全 文 ：Vol. 26 No. 1
Jan. 2010
第 26卷 第 1期
2010年 1月
赤 峰 学 院 学 报（自 然 科 学 版）
Journal of Chifeng University（Natural Science Edition）
十字花科植物菘蓝(Isatis indigotica)的根称为
板蓝根（Radix Isatidis），板蓝根药理作用具有抗
菌抗病毒，抗钩端螺旋体及解毒作用.临床应用可
治流行性感冒，预防流行性腮腺炎，治肝硬化，治肝
炎等作用.目前，在生产中，板蓝根品种较为混乱，
加上药材生产基地间的频繁引种，使药材生产者对
板蓝根的品种难以确定，直接影响了板蓝根药材质
量的稳定，以及生产规范化的进行.因此，建立简便
的品种鉴定方法具有重要意义.同时，在对菘蓝进
行细胞遗传学研究和育种过程中，也常常需要进行
染色体检查.染色体计数可以揭示物种的基本种性.
对于双亲染色体不等的种间杂种，染色体计数还可
以被直接用来判断杂种的真实性.
1 材料与方法
1.1 试验材料
试验材料为二倍体种安国菘蓝和四倍体种安
国菘蓝的种子.
1.2 试验方法
1.2.1 催芽 在培养皿内铺上两层滤纸，在湿润的
条件下将种子培养萌根，在 30℃左右的温度下，待
萌发后根长 0.5—1.5cm时，保留根尖切下约 0.5cm
左右的一段作为材料.
1.2.2 预处理 （Ⅰ）将材料置于暗处的敞口培养
皿中，用冰水混合物刚浸没材料，处理 12h以上；
（Ⅱ）在 18℃的恒温振荡器（THZ- C）中，用现配的
0.002mol.L- 1的 8- 羟基喹啉刚浸没敞口培养皿里
的材料，黑暗下振荡，30次 /min，处理 1- 4h.在早晨
8：00~9：00之间切取根尖和卷须，设计四种预处理.
a、对照，不预处理.b、（Ⅰ）；c、（Ⅱ）；d、（Ⅰ）+（Ⅱ）.
1.2.3 固定 将经过预处理的材料用蒸馏水洗去
残液，用现配的 Carnoy’sⅠ固定液（无水酒精的体
积：冰醋酸体积 =3：1）和改良 Carnoy’sⅡ固定液
（无水酒精：氯仿：冰醋酸 =5：2：3）于低温暗处固定
材料 12h以上，然后转入 70%酒精中，冰箱中保存
备用.
1.2.4 解离 用 1mol/LHCl在电热恒温水箱（HH8
型） 中于严格的 60℃下解离 . 比较 5- 6min 和
10- 15min两种时间的解离效果. 材料经解离后，用
蒸馏水洗涤数次，将材料中的酸洗净，以便染色.
1.2.5 染色压片 先用 Schiff’s试剂（脱色的碱性
品红）于室温下暗处染色 1h再用 1%醋酸洋红复
染，微烤，敲片、压片.
1.2.6 镜检与摄影 OLYMPUS显微成像系统镜检
（BH- 2）％照相.先用低倍镜寻找 30个分裂相良好
的细胞，确定处于不同分裂时期的细胞百分率，然
后用高倍镜仔细观察各时期染色体的行为和特征.
2 结果与分析
2.1 不同处理对实验的影响
根据处理效果，发现以低温和化学药剂结合的
处理对于根尖是效果最佳，中期分生细胞的比例高
达 10~15%，仅低温处理与不处理的几乎没有区
别，分裂指数都界于 1%~5%，两种固定液对根尖的
菘蓝的染色体制片技术及核型研究
鹿 萍
（赤峰学院 医学院，内蒙古 赤峰 024000）
摘 要：目的：建立板蓝根染色体制片技术及核型分析方法，以解决生产中品种混乱、品种鉴定的实际
问题.方法：以菘蓝种子萌发后的根尖细胞为材料，用不同预处理方法制备染色体标本，选择一种较易制备
理想的染色体标本的方法，并利用这些染色体标本对二倍体与四倍体染色体进行了核型分析.结果：确定
了菘蓝染色体的制片方法，获得了二倍体、四倍体染色体图片，通过分析二倍体染色体数为 14条，核型为
公式为 2n=2x=14=14m，四倍体染色体数为 28条，核型公式为 4n=4x=28=28m.
