全 文 ：辣木外植体消毒试验研究
姜 艳，高 燕* ，耿秀英，李泽生，李薇莎，姚 春 (云南省德宏热带农业科学研究所，云南瑞丽 678600)
摘要 ［目的］探讨辣木茎段的最佳消毒方法。［方法］以辣木茎段为外植体，用不同消毒剂(升汞、次氯酸钠)，选用不同浓度，在不同
消毒时间下对辣木茎段进行消毒处理。［结果］次氯酸钠最佳消毒组合为浓度 15 g /L消毒 20 min，污染率为 26%，成活率为 34%。升
汞最佳消毒组合为 0． 20 g /L消毒液消毒 5 min，污染率为 2%，成活率达 84%。［结论］辣木茎段最佳消毒方法为:在 75%酒精中浸泡 30
s后，用 0． 20 g /L升汞处理 5 min，污染率为 2%，成活率达 84%。
关键词 辣木;外植体;消毒
中图分类号 S723． 1 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2015)17 －232 －03
Ｒesearch on Explants Disinfection Test of Moringa oleifera Lam．
JIANG Yan，GAO Yan* ，GENG Xiu-ying et al (Dehong Institute of Tropical Agriculture，Ｒuili，Yunnan 678600)
Abstract ［Objective］The aim was to explore the best method of Moringa oleifera Lam． stem disinfection．［Method］With M． oleifera Lam．
stem as explant，the effects of different concentration of mercuric chloride and sodium hypochlorite with different sterilization time were stud-
ied． ［Ｒesult］The best combination for NaClO was 15 g /L with 20 min disinfection，contamination rate was 26%，and survival rate was
40% ． The best combination for HgCl2 was 0． 20 g /L with 5 min disinfection，contamination rate was 2%，survival rate could reach 84% ．
［Conclusion］The best method of M． oleifera Lam． stem disinfection was that 75% alcohol immersion 30 s，after treated with 0． 2 g /L mercu-
ric chloride 5 min，contamination rate was only 2%，the survival rate could reach 84% ．
Key words Moringa oleifera Lam．;Explants;Disinfection
基金项目 德宏州科技创新项目(2014 － 21) ;德宏州生物产业办项目。
作者简介 姜艳(1983 － ) ，女，贵州贵阳人，硕士，从事药用植物选育种
与组培快繁技术研究。* 通讯作者，高级农艺师，从事药用
植物资源收集与种苗培育技术研究。
收稿日期 2015-04-21
辣木树(Moringa oleifera Lam．，英文名:Moringa tree) ，又
称鼓槌树、山葵树，属于辣木树科，为多年生常绿小乔木至大
乔木，现已知共有 14种，供食用栽培的有印度辣木树和非洲
辣木树 2个品种。辣木全株都可利用，含有丰富的营养成分
与抗营养成分［1 －4］，矿物质和维生素含量也高于世界卫生组
织(WHO)的推荐摄取标准［5 －6］。大量研究证明了辣木的医
疗保健功能［7 －13］。此外还含有人体必需的各种氨基酸和微
量元素等，其营养价值与被称为“人类营养微型宝库”的螺旋
藻相当。辣木树作为蔬菜和食品有增进营养和食疗保健功
