全 文 ：物 、 虫和虫卵 ,又能阻止它们生长繁殖 。 装缸密
闭保存 , 可减少本品受自然 因素的影 响 ,避免细
菌和虫害侵人 ,一般可存放 2 一 3 年 。
( 19 9 9
一 12 一 2 2 收稿 )
·化学成分 ·
高效毛细管电泳法测定四倍体荻蓝中有机酸的含量
第二军医大学药学院 (上海 20( 碎33) 王 寅 乔传卓 尹 茶 张汉明
摘要 用高效毛细管电泳法对裕蓝人工同源四倍体中具抗内毒素活性的有机酸成分含量进行测
定 ,结果显示四倍体秘蓝中 5 种有机酸的含量均高于二倍体亲本 , 表明四倍体落蓝是优质 的新 品系 ,具
有较高的开发价值 。
关键词 箱蓝 四倍体 有机酸 高效毛细管电泳法
十字花科植物落蓝 ( sI at is i刀d igo ict a oF rt . )
为常用中药材板蓝根 、 大青叶的主要来源 ,具有
清热解毒 , 凉血消炎等功效〔’ 〕。 从落蓝中分离
的有机 酸类成分具有体外抗 内毒素作用 , 能较
好地反映落蓝药材的清热解毒功效图 。 我们采
用高效毛细管电泳法对选育的落蓝人工同源四
倍体药材中有机酸成分进行了测定 , 并与其亲
本二倍体进行比较 , 为四倍体秘蓝药材的开发
利用提供依据 。
, 试剂和材料
W a te o C叩 111呵 I o n A n吻 z e r ,熔融石英毛细
管柱 60 c m x 75 脚 (河北永年光导纤维厂 ) , HA
一
20 2 M 电子天平 (日本 ) ,州 S 一c3 型酸度计 (上
海雷磁仪器厂 ) ;水杨酸 、 苯甲酸 (上海化学试剂
公司 ) ,丁香酸 、邻氨基苯甲酸 ( 日本东京化成工
业株氏会社 ) , 肉桂酸 (中国药品生物制品检定
所 ) , 3 一 ( 2 一 梭苯基 ) 一 4 ( 3H ) 一 哇哇酮 (以下
简称为哇哇酮酸 )从落蓝中提取 , 与文献报道光
谱值一致 , 经 H P LC 面积归一化法测定含量达
9
.
5% 以上 , 其它试剂 均为分析纯 。 四倍体秘
蓝药材及二倍体亲本均栽培于上海市崇 明岛新
海农场试验 田 , 经作者鉴定为 sI at is i刀d i邵 t ica
oF rt
。
2 方法
2
.
1 色谱 分 离条件 缓 冲液为 25 ~ o U L
N aZ 民O7 一NaO (H p H 9 . 3 ) ,检测波长 21 4 n m , 电压
.
20 4
.
2 2 kV
, 温度 2 5℃ , 进样 方 式 为压差 法 , 10 e m ,
5 5
0
2
.
2 对 照 品 溶液制 备 精 密 称取水杨 酸
19
.
17 mg
,苯甲酸 2 . 68 mg ,丁香酸 20 . 09 gm , 邻
氨基苯甲酸 21 · 59 哩 , 喳哩酮酸 18 · 09 grn :以无
水 甲醇溶解并定容至 10 耐 ;精密称取 肉桂酸
28
.
75 mg
, 以 甲醇配制成 1 . 巧 。岁耐 的内标溶
液 ,避光冷藏 。
2
.
