不同品种类型菘蓝木部与皮部表告依春含量差异显著,4 个品种类型菘蓝皮部
表告依春含量均高于木部。结论:菘蓝侧根中表告依春含量高于主根,且表告依春主要分布于皮部。
关键词 菘蓝;品种类型;表告依春;累积规律
中图分类号:R282. 6 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2013)02-0199-03
Accumulation Law of Epigoitrin in Roots of Isatis indigotica of Different Breed Types
LIU Qian-qian1,WANG Kang-cai1,LUO Chun-hong1,ZOU Li-si2
(1. College of Horticulture,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China;2. College of Chinese Materia Medica,Nanjing U-
niversity of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210046,China )
Abstract Objective:To study the distribution law of epigoitrin in roots of Isatis indigotica of different breed types and provide a
scientific basis for screening of high-quality Isatis indigotica breed. Methods:Determined the contents of epigoitrin in tap root and lateral
root of Chinese-cabbage-leaf Isatis,cabbage-leaf Isatis,mustard-leaf Isatis and tetraploid Isatis by HPLC. Also,compared the contents of
epigoitin in xylem and phloem of Isatis indigotica. Results:Contents of epigoitrin in the tap root and lateral root of Isatis indigotica of
the different breed types were significant different. In four breed types of Isatis indigotica,contents of epigoitrin in the tap root and phlo-
em were higher than those in the lateral root and xylem,respectively. Conclusion:Contents of epigoitrin in the lateral root of Isatis indig-
otica are higher than those of tap root and epigoitrin distributes mainly in phloem.
Key word Isatis indigotica Fort.;Breed type;Epigoitrin;Accumulative Law
收稿日期:2012-06-15
基金项目:国家公益性行业(农业)科研专项(200903008-02-06)
作者简介:刘倩倩(1988-) ,女,在读硕士研究生,专业方向:药用植物栽培与生理;Tel:13770931160,E-mail:2010104141@ njau. edu. cn。
* 通讯作者:王康才,Tel:13770585253,E-mail:wangkc@ njau. edu. cn。
板蓝根为十字花科植物菘蓝 Isatis indigotica
Fort. 的干燥根,味苦、性寒,具有清热解毒、凉血利
咽等功效,表告依春为板蓝根的主要成分指标〔1〕。
目前,国内许多地区种植菘蓝,其中种植面积较大的
