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绢蒿水煎剂对正常小鼠免疫调节作用的研究



全 文 : 收稿日期:2012-11-11
作者简介:王荣(1985-),女,硕士研究生,专业方向为动物传染病诊断与防治,e-mail:1464905857@qq.com。
通信作者:剡根强(1958-),男,教授,从事动物传染病诊断与防治研究,e-mail:1203053597@qq.com。
第31卷 第2期
2013年4月
石河子大学学报(自然科学版)
Journal of Shihezi University(Natural Science)
Vol.31 No.2
Apr.2013
文章编号:1007-7383(2013)02-0187-04
绢蒿水煎剂对正常小鼠免疫调节作用的研究
王荣,剡根强,王静梅,段海丰,刑伟元,万鹏
(石河子大学动物科技学院,石河子832003)
摘要:为了探讨新疆石河子南山地区牧草绢蒿对正常小鼠免疫功能的影响,采用 MTT法、ANAE染色法、酶联免
疫吸附法(ELISA)、中性红法分别对小鼠的T、B淋巴细胞增殖,T淋巴细胞数量,T淋巴细胞亚群、IFN-γ、IL-2含
量,腹腔巨噬细胞吞噬功能进行研究。结果显示:绢蒿水煎剂能不同程度的提高正常小鼠T、B淋巴细胞增殖能力,
T淋巴细胞ANAE阳性率,CD4+T,CD8+T的数量,IFN-γ、IL-2的含量,下调巨噬细胞吞噬中性红的能力。结论:
绢蒿水煎剂对正常小鼠具有双向免疫调节作用。
关键词:绢蒿水煎剂;小鼠灌胃;淋巴细胞;免疫调节
中图分类号:S852.3    文献标志码:A    
Study of Regulating Effect of Seriphidium Decoction on
Immunologic Function of Normal Mice
WANG Rong,YAN Genqiang,WANG Jingmei,DUAN Haifeng,XING Weiyuan,WAN Peng
(Colege of Animal Science and Technology,Shihezi University,Shihezi 832003,China)
Abstract:To investigate the effect of Seriphidium in Nanshan Area of Shihezi on immunologic function of the normal mice,we
studied the proliferation of T and B lymphocyte by MTT method,determined the number of T-lymphocyte of peripheral blood
by ANAE method,determined the subgroup of T lymphocyte,the level of IFN-γand IL-2by the ELISA method,and studied the
phagocytic function of peritoneal macrophages by the neutral red method.Results:the decoction of Seriphidium can improve
proliferative abilities of T and B lymphocyte,positive rates of ANAE+T lymphocytes,the number of CD4+T,CD8+T and the
level of IFN-γand IL-2,and decrease phagocytic ability to toluylene red of macrophages.Conclusion:The decoction of Seriphi-
dium depends on its dose,and has a two-way effect on the immunologic function of normal mice.
Key words:Seriphidium decoction;lymphocyte;immunoregulation
