全 文 ：营养学报2008年第30卷第6期 631

刺儿菜提取物对诱导人肝癌细胞株的裸鼠移植瘤
抑制作用的研究

Study on Inhibition of Cephalanoplos(Bunge) Kitam Extract on the Nude Mice
Transplant Tumor Induced by Human Liver Cancer Cells

李桂凤，吴长举 1，马吉祥 2，毛江胜，沈媛媛 3，谷晓红
（山东省农业科学院中心实验室，济南 250100；1 山东师范大学化学学院 济南 250014；2 山东省疾病
预防控制中心，济南 250014；3 山东省滨州医学院内科学教研室，滨州 256603）
LI Gui-feng, Wu Chang-ju1, MA Ji-xiang2, MAO Jiang-sheng, SHEN Yuan-yuan3, GU Xiao-hong
(Central Laboratory Shandong Academy of Agricultural Sciences, Jinan 250100;1Chemistry Institue of Shandong teacher University,Jinan 250000;
2Shandong Center for Disease Control and Prevention,Jinan 250014;3Medicine Institute of Bin-zhou iatrology college,Bin-zhou 256603 China)

刺儿菜 Cephalanoplos(Bunge)Kitam，是经
常采食的一种野生蔬菜。我们的测定结果表明：
每百克刺儿菜含 Ca 378 mg，是大白菜的近 6 倍；
含硒高达 40.64 μg,是一般蔬菜的许多倍；含 VE
2.34 mg,而大白菜仅含 0.92 mg。含 VK1极高,达
7.88 mg，是菠菜的 5 倍，西红柿的 16.5 倍，土
豆的 82.5 倍。美国匹兹堡大学癌症研究所肝癌中
心的科学家发现维生素 K 在组织培养液里，不但
能够杀死肝癌细胞，还能摧毁包括乳腺癌和皮肤
癌在内的其它类型的癌细胞。它是通过一种新的
生长调节机制以抑制癌症[1]。我们在刺儿菜提取
物抗肿瘤 BEL-7402 细胞研究的基础上，进一步探
讨其对肝癌细胞株的裸鼠移植瘤的抑制作用。

1 材 料 与 方 法
1.1 材料
1.1.1 刺儿菜提取物：从山东省农业科学院采集
刺儿菜，洗净擦干，在 55℃以下烘干。粉碎，过
20 目筛备用。粉碎后的样品加入甲醇，常温下浸
泡 3～4 d 后过滤，滤渣再加入甲醇继续浸泡 3～
4 d 后过滤，浸泡 3～5 次，收集合并滤液。置旋
转蒸发器上，在 50℃水浴上蒸干，回收甲醇。粗
制浸膏用 80%三氯甲烷萃取，（为避免发生乳化，
向体系中加适量食盐，改变溶液的极性）。收集三
氯甲烷相，50℃水浴上减压蒸馏回收溶剂，浓缩
至干；得绿色浸膏。其主要成分为生物碱、皂甙、
黄酮甙，挥发油，VK1，儿茶酚胺类等物质[1]。
1.1.3 仪器试剂：刺儿菜绿色浸膏采用二甲基亚
砜（分析纯）溶解。BEL-7402肝癌细胞在RPMI 1640
培养液中，37℃、5% CO2培养箱中培养，3d 传代
1 次细胞生长达到所需数量后收集细胞，用生理
盐水配成 1×109/L 的细胞悬液。Balb/C 裸鼠（中
国医科院动物中心提供）25 只，4 w 龄，16～18g，
雌雄各半。
1.2 方法
采用随机数字法随机将 25 只 Balb/C 裸鼠分
为 5 组，无菌条件下，裸鼠右后背侧部或右颈部
皮下接种培养细胞悬液。接种后，裸鼠在无菌、
恒温和恒湿条件下饲养，待肿瘤长成约 4mm×4mm
大小时，用瘤旁注射方法给药，分别注射 0.2 ml
生理盐水、40 μg/kg DMSO、10、20、40 μg/kg
刺儿菜提取液进行治疗，隔日 1 次，共 6 次。测
量肿瘤体积的变化（最长径 mm×垂直径 mm），计
算各组的抑瘤率。实验结束后对移植瘤组织进行
HE 染色用光镜和透射电镜观察形态学改变。用
TUNEL 法检测移植瘤组织细胞凋亡率。
1.2.1 肿瘤抑制率：
V1-V2 肿瘤生长抑制率（%）=(1- V3-V4 )×100
V1、V2：治疗组开始时与结束时平均瘤体积
V3、V4：对照组开始时与结束时平均瘤体积
收稿日期 2008-03-27
基金项目 山东省自然基金项目（No.Y2006B27）
作者简介 李桂凤（1953-），女，研究员，E-mail：tianshu1858@sina.com
中图分类号 R151.3 文献标识码 A 文章编号 0512-9480（2008）06-0631-02
DOI:10.13325/j.cnki.acta.nutr.sin.2008.06.028
632 Acta Nutrimenta Sinica,Dec.,2008, Vol.30 No.6
1.2.2 透射电镜观察：取移植瘤组织块 1mm3用 4%
戊二醛固定，1%四氧化锇后固定，梯度乙醇脱水，
包埋，切片，醋酸双氧铀柠檬酸铅双重染色,透射
电镜观察。
1.2.3 TUNEL 染色法：移植瘤组织冰冻切片，PBS
缓冲液 0.1 mmol/L 洗涤后，0.3%过氧化氢-甲醇
溶液及预冷的 0.1% Triton-X 100 处理细胞。以
后步骤按中山生物公司试剂盒操作说明进行，最
后 DAB-H2O2 显色，光镜下观测凋亡细胞计数。
实验对照：阴性对照用去掉 TdT 酶标记体系
处理标本；阳性对照用以 TACS 核酶处理、蛋白酶
消化后的标本，人为导致 DNA 断裂，通过此方法
是一份标本上所有细胞均能低强度显弱棕黄色。
凋亡指数（AI）计算方法：染色后细胞核呈
棕褐色的细胞被判为凋亡细胞。随机选取 5 个高
倍镜视野（＞1000 个细胞），分别计数凋亡细胞
数和总细胞数。AI 值按公式计算：
AI（%）=（凋亡细胞数/总细胞数）×100
1.3 统计方法
t 检验。