能，可用来增强免疫力，对艾滋病(AIDS)有一定的辅助治疗
作用，可以解决营养不良问题［5 －6、14 －16］，CWS(Church World
Service)呼吁贫困地区将其作为主要营养食物。
随着辣木各种用途及产品被人们所认识，在进入 21 世
纪后作为一种新食品资源更加引起人们的重视［17］。辣木喜
温，耐干旱，生长快，非常适宜在云南省热区推广种植［18］。
目前，种植辣木的地区越来越多，传统的种子育苗已不能满
足市场需要。生产上种植的辣木有 90%以上是采用种子育
苗，存在性状不稳定、抗病差、产量低等问题，而以辣木茎段
为外植体，通过组织培养生产辣木种苗，可保证品种的稳定
性、抗病性及品质，对促进云南辣木良种选育及种苗繁殖推
广具有重要意义。该研究通过比较多种消毒方法，旨在建立
适于辣木外植体的消毒程序，为辣木快速繁殖奠定基础。
1 材料与方法
1． 1 试验材料 试验材料为新抽发的辣木嫩茎。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 外植体处理及清洗。剪取新抽发的辣木嫩枝，去除
叶片，留带腋芽的茎段，剪成 4 cm左右长度，用自来水冲洗
干净备用。
1． 2． 2 外植体消毒灭菌。
(1)将清洗干净的辣木茎段放入玻璃瓶中，在超净工作
台中用 75%酒精浸泡 30 s左右。
(2)用镊子取出后放入事先配制好的消毒剂中(消毒剂
浓度及消毒时间见表1) ，并不停地轻轻摇动，驱除气泡，以促
进材料各部分与消毒液充分接触，消毒材料不宜放多，以保
证消毒液充分浸泡辣木茎段，使消毒彻底;消毒时间为外植
体加入消毒液开始计时，至取出外植体结束。
(3)在消毒结束前 1 min，取出辣木茎段并将其放入无菌
水中，摇动装有无菌水和辣木茎段的瓶子 30 s。
(4)取出辣木茎段并将其放入干净的无菌水中，摇动瓶
子 30 s以上。如此重复 5次，必须洗净消毒剂。
表 1 消毒剂浓度及灭菌时间
消毒剂 浓度∥g /L 消毒时间∥min
升汞(HgCl2) 0． 05、0． 10、0． 15、0． 20 5、10、15
次氯酸钠(NaClO) 5、10、15 10、15、20
1． 2． 3 接种。将上述冲洗好的辣木茎段，按无菌操作要求
将外植体切成一个节间、长 1 cm左右茎段，接种于不定芽诱
导培养基(添加一定浓度生长激素的 MS培养基)上，每瓶接
1个茎节，每个处理接种 50 瓶。经消毒处理好的外植体，必
须切除原伤口，否则原伤口处被消毒剂伤害的细胞会对外植
体后期生长产生影响。
1． 2． 4 培养条件。培养温度为 28 ℃，光照强度 2 000 lx，光
照时间 10 h /d。
1． 3 统计方法 培养 3 d，开始观察污染情况;培养 10 d，统
计污染情况;培养 21 d后，统计成活率和死亡褐化率。
污染率 =(污染的外植体数 /接种的外植体数)×100%
责任编辑 高菲 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2015，43(17) :232 － 234
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2015.17.040
成活率 =(成活的外植体数 /接种的外植体数)×100%
死亡褐化率 =(死亡褐化的外植体数 /接种的外植体数)
×100%
2 结果与分析
2． 1 升汞对辣木外植体消毒灭菌的影响 培养 3 d，观察污
染情况，HgCl2 处理的茎段只有 0． 05 g /L浓度处理时有少量
污染，5 d后 0． 10 g /L浓度处理的茎段也开始出现污染，在培
养 10 d统计污染情况时，发现灭菌时间为 15 min的茎段已
开始褐化甚至有死亡的现象。从图 1可以明显看出，无论消
毒灭菌时间多久，污染率都随消毒时间增加而降低，而死亡
褐化率都随 HgCl2 浓度增加而增加;当灭菌时间为 5 min时，
成活率随 HgCl2 浓度增加而升高，灭菌时间为 10 min时，成
活率先升高后降低，灭菌时间为 15 min时，成活率呈下降趋
势。这样的升降规律说明 HgCl2 消毒灭菌时间对于辣木茎
段来说是至关重要的。
表 2 不同消毒方法对辣木外植体影响
消毒剂
时间
min
浓度
g /L
接种瓶数
瓶
污染率