关键词：菘蓝；染色体制片技术；核型研究
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673- 260X（2010）01- 0022- 03
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DOI:10.13398/j.cnki.issn1673-260x.2010.01.014
作用等效.对于解离过程超过 10min，则容易出现染
色体松软膨化现象（表 1）.
2.2 二倍体菘蓝与四倍体菘蓝核型分析
二倍体核型模式图见图 1：2，核型图见图 2：1，
材料
中期分生细胞的比例 (%)* 固定后染色体硬化程度 解离后细胞分散和染色体平整程度
a b c d Carnoy’sⅠ Carnoy’s II 5- 10min 10- 15min
根尖 1~5 1~5 5~8 10~15 不粘连 不粘连
分散
平整
分散
膨化
表 1 对菘蓝根尖进行的不同处理及其效果的比较
a、b、c和 d,代表四种预处理方法。
种名 染色体编号 染色体长度 =长臂 +短臂 相对长度 臂比 类型
菘蓝二倍体 1 2.15=1.25+0.90 17.05 1.19 m
2 2.04=1.08+0.96 16.18 1.13 m
3 1.92=1.02+0.90 15.23 1.13 m
4 1.84=0.98+0.96 14.59 1.14 m
5 1.75=0.95+0.80 13.88 1.19 m
6 1.66=0.91+0.75 13.16 1.21 m
7 1.25=0.56+0.69 9.91 1.23 m
菘蓝四倍体 1 2.62=1.41+1.21 10.93 1.17 m
2 2.26=1.17+1.09 9.43 1.07 m
3 2.18=1.25+0.93 9.10 1.34 m
4 1.94=1.16+0.78 8.10 1.48 m
5 1.84=0.98+0.86 7.68 1.13 m
6 1.80=1.09+0.71 7.51 1.37 m
7 1.79=1.10+0.69 7.47 1.59 m
8 1.76=1.02+0.74 7.35 1.38 m
9 1.66=0.94+0.72 6.93 1.31 m
10 1.37=0.80+0.57 5.72 1.40 m
11 1.21=0.62+0.59 5.05 1.05 m
12 1.21=0.70+0.51 5.05 1.37 m
13 1.16=0.62+0.54 4.84 1.15 m
14 1.16=0.69+0.47 4.84 1.32 m
表 2 核型分析结果
核型分析结果见表 2. 根据上述图、表分析，菘蓝二倍体染色体的组
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型公式为：2n=2x=14=14m，全组染色体总长度为
12.61μm，染色体长度变异范围为 1.25- 2.15μm，
全为小染色体.属 4A类核型.
四倍体核型模式图见图 1，核型图见图 2，核型
分析结果见表 2.
由上述图、表可知菘蓝二倍体染色体组型公式
为：4n=4x=28=28m,全组染色体总长度为 23.96μm
，染色体长度变异范围为 1.16- 2.62μm，全为小染
色体.属 4A类核型.
3 讨论
（1）菘蓝染色体很小，因此，在测量长臂和短臂
时，难以确定长、短臂的分解线，只有制作染色体分
散、染色体分开，而着丝粒未分开的染色体标本，并
把染色体相片尽量放大，才能较准确的确定着丝点
的位置，使数据可靠.
（2）本实验最终确立的卷须制片流程为：取新
萌发的根尖 1- 3cm，在通气性良好的器皿中用冰水
混合物暗处处理 12h以上，然后于 18℃下用 8- 羟
基喹啉遮光处理 2- 4h，用 Carony’s II固定液固定
24h（随后可以转到 70%酒精中冰箱中保存备用），
经 1mol.L- 1HCl于严格 60℃下解离 10- 20min后，
切取根尖 1.5- 3mm的分生区，用 Schiff试剂于阴凉
处遮光染色 1h，再用 1%醋酸洋红滴染、微烤、敲
片、压片、镜检和照相.
（3）最后确立了四倍体菘蓝为 28条染色体，为
二倍体加倍.
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参考文献：
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1.菘蓝四倍体 2.菘蓝二倍体
图 1 核型模式图
图 2 核型图
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