3 样品溶液制备 将秘蓝药材烘干 , 粉碎 ,
过 60 目筛 , 称取 10 9 , 加 50 血 水 煎 煮 30
而 n ,过 滤 , 重复 3 次 ,合并滤液 , 水浴浓 缩至约
10 以 , 加乙醇至醇浓度为 80 % ,冷藏 24 h 后过
滤 , 回收乙醇至无醇味 , 以蒸馏水定容至 10 司
备用 。 取 10 耐 藕蓝提取液用 1 mo F L 的 H CI
调 pH 值为 l ,石油醚萃取多次 , 弃去石油醚 ,再
以乙醚萃取多次 , 合并 乙 醚液 , 以无水 N aZ Sq
脱水 ,过滤 , 回收乙 醚 , 残 留物 以甲醇溶解并定
容至 10 时 。 加 0 . 1 血 肉桂酸内标液后进样 。
2
,
4 标准曲线 各精密量取一定量的对照品
溶液置于 10 血 容量瓶中 , 加人 0 . 1 时 内标溶
液 , 以甲醇定容 ,重复进样三次 。 以对照品校正
峰面积 (峰面积与迁移 时间比值 A订 iT )同内标
校正峰面积之比为纵坐标 ( Y ) , 对 照品溶液 的
浓度为横坐标 ( X ) ,计算线性方程及相关系数 ,
5 种有机酸 的线性关系如下 : 邻氨基苯甲酸 : Y
= 一 5
.
5 8 x 10
一 生 + 1
.
17 x l o
一 ` x , : = 0
.
9 9 9 4 ;丁香
中药材第 23 卷第 4 期 2以X )年 4 月
DOI : 10. 13863 /j . i ssn1001 -4454. 2000. 04. 010
酸 : Y = 一 6 . 48 x 10 一 “ + 1 . 6 8 x 10 一 `X , r = 0 . 99 9 3 ; 0 . 7 0% 。
苯甲酸 : Y 二 一2 . 35 x lo 一 ’ 十 7 . 65 x lo 一 Z x , : = 2 . 6 稳定性 实验 将箱蓝提取液在室温 (20 ~
0
.
9 95 ;水杨酸 : Y = 1 . 60 x or 一 ` + 3 . 62 x 10 一 “ 25 ℃ )避光保存 , 分别在不 同时 间测定 , 结果表
X
, r = 0
.
9 94 ;唆哇酮酸 : Y = 一 1 . 60 x l0 一 ` + 1 . 54 明几种有机酸稳定性良好 ,三天内无明显变化 :
x or
一 ` x , r 二 0
.
9 92
。 喳哩酮酸 sR D = 1 . 5 % , 邻氨基 苯 甲酸 sR D =
2
.
5 加样回收率实验 精密量取 以上对照 品 1 . 98 % , 苯 甲 酸 SR D 二 2 . 07 % , 水杨 酸 R s D 二
溶液 ,加人 已知含量 的秘蓝药材中 , 依法测定 , 1 . 67 % ,丁香酸 SR D 二 1 . 74 % 。
结果哇挫酮酸的加样回收率为 % . 05 % , SR D 为 3 结果和讨论
2
.
3 % ;邻氨 基苯 甲酸 回收 率 为 9 . 7 % , SR D 依据上法对两种倍性水平秘蓝根和 叶中 5
为 1 . 0 9% ; 苯 甲酸 回收率为 95 . 51 % , SR D 为 种有机酸含量进行测定 ,每份样品测 3 次 ,测定
1
.
09 % ; 水 杨 酸 回 收 率 为 9 . 91 % , SR D 为 结果见表 。
1
.
