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植物生长调节剂对辣木(Moringa oleifera Lam.)组培快繁的影响



全 文 :分子植物育种,2016年,第 14卷,第 11期,第 3154-3158页
Molecular Plant Breeding, 2016, Vol.14, No.11, 3154-3158
研究报告
Research Report
植物生长调节剂对辣木(Moringa oleifera Lam.)组培快繁的影响
高敏霞 叶新福 * 王小安 韦晓霞 方智振
福建省农业科学院果树研究所,福州, 350013
*通讯作者, yexinfu@126.com
摘 要 辣木富含维生素、蛋白质和各种微量元素,具很好的保健作用。本试验以辣木种子为外植体,研究
植物生长调节剂对辣木不定芽诱导、增殖以及生根的影响。结果表明:适合辣木不定芽诱导的培养基为MS+
1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;适合辣木不定芽增殖的培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;辣木不
定芽生根的培养基以 1/2 MS+0.3 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA+1 g/L活性炭为佳,根的生长都优于其他培养基。
在生根培养基中,NAA和 IBA两种植物生长调节剂配合使用优于 NAA、IBA单独使用。本研究为辣木组织
培养技术的发展提供了研究参考。
关键词 辣木,生长调节剂,组培,快繁
Effects of Plant Growth Regulator on Tissue Culture and Rapid Propagation
of Moringa (Moringa oleifera Lam.)
Gao Minxia Ye Xinfu * Wang Xiaoan Wei Xiaoxia Fang Zhizhen
Institute of Fruit Sciences, Fujian Academy of Agricultural Sciences, Fuzhou, 350013
* Corresponding author, yexinfu@126.com
DOI: 10.13271/j.mpb.014.003154
Abstract Moringa is rich in vitamin, protein and microelements and have great health benefits. In this research,
using the seeds of the moringa as explants, the effects of plant growth regulator on adventitious bud induction,
proliferation and rhizogenesis were studied. The results showed that the optimum condition for adventitious buds
induction was MS supplemented with 1.0 mg/L 6-BA and 0.2 mg/L NAA; MS supplemented with 0.5 mg/L 6-BA
and 0.2 mg/L NAA was ideal for adventitious buds proliferation; 1/2 MS supplemented with 0.3 mg/L IBA, 0.2 m/L
NAA and 1.0 g/L AC was the optimum medium for root induction and growth in adventitious buds. Roots are
growing better than other media. Adding in the rooting medium, NAA and IBA was better than NAA or IBA,
respectively. This research would lay a foundation for tissue culture study on Moringa oleifera Lam.
Keywords Moringa oleifera Lam., Hormones, Tissue culture, Rapid propagation
基金项目:本研究由农业部热作技术试验示范项目(15162130106232013-4)、福建省省属公益类科研专项(2014R1014-14)、福建
省现代农业技术支撑工程(辣木高效栽培和加工技术研究与示范)和福建省农业科学院院导师制青年基金与青年人才创新基金
项目(2014QB-30)共同资助
辣木,为辣木科辣木属植物,属速生落叶乔木树
种。它的全株均可食用(刘永红和李会珍, 2004),辣木
的鲜叶、嫩枝条、嫩豆荚等可作为蔬菜食用(林宗铿
等, 2015;董小英和唐胜球, 2008);辣木种子和辣木
根可碾成粉末作为辣味调味料;辣木籽油可作为食
用油(刘凤霞等, 2015)。辣木全株富含 VA、VB、VC、
VD、Ca、K、Fe和多种微量元素(刘永红等, 2004; 刘
昌芬和李国华, 2004; 闻向东等, 2006),现已开发出
辣木胶囊、辣木粉等营养补充剂。辣木还具有退热、
消炎、降压、止痛,治疗糖尿病、高血压、忧郁症等医
疗保健功能(刘昌芬等, 2004; 刘永红等, 2004; 彭磊
