全 文 ：南方农业 学报Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＳｏｕｔｈｅｒｎ Ａ ｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ２０ １６ ， ４７（ ９ ） ：１ ５ １７－ １ ５２ １
ＩＳＳＮ２０９５－ １ １ ９１ ；ＣＯＤＥＮ ＮＮＸＡＡＢｈｔｐ ： ／／ｗｗｗ． ｎｆｎｙｘｂ．ｃｏｍ
ＤＯＩ ： １０ ．３９６９／ｊ ： ｉ ｓ ｓｎ ．２０９５－１ １ ９Ｌ２０ １６ ．０９ ． １５ １７
辣木果荚腐病病原菌分离及鉴定
蔡志 英 、 曾艳华 ２ ， 熊 斌２ ， 刘一贤、 杨 焱 、 龙继 明 ｓ
殷振华 ＼ 郭 涵 ３ ， 李海泉”
（
＊ 云南省 热带作物科学研究所 ， 云南 景洪 ６ ６６ １００ ；２ 勐腊县勐醒农场 农林水综合服务 中心 ， 云南 勐腊 ６６６３０４ ；
３景洪市气象局 ， 云南 景 洪 ６６６ １００）
摘要 ： 【 目 的 】明确辣木果荚腐病病原菌种类及其分类地位 ， 为辣木果荚腐病防治提供理论依据 。 【 方法 】对云南
省西双版纳州辣木种植基地感病 、带黑色颗粒物病残体的辣木果荚进行症状观察 、病原菌分离培养 、致病性测定 、
显微形态特征观察 、ｒｒｓ和办－ ｔｕｂｕｌｉｎ基因序列分析 。 【结果 】辣木果荚腐病病原菌的分生孢子不分隔 、透明 ，孢子顶端
呈尖锥形弯曲 ， 基部平截 ， 具油滴 ， 大小为 １５ ． ７？２２ ． １＾ １１１ｘ２ ．５４ ． ３ｐｍ ； 厚垣孢子壁厚 ，呈黑褐色 ，簇生或成链状 。 该菌
株ＩＴＳ和 ｊ３－ｔｏｂｕ！ｉｎ基因的序列与Ｃｏｉ／ｅｔｏｔｒｉｃｉｍｍ ｃＷｏｒｏ沖沖？菌株ＭＨ０３８ ０６ 的同源性高达９９％〇ＴＳ登录号 ： ＧＵ２２７ ８９４ ；
ＴＵＢ２登录号 ： ＧＵ２２８ １ ８８ ） 。 多基因联合系统发育分析结果表明 ，供试菌株与兰生炭疽菌 （ Ｃ． ｃＷｏｒｏｐＡ沖’ ）具有很近的
遗传关系 。 【结论 】兰生炭疽菌 （ Ｃ．ｃＷｏｒｏｐ／邮 ）能侵染辣木弓 丨起果荚腐病 ，是为害辣木果荚的致病菌 。
关键词 ： 辣木 ； 果荚腐烂病 ； 致病菌 ； 鉴定
中图分类号 ： Ｓ４３５ ．７９文献标志码 ： Ａ文章编号 ： ２０９５－ １ １ ９ １ （ ２０ １ ６ ）０９－ １５ １７－０５
Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓｃａｕｓｉｎｇｐｏｄ
ｒｏｔｏｆＭｏｒｉｎｇａｏｌｅｉｆｅｒａ
ＣＡＩ Ｚｈｉ－ｙｉｎｇ １ ，ＺＥＮＧ Ｙａｎ－ｈｕａ２ ，ＸＩＯＮＧ Ｂｉｎ ２ ，ＬＩＵ Ｙｉ－ｘｉａｎ １ ，ＹＡＮＧ Ｙａｎ １ ，
ＬＯＮＧ Ｊｉ－ｍｉｎｇ １ ，ＹＩＮ Ｚｈｅｎ－ｈｕａ １ ，ＧＵＯＨａｎ３ ，ＬＩ Ｈａｉ－ｑｕａｎ １
＊
（Ｙｕｎｎａｎ Ｉｎｓｔ ｉｔｕｔｅ ｏｆ ＴｒｏｐｉｃａｌＣｒｏｐｓ ，Ｊ ｉｎｈｏｎｇ ，Ｙｕｎｎａｎ６６６ １００ ，Ｃｈ ｉｎａ ；２ＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＷａｔｅｒ ＳｅｒｖｉｃｅＣｅｎｔｅｒ ，ＭｅｎｇｌａＭｅｎｇｘｉｎｇ
Ｆａｒｍ ，Ｍｅｎｇｌａ ，Ｙｕｎｎａｎ６６６３０４ ，Ｃｈ ｉｎａ ；３ＪｉｎｇｈｏｎｇＭｅｔｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂｕｒｅａｕ ，Ｊ ｉｎｇｈｏｎｇ ，Ｙｕｎｎａｎ６６６ １００ ，Ｃｈ ｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉ ｖｅ 】 Ｉｎｏｒｄｅｒ ｔｏｐｒｏｖｉ ｄｅｔｈｅｏｒｙｂａｓｉｓｆｏｒｃｏｎｔｒｏｌ ｌｉｎｇｐｏｄｒｏｔｏｆＭｏｒｉｎｇａｏＪｅｉｆｅｒａ ，ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ ｉ －
ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ， ａｎｄｉ ｔｓ ｔａｘｏｎｏｍ ｉｃｓ ｔａｔｕ ｓｗａｓｓｔｕｄ ｉｅｄ ． 【Ｍｅｔｈｏｄ】 ＴｈｅｉｎｆｅｃｔｅｄＪｌｆ ．ｏＪｅｉｆｅｒａｐｏｄｓ ｗｉｔｈｂ ｌａｃｋｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄ
