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侗族药羊耳菊醇提物抗炎镇痛作用的实验研究



全 文 :[收稿日期] 20120220(018)
[第一作者] 莫佳佳,硕士,从事中药资源开发利用与品质评
价,Tel:0571-86613576,E-mail:mo _ legend87 @
sina. cn
[通讯作者] * 黄真,硕士,博士生导师,从事中药资源开发利
用 与 品 质 评 价,Tel:0571-86633088,E-mail:
huangzhen@ zjtcm. net
侗族药羊耳菊醇提物抗炎镇痛作用的实验研究
莫佳佳,徐慕蝶,杨丹丹,黄真 *
(浙江中医药大学药学院,杭州 310053)
[摘要] 目的:观察侗族药羊耳菊醇提物的抗炎镇痛作用。方法:小鼠分为空白对照组,羊耳菊醇提物(生药)2. 5,5 g·
kg - 1剂量组和阳性对照阿司匹林 0. 25 g·kg - 1组。采用二甲苯致小鼠耳肿胀法、小鼠腹腔毛细血管通透性亢进法观察其抗炎
作用;采用小鼠醋酸扭体法、热板法观察其镇痛作用。结果:羊耳菊醇提物(5 g·kg - 1)显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀(P <
0. 05)及醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高(P < 0. 01) ;羊耳菊醇提物(5 g·kg - 1)显著减少醋酸致小鼠 20 min 内扭体次
数,提高热板致痛小鼠痛阈值(P < 0. 01,P < 0. 01)。结论:羊耳菊醇提物具有较好的抗炎镇痛作用。
[关键词] 羊耳菊;醇提物;抗炎;镇痛
[中图分类号] R285. 5 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2012)21-0258-03
Experimental Study on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of
Ethanol Extracts of Dong-medicine Inula cappa
MO Jia-jia,XU Mu-die,YANG Dan-dan,HUANG Zhen*
(College of Pharmaceutical Science,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou 310053,China)
[Abstract] Objective:To observe anti-inflammatory and analgesic effects of ethanol extracts of Dong-
medicine Inual cappa. Method:Mice divided into blank control group, low dose group and high dose group
(2. 5,5 g·kg - 1)of ethanol extracts of I. cappa DC. and positive control group of aspirin (0. 25 g·kg - 1). The
anti-inflammatory action was assessed by tests including HAc-induced peritoneal capillary permeability in mice,
xylene-induced ear edema in mice. The analgesic effect was verified by HAc-induced writhing response in mice
and hot-plate test. Result:The dose group of the ethanol extracts of I. cappa DC. (5 g·kg - 1) could significantly
inhibit the ear edema induced by xylene (P < 0. 05) and very significantly inhibit the phlogistic infiltration induced
by acetic acid in mice (P < 0. 01). The dose group of the ethanol extracts of Inual cappa DC. (5 g·kg - 1) could
significantly reduced writhes of abdominal cavity induced by acetic acid in 20 minutes and increased the pain
threshold in the hot-plate test (P < 0. 01,P < 0. 01). Conclusion:Ethanol extracts of Inual cappa DC. have
obvious anti-inflammatory and analgesic effects.
[Key words] Inual cappa.;ethanol extracts;anti-inflammation;analgesia;mouse
羊耳菊为菊科旋覆花属植物,亚灌木,根状茎粗
壮。又名羊耳风、白牛胆、山白芷、白面风、羊耳茶、