等, 2015)。除此以外,辣木的种子中还含有天然凝聚
活性物质,可用来净化水质(段琼芬等, 2008)。辣木集
食用、营养和保健为一身,被誉为“神奇之树”(刘昌芬
等, 2004;段琼芬等, 2008)。它原产于北印度的喜马
拉雅山地区,现在其种植范围已发展到亚洲、非洲、
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
表 1不同消毒方法对种子消毒效果的影响
Table 1 Effects of different disinfection methods for seed disinfection
处理
Treatment
Runningwater 2 h+75% alcohol 30 s+0.1%HgCl2 15min
20%NaClO 5min+75% alcohol 30 s+0.1%HgCl2 10min
Shell removed+75% alcohol 30 s+0.1%HgCl2 10min
种子数(粒)
Seeds (Pellet)
180
180
180
污染数(粒)
Pollution (Pellet)
78
24
51
发芽数(粒)
Shoots (pellet)
48
60
91
污染率(%)
Pollution rate
(%)
43.3
13.3
28.3
发芽率(%)
Shooting rate
(%)
26.7
33.3
51.7
表 2不同浓度的 6-BA对不定芽诱导的影响
Table 2 Effects of the different concentrations of 6-BA on the adventitious bud induction
培养基
Medium
MS+0.3mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
MS+0.7 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
接种数
Inoculation
60
60
60
60
诱导芽数
Inducting buds
192
258
300
336
诱导系数
Induction
3.2
4.3
5.0
5.6
美洲的 30多个国家和地区(刘昌芬等, 2004;张燕平
等, 2004)。辣木喜温耐旱,在中国主要种植在云南、
福建、广东、广西等地(林宗铿等, 2015)。随着辣木逐
渐被大众所熟知,其种植规模不断扩大,对辣木种苗
的需求也在不断增加。传统的育苗技术已不能满足
市场的需求,利用现代组培技术,可以快速得到大
量健壮的种苗,以满足市场需求。
本研究探讨了辣木种子的前处理及消毒方式对
种子消毒效果的影响和植物生长调节剂对不定芽诱
导、继代增殖和不定芽生根的影响,以期为发展辣木
组织培养及其快速繁殖技术提供科学依据。
1结果与分析
1.1不同消毒方法对种子消毒效果的影响
三种消毒方法对辣木种子均能达到一定的消毒
效果。其中流水冲洗 2 h+75%酒精消毒 30 s+0.1%升
汞消毒 15 min、20%次氯酸钠消毒 5 min+75%酒精消
毒 30 s+0.1%升汞消毒 10 min,这两种方法种子污染
率较低,但死亡率较高,分别为 55%、70%。而 75%酒
精消毒 30 s+0.1%升汞消毒 10 min这种方法死亡率
较低,发芽率达到 51.7%。说明辣木种子以 75%酒精
消毒 30 s+0.1%升汞消毒 10 min较适宜(表 1)。
1.2生长调节剂对辣木种子不定芽诱导的影响
将萌发的种子切成 2 段接种于不同浓度的
6-BA培养基中,带有顶尖的茎段 7 d后基部膨大,
有少量愈伤组织产生,15 d后基部产生一团愈伤组
织且致密,顶尖茎段直立生长且诱导出腋芽;带种子
的茎段 5 d后基部膨大,产生少量愈伤组织,10 d后
长出大量不定芽。
6-BA对不定芽的诱导具有明显的促进作用,且
随着 6-BA浓度的不断增加,诱导出的不定芽数逐
渐增多,当 6-BA浓度为 1.0 mg/L 时诱导系数为
5.6,这表明:不定芽诱导以培养基中添加 1.0 mg/L
6-BA+0.2 mg/L NAA为好(表 2)。
1.3 6-BA和 NAA浓度对继代增殖培养的影响
将辣木诱导产生的单芽或不定芽经切割后,接
种于含有不同浓度的 6-BA和 NAA的培养基中,7 d
后带顶芽的茎段伸长,中间段有腋芽萌出。15 d后带
顶芽的茎段继续伸长,并有中间节;中间段萌出的腋
芽伸长、生长。当 NAA浓度一定时,随着 6-BA浓度
的增加,不定芽的增殖倍数出现峰值变化,当 6-BA
的浓度为 0.5 mg/L 时,其增殖倍数达到最大;当
6-BA浓度一定时,较高浓度的 NAA对辣木不定芽
的增殖影响较大(表 3)。
1.4生根培养
将增殖培养15 d后的无菌苗切成 2~2.5 cm的茎
段,接种于不同生根培养基中。10 d后观察到未添加
活性炭(activated carbon, AC)的无菌苗基部产生致密
的愈伤组织,并有 3~4条粗壮的根长出;添加活性炭
的无菌苗基部未长出愈伤组织,部分基部长出 2~3条
较粗壮的不定根。20 d后统计,未添加活性炭的无菌
苗其生根率、平均生根数/株均高于添加活性炭的,但
3155
表 3不同生长调节剂浓度对不定芽增殖的影响
Table 3 Effects of the different hormones concentrations on the adventitious bud multiplication
培养基
Medium
MS+0.3mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA
