全 文 ：第 6 卷 第 2期 沈 川 药 学 院 学 报 v l o .6N o .2p .8 5
18 9 9
.
4 总 3。期J O UN R AL OFH S EN Y AN G C OL L E C E OF PH AR M A C Y A「r .1 98 9 S dm 3 5
大丁草中抗菌活性成分的研究 (l )
— 大丁试在大白鼠体内、 外的代谢研究
谷黎红 李 铣 朱廷孺
天然药物研究 室
提 婆 本文报道了大丁贰在大以体内、 外的代谢研究 。 通过对大鼠 、`了液和肠内 容物的端 养 ,
证明大丁贰在大鼠的消化道内发生了转化 , 并鉴定了主要代谢物的结构 。 发现 卜羚基香豆精在 休
内的一种新代谢途径 。 对灌胃给药的大鼠尿及粪便的研究也证明了代谢物的存在。 山子代谢 产物
在体外呈抑菌活性 , 从而证明大丁贰在动物体内经过代谢 , 转化成代训产物而发挥抑菌 活性 。 该
研究为今后更好地应用大丁草提供了理论依据 。
关扭词 大丁草 , 大丁贰 , 代谢
大丁草为菊科大丁草属植物 , 我国民间用作清热利湿 、 解毒消肿 、 止咳 、 止血药 。 有人
用其治疗烧伤 、 痢疾 〔 ` , “ 〕 。 我 们在对大丁草的浸膏迸行抑菌实验时 , 发现 效 果较好 。 药理
实验 〔 “ ’ 表明 , 大丁草浸膏和从中提取的单体大丁 试 〔 ` 」经 口 )}及对绿脓杆菌感染的动物有一定
的保护作用 。 然而大丁贰体外未呈抑菌作用 , 这可能色是大丁贰口 服后经体 ’内转化 , 起到抗菌
作用 , 为此我们对大丁贰的体内 、 外代谢进行 了研究 。
材 料 和 仪 器
材料 大丁草采自沈阳北陵和东陵 。
动物 实验动物为体重 150 ~ 2 5 0 9雄性大 白鼠 。 灌 胃前禁食 1 2小时 , 自由饮水 。 体外实
验采取皮下注射乌拉坦 ( 2 9 / k g ) 麻醉 , 打开腹腔取出胃及肠道内容物供实验用 。
药品 、 试剂及仪器 大丁试 ( v ) 、 大丁试元 ( 且 ) 、 大丁双香豆精 ( 工 ) 均自制 。 其
熔点及光谱数据与文献一致 , 纯度大于 ” % 。 大丁试用 1 %梭甲基纤维素钠溶液配成祝悬液
灌 胃。
薄层层析用硅胶系青岛海洋化工厂产品 , 以 0 . 25 %狡甲墓纤 维素钠作粘合剂 。 展开剂系
统如下 , A : C H C I: , B : e H e l 3一 E t o A c ( 2 : 0 . 2 5 ) ; e : e I J e l。 一 M e o l l ( 2 : 0 . 2 5 ) 。 显色剂 :
1
。 碘蒸气 , 2 . 50 % H : 5 0 ; 乙醇 i容液在紫外灯下观察 。 高效液相层析用 日立 6 35 型液相色谱
仪 。 以 N u cl e os il N ( c H 3 ) : 作填充材料 , 乙脂 一 甲醇作 流动相 , 紫外检测 。
厌氧培养液 〔 “ , “ ’ : K : H P O ` · 3 H Z o 9 . 2 7 9 ; K H Z P o ` 2 9 ; 入r g S O ` 一 7 H : 0 0 . 2 0 5 9 ,构摊酸
钠 . 2 H : 0 0 . 5 3 2 6 9 , 葡萄糖 · H : 0 2 . 2 9 ; 硫酸钱 1 9 ,加蒸馏水至 1 0 0 0m l 。
l o s a 。 一 。 : s 收摘
DOI : 10. 14066 /j . cnki . cn21 -1349 /r . 1989. 02. 002
沈 阳 药 学 院 学 报 198 9年
方 法 和 结 果
1大丁贰与大鼠胃内吝物的体外培羊
大鼠二只麻醉后打开腹腔 , 在胃幽门处结扎 。 然后将胃重新放入腹腔
胃喷门处结扎。 取出胃液留一部分作空 白 , 其余加入大丁试 , 在 37 ℃温孵
薄层层析检查 , 只存在大丁贰 。
, 一小时后取出在
, 不同时间取样 ,
2 大丁试与大鼠肠内容物的体外培养
大鼠一只麻醉后 , 在胃幽门处和肠近肛门处结扎 , 取出肠段 , 用培养液洗出肠道内容物
并稀释到 Zo m l 。 在六支试管中各加入 3 m l稀释液 , 五支中加入大丁俄 3m g , 厌氧培养 (见表
1 ) 在二小时产生 亚 , 四小时左右含量最多。 四小时开始产生 工。
