全 文 ：中国人兽共患病学报
Chinese Journal of Zoonoses
　
2011 , 27 (3)
文章编号:1002-2694(2011)03-0222-03
苣荬菜乙醇提取液抗贝氏柯克斯体的初步研究＊
温博栋1 ,邱建波2 ,王锡乐3 ,熊小路3 ,温博海3
摘　要:目的　初步探讨苣荬菜(北败酱)乙醇提取物的抗 Q 热病原菌-贝氏柯克斯体药效。方法　用乙醇提取苣荬菜 ,
1g 干生药获得 1m L提取液;用贝氏柯克斯体腹腔感染 Balb/ c小鼠(105菌体/只)感染后第 2d用倍比(5-160 倍)稀释苣荬菜
乙醇提取液腹腔给药 ,每天 1 次 、连续给药 5d;第 7d 处死小鼠并取小鼠脾脏组织提取 DNA , 用种特异性荧光定量 PCR检测
DNA。结果　10、20 、40 、80 倍稀释药物组小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量约 2 ～ 5倍少于非药物处理对照组 ,其中 20 倍稀释药物
组的小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量显著(5 倍)少于对照组。结论　我们的研究首次证明苣荬菜乙醇提取物对贝氏柯克斯体体
内生长有明显的抑制作用 ,提示它具有潜在的抗贝氏柯克斯体药效。
关键词:苣荬菜(北败酱);贝氏柯克斯体;药效;抗菌
　　中图分类号:R376　文献标识码:A　　
Primary investigation of the ethanol solution extracted
from Sonchus arvensis L against Coxiella burnetii
WEN Bo-dong ,QIU Jian-bo ,WANG Xi-le ,XIONG Xiao-lu ,WEN Bo-hai
(Guangdong Food and D rug Vocational College , Guangz hou 510520 , China)
ABSTRACT:Sonchus arvensis L is one of the herbal medicines tha t w ere used to treat ce rtain infectious disease s in Chinese
medicine.I n this study , the ethano l so lution ex tracted f rom Sonchus arvensis L(1 m L solution ext racted from 1 g ram of dried
he rb)w as applied to treated mice infected w ith C.burnetii , a pathogen of Q fever.From day 2 to 6 after the int rape ritoneal in-
oculation of C.burnetii(105 o rg anisms/ per mouse), the 5-, 10-, 20-, 40-, and 80-fold diluted so lutions were intrape ritoneally
inoculated into mice(0.5 mL/ per mouse)once per day , respectiv ely.The mice we re sacrificed and their spleen tissues we re
co llected fo r preparing DNA.The burdens o f C.burnetii in the mouse spleens w ere de tected by quantitativ e polymerase chain
reaction.The results exhibited that the cox iella burdens of mice treated w ith 10-, 20-, 40-, or 80-fo ld diluted so lutions were 2-
to 5-fold lowe r than tha t o f untr eated mice , and that of mice trea ted w ith 20-fo ld diluted so lutions w ere significantly (5-fold)
low er than that o f untreated mice.Our results firstly confirm that the ethano l ex tracts of S .arvensis L has the capability to in-
hibit the g rowth of C.burnetii in bodies and sugge st that it po ssesses a po tentia l drugs effect ag ainst C.burnetii , an oblig ate
intracellular bacterium.
　　KEY WORDS:Sonchus arvensis L;Cox ie lla burnetii;drugs effect;anti-bacte ria
＊广东省中医药局科研基金项目(2008199)