ｆｒｏｍＭ．ｏｌｅｉｆｅｒａｐｌａｎｔ ｉｎｇｂａｓｅｉｎ Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ ，Ｙｕｎｎａｎ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ．Ｂａｓｅｄｏｎ ｄ ｉｓｅａ ｓｅｓｙｍｐ ｔｏｍ ｏｂｓｅｒｖａｔ ｉｏｎ ，ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔ ｉｃｓ ｏｆｐａｔｈｏ ｇｅｎ ，ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉ ｔｙ ，ｒＤＮＡ－ＩＴＳａｎｄｐ －ｔｕｂｕｌｉｎｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙ ｓｉｓ ，ｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｃａｕｓｉｎｇ ｐｏｄ
ｒｏｔｏｆＭ．ｏ ／ｅｆｅｒａｗａｓｉ ｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ． 【 Ｒｅｓｕ ｌｔ 】 Ｔｈｅｃｏｎ ｉｄｉａｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｗｅｒｅａｓｅｐ ｔａｔｅ ，ｈｙａｌｉｎｅ ，ｓｍｏｏｔｈ ，ｃｕｒｖｅｄ ｗｉｔｈ ｔａｐｅｒｅｄ
ｅｎｄｓａｎｄａ ｔｒｕｎｃａｔｅｄｂａｓｅ ，ａｎｄｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ １５ ．７－２２ ． １ｆｊｉｍｘ２ ．５－４ ．３｜ｘｍ ｉｎｓ ｉｚｅ ．Ｃｈｌａｍｙｄｏｓｐｏｒｅｓｗｅｒｅｄａｒｋ ｂｒｏｗｎ ，ｔｈｉｃｋ－
ｗａｌｌｅｄ ， ａｎｄｆａｓｃｉｃｌｅｄ ｏｒｃａｔｅｎｕｌａｔｅ ．Ｔｈｅｇｅｎｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＩＴＳａｎｄＴＵＢ２ ｇｅｎｅｓｈｏｗｅｄ９９％ｈｏｍｏｌｏｇｙｗｉｔｈＣｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ
ｃｈｌｏｍｐｈｙｄｓ ｔｒａｉｎＩＭＩ １０３８０６ （ ＩＴＳａｃｃｅｓ ｓｉｏｎｎｕｍｂｅｒ ：ＧＵ２２７８９４ ；ＴＵＢ２ａｃｃｅｓｓ ｉｏｎｎｕｍｂｅｒ ：ＧＵ２２８ １８８ ） ．Ｍｕｌｔｉ－ｇｅｎｅ
ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉ ｃａｎａｌｙｓ ｉｓ ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｔｅｓｔｅｄ ｓｔｒａｉｎｈａｄｔｈｅｃｌｏｓｅｓｔｇｅｎｅｔ ｉｃｒｅｌａｔ ｉｏｎｓｈｉ ｐｗｉｔｈＣ．ｃｈｉｏｒｏｐｈｙｄ ． 【 Ｃｏｎｃｌｕｓｉ ｏｎ 】Ｃ
ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｉｃａｎ ｃａｕｓｅｐｏｄｒｏｔｏｆＭ．ｏｌｅｉｆｅｒａ ｔｗｈ ｉｃｈ ｉｓ ｐａｔｈｏｇｅｎｄａｍａｇ ｉｎｇ ｐｏｄｏｆＭ．ｏｌｅｉｆｅｒａ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ：Ｍｏｒｉｎｇａｏｌｅｉｆｅｒａ ；ｐｏｄ ｒｏｔ ；ｐａｔｈｏｇｅｎ ；ｉｄｅｎｔ ｉｆｉｃａｔｉｏｎ
０引言属 ， 在亚洲和非洲的热带及亚热带地区广泛种植 ， 目
【研究意义 】辣木 （Ｍｏｒｉｎｇａｏｌｅｉｆｅｒａ ）原产印度 ， 又前在我 国南方的广东、广西 、海南和云南等地亦有种
称鼓槌树 （Ｄｒｕｍｓｔｉｃｋｔｒｅｅ ） ， 属辣木亚 目辣木科辣木植。 辣木全株均可开发利用且用途广泛 ， 可供食用 、药
收稿 日期 ： ２０１ ６－０７－０６
基金项目 ：农业部“９４８”计划项目 （ ２０ １５－Ｚ７２ ） ；云南省国际科技合作项 目 （ ２０ １４ＩＤ０ １０ ）
作者简介 ： ＊ 为通讯作者 ，李海泉 （ １ ９７２－ ） ， 高级农艺师 ， 主要从事辣木栽培技术研究工作 ， Ｅ－ｍａａ ： ５５ １ ９９２３４５＠ｑｑ．Ｃ〇ｍ。蔡志英
（ １ ９７４－ ） ，博士 ， 主要从事热带作物病害防治研究工作 ， Ｅ－ｍａａ ： ３９ １ ６４０３９５＠ｑｑ．Ｃ〇ｍ
？１５ １ ８．南 方 农 业 学 报４７ 卷
用 、 观赏及净化水 ，也可用作油料作物 、畜牧饲料 、 蜜落 （方中达 ， １ ９９８） ，移植到ＰＤＡ培养基上 ，培养后的单
