全 文 ：植物资源与环境学报　2008, 17(4):73-74　　　　　　　
JournalofPlantResourcesandEnvironment　　　　　
　　　 不同时期山里红叶片中多元酚类成分含量的测定
赵彩云 1, 2 , 陈筱清 1 , 王　强 1, ① , 王年鹤 3 , 田逸民 2
〔1.中国药科大学 , 江苏 南京 210038;2.江苏省徐州药品检验所 , 江苏徐州 221006;
3.江苏省·中国科学院植物研究所(南京中山植物园), 江苏南京 210014〕
DeterminationofcontentofpolyphenoliccompoundsinleafofCrataeguspinnatifidavar.majoratdiferentperiods
ZHAOCai-yun1 , 2 , CHENXiao-qing1 , WANGQiang1, ① , WANGNian-he3 , TIANYi-min2 (1.ChinaPharmaceuticalUniversity, Nanjing210038, China;2.JiangsuProvincialXuzhouInstituteforDrugControl, Xuzhou221006, China;3.
InstituteofBotany, JiangsuProvinceandtheChineseAcademyofSciences, Nanjing210014, China), J.PlantResour.＆Environ.2008, 17(4):73-74
Abstract:Thecontentofpolyphenoliccompoundsincludingchlorogenicacid, vitexin-4″-O-glucoside, vitexinrhamnoside,
rutin, vitexin, hyperosideinleafofCrataeguspinnatifidaBungevar.majorN.E.Br.atdiferenttimeswasdeterminedbyHPLC.Theresultsshowthatthecontentofpolyphenoliccompoundsindiferenttimesisvarious.InApril, thetotalcontent
ofpolyphenoliccompoundsandthecontentsofchlorogenicacid, vitexin-4″-O-glucoside, vitexinrhamnoside, rutinreachthepeak.Andthecontentofeverycompoundandthetotalcontentofthesecompoundsdecreasegradualywiththeplant
growing, andreachthelowestpointinJulytoAugust.Therefore, inordertoextractpolyphenoliccompounds, theoptimalharvesttimeforC.pinnatifidavar.majorleafisApril.
关键词:山里红叶片;多元酚类成分;生长期;含量测定
Keywords:leafofCrataeguspinnatifidaBungevar.majorN.E.Br.;polyphenoliccompound;growthstage;contentdetermination
中图分类号:Q949.751.8;R284.2　　文献标志码:A　　文章编号:1004-0978(2008)04-0073-02
　　中药山楂叶为山里红(CrataeguspinnatifidaBungevar.
majorN.E.Br.)或山楂(C.pinnatifida)的干燥叶 [ 1] 。近几
年来 , 随着提取工艺及检测手段的提高 , 对山楂叶的研究取
得了一定的进展。山楂叶中含有牡荆素 、芦丁 、牡荆素鼠李
糖苷 、金丝桃苷 、牡荆素 -4″-O-葡萄糖苷等黄酮类成分及
绿原酸等酚酸类成分 , 具有降压 、强心和清除自由基等作
用 [ 2-5] 。为了合理地开发利用山楂叶 , 并确定其最佳采收
期 , 作者采用 HPLC法对不同生长期山里红叶片中的黄酮类
成分和绿原酸等多元酚类成分进行了含量分析。
1　材料和方法
1.1　材料
供试山里红叶片采自江苏省铜山县汉王镇大窝子山 ,原
植物由田逸民主任中药师鉴定。于 2007年 4月至 10月间每
月 1日和 15日采集同一棵山里红植株上的叶片 , 60 ℃干燥
至恒质量 , 粉碎 ,过 50目筛 ,置于干燥器中保存 , 备用。
绿原酸 、金丝桃苷 、芦丁和牡荆素鼠李糖苷标准品均购
自中国药品生物制品检定所(纯度为 100%);牡荆素和牡荆
素 -4″-O-葡萄糖苷标准品由中国药科大学陈虹提供(纯
度大于 99.0%)。
1.2　方法
