全 文 ：收稿日期：２０１３－０３－０７
基金项目：国家自然科学基金（３１０７０３１３，２１２７２１３６）；湖北省自然科学基金（２０１１ＣＤＢ１７７）；三峡大学人才科研启动基金（ＫＪ２０１１Ｂ００３）
通信作者：邓张双（１９７９－），男，副教授，博士，硕士生导师，主要从事天然产物研究与利用工作．Ｅ－ｍａｉｌ：ｄ．ｚｈａｎｇｓｈｕａｎｇ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ
菊三七根中化合物ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和
ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量测定
刘　芳　郭志勇　程　凡　周海峰　邹　坤　邓张双
（三峡大学 化学与生命科学学院 天然产物研究与利用湖北省重点实验室，湖北 宜昌　４４３００２）
摘要：目的：采用 ＨＰＬＣ法测定菊三七根部ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量．方法：建立
ＨＰＬＣ法测定菊三七根部ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量．色谱柱为Ａｃｃｌａｉｍ　Ｃ１８色谱
柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇－０．１％甲酸水（４０∶６０，ｖ·ｖ
－１），流速为１．０ｍＬ·
ｍｉｎ－１，柱温为３０℃，紫外检测波长为２２０ｎｍ．线性范围：Ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ为０．１～０．８ｍｇ·ｍＬ－１
（相关系数ｒ＝０．９９９　７）；ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ为０．１～１．５ｍｇ·ｍＬ－１（相关系数ｒ＝０．９９９　８）．结果：测得
菊三七根部ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量分别为２．９６１　３ｍｇ·ｇ－１、０．９５４　２ｍｇ·ｇ－１；
ＲＳＤ分别为１．３４％、１．２８％；平均回收率为９８．８４％、９９．１６％，ＲＳＤ为１．９４％、１．５１％．结论：该方
法快速、简便、准确度高，可为开发利用菊三七提供研究基础．
关键词：Ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ；　ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；　菊三七；　含量测定；　ＨＰＬＣ
中图分类号：Ｒ２８４：Ｑ５８６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１６７２－９４８Ｘ（２０１３）０２－００９７－０３
Ｃｏｎｔｅｎｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　Ａｃｉｄ　ａｎｄ　Ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ
Ａｃｉｄ　ｉｎ　Ｒｏｏｔｓ　ｏｆ　Ｇｙｎｕｒａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ
Ｌｉｕ　Ｆａｎｇ　Ｇｕｏ　Ｚｈｉｙｏｎｇ　Ｃｈｅｎｇ　Ｆａｎ　Ｚｈｏｕ　Ｈａｉｆｅｎｇ　Ｚｏｕ　Ｋｕｎ　Ｄｅｎｇ　Ｚｈａｎｇｓｈｕａｎｇ
（Ｈｕｂｅｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　＆Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｉｔｒｙ　＆Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，
Ｃｈｉｎａ　Ｔｈｒｅｅ　Ｇｏｒｇｅｓ　Ｕｎｉｖ．，Ｙｉｃｈａｎｇ　４４３００２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｇｙｎｕｒａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ
ＨＰＬＣ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ＨＰＬＣ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｗａｓ　ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｏｎ　ａ　Ａｃｃｌａｉｍ　Ｃ１８
ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ａｔ　３０℃ ｗｉｔｈ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－０．１％ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｔｅｒ
（４０∶６０，ｖ·ｖ－１）ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１ｍＬ·ｍｉｎ－１　ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ＵＶ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｔ　２２０ｎｍ．Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ
ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｗｅｌ　ｌｉｎｅａｒ　ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇ　ｆｒｏｍ　０．１ｔｏ　０．８ｍｇ·ｍＬ－１（ｒ＝０．９９９７）；ｔｈｅ
ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｗｅｌ　ｌｉｎｅａｒ　ｏｖｅｒ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇ　ｆｒｏｍ　０．１ｔｏ　１．５ｍｇ·ｍＬ－１（ｒ＝