源植物和薪材等 （盛军 ， ２０ １ ５ ） ， 因其含丰富的蛋白质 、 孢子菌株保存于４ 丈冰箱备用 。
维生素 、 氨基酸等被欧美国家视为新时代健康食品１ ． ２ ． ２ 致病力测定 用带菌琼脂块田间 活体接种法
（刘 昌芬 ， ２０ １ ３ ） 。 云南省西双版纳州于２０世纪６０年代进行病原菌致病性测定 。 将辣木果荚表皮用灭菌芽签
引进辣木 ，２００２年云南省热带作物科学研究所启动辣刮伤 ， 从培养４ｄ的菌落外缘切取直径４ｃｍ带菌琼脂
木系统研究 ，在西双版纳建立了 １ ３ ．３３ｈａ（ ２００亩 ）实验块接种到辣木果荚表皮刮伤处 ，菌丝面直接贴在伤口
基地 ，进行辣木的引种 、试种 、评价及开发利用研究 ， 上 ，将湿棉球覆盖于带菌琼脂块上 ，然后用保鲜膜包
目前已收集保存多油辣木 （Ｍｏｒｉｎｇａｏｔｅｉｆｅｒａ Ｌａｍ． ） 、狭裹接种部位 ，最后用 防水纸袋将接种果荚套上 ， 以接
瓣辣木 （Ｍｓｔｅｎｏｐｅｔａｆｅ Ｃｕｆｏｄ ） 、象腿辣木（Ｍｄｒｏｕｈａｒｄｉｉ种纯ＰＤＡ培养基为对照 ， 每处理接种 １０个果荚 ，从第
Ｊｕｍ ． ）和北方辣木 （Ｍ＿ｃｏｉｉｃａｎｅｎｓｉｓＮｉｍｍｏ． ）４个种及２ｄ起隔 日观察 、记录果荚感病情况 。 经柯赫氏法贝 ｌｊ确
１个品种ＰＫＭ １ ，通过多年的栽培试验及评价 ， 筛选出 认为致病菌后开展后续试验。
最具商业前景的多油辣木和品种ＰＫＭ １ 。 项 目组研究１ ． ２ ． ３ 病原 菌的 形 态观察及鉴定 从单孢菌落外缘
发现 ，在高温 、高湿的热带和亚热带地区 ，辣木会受到用打孔器取直径约０．４ｃｍ的带菌琼脂块移植于ＰＤＡ培
各种病虫害的侵害 ，其中 ，辣木果荚腐病是最严重的养基 ， 置于 （ ２５± １ ） ＜£ 、光照与黑暗各 １ ２ｈ交替条件下培
病害之一 ， 尤其在降雨密集的 ７￣８月 可导致 ９０％以上养 ，观察 、记录病原菌的培养性状 （ Ｔｈａｎｅｔ ａｌ ． ， ２００ ８ ） 。
的果荚受害 ，严重时颗粒无收 。 因此 ，对辣木果荚腐病用蔡司光学显微镜 （Ａｘ ｉｏＬａｂＡ １ ，德国 ）观察分生孢子
病原菌进行分离 、鉴定 ， 明确为害辣木的病原菌 ，对辣形态 ，测量分生孢子大小 ， 图像由蔡司数码相机 （Ａｘｉｏ－
木果荚腐病的综合防治具有重要意义 。 【前人研究进ｃａｍ Ｅｒｃ５ｓ ， 德国 ）拍摄 ，用ＺＥＮ Ｌｉｔｅ ２０ １ ２处理数据。
展 】 目前国 内外关于辣木的研究主要集中在其功能成 １ ． ２ ． ４ 病原 菌分子鉴定
分分析及栽培引 种方面 （张德等 ， ２０ １４ ； 杨春梅等 ，１ ． ２ ．４． １ 病原 菌基 因 组ＤＮＡ提取 从ＰＤＡ培养基
２０ １ ５ ） ，针对辣木病害的研究较少 。 Ｒｅ ｓｍ ｉ等 （ ２００５ ）上刮取培养 ６ｄ左右的病原菌菌丝体 １ ０ｍｇ ， 放入灭菌
通过致病性测定和形态鉴定发现镰刀菌可为害辣木研钵中 ， 加人液氮研磨成粉 。 采用基因组提取试剂盒
果荚 。 印度学者报道辣木果荚腐烂是 由 Ｄｒｅｃｉｓｔｅｒａ（ ＰｌａｎｔＧｅｎ ＤＮＡ Ｋｉｔ ， 北京康为世纪生物科技有限公
（ ＣｏｃＭｏｂｏ］ｕｓ）ｈａｗａｉｆｅｎｓｉ＾病原菌侵害造成（Ｋｓｈｉｒｓａｇａｒ司 ） ，按操作指南提取病原菌基因组总ＤＮＡ 〇
ａｎｄＤ ＇Ｓｏｕｚａ ， １ ９８９ ） ， 而蒋桂芝等 （ ２００７ ）报道辣木果１ ．２ ．４．２ 病 原 菌 ｒＤＮＡ－ＩＴＳ和 ｜３－ 微 管 蛋 白 基 因
荚腐烂病的致病菌为半裸镰孢 （ Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｅｍｉｔｅｃ ｔｕｍ（ ／３ －ｔｕｂｕ／ｉｉ］ ） 的ＰＣＲ扩增 以提取的病原真菌基因组
Ｂｅｒｋ＆Ｒａｖ ） ， 暗示该病害可能存在多种病原菌 。 【本ＤＮＡ为模板 ， 用真菌特异引 物对 ｒＴＳ ｌ／ＩＴＳ４和 Ｂｔ２Ａ／
研究切人点 】本项 目组在辣木果荚腐病调查 中发现许Ｂｔ２Ｂ （Ｇ ｌａｓ ｓａｎｄＤｏｎａ ｌｄｓｏｎ ，１ ９９５ ） 分别扩增 ｒＤＮＡ基
多受害果夹中有黑色小颗粒状物的病原菌子头体 ， 经因 内转 录间 隔区 （ ＩＴＳ ， ｉｎｔｅｒｎａ ｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｄｓｐａｃｅｒ ）和分离培养 、显微观察 ，发现其孢子形态多为新月 形 ， 不ｊＳ－ｆｔｉｂｉｉｔｏ谨因的部分序列 。 ＰＣＲ反应体系 （ ２５ ．０ ０ｍＪＬ ） ：