娜罕、美叉列大力王[1],主要生长在亚热带和热带
的低山和亚高山的湿润或干、荒地、灌丛或草地,在
酸性土、砂土和黏土上都常见[2]。此药味苦微辛,
性平无毒,以全草或根花入药[3],具有行气止痛、祛
风消肿之功,主治风湿骨痛、跌打损伤、感冒风寒
等[4]。在我国南方侗、傣、景颇、拉祜、傈僳、苗、彝、
佤、壮等族的民间都有丰富的药用经验[5]。目前,
国内外尚无关于羊耳菊抗炎镇痛作用的研究报道,
为进一步开发利用其资源,本实验对羊耳菊根醇提
物抗炎镇痛作用进行了实验研究,为临床用药提供
参考。
·852·
第 18 卷第 21 期
2012 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 21
Nov.,2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.21.021
1 材料
1. 1 药物和试剂 羊耳菊药材采自广西壮族自治区
三江侗族自治县,经浙江中医药大学资源鉴定教研
室陈锡林副教授鉴定为菊科羊耳菊[Inula cappa
(Buch. -Ham.)DC.]。取其干燥根打成粗粉,加入
药材 10 倍量 50% 的乙醇,提取前浸泡 0. 5 h,加热
回流提取 2 次,每次 1 h,合并滤液,减压抽滤并浓缩
至无醇味,加水稀释至 2. 5,5 g·kg - 1的药液,备用。
阿司匹林维 C 肠溶片,南京白敬宇制药有限责任公
司,批号 110709,使用时以生理盐水配制 0. 25 g·
kg - 1药液;二甲苯(分析纯) ,国药集团化学试剂有
限公司,批号 20110304;冰醋酸(分析纯) ,中国杭州
化学试剂有限公司,批号 20080719;伊文思蓝,国药
集团化学试剂有限公司,批号 F20040213。
1. 2 动物 SPF 级 ICR 小鼠,体重(20 ± 2)g,由浙
江中医药大学实验动物中心提供。动物许可证号
SCXK(沪)2008-0016,实验动物饲养环境:室温22 ~
25 ℃,相对湿度 45% ~ 50%。
1. 3 仪器 ISO9001 电子分析天平(赛多利斯科学
仪器有限公司) ,YLS-Q4 耳冲打孔器(淮北正华生
物仪器设备有限公司) ,YLS-6B 智能热板仪(北京
吉安得尔科技有限公司) ,UV-1800 紫外-可见分光
光度计(日本岛津公司) ,RE-52AA 旋转蒸发仪(上
海亚荣生化仪器厂) ,循环水式真空泵(巩义市予华
责任有限公司)。
2 方法
2. 1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响[6] 小鼠 40
只,雌、雄各半,随机分为 4 组,每组 10 只。羊耳菊
醇提物低、高剂量组以生药量计分别为 2. 5,5 g·
kg - 1,阳性组给予 0. 25 g·kg - 1的阿司匹林,空白对
照组给予同体积生理盐水。ig 给药,每天 1 次,连续
给药 7 d,末次给药 1 h 后,将动物右耳前后两面涂
二甲苯 0. 02 mL /只,左耳不做处理。40 min 后将小
鼠断椎处死,剪下双耳,用 8 nm 直径打孔器分别在
同一部位打下圆耳片,电子天平称重,每鼠右耳质量
减去左耳质量为肿胀度。
肿胀抑制率 = (空白组平均肿胀度 - 给药组平均肿胀
度)/空白组平均肿胀度 × 100%
2. 2 对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进的
影响[7] 小鼠 40 只,雌雄各半,分组及给药方法同
2. 1,末次给药后 1 h,小鼠尾 iv 0. 5%伊文思蓝生理
盐水溶液 0. 01 mL·g - 1,再 ip 0. 6% HAC 溶液 0. 01
mL·g - 1,20 min后将小鼠断椎处死,剪开腹部皮肤,6
mL 生理盐水分数次冲洗腹腔,吸管小心吸出腹腔
液,合并,定容至 10 mL,3 500 r·min - 1离心 15 min,
取上清液于 590 nm 比色,测定吸光度(A)。
2. 3 对热板法小鼠痛阈的影响[8] 雌性小鼠 40 只
(剔除过敏感及不敏感动物) ,体重(20 ± 2)g,分组
与给药方法同 2. 1,连续 7 d,末次给药 1 h 后,将小
鼠放到(55 ± 0. 5)℃的热板仪上,以接触热板至小
鼠舔后足或跳跃反应所经历的时间为痛阈值,超过
60 s 者按 60 s 计算。给药前测各鼠痛阈 2 次,取平
均值为基础痛阈。
2. 4 对醋酸致小鼠扭体的影响[9] 小鼠 40 只,雌
雄各半,分组与给药方法同 2. 1 项,连续 7 d,末次给
药后 1 h,各鼠 ip 0. 6% HAC 溶液 0. 01 mL·g - 1,观
察 20 min 内第一次出现扭体反应的时间(潜伏时
间)及扭体次数,并计算抑制率。
抑制率 =(空白组扭体次数 - 试药组扭体次数)/空白
组扭体次数 × 100%
2. 5 统计学处理 采用 SPSS 11. 0 统计软件进行
处理,数据均采用 珋x ± s 表示,各组间均值比较采用
单因素方差分析,t 检验进行组间差异性比较,P <
0. 05 为有统计意义。
3 结果
3. 1 对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响 结果表明,羊
耳菊醇提物高剂量组可明显抑制二甲苯所致小鼠耳
廓急性炎性水肿,与空白组比较具 显 著 差 异
(P < 0. 05) ,其抑制率略低于阿司匹林。表明羊耳
菊醇提物 5 g·kg - 1对二甲苯所致小鼠耳肿胀有显著