  绢蒿((Serphidium (Bess)Poljak)属菊科蒿属
植物,是新疆分布较广,牛羊喜食的一种蒿属牧
草[1-2]。绢蒿和药用植物青蒿同属于蒿属植物,已有
的研究表明,绢蒿与青蒿均含有丰富的萜类化合物
及芳香族化合物。从青蒿植物提取的青蒿素不仅是
抗虐特效药,同时还具有免疫调节作用。青蒿素能
有效诱导淋巴细胞增殖转化,促进干扰素,白细胞介
素的释放,调节巨噬细胞的吞噬功能等作用[3-5]。
目前,但有关绢蒿牧草是否具有青蒿相似的免
疫调节作用未见研究报道。为此,本试验借鉴青蒿
的免疫学研究方法,制备绢蒿水煎剂给小鼠灌服,通
过检测小鼠T、B淋巴细胞的转化、T淋巴细胞的数
量、T淋巴细胞亚群、IFN-γ、IL-2及巨噬细胞吞噬
活性等免疫学指标,研究确定绢蒿的免疫生物学活
性,旨在为进一步开发具有营养与保健双重作用的
植物饲用添加剂提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 试验动物
昆明小白鼠,6周龄,体重(20.0±2.0)g,石河
子大学实验动物中心提供。
1.1.2 试验药物
绢蒿牧草,采自石河子南山草场5-7月绢蒿茎
叶,阴干待用。
1.1.3 主要仪器与试剂
灌胃针;Power Wave XS2连续波长酶标仪
(BioTek);CD4+T ELISA试剂盒、CD8+T ELISA
试剂盒、IFN-γELISA试剂盒、IL-2ELISA试剂盒
均购于上海蓝基生物科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 水煎剂的制备,试验动物分组及给药方式
取绢蒿干草,经切片机粗粉,粉碎机细粉后,于
不锈钢锅中煎煮[6]。合并的煎液置干燥箱80℃温
度下浓缩成每毫升相当于原绢蒿生药约1g的药
液。用时以蒸馏水稀释为所需浓度,置4℃冰箱保
存备用。
选取90只小鼠,称重后随机分成3组,即正常
对照组(蒸馏水);低浓度组(800mg/kg)和高浓度
组(2000mg/kg),均采用灌胃给药,0.4(mL/次)/
只,连用10d。
1.2.2 绢蒿水煎剂对小鼠T、B淋巴细胞转化能力
的测定
T淋巴细胞转化试验[7]:采用ConA作为刺激
剂。制备脾淋巴细胞悬液,加入到96孔培养板,100
μL/孔,然后加入使每孔最终浓度为5μg/mL的
ConA液,100μL/孔,每个样设3个重复,且重复做
4块细胞培养板。将板置培养箱(37℃,5% CO2)
分别培养24、48、72和96h。培养过程中隔3~8h
震荡培养板1次。MTT比色法检测细胞增殖结
果,酶标仪测OD值,测定波长570nm。
B淋巴细胞转化试验:采用LPS作为刺激剂。
试验方法同T淋巴细胞转化试验,其中LPS液最终
浓度为10μg/mL。
1.2.3 绢蒿水煎剂对小鼠T淋巴细胞数量(ANAE)
的测定
采集 小 鼠 抗 凝 血,按 酸 性 α-醋 酸 萘 酯 酶
(ANAE)染色法染色[8]。
1.2.4 绢蒿水煎剂对小鼠外周血T细胞亚群的测定
小鼠采血分离血清。CD4+、CD8+T数量测定
按ELISA试剂盒说明检测,其中被检样品、空白对
照和标准曲线做各重复3孔。
1.2.5 绢蒿水煎剂对小鼠巨噬细胞吞噬功能的测定
灌胃第8天,小鼠腹腔注射6%的淀粉溶液1.0
mL/只。中性红法检测巨噬细胞吞噬功能,酶标仪
于520nm波长测吸光度,以吸光度值大小表示巨
噬细胞摄取中性红的能力强弱,结果以酶标仪A值
表示[9]。
1.2.6 绢蒿水煎剂对小鼠IFN-γ、IL-2的测定
小鼠采血分离血清。IFN-γ和IL-2的测定按
ELISA试剂盒说明检测,其中被检样品、空白对照
和标准曲线做各重复3孔。
1.3 统计学处理
所有数据经SPSS统计学处理后数据以均数±
标准差(珔x±S)表示。组间差异采用t检验。P<0.05
为差异显著,P<0.01为差异极显著,有统计学意义。
2 结果与分析
2.1 绢蒿水煎剂对T、B淋巴细胞转化能力
的影响
如图1、2所示,从48h开始,三组试验组T、B
淋巴细胞增殖均明显;72h时绢蒿水煎剂高浓度组
和低浓度组的T、B淋巴细胞增殖程度均达到最大;
96h时绢蒿水煎剂高浓度组和低浓度组的T、B淋
巴细胞增殖程度均无明显变化。
图1 不同时间段各组小鼠T淋巴细胞增殖情况
 Fig.1Proliferative situation of T lymphocyte