同于现有报道辣木果荚腐病致病菌产生的分生孢子 。 ｌ ＯｘＢｕｆｅｒ２ ．５｜ｘＬ ， １ ０ （ ｊｉｍｏｌ／Ｌ引物各 １ ．０＃ ， ２ ．５ ｍｍｏｌ／Ｌ
【拟解决的关键问题 】为明确产生黑色小颗粒状物的ｄＮＴＰｓ２ ．０（ｘＬ ， 模板ＤＮＡ０ ．５ｎｇ ，０ ． ５ＵＴａｑ酶 ０ ．２｜ｘＬ ，真菌是否为辣木果荚腐病的致病菌 ， 本研究通过病原用 ｄｄＨ２０补足至 ２５ ．００ｊｊ ｌＬ 。 扩增程序 ４４ 丈预变性菌分离 、致病性测定 、形态特征结合多基因分析的方５ｍｉｎ ； ９４ｔ １ｍ ｉｎ ， ６０ｔ１ｍ ｉｎ ， ７２Ｘ ；１ｍｉｎ ，进行３ ５个
法对该病原菌进行鉴定 ， 以期为生产上辣木果荚腐病循环 ； ７２ 丈 ５ｍｉｎ ；１ ０Ｔ ：保存 。 用 １％琼脂糖凝胶电泳
的防治提供科学依据 。检测分析 ，记录观察结果 。 ＰＣＲ扩增产物的纯化采用
１康为凝胶纯化试剂盒 ，具体操作见说明书 。 将纯化后
的ＰＣＲ产物送至北京六合华大基因科技有限公司广
１ ＿１ 供试材料 州分公司测序 ， 利用ＮＣＢＩ在线软件ＢＬＡＳＴｎ将获得 的
有典型症状 、带黑色小颗粒病残体的辣木果荚采基因序列与 ＧｅｎＢａｎｋ核酸数据库进行比对分析 。
自云南省热带作物科学研究所中古辣木合作基地 ，辣１ ． ２． ５ 病原菌ｒＤＮＡ－ ＩＴＳ和 ／３－ｆｔｉｂｕｉｆｎ系统发育分析 将
木品种均为ＰＫＭ １ 。获得的病原菌 ｒＤＮＡ－ＩＴＳ和 ／３ －ｔｕｂｕｌ ｉｎ序列提交Ｇｅｎ－
１ ． ２ 试验方法
＾Ｂａｎｋ ，用ＢＬＡＳＴ软件搜索ＧｅｎＢａｎｋ中相关ｒＤＮＡ－ＩＴＳ和
１ ． ２ ． １ 病原菌分离 培养 切开辣木果荚 ， 从病健交／３－ｆｔｉｂｕｌｉｎ序列 ， 同源性分析所选择的比对菌株均属于
界处切取０ ． ５ｃｍｘＯ ．５ｃｍ大小 的辣木果肉组织块 ， 用产生弯形分生孢子的炭疽菌属真菌 （ Ｄａｍｍｅｔａ ｌ ． ，
７０％酒精浸泡３０ｓ ，置于０ ． １％升汞溶液中消毒 １ ＿５ｍｉｎ ，２００９ ） ， 通过手工校正使序列排序获得优化 ，将校正后
再用无菌水漂洗３次 ， 无菌滤纸吸干水后置于ＰＤＡ培 各个基因按照首尾相连方法合并 ， 采用 Ｃ ｌｕｓｔａｌＸ ２ ．０
＾基中 ， 于 （２ ５± １ ）丈 、光照与黑暗各 １２ｈ交替条件下 。 将选择的序列进行多重比对分析 ， 以 Ｃｏ？ｅｔｏ＜ｒｉｃｉｕｍ恒温培养 ３？７ｄ ， 待组织块上长出菌落并产生大量分〗ｉｎｄｅｍｕｔｈｉａｎｕｍ （ＣＢＳ１５ １ ．２８ ）为外类群 ， 通过ＭＥＧＡ
生孢子后 ，采用水琼脂平板单孢子挑取法获得单孢菌６ ＿０构建ＮＪ系统发育进化树 ， 自举法检测为 ５００次重复 。
９期蔡志英等 ： 辣木果荚腐病 病原菌分 离及鉴定？ １ ５ １９ ＊
２ 下病斑迅速向 四周扩张 ，果荚上的块状病斑连接起来
２．木果巧＝旬危害症＾病原＝离
魏＿＿ 、颗＿＿藤子排 （ 图⑷ 。
邏＿
图 １ 辣木果荚腐病症状
Ｆｉｇ ． １Ｓｙｍｐｔｏｍｓｏｆ Ｍ ｏｌｅｉｆｅｒａ ｐｏｄｒｏ ｔｄ ｉｓｅ ａｓｅ
Ａ ：辣木果荚腐病初期形成褐色斑块 ； Ｂ ： 高温 、高湿条件下果荚裂开
Ａ
：
Ｂ ｒｏｗｎｐ ｌａｑｕ ｅｓ ｆｏｒｍｅｄｉｎｔｈｅ ｅａ ｒｌ ｙｓｔａｇｅｏｆ Ｍ．ｏｌｅｉｆｅｒａ ｐｏｄ ｒｏｔｄ ｉｓｅａｓｅ ；Ｂ：Ｐｏｄ ｃｒａｃｋｉｎｇ ｕｎｄｅｒ ｈ ｉｇｈｔｅｍｐ ｅｒａ ｔｕｒｅａ ｎｄ ｈ ｉｇｈ ｈｕｍｉｄ ｉ ｔｙｃｏｎｄ ｉｔｉ ｏｎｓ
用组织分离法从辣木果荚腐病病组织中分离到从感病组织中再次分离得到同一种病原菌 ，而接种纯
２６株分离物 ， 根据菌株 的培养性状和形态特征 ， 初步ＰＤＡ琼脂块 和细菌的辣木果荚未出 现症状 （ 图 ２－Ｃ ，
确定有一种细菌和一种真菌 ， 其中所分离真菌产生的图２ －Ｄ ） ， 经柯赫氏法则确认这种能产生新月 形孢子的
孢子形态为香蕉形 ， 与从带黑色小颗粒病残体的辣木真菌为致病菌 。
果荚上挑取镜检的孢子相似 ，将分离得到的真菌菌株２． ３ 病原菌形态特征
命名为ＬＭｇｈ ｌ 。在ＰＤＡ培养基上 ， （ ２ ５± １代 、光照与黑暗各 １ ２ｈ交
２ ． ２ 致病性测定结果 替条件下培养 ，菌落初为 白 色 ， 近圆形 、平铺 、边缘光
接种孢子为香蕉形真菌的果荚接种４ｄ后果荚表滑 、几乎无气生菌丝 ， 培养３ｄ后在接种点周围 出现许
面形成褐色坏死 ， 随后病斑逐渐扩展 ，产生条状裂 口 ，多黑色 、细小颗粒状物 ， 呈同心轮分布 ，后期整个菌落
症状与 田间发病植株症状一致 （ 图２－Ａ ， 图 ２－Ｂ ） ， ７ｄ后上均长出黑色 、小颗粒状物 ， 整个菌落呈灰黑色 ， 有少