０．９９９８）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｒｏｏｔ　ｏｆ　Ｇｙｎｕｒａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ　ａｒｅ　２．９６１３ｍｇ·
ｇ－１、０．９５４２ｍｇ·ｇ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　ａｒｅ　９８．８４％、
９９．１６％ ｗｉｔｈ　ａ　ＲＳＤ　ｏｆ　１．９４％，１．５１％．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｆａｓｔ，ｓｉｍｐｌｅ　ａｎｄ　ｈｉｇｈ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｗｉｌ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｅｃｈ－
ｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｙｎｕｒａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　Ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ；　ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ；　Ｇｙｎｕｒａ　Ｊａｐｏｎｉｃａ；　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ；　ＨＰＬＣ
　　菊三七（Ｇｙｎｕｒａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）为菊科（ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ） 菊三七属植物，湖北地区的利川、当阳以及神农架，全
第３５卷　第２期
２０１３年４月
三峡大学学报（自然科学版）
Ｊ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｔｈｒｅｅ　Ｇｏｒｇｅｓ　Ｕｎｉｖ．（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）
Ｖｏｌ．３５Ｎｏ．２
Ａｐｒ．２０１３
国大部分地区均有分布［１］．菊三七亦为长江三峡库区
民间广为使用的民间中草药［２］，民间用于跌打损
伤［３］、创伤出血［４］、镇痛６ ［５］、抗炎［６］等．本文对自菊
三七乙酸乙酯部位中分离得到的化合物ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌ－
ｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ，采用制备 ＨＰＬＣ技术进行
纯化，以纯化后的化合物为标准品，采用分析型高效
液相色谱法测定菊三七根部ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅ－
ｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量，为更好地利用传统中草药菊三七
提供科学依据．
１　材料与仪器
１．１　试药
标准品溶液：精密称取ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ标准品
适量，加甲醇配置成质量浓度为０．１０、０．２０、０．４０、
０．６０、０．８０ｍｇ·ｍＬ－１的系列对照品溶液．精密称取
ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ标准品适量，加甲醇配置成质量浓度为
０．１０、０．３０、０．５０、１．００、１．５０ｍｇ·ｍＬ－１的系列对照
品溶液．用０．４５μｍ的有机滤膜过滤，备用．
１．２　仪器与设备
ＤＩＯＮＥＸ　Ｕｌｔｉｍａｔｅ　３０００型高效液相色谱仪（美
国戴安液相色谱有限公司）；Ｎ１００１型旋转蒸发仪（上
海爱朗仪器有限公司）；ＭＥ２１５Ｓ型十万分之一电子
天平（德国Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）．
２　方法
２．１　色谱条件
色谱柱：Ａｃｃｌａｉｍ　Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ）；流动相：甲醇／甲酸溶液；洗脱梯度：甲醇∶
０．１％甲酸溶液＝３８∶６２（ｖ·ｖ－１）；流速：１．０ｍＬ·
ｍｉｎ－１；检测波长：２２０ｎｍ；柱温：３０℃；检测时间：２０
ｍｉｎ．分别精密吸取标准品溶液，供试品溶液各１０
μＬ，进样，依上述色谱条件测定．依据标准品在色谱
图上的保留时间，在供试品溶液的色谱图中找出相对
应的色谱峰．其中：ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ的色谱保留时
间为１２．７８ｍｉｎ；ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的色谱保留时间为
１６．３２ｍｉｎ，达到基线分离．
２．２　样品预处理
精密称取干燥的菊三七根粉末１．２ｇ，加入２５ｍＬ
乙醇７０℃回流提取３次，过滤，滤液减压浓缩至干，
得到１００ｍｇ浸膏，用５ｍＬ色谱甲醇溶解，定容，用
０．４５μｍ的有机滤膜过滤，备用．
３　结果与分析
３．１　标准曲线
分别精密吸取标准品ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ溶液１０
μＬ进样，按２．１中色谱条件测定色谱峰面积，以峰面
积Ｙ 为纵坐标，质量浓度Ｘ（ｍｇ·ｍＬ－１）为横坐标，
绘制标准曲线，并进行线性回归．结果表明，在对照品
质量浓度为０．１０～０．８０ｍｇ·ｍＬ－１范围内线性关系
良好，回归方程：Ｙ＝８５．５１８Ｘ＋０．９５４　２，ｒ＝０．９９９　７．
分别精密吸取标准品ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ溶液１０μＬ
进样，按２．１中色谱条件测定色谱峰面积，以峰面积
Ｙ 为纵坐标，质量浓度Ｘ（ｍｇ·ｍＬ－１）为横坐标，绘
制标准曲线，并进行线性回归．结果表明，在对照品质