      in diferent period
       
图2 不同时间段各组小鼠B淋巴细胞增殖情况
 Fig.2Proliferative situation of B lymphocyte
      in diferent period
881               石河子大学学报(自然科学版)                第31卷 
  如表1所示,绢蒿水煎剂高浓度组的T淋巴细
胞增殖程度明显高于对照组(P<0.01);绢蒿水煎
剂低浓度组的T淋巴细胞增殖程度高于对照组(P
<0.05);绢蒿水煎剂高浓度组的T淋巴细胞增殖
程度接近低浓度组(P>0.05)。绢蒿水煎剂高浓度
组的B淋巴细胞增殖程度高于对照组(P<0.05)。
2.2 绢蒿水煎剂对小鼠免疫指标的影响
2.2.1 绢蒿水煎剂对T淋巴细胞数量的影响
如表1所示,绢蒿水煎剂高低浓度组的小鼠T
淋巴细胞 ANAE阳性率均显著高于对照组(P<
0.01);绢蒿水煎剂高低浓度组间的 T 淋巴细胞
ANAE阳性率差异不显著(P>0.05)。
2.2.2 绢蒿水煎剂对T淋巴细胞亚群数量的影响
如表1所示,绢蒿水煎剂低浓度组的CD4+T,
CD8+T含量均高于对照组(P<0.05);绢蒿水煎剂
高浓度组的CD4+T,CD8+T含量均比对照组低,差
异不显著(P>0.05)
2.2.3 绢蒿水煎剂对巨噬细胞吞噬功能的影响
绢蒿水煎剂低浓度组巨噬细胞吞噬能力稍高于
对照组,差异不显著(P>0.05);绢蒿水煎剂高浓度
组的巨噬细胞吞噬能力略低于对照组,差异不显著
(P>0.05)。
2.2.4 绢蒿水煎剂对小鼠IFN-γ、IL-2含量的影响
绢蒿水煎剂低浓度组IFN-γ含量高于对照组
(P<0.05);高浓度组IFN-γ含量明显低于对照组
(P<0.01);绢蒿水煎剂低浓度组IL-2含量明显高
于对照组(P<0.01);绢蒿水煎剂高浓度组IL-2含
量略低于对照组,差异不显著(P>0.05)。
表1 小鼠免疫指标的测定
Tab.1Determination of the mice immune index
分组 对照组 水煎剂低浓度组 水煎剂高浓度组
OD(T淋巴细胞) 0.105±0.0101  0.132±0.0088* 0.140士0.0342**
OD(B淋巴细胞) 0.106±0.0139  0.139±0.0100  0.154士0.0420*
ANAE阳性率/% 51.500±1.291  68.250±1.258** 70.500±2.646**
CD4+T数量 289.220±115.082  447.48±73.948* 222.570±60.765
CD8+T数量 101.520±33.402  167.075±34.708* 88.750±36.628
OD(巨噬细胞) 0.587±0.0613  0.607±0.0648  0.500±0.0665
IFN-γ含量 1641.950±510.465  2284.880±293.875* 875.340±160.393**
IL-2含量 186.840±58.330  336.260±25.772** 96.950±50.450
  注:**为P<0.01,*为P<0.05与对照组相比。
3 讨论
绢蒿水煎剂对小鼠T、B淋巴细胞转化能力,T
淋巴细胞亚群数量,IFN-γ、IL-2含量的影响与青蒿
具有相似性。其原因:青蒿素是从菊科植物蒿属中
提取的倍半萜内酯,绢蒿属作为蒿属中的一个组或
亚属一直被看作是一个大类群,与青蒿的研究历史
紧密相关;青蒿植物含有丰富的萜类化合物,芳香族
化合物,醇、醛、酮类化合物,长链脂肪烃[10-11]等成
分,与绢蒿成分相似;绢蒿水煎剂对小鼠T,B淋巴
细胞转化能力,巨噬细胞吞噬功能的影响与青蒿不
完全一致[12-13],除检测方法不同外,主要原因可能是
所用药物材料不同。中药青蒿通常分离提取有效成
分进行试验,而本试验中采用水煎法保留了牧草绢
蒿的全草成分。
T淋巴细胞分化为 TDT H 细胞,并产生细胞
因子,从而发挥细胞免疫的作用;B淋巴细胞主要
作用是对抗原的识别、活化、增殖,分化为浆细胞并
分泌抗体[14],根据淋巴细胞的转化情况,可判断机
体的细胞和体液免疫水平。本试验中绢蒿水煎剂对
T、B细胞的转化能力具有上调作用,因此绢蒿制剂
可能具有提高机体细胞免疫,体液免疫作用。巨噬