MS+0.5 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA
MS+0.7 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA
MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA
MS+0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
MS+0.7 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA
接种芽数
Inoculating buds
71
70
46
74
84
73
98
81
平均茎节长(cm)
Average length of internode (cm)
1.46±0.329 8 a
1.54±0.331 5 ab
1.61±0.233 8 a
1.47±0.254 5 bc
1.35±0.358 2 c
1.02±0.255 7 ab
1.13±0.304 3 d
1.24±0.165 5 a
增殖芽数
Multiplicating buds
96
105
55
89
175
196
224
163
增殖倍数
Multiplication
1.35 c
1.50 c
1.21 c
1.20 c
2.08 b
2.68 a
2.29 a
2.01 b
注:邓肯氏新复极差测验,表中同列数值后标记不同字母表表示差异达 0.05显著水平
Note: Different letters mean significant at 0.05 leve1of Duncans
表 4生长调节剂浓度及活性炭对生根的影响
Table 4 Effects of hormones and active carbon on rooting
培养基
Medium
1/2 MS+0.2 mg/L NAA
1/2 MS+0.2 mg/L NAA+1 g/L AC
1/2 MS+0.2 mg/L IBA+1 g/L AC
1/ MS+0.1 mg/LIBA+0.2 mg/L NAA+1 g/L AC
1/2 MS+0.3 mg/LIBA+0.2 mg/L NAA+1 g/L AC
1/2 MS+0.5 mg/LIBA+0.2 mg/L NAA+1 g/L AC
生根率(%)
Rooting rate (%)
81.7
45.0
63.3
76.7
80.0
73.3
平均生根数(株)
Average No. of roots (plant)
3.40±1.254 0 a
2.30±0.635 5 ab
2.56±0.875 4 ab
2.45±1.235 5 b
2.60±1.366 0 b
2.37±1.225 3 bc
平均根长(cm)
Average length of roots (cm)
0.70±0.323 3 c
3.11±0.256 1 a
1.80±0.287 3 b
2.82±0.345 5 a
3.04±0.254 7 a
2.93±0.231 3 a
注:邓肯氏新复极差测验,表中同列数值后标记不同字母表表示差异达 0.05显著水平
Note: Different letters mean significant at 0.05 leve1of Duncans
平均根长小于添加活性炭的。在生根培养基中,添加
NAA和 IBA两种植物生长调节剂优于 NAA、IBA单
独使用(表 4)。
2讨论
植物激素在植物的生长发育中起着极其显著的
作用(蔡庆生, 2011)。一般认为,植物器官的分化与发
育倾向取决于植物内源激素的平衡,外源激素通过
调节内源激素的平衡而起作用。在植物组织培养中,
通过在培养基中添加适宜的植物生长调节剂,从而
打破外植体内源激素的平衡,使外植体向着合乎理
想的方向分化(谢利娟等, 2005)。试验研究表明:不同
浓度的 6-BA、NAA、IBA及其组合对辣木不定芽的
诱导、增殖和生根有不同的生理作用。6-BA可有效
诱导不定芽的萌发;6-BA和 NAA协同作用,有利于
不定芽的增殖,改善苗的质量;NAA和 IBA都可刺
激不定芽的生根,两者共同使用可有效提高苗的生
根率,改善生根质量。在植物组织培养中,除了植物
生长调节剂影响不定芽诱导、增殖、生根外,还与外
植体类型(韩超和方正, 2005)、培养基添加物(王玮玮
等, 2015)、pH值、培养条件(谢利娟等, 2005)等有关,
这些因素对辣木组培苗的影响有待进一步研究。
3材料与方法
3.1试验材料
辣木种子购自厦门天竺实业发展有限公司,将
辣木种子无菌实生苗作为研究材料,进行组培实验。
3.2培养基
种子萌发培养基:MS+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂,
pH调至 6.0。
诱导培养基:MS +0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L
NAA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂,pH 调至 6.0;MS+
0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼
植物生长调节剂对辣木(Moringa Oleifera Lam.)组培快繁的影响
Effects of Plant Growth Regulator on Tissue Culture and Rapid Propagation of Moringa (Moringa oleifera Lam.)