2 结 果
2.1 刺儿菜提取物对移植瘤的抑制作用（表 1）
从肿瘤抑制率可见，刺儿菜提取物对 BEL-
7402 移植瘤有明显的抑制作用。

Table 1 Inhibition effect of Cephalanoplos(Bunge)
Kitam extract on transplant tumor in naked mice
（n=5, x ± s ）
Size of tumor（mm3） Inhibition rateGroup
0d 12d (％)
0.2ml saline 20.51±0.94 498.08±8.79
DMSO 40（μg/kg） 19.78±1.29 505.41±10.63 -1.69
Cephalanoplos(Bunge) kitam extract groups(μg/kg)
10 20.40±1.74 448.03±7.70 10.67
20 21.82±1.85 362.12±5.19 28.81
40 21.32±1.72 314.31±6.02 38.66

2.2 透射电镜观察（图 1）
两个对照组的瘤组织中多数癌细胞线粒体、
内质网丰富，表明细胞代谢旺盛；而刺儿菜提取
物组的瘤组织中有较多凋亡细胞。
2.3 TUNEL 染色法
刺儿菜提取物组瘤组织周边有成片密集的凋
亡细胞，而对照组和 DMSO 对照组的瘤组织中无或
少数分散的凋亡细胞。刺儿菜提取物 40、20 和
10 μg/kg 组、DMSO 对照组和盐水对照组凋亡指
数分别为（65.24±1.23）%、（55.22±1.36）%、
（ 47.62 ± 1.68 ） % 、（ 14.61% ± 1.21 ） % 和
（13.42±1.12）%，刺儿菜提取物组明显高于生
理盐水组（P＜0.05），DMSO 组与生理盐水组无显
著性差异。


(transmission electron microscope, ×6400)
Fig. 1 After treatment with Cephalanoplos(Bunge)
Kitam extract, transplant tumor tissue cells became
apoptic
上述结果表明刺儿菜提取物对 BEL-7402 移
植瘤有明显的抑制和诱导凋亡的作用。

关键词：刺儿菜提取物；诱导人肝癌细胞株；
裸鼠移植瘤；抑制作用
Keywords：Cephalanoplos (Bunge) Kitam extracts;
human liver cancer cells;
transplant tumor in nude mice;
inhibition effect

[参 考 文 献]
[1] 李桂凤，董淑敏，吴常举，等. 50 种野菜的营养价
值与食疗[M]. 北京：金盾出版社，2006.1－4.
[2] 中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所.食物成
分表[M]，北京：人民卫生出版社，1991.12－14.
[3] 李桂凤，郝征红，董淑敏，等.反相高效液相色谱法
分析刺儿菜中维生素 K1色谱[J]，1997，15：90－91.
[4] 胡福良.蜂胶药理作用的研究[M].杭州：浙江大学出
版社，2005.29－59.
[5] 梁惠,贺娟，董春景，等.凹顶藻萜类化合物抑瘤作
用及其机制研究[J].营养学报，2005.27：502－505.
[6] 梁惠，贺娟，张士璀，等.凹顶藻萜类化合物抑瘤活
性及其对免疫作用的研究[J].中国海洋药物，2005,
24：6－9.