隠 ■函
图 ２ 田 间活体辣木果荚接种结果
Ｆ ｉｇ ． ２Ｍ． ｏｌｅ ｉｆｅｒａｐｏｄ ｉｎｏｃｕ ｌ ａｔｅｄｗ ｉｔｈＣ．ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｉ
Ａ 、 Ｂ ： 辣木果荚接种带炭疽菌的琼脂块 ７ｄ后 出现果腐症状 ； Ｃ 、Ｄ ： 辣木果荚接种带纯琼脂块７ ｄ后未出现症状
Ａ ，Ｂ： Ｓｙｍｐｔｏｍ ｓ ｏｆＭ． ｏｌｅｉｆｅｒａｐｏｄａｆｔｅｒ ｂｅ ｉｎｇｉｎｏｃｕ ｌａｔｅｄｗｉｔｈＣ．ｃｈ ｌｏｒｏｐｈｙｔｉ ａｇａｒ ｆｏｒ ７ｄ ；Ｃ ，Ｄ ： Ｍｏｌｅｉｆｅｒａ ｐｏｄ ｗａ ｓ ａ ｓｙｍｐｔｏｍ ａｔ ｉｃ ａｆｔｅｒ ｂｅ ｉｎｇ
ｉｎｏｃｕ ｌａ ｔｅｄｗｉｔｈ
ｐｕｒｅ ａｇａｒ ｆｏ ｒ７ ｄ
？１ ５ ２０ ？南 方 农 业 学 报４ ７ 卷
许气生菌丝 （ 图 ３－Ｃ ） 。 大小为 １ ５ ．７？２２ ． １ｊｘｍｘ２ ． ５？４ ．３ （１ １１１ （ １１＝１ ００ ） （ 图 ３－Ｂ ） 。 参
该菌厚垣孢子呈球形 ，单生或串生于菌丝顶端或考相关文献 （ Ｄａｍｍｅ ｔａ ｌ ． ，２００９ ；Ｙａｎｇｅｔａ ｌ ． ，２０ １ ２ ）
中间 （ 图 ３ －Ａ ） ； 分生孢子单胞无色 ， 新月 形或镰刀形 ，发现 ， 病原菌的培养性状和形态特征与兰生炭疽菌
孢子顶端呈尖锥形弯 曲 、基部平截 ， 具油滴 ， 分生孢子 （ Ｃｏｉ ／ｅｔｏ ｆｒｉｃｈ ｕｍｃＷｏｒｏｐ／ｉｙｔｉ‘湘似 （ 图 ３ ） 。
Ａ—Ｂ—Ｃ
图 ３ 兰生炭疽菌
Ｆ ｉｇ ．３Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｉ
Ａ ： ＰＤＡ培养基上形成的厚垣孢子 ； Ｂ ： 分生孢子 ； Ｃ ： 菌落形态 ； 标尺＝ １ ０
（
ｘｍ
Ａ ：Ｃｈ ｌａｒａｙｄｏｓｐｏｒｅ ｓ ｉｎＰＤＡ ；Ｂ ：Ｃｏｎ ｉｄ ｉａ ；Ｃ ：Ｃｏ ｌｏｎｙｍｏｒｐｈｏ ｌｏｇｙ ； Ｂａ ｒ＝ １０ｐ－ｍ
２．４ 病原菌ｒＤＮＡ－ ｌＴＳ和 ／３ －ｔｕｂ ｕｉ ｉｎ比对及系统发育分析因序列 （ ＴＵＢ２登录号 ： ＧＵ２２８ １ ８８ ）相似性达９９％ 。
提取代表菌株ＬＭｇｈ ｌ基因组ＤＮＡ ， 用真菌 的通用 用于系统进化树分析的炭疽菌株及其ｒＤＮＡ－ ＩＴＳ
引物 ＩＴＳ １ 与 ＩＴＳ４扩增该病原菌 丨 ８Ｓ ｒＤＮＡ部分序列 、和 基因序列参照Ｄ ａｍｍ等 （ ２０ ０９ ） 的研究结果
ＩＴＳ １ －５ ． ８Ｓ－ＴＴＳ ２全部序列和 ２８ＳｒＤＮＡ部分序列片段 ，（ 表 １ ） 。 基于ｒＤＮＡ－ ＩＴＳ和＾ｕｂｕ ｉｉ’ｎ基因序列构建的炭
序列提交ＧｅｎＢａｎｋ （ 登录号 ： ＫＴ２０ ７４６４ ） 。 通过ＢＬＡＳＴ疽菌系统进化树见图４ ， ８个菌株共形成 ３个明显分支 ，
序列 比对分析 ，该核酸序列与 Ｃ ．ｃＷｏｒｏｐｔｙｒｉ的相似性遗传关系非常清晰 。 辣木果荚腐病病菌与其他不同来
高达９９％ （登录号 ： ＧＵ ２２７８９４ ） 。 用Ｂ ｔ２Ａ／Ｂｔ２Ｂ引物扩源 ２个Ｃ ．ｃＷｏｒｏｐ ／ｉｙｔｉ模式菌株聚在一起 ， 与其他种炭疽
增 获 得 ｊ３ － ｔｕｂ ｕ丨 ｉｎ基 因 的 部分序 列 （ ＴＵＢ２登 录号 ：菌形成明显分支＾ＤＮＡ －ＩＴＳ和屮 ｔｕ ｂｕｔｏ比对和系统发
ＫＴ８６２８４ ６ ） ， 该序列样与 ＣｃＷｏｒｏｐｉｉｙｔｉ的 ｊ８ － ｆｕｂｕｈ＇ｎ基育分析结果进一步证明该病病原菌为Ｃ． ｃＷｏｒｏｐｉｉｙｆｙ 。
表 １ 用于Ｎ Ｊ系统发育进化树分析的相关Ｃｏ／ ；ｅｔｏ ｔｒｉｄｎ ｊｍ菌株及 ｒＤＮＡ － ＩＴＳ和 ｐ －ｔｕｂｕｌ ｉｎ序 列登录号
Ｔａｂ ． ｌＣｏ ｌｌｅｔｏ ｔｒｉｃｈｕｍｓｔｒａｉｎ ｕ ｓｅｄ ｉｎｎｅｉｇｈ ｂｏｕｒ－ｊｏ ｉｎ ｉｎｇｐｈｙｌ ｏｇｅｎｅｔｉ ｃａ ｎａ ｌｙｓ ｉｓａｎ ｄｔｈｅ ｉｒ ｒＤＮＡ－ ＩＴＳａｎｄ Ｐ － ｔｕｂｕｌ ｉ ｎｓ ｅｑｕｅｎｃｅａｃｃｅｓ ｓｉ ｏｎ
ｎｕｍｂｅｒ
培养物 ／证据标本号ｍ．Ｉ ＴＳ登录号ＴＵＢ ２登录号
Ｓｃ ｉｅｎｔ ｉｆｉｃ ｎａｍ ｅＣｕｌ ｔｕｒｅ／ｖｏｕｃｈｅｒ ｓｐｅｃ ｉｍｅ ｎｎｕｍｂｅ ｒ
Ｃｏｕｎｔｒｙ Ｈｏｓｔ
ＩＴＳａｃ ｃｅ ｓｓ ｉｏｎ ｎｕｍ ｂｅｒＴＵＢ２ ａ ｃｃ ｅｓｓ ｉｏｎｎｕｍｂｅ ｒ
Ｃ．ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｉＬＭｇｈ ｌ中国ＣｈｉｎａＭｏｒｉｎｇａ ｏ丨ｅｉ ｆｅｒａＫＲ０５２０８４ＫＵ９２３６７０