通讯作者:温博栋 , Em ail:w bd-yx888@163.com
作者单位:1.广东食品药品职业学院 ,广州　510520;
2.广东省食品药品职业技术学校 ,广州　510663;
3.军事医学科学院微生物流行病研究所 ,北京　100071
　　贝氏柯克斯体(Cox iel la burnet ii ,俗称 Q 热立
克次体)是一种专性原核细胞内寄生的革兰阴性小
杆菌 。贝氏柯克斯体为 Q 热(Query (Q)fever)病
原 ,是一种重要的人兽共患病原体[ 1-2] 。贝氏柯克斯
体对家畜和人有高度感染性 ,羊 、牛是其最主要的易
感动物 ,人的感染源主要来自感染家畜[ 1-2] 。Q 热呈
全球性分布 ,遍及五大洲 80多个国家 , Q 热在我国
的分布也十分广泛 ,已在 20多个省市自治区报告过
Q 热的存在 ,并在四川 、重庆 、云南等地有过 Q 热的
暴发流行[ 3] 。据新华社报道 , 2009 年底以来荷兰暴
发的“羊流感”即为 Q 热 ,已致数千人发病 , 10人因
此病死亡。荷兰 Q 热暴发的感染源主要来自农场
的羊 ,已有 75个农场的 4.5万头生畜疑被贝氏柯克
斯体感染而被紧急屠宰处理 。“Q 热”分为急性和
慢性两种类型 ,急性“Q 热”主要有发热 、头痛 、肌肉
酸疼等类似流感临床表现 ,常伴有支气管肺炎 、肝
炎[ 1-2] 。由于急性“Q 热”未治愈或治疗不彻底 ,急性
Q 热可转变为慢性 Q热 ,其表现为长期持续或反复
发热 ,合并心内膜炎 、慢性肝炎 、骨髓炎等[ 1-2] 。四环
素类广谱抗生素为治疗 Q热的有效药物 ,但是由于
222
3期 温博栋等:苣荬菜乙醇提取液抗贝氏柯克斯体的初步研究
该类抗生素的长期广泛使用 ,引起贝氏柯克斯体对
其耐药[ 4] 。因此 ,寻找新的药物 、特别是中草药用于
Q热的治疗与预防十分必要 。
　　苣荬菜 (Sonchus arvensis L .)又名北败酱 ,为
菊科苦苣菜属多年生草本植物 。在民间常作野菜食
用 ,华北作败酱入药 ,而东北作小蓟入药 ,近年也用
于肝炎的治疗。苣荬菜的化学成分主要有黄酮类 、
挥发油 、香豆素类等 ,其具有清热解毒 、消肿排脓 、化
瘀 、保肝 、抑菌 、清除羟自由基 、抗烟毒等作用 ,已用
于阑尾炎 、肠炎 、痢疾 、疮疔痈肿 、痔疮 、产后瘀血腹
痛 、肝炎 、乳糜尿 、小儿急性咽炎肺胃实热证等病的
治疗[ 5-6] 。本研究采用贝氏柯克斯体感染 Balb/c 小
鼠做动物模型 ,用苣荬菜乙醇提取液腹腔给药贝氏
柯克斯体感染小鼠 ,用特异性荧光定量 PCR检测感
染小鼠脾脏的柯克斯体载量来评价苣荬菜提取物的
抗贝氏柯克斯体效果 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　苣荬菜提取物　苣荬菜乙醇提取物由广东
省食品药品职业技术学校制备:取 100g 药材粉末 ,
加 6倍量 95%乙醇 ,浸泡 2 h后 ,加热回流提取 0.5
h ,滤过 ,再加 4倍量 95%乙醇加热回流提取 0.5 h ,
滤过 ,合并滤液 ,减压蒸干 ,残渣用 0.5%羧甲基纤
维素纳溶液分散并定容为 100 mL。浓度为 1 g ·
mL -1 ,即每 1 mL 相当于 1 g 生药 ,以下浓度都以生
药计 。
1.1.2　贝氏柯克斯体毒株　贝氏柯克斯体新桥株
为我国蜱体内分得 I 相毒株 ,由军事医学科学院微
生物流行病研究所保存并制备菌液 。
1.1.3　Balb/c小鼠 　8w 龄 BA LB/c 雄性小鼠购
自军事医学科学院实验动物中心。每个实验组均为
5只小鼠 。
1.1.4　主要试剂　组织 DNA 提取试剂盒为德国
QIAGEN 公司产品;TaqM an Universal PCR M as-
ter Mix 由美国 ABI公司生产;TaqMan MGB-探针
由上海基康公司合成 。
1.2　方法
1.2.1　贝氏柯克斯体感染小鼠　用贝氏柯克斯体
新桥株感染鸡胚卵黄囊膜匀浆 ,以检测贝氏柯克斯
体荧光定量 PCR进行定量测定[ 7] ,经小鼠腹腔注射
的贝氏柯克斯体剂量为 105个/只 。感染后第 7d 解
剖小鼠 ,取小鼠脾脏组织提取 DNA做定量 PCR。
1.2.2　苣荬菜提取物注射小鼠　用生理盐水将苣
荬菜乙醇提取物稀释至不同浓度。于贝氏柯克斯体
感染的第 2d ,分别用不同浓度的苣荬菜提取物对小
鼠腹腔注射 ,每天每只小鼠用量为 0.5mL ,连续给
药 5d。
1.2.3　荧光定量 PCR定量检测贝氏柯克斯体　每
只小鼠取 10mg 脾脏于 1.5mL 离心管内 ,以组织
DNA 提取试剂盒提取小鼠脾脏总 DNA 。采用实时
荧光定量 PCR方法检测小鼠脾脏贝氏柯克斯体含
量[ 7] 。荧光定量 PCR采用 25μL 反应体系 ,每个反
应中含 12.5μL 的 TaqM an Universal PCR M aster
M ix ,5μL 引物和探针混合物[ 100μL 体系中上下游
引物各 3μL(50μmo l/L), 探针 2μL(50μmol/L),
92μL 去离子水] ,5.5μL 去离子水 ,2μL DNA 模板。
在荧光定量 PCR 仪(Applied Biosy stems 7300)内
扩增 ,条件为 50℃ 2min 和 95℃ 10min 后以 95℃
15 s和 60℃1min ,循环 45次。
1.2.4　统计学分析　本实验为单因素多水平实验