抑制作用,见表 1。
表 1 羊耳菊醇提物对二甲苯致
小鼠耳肿胀的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
给药剂量
/ g·kg - 1
肿胀度
/mg
耳肿胀抑制率
/%
空白对照 - 7. 65 ± 5. 90 -
羊耳菊醇提物 5. 0 3. 62 ± 2. 391) 52. 68
2. 5 5. 01 ± 3. 31 34. 51
阿司匹林 0. 25 3. 26 ± 2. 231) 57. 74
注:与空白对照组比较1)P < 0. 05。
3. 2 对毛细血管通透性的影响 结果表明,羊耳菊
醇提物高剂量组可明显抑制醋酸所致小鼠毛细血管
通透性亢进,与空白组比较具极显著差异(P <
0. 01) ,其抑制率略低于阿司匹林。表明羊耳菊醇
提物在 5 g·kg - 1剂量时对醋酸所致小鼠毛细血管通
透性亢进有非常显著抑制作用,见表 2。
3. 3 对热板反应的影响 结果表明,羊耳菊醇提物
高剂量组可明显提高热致痛小鼠的痛阈值,与空白
组比较具极显著差异(P < 0. 01) ,其痛阈值提高率
·952·
莫佳佳,等:侗族药羊耳菊醇提物抗炎镇痛作用的实验研究
表 2 羊耳菊醇提物对醋酸致小鼠
毛细血管通透性的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/ g·kg - 1
A
抑制率
/%
空白对照 - 0. 033 ± 0. 013 -
羊耳菊醇提物 5. 0 0. 014 ± 0. 0051) 58. 54
2. 5 0. 030 ± 0. 016 9. 15
阿司匹林 0. 25 0. 011 ± 0. 0031) 67. 07
注:与空白对照组比较1)P < 0. 01。
略高于阿司匹林。表明羊耳菊醇提物在 5 g·kg - 1剂
量时可抵抗热致痛对小鼠的影响,并使其痛感潜伏
期明显延长,见表 3。
表 3 羊耳菊醇提物对小鼠痛阈值的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
剂量
/ g·kg - 1
基础痛阈值
/ s
给药 1 h 后
痛阈值 / s
痛阈值
提高率 /%
空白对照 - 21. 09 ±4. 89 24. 84 ±8. 99 17. 78
羊耳菊醇提物 5. 0 24. 09 ±3. 13 37. 97 ±11. 081,3) 57. 61
2. 5 23. 68 ±4. 18 29. 41 ±7. 112) 24. 20
阿司匹林 0. 25 22. 85 ±3. 21 35. 34 ±7. 7031,3) 54. 66
注:与空白对照组比较1)P < 0. 01;与同组基础痛阈比较
2)P < 0. 05,3)P < 0. 01。
3. 4 对小鼠扭体反应的影响 结果表明,羊耳菊醇
提物高剂量组可明显减少醋酸所致小鼠扭体次数,
与空白组比较具极显著差异(P < 0. 01) ,且扭体潜
伏时间也明显延长,与空白组比较具显著差异
(P < 0. 05)。提示羊耳菊醇提物在 5 g·kg - 1剂量时
对醋酸所致小鼠扭体反应有非常明显的抑制作用,
见表 4。
表 4 羊耳菊醇提物对醋酸致小鼠扭体反应的影响(珋x ± s,n = 10)
组别
给药剂量
/ g·kg - 1
潜伏时间
/min
扭体次数
/20 min
抑制率
/%
空白对照 ∕ 5. 1 ± 1. 79 23. 8 ± 8. 32 ∕
羊耳菊醇提物 5. 0 7. 0 ± 2. 091) 14. 0 ± 5. 942) 41. 18
2. 5 4. 3 ± 1. 33 19. 6 ± 10. 48 14. 58
阿司匹林 0. 25 11. 1 ± 6. 851) 7. 2 ± 6. 512) 69. 74
注:与空白组比较1)P < 0. 05,2)P < 0. 01。
4 讨论
在广西侗族地区民间常用羊耳菊根浸酒用于消
炎消肿止痛,治疗关节痹痛,具有较好的疗效。课题
组前期预实验表明,羊耳菊水提物并无抗炎镇痛作
用,结合民间浸酒的方法,本实验将羊耳菊根进行醇
提,并采用小鼠耳肿胀法、小鼠腹腔毛细血管通透性
亢进法、醋酸扭体法、热板法等 4 种经典抗炎镇痛药
效研究实验,探讨羊耳菊根醇提物的抗炎镇痛作用。
实验结果表明,羊耳菊根醇提物能明显抑制二甲苯
诱发的小鼠耳肿胀及醋酸所致小鼠毛细血管通透性
亢进,具有一定的抗炎作用,其作用机制可能与其改
善局部血液循环,减少渗出,加速吸收有关。同时羊
耳菊根醇提物能非常明显的抑制热板法和扭体法所
致的小鼠疼痛反应,具有一定的镇痛作用。热板法
致痛是通过热刺激足部的感觉神经末梢止痛,类似
急性锐痛,扭体法是通过化学刺激致痛,类似于炎性
痛疼。推测羊耳菊醇提物镇痛作用可能与其抑制末
梢神经对疼痛刺激的敏感性及炎症有关。
目前,根据已有文献报道羊耳菊主要含有倍半萜、三
萜、甾醇、黄酮、芳香化合物等化学成分,而三萜和
甾醇居多[10],其抗炎镇痛作用的物质基础及作用原
理还不清楚,是否与其所含的三萜和甾醇等成分相
关有待进一步研究。
[参考文献]
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[责任编辑 李玉洁]
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第 18 卷第 21 期
2012 年 11 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 18,No. 21
Nov.,2012