细胞是主要的炎性反应调节细胞和抗原提呈细胞,
在炎性反应过程中分泌不同的细胞因子(IL-1、IL-
6、IL-10、TNF)和趋化因子等,间接或直接地参与各
种炎性反应过程[15]。本试验中高浓度绢蒿水煎剂
对小鼠的巨噬细胞具有下调作用,因此绢蒿制剂可
能具有缓解炎性反应作用,这为绢蒿制剂在超敏反
应,免疫应激中的应用提供了试验依据。
绢蒿水煎剂低浓度组对T淋巴细胞亚群数量,
巨噬细胞吞噬功能,IFN-γ、IL-2含量具有上调作
用,高浓度组具有下调作用,这与多数免疫调节剂的
特性一致,表明绢蒿对机体免疫功能的影响具有剂
量依赖性[16]。提示,在今后的试验和临床研究中考
981 第2期            王荣,等:绢蒿水煎剂对正常小鼠免疫调节作用的研究
虑绢蒿剂量的选择。
参考文献:
[1]林有润.中国植物志(第七十六卷第二分册)[M].北京:
科学出版社,1991:259-290.
[2]于磊,鲁为华,代焕喜,等.新疆兵团农十四师一牧场天
然草地资源及其利用研究[J].石河子大学学报:自然科
学版,2007,25(1):56-59.
[3]Xu F X.Sclerotesta Morphology and its Systematic Im-
plications in Magnoliaceous Seeds[J].Botanical Journa1
of the Linnean Societv,2003,142(4):407-424.
[4]舒贝,马行一.青蒿素及其衍生物的免疫调节作用[J].
中国中西医结合肾病杂志,2005,6(3):176-178.
[5]Wenisch C,Parschalk B,Zedwitz-Liebenstein K,et al.
The effect of artemisin on granulocyte assessed by flow
cytometry[J].Antimicrob Chemocher,1997,39(1):
101.
[6]陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京:人民卫生
出版社,1993:69.
[7]罗燕.中药复方总多糖对小鼠免疫功能的影响及小鼠相
关差异基因的筛选[D].石河子:石河子大学,2005.
[8]王凯,杨丽梅,霍星华,等.霉玉米对小鼠体重和外周血
淋巴细胞数量的影响[J].动物医学进展,2006,27(3):
81-84.
[9]Abul K,A bbas,Andrew H.Lichtman.Celular and Mo-
lecular lmmunology[M].Fifth Edition.北京:北京大学
医学出版社,2004:16-104.
[10]滑艳,何荔,汪汉卿.白茎绢蒿化学成分的研究[J].天
然产物研究与开发,2003,15(3):219-221.
[11]肖黎辉,冯学兵.青蒿素类药物与自身免疫性疾病[J].
辽宁中医药大学学报,2011(1):130-133.
[12]Efferth T,Sauerbrey A,Olbrich A,et al.Molecular
modes of action of artesunate in tumor cel lines[J].
Mol Pharmacol,2003,64(2):382-3941.
[13]Aldieri E,Atragene D,Bergandi L,et al.Artemisinin
inhibits inducible nitricoxide synthase and nuclear fac-
tor NF-κB activation[J].FEBS Lett,2003,552(2/3):
141-144.
[14]邵永斌.中药G-免疫增强剂复方和单味中药多糖的免
疫增强作用研究[D].石河子:石河子大学,2005.
[15]李丹,任亚娜,范华骅,等.巨噬细胞的分类及其调节性
功能的差异[J].生命科学,2011,23(3):250-253.
[16]杨巧丽,顾政一,黄华,等.金蒿抗流感滴丸对小鼠
TNF-α、IL-2和IFN-γ等细胞因子的影响[J].石河子
大学学报:自然科学版,2012,30(1):57-59.
091               石河子大学学报(自然科学版)                第31卷