设计 ,全部采用 One-way ANOVA方法进行统计学
分析。
2　结　果
2.1　苣荬菜乙醇提取物作用效果　首先用原液 、10
倍 、100 倍稀释药物分别对小鼠做连续 5d 腹腔给
药 ,感染后第 7d取小鼠脾脏检测贝氏柯克斯体载
量 。结果显示 10倍稀释药物组的小鼠贝氏柯克斯
体载量比对照组减少约 2 倍 , 100 倍稀释药物组比
对照组减少约 1倍 ,而原液组脾脏贝氏柯克斯体载
量与对照组相近。
图 1　10 倍连续稀释苣荬菜乙醇提取液腹腔给药后小鼠的
脾脏贝氏柯克斯体载量
Fig.1　Coxiella burdens of mice infected with C.burnetii af-
ter treatment with original , 10-fold, or 100-fold dilu-
ted ethanol extract of Sonchus arvensis L
2.2　倍比稀释苣荬菜乙醇提取物作用效果　用生
理盐水对苣荬菜乙醇提取物做倍比稀释。于感染第
2天 ,每个稀释度取 0.5 mL 分别对小鼠做连续 5d
腹腔注射 ,感染第 7d取小鼠脾脏检测贝氏柯克斯体
载量。结果显示 10 、20 、40 、80倍稀释药物组小鼠脾
脏贝氏柯克斯体载量约 2 ～ 5倍少于非药物处理对
照组 ,其中 20倍稀释药物组的小鼠脾脏贝氏柯克斯
体载量 5倍少于对照组 ,有显著差异(P<0.05)。
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中 国 人 兽 共 患 病 学 报 2011 ,27(3)
表 1　倍比稀释苣荬菜乙醇提取液腹腔给药后小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量
Tab.1　Coxiella burdens of mice infected with C.burnetii af ter treatment with two-fold serial dilutions of ethanol extract of Son-
chus arvensis L
小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量
Coxiella burdens o f mouse spleens
稀释倍数
Diluted fo lds
cont rol 80× 40× 20× 10× 5×
平均值
Average
1.265×108 4.141×107 5.275×107 2.556×107 5.319×107 1.116e×108
标准差
Standard deviation
7.862×107 2.803×107 5.502×107 1.460×107 5.010×107 6.041×107
图 2　倍比稀释苣荬菜乙醇提取液腹腔给药后小鼠的脾脏
贝氏柯克斯体载量
Fig.2　Coxiella burdens of mice infected with C.burnetii af-
ter treatment with two-fold serial dilutions of ethanol
extract of Sonchus arvensis L
3　讨　论
　　本研究首先采用苣荬菜乙醇提取物原液和 10
倍稀释液腹腔给药 ,实验组小鼠生活状况良好 ,无明
显异常 ,提示苣荬菜乙醇提取物对小鼠无明显毒性
作用 。实时荧光定量 PCR检测结果显示 10倍稀释
药物作用的小鼠贝氏柯克斯体载量比对照组减少约
2倍 ,提示该浓度的苣荬菜乙醇提取液有一定的抗
贝氏柯克斯体作用。对苣荬菜乙醇提取液做连续倍
比稀释 ,用稀释后不同浓度药物对贝氏柯克斯体感
染小鼠腹腔给药 ,结果 10 、20 、40 、80倍稀释药物组
小鼠脾脏贝氏柯克斯体载量约 2 ～ 5倍少于非药物
处理对照组 ,其中 20倍稀释药物组的小鼠脾脏贝氏
柯克斯体载量 5倍少于对照组 ,有显著差异。
　　与一般细菌不同 ,贝氏柯克斯体为专性吞噬细
胞内寄生菌 ,能够在巨噬细胞的吞噬溶酶体的酸性
环境中生长繁殖。脾脏含有大量的巨噬细胞 ,因此
脾脏为贝氏柯克斯体最主要的器官[ 8] 。本研究证明
一定浓度的苣荬菜乙醇提取物对脾脏贝氏柯克斯体
生长有明显的抑制作用 ,说明苣荬菜乙醇提取物具
有抗专性胞内寄生菌贝氏柯克斯体作用 。
　　已有研究报告苣荬菜对金黄色葡萄球菌 、白色
葡萄球菌 、大肠杆菌 、绿脓杆菌 、变形杆菌 、志贺氏痢
疾杆菌 、福氏痢疾杆菌 、宋内氏痢疾杆菌有抑菌作
用[ 9] 。苣荬菜乙醇提取物对金黄色葡萄球菌 、铜绿
假单胞菌 、大肠埃希氏菌 、枯草芽孢杆菌 、肺炎克雷
伯杆菌等有一定的抑制作用[ 10] 。本研究首次报告
苣荬菜乙醇提取物具有抗专性胞内寄生菌贝氏柯克
斯体作用 ,该结果为中草药治疗或预防 Q 热(羊流
感)提供一种新的思路 。本研究给药的途径为腹腔
给药 ,其它给药方式 ,如口服给药的效果如何值得进
一步研究。另外 ,苣荬菜乙醇提取物抗专性胞内寄
生菌的作用机制也值得研究 。
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收稿日期:2010-05-07;修回日期:2010-10-20
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