3156
分子植物育种
Molecular Plant Breeding
脂,pH调至 6.0;MS+0.7 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+
30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂,pH 调至 6.0;MS+1.0 mg/L
6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂,pH
调至 6.0。
增殖培养基:MS+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA+
30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂,pH 调至 6.0;MS+0.5 mg/L
6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂,pH调
至 6.0;MS+0.7 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗
糖+8 g/L 琼脂,pH 调至 6.0;MS+1.0 mg/L 6-BA+
0.1 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂,pH 调至
6.0;MS+0.3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L 蔗
糖+ 8 g/L 琼脂,pH 调至 6.0;MS+0.5 mg/L 6-BA+
0.2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+8 g/L 琼脂,pH 调至
6.0;MS+0.7 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L 蔗
糖+ 8 g/L 琼脂,pH 调至 6.0;MS+1.0 mg/L 6-BA+
0.2 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂,pH调至6.0。
生根培养基:1/2 MS+0.2 mg/L NAA+20 g/L 蔗
糖+7 g/L琼脂,pH调至 6.0;1/2 MS+0.2 mg/L NAA+
20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂+1 g/L活性炭,pH调至 6.0;
1/2 MS+0.2 mg/L IBA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂+1 g/L
活性炭,pH调至 6.0;1/2 MS+0.1 mg/L IBA+0.2 mg/L
NAA+20 g/L蔗糖+7 g/L琼脂+1 g/L活性炭,pH调至
6.0;1/2 MS+0.3 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA+20 g/L蔗
糖+7 g/L琼脂+1 g/L 活性炭,pH 调至 6.0;1/2 MS+
0.5 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA+20 g/L 蔗糖+7 g/L 琼
脂+1 g/L活性炭,pH调至 6.0。
3.3种子消毒
选择饱满的辣木种子,去除外壳,用清水洗净,
采用不同的消毒方法:流水冲洗 2 h+75%酒精 30 s+
0.1%升汞 15 min;20%次氯酸钠 5 min+75%酒精
30 s+0.1%升汞 10 min;75%酒精 30 s+0.1%升汞
10 min进行消毒处理(0.1%升汞消毒时,加入 2滴吐
温),然后无菌水冲洗 5~6次,用无菌滤纸吸干表面
水分,然后接种于 MS培养基上,每瓶接种 3粒种
子,每处理接种 20瓶,每个处理重复 3次。置于培养
室中,从接种的第 3 d开始观察消毒效果,接种 15 d
后观察统计种子的污染、发芽情况。
3.4诱导培养
待消毒种子萌发成无菌实生苗后,在接种台上
将无菌苗切成 2~2.5 cm的顶尖段和带种子的茎段,
接种于诱导培养基上,然后置于(25±2)℃的培养室
中,前 7 d暗培养,然后 12 h/d的光照培养。诱导培养
基选择以 MS 为基本培养基,3%蔗糖,0.8%琼脂,
0.02% NAA,添加不同浓度的 6-BA,进行诱导培养。
接种后每周观察 1次,并记录结果,15 d后统计其
诱导系数。
3.5增殖培养
将诱导产生的单芽或不定芽切成 2~2.5 cm长的
茎段,接种于含不同浓度 6-BA和 NAA的培养基
上,增殖培养以MS为基本培养基,3%蔗糖,0.8%琼
脂。15 d后观察记录苗的生长情况,每个处理统计
15株苗的平均茎节长、增殖倍数,并对统计结果进
行方差分析。
3.6生根培养
将增殖得到的无菌苗,切成 2~2.5 cm带顶尖的
茎段和中间段,接种于添加不同成分的生根培养基
上,生根培养以 1/2 MS为基本培养基。10 d后观察
记录苗的生根情况,20 d 后每个处理统计 15 株苗
的生根率、平均生根数、平均根长,并对统计结果进
行方差分析。
作者贡献
高敏霞是本试验研究的设计和执行人,完成数
据分析和论文初稿的写作;王小安和韦晓霞参与试
验材料的收集和种植;方智振对论文修改提出许多
宝贵建议;叶新福是项目的构思者和负责人,指导实
验设计,数据分析,论文写作与修改。全体作者都阅
读并同意最终的文本。
致谢
本研究由农业部热作技术试验示范项目(15162-
130106232013-4)、福建省省属公益类科研专项(20-
14R1014-14)、福建省现代农业技术支撑工程(辣木
高效栽培和加工技术研究与示范)和福建省农业科
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(2014QB-30)共同资助。
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