T a b 1 T h e m e t a bo l i e r e s ul t s o f V b y b a tC e r i a i n i n t e s巨n e o f r a t
氛58ùT u b e n u m b e rI n e u b a it o n it m e ( h . ) C o n tr o 1 28 0 。 5
+
十+
+ +
一了下蒜石屯几俪蕊奋 -一一一叫一一一3 大鼠体内代谢实验大鼠空白粪便及尿液的收集和处理 .取三只大鼠置于代谢笼中 , 收集 12 小时尿液 18 ml , 过滤后加蒸馏水至 s oml 。 取 1 5 ml 稀释液加盐酸调 p H I , 用乙酸乙醋萃取三次 , 减压回收溶媒得残渣用甲醇溶解。 另取 1 s m l 尿加浓盐酸3m l ,置沸水浴中加热 30 分钟 , 同样萃取后得到的残渣肘甲醇溶解备用 。取大鼠粪 g5 , 加入适量甲醇提取三次 , 回收醇后的溶液分成二份 。 一份先用盐酸水解 ,然后二份同尿一样用乙酸乙醋萃取 , 残渣用甲醇溶解 。给药后大鼠粪 、 尿的收集及处理 :三只大鼠每只按 10 9 s/ 灌胃给大丁俄 , 然后放入代谢笼中收集尿液 及粪便 。 尿液收集器中加入少量盐酸防腐 。 每 24 小时收集一份 , 共七天。 得到的尿液过滤后稀释 至 1 0 0 1。 分取3 Om l二份 , 各按空白尿一样处理。 甲醇液冰箱放置待测定。每份粪便各取 g5 , 操作同空白粪便 , 甲醇溶液留待测定 。体内实验结果 : 应用高效液相 , 与标准品的保留时间对照定性 , 峰高和峰面积定量 。 在O一24 小时尿中检查出 I 、 兀和 v , 其中 v 的 含量较少 。 工和 兀为主要代谢产物 。 (见图 1和 2 ) 。 在 O一 48 小时粪便中检查出 工和 V , 其 中 v 的含量较少 。
讨 论
l 大丁试在大鼠体内外代谢表明 , 该化合物主要在肠道中代谢 , 主要代谢产物为大丁试元
亚 和大丁双香豆精 工 , 结构及代谢途径如下 (见下页 ) :
据文献报道 ` ’ “ , 在人和动物的肠道中存在一些细菌丛 , 它们可以产生 价试键裂解酶 ,
使贰类化合物水解生成试元 。 大丁贰即是发生这类反应产生 n 。 由于在体外 : 可以与甲醛进
2期 谷黎红等 大丁草中抗菌活性成分的研究 ( I )87
自令尹 ~叹岁 全一界c 飞 -og luC H3 0 }JC H3 O H气/ 。 、 , / 浪、声丫o H CH 3
行缩合产生 工 , 因此 ,不能排除 且与体内微量甲醛作用产生 1 。 但 工的生成也有可能涉及到酶
的参与 。
2 大丁贰经口服在大鼠体内的代谢研究表明 , 大丁贰的主要代谢产 物既可 以通过尿也可 以
通过粪便排泄 , 而在粪中主要是 工的排泄 。 同时由于给药量较大 , 还有一部分以原型药物从
尿及粪中排出。
l
曰川日.日川尸n州卜日r从代谢的时间看
, 这类化合物代谢较快 。
尿中代谢物在 ` O一 2 4小时全部排 出 。 粪中代谢
物在 0一 48 小时全部排 出 。 经酸水解处理的粪
便 I 的含量更高}一些 , 说明 I 可能以某种结合
形式存在 , 且易为酸水解 。 从排泄代谢物的量
来看以尿为主要代谢途径 。
3 在对尿的代谢物进行 T L C 检查时 , 发现
在 原 点 附 近仍有遇硫酸呈 兰色荧光的物质 。
为了对其结构进行研究 , 我们把样品先经 乙酸
乙醋萃取 , 剩余水溶液再用 浓盐酸水解 , 结朱
检出 l 。 同时在 r L C上还发现二个 R f值较 1 大
的兰色斑点 , 其结构待测定 。 这说明涂巳鉴定
的代谢物结构外 , 可能还存在极性较大的其它
结构代谢物 。 它们对酸较敏感 。 且生浅极性大
的物质 , 有利于排 泄 。
4 一般香豆精类在肠道中的代谢 主 要 是 发
生 3 , 4 双键的还原和醋键的水解 , 生成 C 。一
C 3型酚酸化合物 。 4 一轻基香豆精 的 代 谢则不
同 . 主要以未开环形式存在 , 并且可 以两分子
缩合生成双香豆精 。 这在香豆精 的代谢 中实属 iF g
一新发现。
H P L C o f o 、 2 4h , l了19 2 H P L C o f o~ 2一h ,
u
ir
n e h y d r o l y z e d f a e e e s
5 体外抑菌实验 中 , 且和 工均星较强 的抑菌活性 , 其 最 小 抑 菌 浓 度 分 别 为 。 . 25 和
0
.