地区有甘肃、河北、安徽、江苏、贵州、黑龙江大庆等。
虽然菘蓝种植历史较长,但关于品种选育工作仍处
于起步阶段,目前国内仅有多倍体品种的报道与运
用〔2,3〕。为此,本课题组对国内菘蓝资源进行了广
泛收集、整理与评价,筛选出了具有代表性的菘蓝品
种类型(白菜叶型、甘蓝叶型、芥菜叶型和四倍体)
作为研究材料,本研究通过对菘蓝主根与侧根、木部
与皮部表告依春含量的测定,了解了有效成分表告
依春在板蓝根中的分布情况,从而为合理利用菘蓝
种质资源,筛选优质菘蓝品种提供科学依据。
1 材料与仪器
1. 1 材料 供试材料为白菜叶型、甘蓝叶型、芥菜
叶型和四倍体菘蓝的种子,由南京农业大学中药材
研究所菘蓝课题组收集,经南京农业大学中药材研
究所王康才教授鉴定为十字花科植物菘蓝 Isatis in-
digotica Fort. 的种子,于 2011 年 4 月种植于南京农
业大学中药材实验基地,同一水平下进行常规田间
管理。于 2011 年 11 月采收板蓝根样品,每种随机
取 10 株菘蓝,洗净,主根与侧根、木部与皮部分开,
分别于 105 ℃杀青 15 min,60 ℃烘干至恒重,打粉,
过 60 目筛,备用。
1. 2 试剂 甲醇为色谱纯,0. 02%磷酸溶液,水为
超纯水,表告依春(批号:111753-200601)对照品由
中国食品药品检定研究院提供。
1. 3 仪器 安捷伦高效液相色谱仪(LC1120) ,
KQ-250B型超声仪(昆山市超声仪器有限公司) ,分
析电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
2 方法
2. 1 性状观测 按照菘蓝 DUS 测试指南研制标
准,在生长期间取样观测,比较叶片、根的特征。
2. 2 表告依春的测定
2. 2. 1 色谱条件:C18 柱(250 mm × 4. 6 mm,5
·991·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2013.02.003
μm) ,流动相为甲醇-0. 02%磷酸溶液(7 ∶ 93) ,流速
1. 0 mL /min,检测波长 245 nm,柱温 25 ℃,进样量
为 10 μL。见图 1。
图 1 对照品(A)和菘蓝根样品(B)的 HPLC图谱
1. 表告依春
2. 2. 2 对照品溶液的制备:称取表告依春对照品
约 1. 0 mg,精密称定,置于 10 mL量瓶中,加流动相
至刻度,摇匀,制成质量浓度为 0. 121 mg /mL 的对
照品溶液。
2. 2. 3 供试品溶液的制备:取供试样品约 0. 2 g,
精密称定,置 50 mL 具塞锥形瓶中,加水 20 mL,称
重,超声提取(功率 250 W,频率 20 kHz)60 min,取
出,放冷,再称重,用水补足失重,滤过,弃去初滤液,
取续滤液 2 mL,水浴蒸干,残渣加流动相适量溶解,
并定容于 10 mL量瓶中,摇匀,0. 45 μm微孔滤膜滤
过,取续滤液,即得。
2. 2. 4 线性关系考察:精密量取质量浓度为
0. 121 mg /mL的对照品溶液,分别稀释得到质量浓
度为 3. 025、6. 050、12. 100、24. 200、60. 500 μg /mL
的对照品溶液,分别精密吸取上述对照品溶液 10
μL,按“2. 2. 1”项下色谱条件进行测定,以峰面积
(Y)和对照品浓度(X)进行线性回归,回归方程为Y =
60116X + 102383,r = 0. 9996,表告依春在 3. 025 ~
60. 500 μg /mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 2. 5 精密度试验:精密吸取质量浓度为 12. 100
μg /mL的对照品溶液 10 μL,连续进样 6 次,测定,
峰面积的 RSD为 0. 46%,表明精密度良好。
2. 2. 6 重现性试验:称取同一品种类型同一部位
的板蓝根粉末 0. 2 g,平行 6 份,精密称定,制备供试
品溶液,精密吸取 10 μL,在同一色谱条件下测定。
计算所得 RSD为 1. 02%,表明该方法重现性良好。
2. 2. 7 稳定性试验:精密量取同一供试品溶液 10
μL,分别在 0、2、4、8、16、24 h 进样,测定,峰面积的
RSD为 1. 13%。表明供试品在 24 h内稳定。