ＩＭＩ１ ０３ ８０６ 红１ 度 Ｉｎｄ ｉａ Ｃｈｌｏｒｏｐｈｙｔｕｍｓｐ ． ＧＵ２２７８９４ ＧＵ２２８ １ ８ ８
ＣＢＳ１ ４２ ． ７９澳大利亚Ａｕｓｔｒａｌ ｉａＳｔｙｌｏｓａｎｔｈｅｓｈａｍａ ｔａＧＵ２２７８９５ＧＵ２２８ １ ８ ９
Ｃ．ｐｈａ ｓｅｏｌｏｒｕｍＣＢＳ１ ５７ ． ３ ６ 日本 Ｊａｐａｎ Ｐｈａｓｅｏｌｕｓｒａｄｉ ａ ｔｕｓ ｖａｒ ． ａ ｕｒｅｕｓＧＵ２２７８９６ ＧＵ２２８ １ ９０
ＣＢＳ１ ５８ ． ３６日本 Ｊａｐａｎ Ｖ７ｇｎａｓｉ ｎｅｎｓｉｓＧＵ２２７８９７ＧＵ２２８ １ ９ １
Ｃ． ｌｉｎｅｏｌａ ＣＢ Ｓ１ ２５３ ３７ 捷克ＣｚｅｃｈＲｅｐｕｂ ｌ ｉｃＡｐ ｉａ ｃｅａ ｅ ， ｄｅａ ｄ ｓｔ ｅｍ ＧＵ２２７８ ２９ ＧＵ２２８ １ ２３
ＣＢ Ｓ１ ２５ ３ ３ ９捷克ＣｚｅｃｈＲｅｐｕｂ ｌ ｉｃＡｐ ｉａ ｃｅａ ｅ ， ｄｅａ ｄ ｓｔ ｅｍＧＵ２２７８ ３０ＧＵ２２８ １ ２４
Ｃ．ｌ ｉｎｄｅｍｕ ｔｈｉａｎｕｍ
ＣＢＳ１ ５ １ ． ２８ 英国ＵＫ
Ｐｈａｓｅｏｌ ｕｓｖｕｌｇａｒｉ ｓ
ＧＵ２２７８００ ＧＵ２２８０９４
属是一类世界性分布的植物病原菌 ， 在高温 、高湿 的
热带和亚热带地区发生危害最重 ， 给许多林木 、蔬菜 、
果树 、 花丼及大田作物等造成严重的经济损失 （ Ｈｙｄｅ
｜
－ ｃｗ． ｃｂｓ ｕ５３３７ｅ ｔａ ｌ ． ，２００９ ） 。 ２０ １ ２年美国科学家报道 ＣｃＷｏｒｏｐｈｙｆａ？是
ｃＢｓ ｍａ引起大Ｓ炭痕病的病原菌之一■ ， 此外该病原菌还能侵
＇
￣ 染柱花草 、 吊兰等 （ Ｙａｎｇｅｔ ａｌ ． ， ２０ １ ２ ） 。
？Ｋ， ？传统炭疽菌的种类鉴定标准是根据分生孢子 、菌图 ４ 基于ｒＤＮＡ－ＩＴＳ和 ／３－ ｔｕｂ ｕｉｍ基 因序列构建的辣木果腐炭ｖ ７ ｍ
疸菌及其近似类￡ 系统发育进化树落 开 丝生长速率 、厚 抱子和产生色素等ｆ征
Ｆｉｇ ． ４Ｎｅｉｇｈｂｏｕｒ－ｊ ｏｉ ｎｉ ｎｇｐｈｙｌ ｏｇｅｎｅｔ ｉｃ ｔｒｅｅｏｆＣｏｌ ｌｅｔｏ ｔｒｉｃｈ ｕｍ进 ＂ ｆ Ｘ确疋 （ Ｓｍｉ ｔｈａｎｄＢ ｌａｃｋ ，１ ９９０ ） ， 但由 于炭痕囷 中
ｓｐｅｃｉ ｅｓｂａｓ ｅｄｏｎｒＤＮＡ－ ＩＴＳ ａｎｄ／３－ｔｕ ｂｕｌｉｎｇｅｎ ｅ ｓｅｑｕ ｅｎｃｅｓ许多种的分生抱子等形态相似 ， 单用形态学特征很难
准确鉴定其种类 。 ＩＴＳ是指真核生物中 ｒＤＮＡ基因内转
＾ 录间隔 区 ， 是ｒＤＮＡ上的一个非编码区域 ， 包括ＩＴＳ １ 和
ｒｒｓ２ ，该区域受外界环境的影响较小 ， 与编码区相 比
本研究将分离 自 带黑色小颗粒状物辣木病果荚具有进化快的特点 。 真菌的ｉｔｓ具有属内种间差异明
的炭疽菌鉴定为兰生炭疽菌 （ Ｃ ．ｃＷｏｒｅｐｈｙｒｉ） 。 炭疽菌显 、种内较一致的特点 ，且基于 ｒＤＮＡ －ＩＴＳ 的序列分析
９期蔡志英等 ： 辣木果荚腐病病原菌分离及鉴定？１５２ １？
可以从核酸序列中获得信息以反映生物亲缘关系远刘昌芬？２０１３ ？ 神奇保健植物辣木及其栽培技术 ［Ｍ ］ ？ 昆明 ： 云
近及分类 ， 目前已广泛应用于真賴种间及部分种 Ｕｕｃ南 邮―ＷＭ。―敲一内组群水平的系统学研究 （ Ｂｒｕｎｓｅｔ ａｌ ． ， １９９ １ ） 。 ＩＴＳａｎｄＩｔｓＣｕ ｌｔ ｉｖａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ［Ｍ ］ ．Ｋｕｎｍｉｎｇ ：ＹｕｎｎａｎＳｃｉ－
序列分析已被用于解决炭疽菌和镰刀菌种属分类上成宏 明 －击轨枯 屮 ＢＳｉｆ盛军． ２０１ ５ ． 现代辣木生物学 ＬＭ 」 ． 昆明 ： 石南科技出 版社 ：的疑难问题（Ｐｈｏｔｉｔａ ｅｔ ａＬ ， ２００５ ） 。 除了ｒＤＮＡ ， ／３－ｆｔｉｂｕｌｉｎ １ ３３－２１７．
序列分析已应用于真菌间的系统发育 中 （ ＢｏｇａｌｅｅｔＳｈｅｎｇＪ ．２０ １ ５．Ｍｏｒｄｅｍ ＭｏｒｉｎｇａｏｌｅｉｆｅｍＢｉｏｌｏｇｙ ［Ｍ ］ ，Ｋｕｎｍｉｎｇ ：
ａｌ ． ，２００６ ） 。本研究将传统的植物病理学方法与现代分 杨春 ？丽芳 ，蒋海子生物学技术相结合 ， 证实Ｃ．ｃＷｏｒｏｐｉｙｔｆ能为害辣木玉． ２０１５ ？ 辣木组织培养和快繁技术研究 ［ Ｊ ］ ． 西南农业学