1 25 m g /ml
。 而大丁试却不呈 抑 菌活性 。 通过体内外代谢研究 , 我们发现大丁试在大鼠体
内主要代谢为 工和 兀 , 这说明大丁试丫!咐: 内发挥抗菌作用是由于产生了 工和 n 的缘故 。 从而
证明大丁草作为一种抗菌 中草药 , 只有经 口服 , 刁`能更好发挥疗效 。
本实验对大丁草的代谢研究揭示丁人及动物体 内肠道细菌丛参与了大丁试的代谢转化 ,
使其生成具有抗菌 活性的 工和 1 , 在体 内发挥疗效 。 由于许多中草药有效成分为试或结构
沈 阳 药 学 院 学 报 1 8 9 9年
杂化合物 , 它们很有可能在体内受酶的作用发生转化 。 因此对其代谢物的研究及活性考查 ,
可以更好地了解中草药作用原理 , 为药物结构改造及更好地 口用中草药提供了理论依据 。
致钳 本院于庆海 、 郭月英老师协助药理实脸 , 陈英杰老师对木实验给子大量帮助 , 中科院林土所杨
志勇老师帮助测定高压液相数据 。
参 考 文 献
江苏新 医学院 . 《 中护大词典 》 上册 . 上海 : 上海人 民出版社 , 1 9了了: 1 17 ( 。 19 3 )
全国中草药汇编编写组 . 《 全国中草药汇编 》 上册 . 北 京 : 人民 卫生出版社 , 19 8 5 : 48 ( 5 2 )
冯玉书等 。 沈 阳药学院学报 , 19 81 , 12 : 39
谷 攀红等 。 药学学报 , 一。 5 7 , 2 2 ( ` ) : 2? 2
H a忱Br 1 M , e t a l . C h e口 Ph ar m B u u , 10 5 5 , 3 e ( 。 ) : 35 3 3
Y” h i a k a l , et a l . C il e m P h a r m B u l , 10 7 2 , 2 0 ( 1 1) : 2` 5 0
2恤曰4.舀月O
ST U DIE S O N A N T旧 AC T E RIAL C ON S T IT U EN T S F R OM G E R B E R A AN A NOR IA
( L
.
) SC H B IP ( l )— T H E M E T A B O L IS M IN V IT RO A N D IN V IV O O FG E RB E RIN S ID E ! N R A S
G u L ih o n g L i X i a n Z h u T i n g r u
R e s e a r e几 D e 刀a l嗜 m 。 ; : 公 o f N a 亡u r a 乙 D r u g s , Sh e n夕a n g C o l不e g o o f 尸九a r m a e o , S h e n夕a ,: g
T h e s t u d i e s r e P o r t e d h e r e w e r e a b o u t t h e m e t a b o l i sm o f G e r b e r i n s i d e (V ) i n r a t` i n
v i t r o a n d i n v i v o
.
T h e V W a s c h a n g e d i n a l im e n ta r y c a n a l o f r a t s w h e n c u l t u r e d W i t h
g a s t r o i n t e s t i n a l m i e r o o r g a n i s m s
.
T h e m a i n m e t a b o l i t e s b a d a n t i b a e t e r i a l a e t i v i t i e s a n d t h e
s t r u e t u r e s w e r o i d e n t i f i e d
.
A n e w m e t a bo l i e w a y w a s d i s e o v e r e d
.
K e y w o r d s G e r b e r a a n a n d r i a ( L
.
) S e h B i p , G e r be r i n s i d e , M e t a b o l i s m