05 % ; 丁 香 酸 回 收 率 为 10 . 4 % , SR D 为 四倍体蓓蓝叶中 5种有机酸 的含量均显著
表 四倍体和二倍体荻蓝药材 5 种有机酸的含量恤岁而厉士 s , n = 3)
样品 喳哩酮酸 水杨酸 苯甲酸 邻氨基苯甲酸 丁香酸
根 (Z n ) 1 . 6() 士 0 . 0 1 7 . 7 2 士 0 07 6 . 7 7 士 0 .伪 6 . 以 * 0 .以 2 . 3 6 土 0 . 0 1
根 (4 n ) 2 . 1 1 士 0 . o l b 7 . 80 士 0 . 0 3 8 . X() 士 0 . 07 1 8 . 15 士 o . 0 8 a 7 . 9 3 士 o . 0 2 a
叶 ( Z n ) 1 8 . 66 士 0 . 1 2 2 2 . 1 5 士 0 . 14 17 . 37 士 0 . 1 1 62 . 05 士 0 . 3 1 10 . 17 士 0 . 08
叶 (4 n ) 2 3 4 3 士 0 . 1 8 b 2 5 . 82 土 0 . 34 b 2 6 . 68 士 0 .抖 b 28 1 . 37 士 l . 12 a 13 . 5 2 士 0 . 08 ,,
注 : 根 ( 4 n )组与根 ( Z n )组 比较 , 叶 ( 4 n )组与叶 ( Z n )组 比较 , a : P < 0 . 0 1 ; b : P < 0 . 0 5
高于二倍体亲本 ; 四倍体秘蓝根中邻氨基苯 甲
酸、 丁香酸和唆挫酮 酸的含量也显著高于二倍
体亲本 , 水杨酸和苯 甲酸的含量与二倍体没有
显著差别 。 相同倍性水平秘蓝叶中有机酸含量
明显高于根中含量 。
药材中的活性成分是其产生药理作用的物
质基础 。 实验结果显示 四倍体落蓝 中的 5 种有
机酸含量比二倍体亲本高 , 表明四倍体秘蓝具
有更强的体外抗 内毒素作用 。 相同倍性水平的
箱蓝叶中有机酸含量 比根高 , 表明落蓝 叶具有
很高的开发利用价值 。
中国药典规定以靛玉红作为此类药材的鉴
定标准 , 因其脂溶性大 , 经药典方法处理后几乎
测不到含量 , 以之作为质量标准不可行 ,有机酸
类成分在药材提取后能有效测定 ,稳定性好 ,能
作为药材 的质控指标 , 为私蓝药材及其制 剂的
质量监控提供依据 。
` 国家 自然科学基金资助项 目 (编号 N邵 C 39 67 07 87 8 ) 、 上
海市科委星火计划项 目
参 考 文 献
中华人民共和国药典 (一部 ) . 广州 : 广东科技 出版
社 、化学工业出版社 , 19 5 二巧
W
l l
X Y
,
et al
.
C he 而 c al co ns it ue nt s of sI at is ind lgo it 邻 .
lP a l l t a M et l e a
,
19 6
,
63
:
55
李影 ,等 . 板蓝根冲剂生产过程中靛玉 红的含量变
化及工艺改进设想 . 中成药 , 19 0 , l 2( 9) : 8
( 19 9 9
一 1 1 一 2 9 收稿 )
eD et m
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Qi的 Chu al l z ll u o , Y in C h a , hZ缨 HamUI n g
(氏h o l of hP a n n a c y , ceS o dn M I li tayr M e id c吐 Uvm e o iyt
,
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s Of o rg田 l l c ac id s of t e tar lP o i d ls 以 is
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.
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t r a pl io d sI at is in digo
t o F ort
.
w as a en w il en
s iw ht be et
:
中药材第 23 卷第 4 期 2X( X) 年 4 月 · 205 ·
甲止t y , w lit hc h ad not a b ly v al ue of ex 禅io it ng 田 ld iut il 五ng .
K e y w o 八如 sI at is ind igo tica : eT atr p fo i d ; o r ga l u e ac id s ; H ihg 详1」b n l l a ll e e e a p il娜 e le e tor p h o er s is
五指毛桃挥发性成分的 G c 一 M s 分析
广州中医药大学 (广州 51 以05 ) 林 励 钟小清 魏 刚
摘要 应用气 一 质联用法对五指毛桃挥发性成分进行了研究 , 结果表明 : 五指毛桃挥发性成分以十
六酸 、 油酸 、 亚油酸及乙酸乙醋为主 ;其乙醚提取物中还含有异补骨内酷及佛手内酉歇香豆素类应为五指
毛桃的有效部位之一 。
关键词 五指毛桃 挥发性成分 气质联用
华南地区常用药材五指毛桃为桑科植物粗
叶榕 icF o hit ar Vha l 干燥根 ,具有健脾补肺 、 利
湿舒筋的功效〔’ 〕 ,在临床上称为 “ 五爪龙 ” 或 “ 南
茂 ” 。 五指毛桃主产于广东 、广西 、 湖南等地 , 由
于经济价值较高 , 目前广东河源等地已有大面
积人工栽培 。 然而 , 有关五指毛桃化学成分的
报道稀少 ,仅见该植物可能含有香豆素 、 菇类等
成分的记载 〔2〕。 五指毛桃具有香气 , 民间常以
香气强弱来评价其质量 。 为此 , 笔者对五指毛
桃的挥发性成分进行了研究 。
1 仪器与样品
1
.