果莖引起果泰腐烂病Ｊｇ ， ２８ （ ５ ） ： ２２ １ ８－２２２２．术失 一ｍ 。 Ｙａｎｇ ＣＭ ，ＱｕＹＨ ， ＷａｎｇＧＸ ， ＣａｏＨ ， Ｓｈａｎ（？Ｌ ， ＲｕａｎＪＷ ，镰 刀 菌 中 的Ｆ．ＯＸ＞？ｐ〇ｒｕｍ 、Ｆ．ｓｅ血＇ｔｅｃｆｔｉｍ和Ｊ７．ＷｕＬＦ ，Ｊ ｉａｎｇＨＹ．２０ １ ５．Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｉ ｓｓｕｅｃｕｌ ｔｕｒｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ
ｓｏｆｅｎｉ已 被报道为害辣木果荚 、幼苗茎干 （ ＰａｎｄｅａｎｄＰ １？？３＾０１１Ｗ—ｅｏｆＭｏｒｉ＂供 ０ｆｅｉｆｅｒａｈａｎｃｅｍｅｒｉｓｔｅｍ
乃，二二Ｔ？ 〇外 １丁，二 ｒ二」丄业＋ｎｗ ［Ｊ ］ ．Ｓｏｕ ｔｈｗｅｓｔＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ ｓ ，２８Ｇｈａｔｅ ，１９９８ ；Ｌｅｚｃａｎｏ ｅｔ ａｌ ． ， ２０ １４ ） ，但 目前尚未见炭 （ ５ ） ． ２２ １ ８－２２２２疽菌侵染引起辣木果荚腐烂的相关研究报道 ，本研究 张德 ， 龙‘英 ， 郑益九张燕平 ？２０１ ４？ 不同种植密度和栽培管
ｌＵＭａ 农艺性状的影响⑴ ． 西南农业学报 ， ２７ （ ５ ） ：
取单个病斑病健交界处组织进行分离培养 ，从带黑色ＺｈａｎｇＤ ，ＬｏｎｇＨＹ ，ＺｈｅｎｇＹＸ ，ＺｈａｎｇＹＰ．２０１４ ．Ｅｆｅｃｔｓｏｆ
颗粒状物的病果荚中未 同时分离到 Ｃ．ｃｈｉｏｒｏｐｌｉｙｔｉ和 ｄｅｆｊ３１１（１ｅ ｉ＾ｖａｔ ｉ°ｎ
－１４？ＶＸ ￡．ｚ ｏ．＾ｒｎ／ ． Ｌｎｚｒ＾ｆｅ＾ｕ＞ ＾ ｉ＝ｒ＾ｃｈａｒａｃｔｅｒｓｏｆＭｏｒｉｎｇａｏｌｅｉｆｅｒａ ｉ ｎＤｒｙ－ＨｏｔＶａｌｌｅｙｏｆＹｕａｎ－已报道 、能侵染辣木果夹的其他病原菌 ，这些病原菌 ｍｏｕ ［ Ｊ ］ ．ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＣｈｉ ｎａＪｏ ｕｒｎａｌｏｆ Ａｇｒｉｃｕ ｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ ，
是否存在协同侵染有待进一步验证。 前期研究中发现ｎ？７ （＾ ：ｗｒ， ，，＾
Ｃ． 他＿赠了为害果荚外 ， 还可侵染辣木叶和莲 Ｊ〇ｆＳｌｒＰ〇＾－杆 。 当前辣木已推广种植到高寒山区 、干热河谷及热ｒｕｍｉ ｓｏｌａ ｔｅｓ ｆｒｏｍＥｔｈｉｏｐｉａｕｓｉｎｇＡＦＬＰ ， ＳＳＲａｎｄＤＮＡｓｅ－
带雨林等地 ， 目雌测＿已插＿願外 ，． ＢｍｎｆＴｌ ｓｙｓ＿还存在其他的致病菌 。ｔｅｍａｔ ｉｃｓ ［ Ｊ ］ ．Ａｎｎｕａ ｌＲｅｖｉｅｗ〇￡Ｅｃｏｌｏｇｙ ａｎｄＳｙｓｔｅｍａｔｉｃｓ ，
在云南西双版纳 ，辣木一年四季均可开花 ， 吐蕾ｎ Ｐ Ｆｒｐ ｗ９ｍｑ到谢花约３０ｄ ， 上果至成熟约 ９５ｄ ， 从吐蕾到成熟约 ＧａＺ／ｅｔｏｆｎｅｌｉ ｕｍｓｐｅｅｉｅｓ ｗｉ ｔｈ ｃｕｒｖｅｄｅｏｎｉｄ ｉａ ｆｒｏｍｈｅｔｌｍｅｅｍｉｓ
１２５ｄ（刘昌芬 ， ２０ １ ３ ） 。 西双版纳地区 １￣３月 期间因降ｈｏｓｔｓ ［ Ｊ ］ ．ＦｕｎｇａｌＤｉｖｅｒｓｉ ｔｙ ， ３９ ：４５＿８＇
雨量少 、天气干旱 、空气湿度小等 ， 辣木开空花 ， 不结
果 ； ３月后的开花坐果率逐渐增加 ， ６＾８月 为西双版纳ｆｒｏｍｆｉｌａｍｅｎｔｏｕｓａｓｃｏｍｙｃｅｔｅｓ ［ Ｊ ］ ．Ａｐｐｌ ｉｅｄａｎｄＥｎｖｉｒｏｎ－
Ｊ区降雨密集期厂旦天５气酿达４０炫右 ，高？Ｈ⑶高湿 、骤冷骤热不利于果夹生长 ，有利于病害暴发 ，加 Ｕ ，Ｌｉｕ ＺＹ ． ２００９ ．Ｃｏ ｌｌｅｔｏ ｔｒｉｃｈｕｍ－ｎａｍｅｓｉｎｃｕｒｒｅｎｔｕｓｅ［ Ｊ ］ ．
之雨水密集很难用化学农药防治 ，使病害加重 。 建议ＦｕｎｇａｌＤｉｖｅｒｅｉｔｙ ，３９ ：１ ４７－ １８２
， ？ 士？ ．？＾ ．＿ ＿ｎ — Ｉｉｄ 进被 竹 ． ｖ ．／ｎＫｓｈ ｉｒｓａｅａｒＣＲ ，Ｕ ＳｏｕｚａＩｉ＊ ．１９８９ ． Ａｎｅｗ ｄｉｓｅａｓｅ ｏｉｄｒｕｍｓｂｅｋ生产上在旱季的２月底加强灌溉及施肥 ， 以促进辣木 Ｊｏｕ ｒｎａｌｏｆＭａｈａｒａｓｈｔｒａＡｇｒｉｅｕｌ ｔｕｒａｌＵｎｉＴＯｉｓｉｔｉｅｓ ， １４
开花 、坐果 ；在果荚生长到直径 ０． ８ｃｍ左右时进行套 （２ ） ：２４ １－２４Ｚ
袋 ，可有效防治辣木果荚腐病 ， 同时还能预防害虫为