2. 2. 8 加样回收率试验:取已知表告依春含量板
蓝根粉末共 6 份,称重后加入表告依春对照品溶液
适量,按照“2. 2. 3”项下方法制备供试品溶液,结果
测得平均加样回收率均符合规定要求。
2. 2. 9 样品含量测定:各供试品溶液按“2. 2. 1”
项下条件进行测定。
3 结果与分析
3. 1 不同品种类型菘蓝的性状差异 本实验对不
同品种类型菘蓝的各部位性状进行了观察与比较,
发现它们分别在叶、根等方面存在差异:在倍性方
面,白菜叶型、芥菜叶型、甘蓝叶型菘蓝均属于二倍
体;仅芥菜叶型幼叶有绒毛;叶片颜色由深到浅为芥
菜叶型 >四倍体 >白菜叶型、甘蓝叶型;在叶形方
面,芥菜叶型与四倍体叶片均为倒卵形、白菜叶型为
椭圆形、甘蓝叶型为披针形;叶片蜡质由多到少为白
菜叶型、甘蓝叶型 >四倍体 >芥菜叶型;白菜叶型主
根最长,根分枝最少。见表 1。
表 1 不同品种类型菘蓝性状比较
类型 倍性 绒毛 叶色 叶形 叶片蜡质 根长 根分枝
白菜叶型 二倍体 无 浅绿 椭圆形 多 长 少
芥菜叶型 二倍体 有 深绿 倒卵形 少 中 多
甘蓝叶型 二倍体 无 浅绿 披针形 多 短 多
四倍体 四倍体 无 中等绿 倒卵形 中 短 多
注:绒毛于幼叶时期观察;叶色为叶片上表面颜色
3. 2 不同品种类型主根与侧根中表告依春含量比
较 不同品种类型菘蓝根中表告依春含量差异显
著,4 个品种类型菘蓝根中表告依春含量侧根均高
于主根,主根部分由高到低为芥菜叶型 >四倍体 >
甘蓝叶型 >白菜叶型,侧根部分由高到低为芥菜叶
型 >四倍体 >白菜叶型 >甘蓝叶型,其中,芥菜叶型
主根与侧根中含量均远高于其他类型。见图 2。
图 2 菘蓝主根与侧根中表告依春含量比较(n =3)
·002· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月
3. 3 根的不同部位中表告依春含量比较 木部与
皮部表告依春含量差异显著,4 个品种类型中表告
依春含量皮部远高于木部(图 3)。其中芥菜叶型差
异最大,皮部中含量为木部的 13. 23 倍;甘蓝叶型差
异最小,为 7. 45 倍。由此可以看出,表告依春主要
存在于皮部中。
图 3 菘蓝根中木部与皮部表告依春含量比较(n =3)
4 讨论
菘蓝在外观形态、生长习性上与同科植物油菜
有类似现象。中国油菜栽培种根据其遗传特征、亲
缘关系和形态特征等可分为白菜型、芥菜型和甘蓝
型 3 大类型〔4,5〕。中国油料所筛选出的 3 个抗病品
种油菜所具有的共同形态特点是叶片蜡粉多、分枝
为上生型、较紧凑、茎秆坚硬、微紫色或绿色〔6〕。油
菜特定的形态特征可以反映油菜抗病的强弱。本课
题组在收集、比较国内菘蓝种质资源的过程中,发现
陇西、云南、河北安国 3 个地区的菘蓝存在类似于油
菜的 3 大类型的形态特征,初步将这 3 个地区的菘
蓝命名为甘蓝叶型、白菜叶型、芥菜叶型。本研究结
果发现,芥菜叶型菘蓝具有叶色深绿、叶柄基部花青
苷显色强、蜡质少、根分枝多、匍匐生长等形态特征,
是否具有抗病性需要进一步的研究。
鄢丹等〔7〕研究发现,不同木皮比板蓝根药材质
量存在差异,木皮比低于1∶ 1的质量较优且与化学
成分和生物活性信息有一定相关性。本实验除了分
别比较 4 个品种类型菘蓝主根与侧根中表告依春含
量外,还分别测定了 4 个类型板蓝根的木部与皮部
表告依春含量。通过观察与测量发现,4 个品种类
型菘蓝侧根中木皮比均低于 1 ∶ 1,主根中木皮比因
品种不同而不同,其中芥菜叶型菘蓝主根与侧根中
皮部所占比例较大。实验结果表明,4 个品种类型
板蓝根中表告依春含量均是侧根高于主根,皮部中
表告依春含量远高于木部,其中,芥菜叶型的主根与
侧根含量远高于其他 3 种。由此可以看出,表告依
春含量的多少与板蓝根中的木皮比成反比。生产
中,人们习惯将主根粗长者列为上品,本实验结果表
明,在产量一致条件下,同一品种类型板蓝根,侧根
越多,含有的表告依春越多。是否能将侧根多少作
为生产上板蓝根优劣的评价标准还需要进一步的研
究。
参 考 文 献
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·102·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 36 卷第 2 期 2013 年 2 月