, 仪器 岛津 G c M s 一 QSP以刃 型气相色谱
质谱联用仪 , DB 一 1石英毛细管柱 ( 30 m x 0 . 25
m )
。
1
.
2 样品 采 自广州市 白云山 ,原植物经华南
植物研究所陈炳辉副研究员鉴定为桑科植物粗
叶榕 icF o hit ar V ha l
. 。 采样后取其根 , 阴干后
备用 。
2 方法
2
.
1 水蒸 汽蒸馏法 取样 品粗粉 10 9 , 置
1臼X )时 圆底烧瓶中 , 加蒸馏水 550 时 浸泡 过
夜 ,再按药典 甲法提取挥发油 ,提取时间为 6 h 。
其油状物冷后为 白色固状物 ,故 以少量 乙醚洗
出 ,无水 硫酸 钠脱 水后 得样 品 I , 密 闭保存待
测 。
2
.
2 乙醚提取法 取样 品粗粉 , 置 10 以 三
角烧瓶中 ,加 乙醚 60 时 ,浸泡 26 小时后滤取醚
提液 ,常温下挥至 10 而 左右 , 得样 品 1 , 密闭
.
2 0 6
·
保存待测 。
2
.
3 气 一质联用 分析 G C : 进样 口 温度 2 50 ℃ ,
接 口温度 2 30 ℃ , 载气为氦气 ,流速 1 . 5 11月/ m i n ,
柱压 s o k几 ,分流 比 2 0 : l , 进样量 1 . 0 拼l ;升温
程序 : 柱温 4 0℃ , 恒温 3 m in , 以 or ℃ / m in 程序
升温至 70 ℃ ,再以 20 ℃程序升温至 28 0℃ ,恒温
3 m in
。 峰 面积 以归 一化法计算 各化合物 的相
对含量 。 M S : EI 源 70 Ve , 双灯丝 ;质量范 围 40
一 4 0 而 z 全程扫描 ,扫描间歇时间 1 . 0 秒 。
3 结果
依法分别对两 种方法 所得 供试品进行 分
析 ,结果见表 。 结果显示 , 以水蒸汽蒸馏法得到
的供试品以十六酸 、亚油酸 、 油酸及 十四酸为主
成分 , 占挥发性成分 的 54 . 13 % , 另含少量 乙酸
乙醋 、 2 , 3 一 二丁醇 、 l , 3 一 二丁醇 , 2 一 丁醇及 1 ,
1 一 二乙 氧基 乙烷等成分 。 而 乙 醚浸法 得到的
供试品则 以 乙酸乙酷 、 2 , 3 一 二丁醇 、 1 , 3 一 二丁
醇 、 2 一 丁醇及 1 , 1 一 二 乙 氧基 乙 烷 为主要 成
分 , 占挥发 性 成分的 58 . 79 % , 仅含少量十 六
酸 、亚油酸 、油酸等脂肪酸 ;另外 ,还检 出异补骨
内醋和佛手 内醋 ,这两种成分在水蒸汽蒸馏法
供试品中均未检出 。
4 小结
4
.
1 有人曾用石油醚浸法提取药材 中的挥发
性成分图 , 由于石油醚为多种高级烷烃复合物 ,
作气质联用分析时难 以判 别溶 剂峰 , 易影 响测
定结果 。 乙醚浸法能有效地提取五指毛桃中的
挥发性成分 ,其挥发性成分分类与水蒸气蒸馏
中药材第 23 卷第 4 期 2 (XX)年 4 月