%
死亡褐化率
%
成活率
%
HgCl2 5 0． 05 50 50 8 42
0． 10 50 18 6 76
0． 15 50 10 12 78
0． 20 50 2 14 84
10 0． 05 50 30 12 58
0． 10 50 4 20 76
0． 15 50 6 34 60
0． 20 50 0 100 0
15 0． 05 50 8 22 70
0． 10 50 0 80 20
0． 15 50 0 100 0
0． 20 50 0 100 0
NaClO 10 5 50 100 0 0
10 50 100 0 0
15 50 100 0 0
15 5 50 90 2 8
10 50 86 4 10
15 50 50 10 40
20 5 50 84 10 6
10 50 74 16 10
15 50 26 40 34
图 1 不同浓度 HgCl2 对辣木外植体消毒灭菌的影响(a．处理 5 min;b．处理 10 min;c．处理 15 min)
2． 2 次氯酸钠对辣木外植体消毒灭菌的影响 NaClO处理
的茎段在 3 d观察污染时就已经大量污染了，但是培养 10 d
后仍然没有发现褐化死亡。从表 2可以看出，采用 NaClO对
辣木茎段进行消毒，消毒时间≤10 min 的外植体污染率为
100%;消毒时间≥15 min时，污染率随着消毒时间的增加而
降低，死亡褐化率和成活率随浓度的增加而升高;消毒时间
20 min、消毒液浓度为 15 g /L时，效果最好，污染率为 26%，
成活率为 34%，死亡褐化率为 40%。
3 结论与讨论
通过该试验研究得出:以辣木茎段为外植体，先用 75%
酒精浸泡 30 s后，再用 0． 20 g /L HgCl2 消毒处理 5 min效果
最佳，污染率为 2%，成活率高达 84%，死亡褐化率为 14%;
其次是 0． 15 g /L HgCl2 消毒处理 5 min，污染率为 10%，成活
率高达 78%，死亡褐化率为 12%;NaClO处理效果最好的成
活率仅 40%。这就说明对于消毒灭菌而言，除了处理时间很
关键以外，消毒剂的选择也至关重要。该试验选择 75%酒精
浸泡 30 s，利用酒精渗透压吸收细菌的水分，杀死外植体表
面细菌，再分别用 HgCl2 和 NaClO处理，HgCl2 中含有的重金
属离子可使含有巯基、氨基、二巯基、羟基等的酶受到损伤甚
至失去活性，丧失功能，这 2种方法互补不足，因此消毒效果
显著;而 NaCLO则是利用其氧化作用消毒，仅能杀死外植体
表面的少量细菌，效果跟 75%酒精相似，将 NaCLO与酒精组
合，消毒效果欠佳。
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137 －145．
(上接第 203 页)
为宅基地置换工作还涉及就业、就学、养老等多个环节，所以
地方政府应加强对于宅基地置换后农民的文化和就业培训，
提高农民的环境适应性和进城就业能力。同时，针对于集中
居住在农村的农民，应大力发展乡镇企业，优化产业结构，以
增加吸纳农民就业的能力［37 －38］。田莹莹等以政府主导型宅
基地置换模式为研究对象，提出政府应保证置换资金的稳
定，充分考虑农民意愿，提高农民宅基地置换工作的参与度，
提高宅基地置换的综合效益［29］。
3 研究评述
综上所述，众多学者在农村宅基地置换的模式、存在问
题及对策建议、机理分析以及效益评价等领域已取得了不少
研究成果，但还需要在以下两方面进行努力:
(1)从研究的内容来看，现有农村宅基地置换研究主要
集中于对农村宅基地置换的现状、机理分析、效益评价和完
善建议等方面的探讨，其中宅基地置换置换的机理分析部分
从宏观和微观的不同视角下进行研究，已形成较为完整的理
论基础，但针对于定量方面的研究还很缺乏，缺少可视化的
实证研究论证宅基地置换机理分析的相应结论，这方面的研
究有待进一步加强。
(2)从研究的推广性来看，以个例地区作为对象的研究
较为普遍，研究结论应用并进行大面积推广的可施行性较
差。关于宅基地置换方面的研究应该对不同地区宅基地置
换的差异性进行对比分析，总结出其共性的影响机理，提高
结论应用的普适性。
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