1.2.1　色谱条件　使用 Waters高效液相色谱仪(包括 2695
泵 、2996PDAD检测器 、自动进样器和 Empower色谱工作站)
进行 HPLC分析。 色谱柱为 SepaxHPC18柱(4.6 mm×250
mm, 5 μm)。流动相 A为 V(乙腈)∶V(四氢呋喃)=19∶1,流
动相 B为体积分数 0.5%的甲酸溶液 , 将流动相 A与流动相
B按不同比例混合后进行梯度洗脱:0 ～ 13 min, A14% ～
17%;13 ～ 26 min, A17% ～ 18%;26 ～ 28 min, A18% ～ 14%。
流速 1.0 mL· min-1 , 柱温 32 ℃, 检测波长 360 nm, 进样量
10 μL。
1.2.2　标准曲线绘制　精密称取经 P2O5减压干燥 24 h的
绿原酸 、牡荆素-4″-O-葡萄糖苷 、牡荆素鼠李糖苷 、牡荆素 、
芦丁和金丝桃苷标准品 ,混合后用甲醇溶解并定容后作为标
准品贮备液 , 贮备液中上述各标准品浓度分别为 0.703 6、
0.662 0、0.997 0、0.042 3、0.097 3和 0.095 4 g· L-1。精密
吸取 0.5、1.0、 2.0、3.0、4.0、5.0和 6.0mL贮备液 ,用甲醇稀
释并定容至 10mL,按照上述色谱条件进行 HPLC分析 , 分别
记录各标准品不同进样浓度的峰面积。
以峰面积为因变量 Y、进样浓度为自变量 X进行线性回
归分析 , 得到 6个标准品的回归方程。 其中 , 绿原酸的回归
方程为:Y=613 256X+18 632, r=0.999 8,线性范围 35.18～
收稿日期:2008-03-21
作者简介:赵彩云(1972—),女 ,江苏丰县人 ,本科 , 副主任药师 ,主
要从事中成药及中药材的质量检验工作。
①通讯作者 E-mail:qwang49@tom.com
422.20 mg· L-1;牡荆素 -4″-O-葡萄糖苷的回归方程为:
Y=12 786X+79 149, r=0.999 6, 线性范围 33.10 ～ 397.20
mg· L-1;牡荆素鼠李糖苷的回归方程为:Y=1 244 689X+
120 326, r= 0.999 2, 线性范围 49.80 ～ 598.20 mg· L-1;牡
荆素的回归方程为:Y=14 903X-3 034, r=0.999 8, 线性范
围 0.21 ～ 2.54 mg· L-1;芦丁的回归方程为:Y=167 983X-
743, r= 0.999 8, 线性范围 4.86 ～ 58.40 mg· L-1;金丝桃苷
的回归方程为:Y=20 886X-7 054, r=0.999 9, 线性范围
4.77 ～ 57.20 mg· L-1。
1.2.3　样品溶液的制备及分析方法　称取样品粗粉 1.5 g,
置于具塞锥形瓶中 , 加入 25 mL体积分数 50%的甲醇溶液 ,
密塞 , 称质量;用超声波提取器提取 30 min(功率 250 W, 频
率 50kHz),冷却至室温 , 称质量 , 并用体积分数 50%的甲醇
补足减失的质量;摇匀后过滤 , 所得滤液即为样品溶液。
按上述色谱条件进行 HPLC分析 , 记录峰面积并按外标
法计算样品中上述 6种成分的含量。实验重复 3次。
1.2.4　方法学考察
1.2.4.1　精密度实验　取标准品贮备液 3 mL, 用甲醇稀释
并定容至 10mL, 待测。精密量取 10 μL标准品溶液 ,按上述
色谱条件进行分析 , 重复进样 6次。绿原酸 、 牡荆素 -4″-
O-葡萄糖苷 、牡荆素鼠李糖苷 、牡荆素 、芦丁和金丝桃苷的
RSD分别为 0.81%、 0.99%、 0.73%、 0.99%、 1.23%和
0.85%,表明仪器的精密度良好。
1.2.4.2　重现性实验　精密称取同一批样品 6份 ,分别按
样品溶液的制备方法及色谱条件进行提取和分析。绿原酸 、
牡荆素 -4″-O-葡萄糖苷 、牡荆素鼠李糖苷 、牡荆素 、芦丁
和金丝桃苷的 RSD分别为 0.74%、 0.86%、 0.98%、 0.76%、
0.84%和 1.23%,表明本检测方法的重现性较好 。
1.2.4.3　稳定性实验　精密吸取同一样品溶液 , 分别于 0、
2、 4、 6、 8和 12h按上述色谱条件进行分析。绿原酸 、 牡荆
素 -4″-O-葡萄糖苷 、 牡荆素鼠李糖苷 、 牡荆素 、芦丁和
金丝桃苷的 RSD分别为 0.59%、 0.78%、 0.88%、 0.83%、
0.65%和 0.72%, 表明样品溶液在 12h内稳定。
1.2.4.4　加样回收率实验　精密称取已知含量的样品 6
份 , 分别精密加入 2.0、 3.0和 4.0 mL混合标准品溶液 , 其
中 , 绿原酸 、牡荆素 -4″-O-葡萄糖苷 、牡荆素鼠李糖苷 、牡
荆素 、芦丁和金丝桃苷的浓度分别为 0.375 2、0.356 0、