害果英 。 防治辣木果英腐病长久之计是选育抗病品ｏｉｅｉｆｅｒａＬａｍａｒｃ ｌｃ ［ Ｊ ］ ．Ｐａｓｔｕｒｅｓａｎｄ Ｆｂｒａｇｅｓ ， ３７ （ ２ ） ： ２２８ －
种 ，栽培高产 、抗病品种是经济 、安全 、绿色 、环境友好Ｐ… ｔｖ １ （ＷＳＡｆＭ．
的一１种防 施 。 因此 ， 当 目 丨』应加强现有栽ｉ〇 Ｂ〇种 自 （Ｍ．ｃｏｎｃａｎｅｕｓｉ＊ｓ ） ［Ｊ ］ ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｎｏｍｉｃａｎｄＴａｘｏｎｏｍ ｉｃ
然杂交后代抗病性评价 ，并加强培育高产抗病品种 。 ， Ｂｏ＝ｙ ， ２２ 丨 ２ ），２３＿４２＾：■Ｔ 」Ｔ。Ｐｈｏｔｉ ｔａＷ ，ＴａｙｌｏｒＰＷＪ ，ＦｏｒｄＲ ，ＨｙｄｅＫＤ ，ＬｕｍｙｏｎｇＳ．
４２００５ ． Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇ ｉｃａｌａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔ ｉｏｎ ｏｆＣｏｌ—
ｌｅｔｏｔｒｉｃｈ ｕｍ ｓｐｅｃｉｅ ｓｆｒｏｍｈｅｒｂａｃｅｏｕ ｓｐ ｌａｎｔｓ ｉｎＴｈａｉｌａｎｄ［ ｊ ］ ．
本研究结果表明 ，腐烂辣木果荚中黑色小颗粒病ＦｕｎｇｄＤｉｖｅｒｓｉｔｙ １８ ： １ １７： Ｉ ３３ｖＫｅｓｍｉｕｂ ，ＧｍｊａＶＫ ，ＣｅｌｉｎｅＶＡ ．２００５ ．ｒ ｕｓａｎｕｍｉｎｃｉｔｅｄ残体是二生炭痕菌 （ Ｃ＊．ｃＷｏｒｏｐＡｙｔｌ ）侵害辣木果夹形ｆｒｕｉ ｔｒｏｔｏｆ Ｄｎｕｎｓｔｉｃｋ （Ｍｏｒ ｉｎｇａｃｉｅｉｆｅｒａｌａｍｋ ． 〉 ［ Ｊ ］ ．Ｊｏｕｒｎａｌ
成 ，兰生炭疽菌是为害辣木果荚的致病菌 。Ｃ ，ＪＵＳｍｉｔｈ ＢＪ ，Ｂｌａｃｋ ＬＬ．１９９０ ．Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ ，ｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ ｐａｔｈｏ？
ｇｅｎｉｃｖ ａｒｉａｔｉｏｎａｍｏｎｇＣｏＵｅ ｔｏｔｒｉｃｈｕｍｓｐｅｃｉｅｓｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ参考文献 ： ｓｔｒａｗｂｅｎｙ ［Ｊ ］ ．ＰｌａｎｔＤｉｓｅａｓｅ ， ７４（ １ ） ：６９－７６ ．
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１ ２２－ １ ２５ｐｏｍ０ ’ ｌａｙｌｏｒＰＷＪ ．２００８ ．Ｃｈａｒａｃ ｔｅｒ ｉｚａｔｉｏｎａｎｄ
ＦａｎｇＺＤ ．１９９８ ．ＲｅｓｅａｒｃｈＭｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｇｙ ［Ｍ ］ ．Ｂｅｉ－ｐ
ａｔｈｏｇｅｎ ｉｃｉｔｙｏｆＣｏＵｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｓｐｅｃｉｅｓ
＾ｓｏｃｉａｔｅｄｍｔｈａｎ－
ｊｉｎｇ ： ＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕ ｌｔｕｒｅＰｒｅｓｓ ： １２２－ １２５ ．ｔｏｏｓｅｏｎｃＨｈ （ Ｃａｐｓｉｃｕｍｓｐｐ． ） ｉｎＵａｄａｎｄ ｔ ｊ ］ ，Ｐｌａｎ ｔ蒋桂芝 ， 刘昌芬 ， 苏海鹏 ？２００７ ＿ 西双版纳辣木果腐病及其病Ｐａｔｈｏｌｏ＾ ，５ ７ （ ３ ） ：５６２－５ ７Ｚ原０的鉴邊 〖Ｊ ］ ？ 植物保护？报 ， ３４ （ ５ ） ：５５７－５ ５８ ．ＹａｎｇＨＣ ，ＨａｕｄｅｎｓｈｉｅｌｄＪＳ ，ＨａｒｔｍａｎＧＬ．２０ １２ ．Ｆｉ＾ｔｒｅｐｏｒｔ
ＪｉａｎｇＧＺ ，ＩｉｕＣＦ ，ＳｕＨＰ．２００７ ．Ｆｒｕｉｔｒｏｔ ｏｆ Ｍｏｒｉｎｇａ ｏｌｅｉｇｅｒａｆＣｏＵｅｔｏｍｃｈｕｍＭｏｗｐｈ＾ｃａｖｓｍｇｓｏｙｂｅａｎａｎ ｔｈｒａｃｎｏｓｅ
ａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｎＸｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ ［ Ｊ ］ ．Ａｃｔａ
１ｌ ｓｅａｓｅ ＊＊ｉ＊Ｉ＾ ＾
Ｐｈｙｔｏｐｈｙｌａｃｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ ，３４（ ５ ） ； ５５７－５５８． Ｕ仕編科 麻小燕 ）