量浓度为０．１０～１．５０ｍｇ·ｍＬ－１范围内线性关系良
好，回归方程：Ｙ＝１４３．１９　Ｘ＋９．１９５　９，ｒ＝０．９９９　８．
３．２　精密度试验
精密吸取标准品ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ溶液０．２０、
０．４０、０．８０ｍｇ·ｍＬ－１各１０μＬ，按２．１中色谱条件连
续进样，每个质量浓度进样３次，测定色谱峰面积，计
算其ＲＳＤ分别为１．５０％．
精密吸取标准品ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ溶液０．３０、０．５０、
１．００ｍｇ·ｍＬ－１各１０μＬ，按２．１中色谱条件连续进
样，每个质量浓度进样３次，测定色谱峰面积，计算其
ＲＳＤ分别为１．１％．
３．３　稳定性试验
分别精密吸取一定质量浓度的ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ溶液１０μＬ，于０、２、４、６、８、１０、１２、
２４ｈ分别进样分析，测定其峰面积，其 ＲＳＤ 值为
１．４０％和１．７０％，表明样品溶液在２４ｈ内稳定性良好．
３．４　重复性试验
精密称取干燥的菊三七根粉末１．２ｇ，６份．按２．２
方法平行制备，在２．１色谱条件下进行分析，测定ｓｅ－
ｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ为２．９６１　３ｍｇ·ｇ－１，０．２９６　１％，ＲＳＤ
值为１．３０％；测定ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ为０．９５４　２ｍｇ·ｇ－１，
０．０９５　４％，ＲＳＤ值为１．２０％，表明该方法重复性良好．
３．５　加标回收率试验
精密称取已知含量的菊三七乙醇浸膏５份，每份
约１００ｍｇ，各样品分别精密加入标准品ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ
ａｃｉｄ和标准品ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ适量，按样品溶液制备方
法平行制备．
在２．１色谱条件下，分别进样１０μＬ进行测定，
得平均回收率及其ＲＳＤ值，结果见表１．
８９ 三 峡 大 学 学 报（自 然 科 学 版）　　　　　　　　　　　　　　２０１３年４月
表１　加标回收率实验结果
标准品
样品称样量
／ｍｇ
样品中标准品含量
／ｍｇ
添加标准品量
／ｍｇ
测出标准品总量
／ｍｇ
回收率
／％
平均回收率
／％
ＲＳＤ
／％
ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
１００　 ０．２９６　１　 ０．５８７　９　 ９７．２７
９９．７　 ０．２９５　２　 ０．５９０　７　 ９８．５０
１００．５　 ０．２９７　６　 ０．３　 ０．６０２　８　 １０１．７３　 ９８．８４　 １．９
１０２　 ０．３０２　０　 ０．６００　９　 ９９．６３
１０１．４　 ０．３００　２　 ０．５９１　４　 ９７．０７
ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ
１００　 ０．０９５　４　 ０．１９４　１　 ９８．７０
９９．７　 ０．０９５　１　 ０．１９２　４　 ９７．３０
１００．５　 ０．０９５　９　 ０．１　 ０．１９５　５　 ９９．６０　 ９９．１６　 １．５
１０２　 ０．０９７　３　 ０．１９８　７　 １０１．４０
１０１．４　 ０．０９６　７　 ０．１９５　５　 ９８．８０
４　结　论
本文利用正相硅胶层析、制备高效液相色谱等技
术，从菊三七乙酸乙酯部位分离纯化得到主要化学成
分ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ．以ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌ－
ｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ为标准品，采用回流提取辅
助浸提的方法制备菊三七测试样，建立了 ＨＰＬＣ法
测定菊三七根部ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ
含量的方法体系．测得菊三七根部ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ
和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量分别为２．９６１　３ｍｇ·ｇ－１、
０．９５４　２ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ分别为１．３４％、１．２８％．同时
还进行了方法学验证，结果表明方法的精密度、稳定
性、回收率等指标均满足测定要求，可为菊三七药材
的质量控制提供参考，为开发利用民间中草药菊三七
提供理论研究基础．
参考文献：
［１］　中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志第七十
七卷第一分册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９９９：３１２－３１３．
［２］　余甘霖，沈　力，易东阳，等．长江三峡库区中草药资源
调查研究［Ｊ］．实用中医药杂志，２００５，２１（３）：１８７．
［３］　曾晓琼，宋一心．菊三七对运动性骨折治疗作用的研究
［Ｊ］．西安体育学院学报，２００３（３）：６４－６５．
［４］　刘贺之，庞　健，王增岭，等．菊三七与参三七对血小板
超微结构影响的研究［Ｊ］．药学学报，１９８２，１７（１１）：２３－
２４．
［５］　张铭龙，刘文彬，李星元，等．菊三七生物碱的提取以及
类似物的药理活性比较［Ｊ］．吉林中医药，１９９８（４）：３５－
３８．
［６］　林　菁，林建忠，李常春，等．红番苋水提物的抗炎作用
［Ｊ］．福建中医药，１９９６，２７（２）：２３－２４．
［责任编辑　周文凯］
９９第３５卷　第２期　　　　　　　刘　芳，等　菊三七根中化合物ｓｅｎｅｃｉｐｈｙｌｉｃ　ａｃｉｄ和ｓｅｎｅｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ的含量测定