1.210 0、 0.014 9、 0.049 7和 0.197 6 g· L-1 ,按样品溶液制
备方法及色谱条件进行提取和分析。上述 6种成分平均加
样回收率依次为 99.24%、 99.26%、 99.36%、 97.24%、
99.22%和 98.78%。
2　结果和讨论
不同采样期山里红叶片中绿原酸 、牡荆素 -4″-O-葡
萄糖苷 、牡荆素鼠李糖苷 、牡荆素 、芦丁和金丝桃苷的含量见
表 1。由表 1可见 ,除牡荆素和金丝桃苷外 , 4月份(花期)山
里红叶片中其他 4种多元酚类成分的含量及 6种成分的总
含量在全年中均最高 , 但随生长期的推移 , 各成分的含量均
降低 , 尤其在 7月份至 8月份 ,各成分的含量均在低谷 , 说明
4月份是多元酚类成分合成及积累的旺盛时期 , 而 7月份至
8月份是各成分合成及积累的低谷时期。
值得注意的是 , 6月 1日采集的山里红叶片中 ,牡荆素的
含量明显高于其他时期 ,牡荆素含量的突然增高可能与植株
的次生代谢过程有关 ,其原因有待进一步实验研究。
根据上述研究结果可以看出 ,如果以提取多元酚类化合
物为目的 , 山里红叶片最适宜的采收期为 4月份 ,此时多元
酚类成分的含量最高。 此外 , 由于春天新叶萌发前后(4月
份)山里红叶片的次生代谢活跃 , 各种多元酚类成分的含量
较高 , 且叶片幼嫩 ,可采摘叶片制成茶 , 或提取有效成分后做
成保健饮料 , 以提高山里红叶片的药用价值。
表 1　不同生长期(2007年)山里红叶片中多元酚类成分的含量 1)
Table1　ContentofpolyphenoliccompoundsinleafofCrataegus
pinnatifidaBungevar.majorN.E.Br.atdiferentdatesin20071)
日期
(MM/DD)
Date
不同成分的含量 /mg· g-1
Contentofdiferentcompounds
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅵ Total
04/15 3.92 5.30 19.18 0.18 0.58 0.48 29.64
05/01 1.84 1.90 9.06 0.08 0.33 0.40 13.61
05/15 1.48 2.06 7.27 0.07 0.30 0.46 11.64
06/01 0.88 2.15 6.65 0.36 0.21 0.49 10.74
06/15 0.89 1.71 6.05 0.13 0.21 0.43 9.42
07/01 0.59 1.71 6.07 0.15 0.23 0.52 9.27
07/15 0.60 1.45 5.27 0.04 0.19 0.65 8.20
08/01 0.75 1.48 5.52 0.05 0.20 0.70 8.70
08/15 0.96 1.51 5.60 0.05 0.20 0.68 9.00
09/01 1.15 1.53 5.39 0.08 0.23 0.79 9.17
09/15 1.53 1.82 5.79 0.10 0.25 0.89 10.38
10/01 1.51 1.50 5.57 0.12 0.15 0.29 9.14
10/15 1.80 1.56 5.59 0.14 0.14 0.28 9.51
　1)表中数据为 3次重复的平均值 Thedatumsinthistablearethe
averageofthreereplications;Ⅰ :绿原酸 Chlorogenicacid;Ⅱ:牡
荆素 -4″-O-葡萄糖苷 Vitexin-4″-O-glucoside;Ⅲ:牡荆素鼠李糖苷 Vitexinrhamnoside;Ⅳ:牡荆素 Vitexin;Ⅴ:芦丁 Rutin;
Ⅵ :金丝桃苷 Hyperoside.
参考文献:
[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典 2005年版(一部)
[ M] .北京:化学工业出版社 , 2005:22.
[ 2] 　丁杏苞 , 姜岩青 , 仲　英 , 等.山楂叶化学成分的研究 [ J].中
国中药杂志 , 1990, 15(5):39-41.
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[ 4] 　宋少江 , 陈　佳 , 寇　翔 , 等.山楂叶的化学成分 [ J].沈阳药
科大学学报 , 2006, 23(2):88-90, 96.
[ 5] 　刘荣华, 余伯阳 , 邱声祥 , 等.山楂叶中多元酚类成分抗超氧
阴离子活性研究及构效关系分析 [ J] .中国药学杂志 , 2005,
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74 　　　　　　　　　　植 物 资 源 与 环 境 学 报　　　　　　　　　　　　　　　　　　第 17卷