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– ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ　ａｆｔｅｒ　ｏｒａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｘｉａｏｃｈａｉｈｕ
Ｔａｎｇ　ａｎｄ　Ｒａｄｉｘ　ｓｃｕｔｅｌａｒｉａｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｔｏ　ｒａｔｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏ－
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（收稿２０１５－１２－２７；修回２０１６－０１－１４）
高效液相色谱法同时测定香青兰中熊果酸和齐墩果酸含量
李　频　四川自贡市中医医院药剂科（自贡　６４３０１０）
　摘　要　目的：建立药材香青兰中熊果酸和齐墩果酸 ＨＰＬＣ含量同时测定方法。方法：ＺＯＲＢＡＸ
Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５ｕｍ），检测波长：２２０ｎｍ，流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ，柱温：２５℃，流
动相：甲醇－水－冰醋酸－三乙胺（８５∶１５∶０．０４∶０．０８）。结果：所测成分熊果酸进样量在０．
１０１７μｇ～２．５４２５μｇ（ｒ＝０．９９９４）范围内与峰面积呈良好线性关系；齐墩果酸进样量在０．
３０６３μｇ～７．６５７５μｇ（ｒ＝０．９９９６）范围内与峰面积呈良好线性关系。加样回收率分别是９８．
０７％（ＲＳＤ＝０．６６％）和９９．４１％（ＲＳＤ＝１．０２％）。结论：本文所采取的方法准确可靠，适用
于香青兰中熊果酸和齐墩果酸的含量的同时测定。
　主题词　熊果酸／中药分析化学　 齐墩果酸／中药分析化学　色谱法，高压液相　＠香青兰
　【中图分类号】　Ｒ２８３　【文献标识码】　Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－７３６９．２０１６．０５．０４５
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｏｌｅａｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ
ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｍｏｌｄａｖｉｃｕｍ　Ｌ　ｂｙ　ＨＰＬＣ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｚｉｇｏｎｇ（Ｚｉｇｏｎｇ　６４３０１０）Ｌｉ　Ｐｉｎ
　　ＡＢＳＴＲＡＣＴ　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｍｅｔｈｏｄ　ｔｏ　ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｏｌｅａｎ－
ｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｍｏｌｄａｖｉｃｕｍ　Ｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ｃａｒｒｙ　ｏｕｔ　ｏｎ　ａ　ＺＯＲＢＡＸ　Ｃ１８ｃｏｌｕｍｎ（４．６×２５０ｍｍ，
５ｕｍ）ｗｉｔｈ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ－ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ －ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｉｎｅ（８５∶１５∶０．０４∶０．０８），ｕｓｉｎｇ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　０．６
ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｈｒｅ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ａｔ　２５℃，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　ａｔ　２２０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ
Ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　０．１０１７μｇ～２．５４２５μｇ（ｒ＝０．９９９４），ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ｏｌｅａｎｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　０．３０６３μｇ～７．６５７５μｇ（ｒ＝０．
９９９６），ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｉｓ　ｒａｎｇｅ　ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗａｓ　ｇｏｏｄ．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗｅｒｅ　９７．１２％（ＲＳＤ＝１．０２％）ａｎｄ　９７．
２８％（ＲＳＤ＝０．９７％），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ；Ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｓｉｍｕｌ
ｔａｎｅｏｕｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｄｒａｃｏｃｅｐｈａｌｕｍ　ｍｏｌｄａｖｉｃｕｍ　Ｌ．
　　ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ　 Ｕｒｓｏｌｉｃ　ａｃｉｄ／ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＴＣＤ）　Ｏｌｅａｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ／ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（ＴＣＤ）　Ｃｈｒｏｍａ－
ｔｏｇｒａｐｈｙ，ｈｉｇｈ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　ｌｉｑｕｉｄ　＠Ｘｉａｎｇｑｉｎｇ　Ｌａｎ
　　香青兰为唇形科植物香青兰的干燥地上部分［１］，
维吾尔名为巴德兰吉布牙香青兰［２］（Ｄｒａｃｏｃｅｐｈｓｌｕｍ
ｍｏｌｄａｖｉｃａｅ　Ｌ．），是维吾尔族、蒙古族习用药材，属于豆
属豆科菜一年生草本，茎叶带有芳香味［３］。香青兰有
安神补脑、暖胃养肝、止喘镇咳等作用，一般用于心脏
性的脑病、高血压引起的头昏、气管炎等，《后续医典》
中治疗肝热的七味清肝红花散中就加有此味药材，其
对胃出血也有良好治疗效果，在《蒙医药方汇编》记载
中七味松石散就加有此药治疗胃出血。近些年有学者
研究发现此药中含有许多化合物如：黄酮类、氨基酸、
木脂素类、萜类、黄酮醇类等［４－６］。
虽香青兰在中药治疗中使用广泛，近些年有不少
２２６ 陕西中医２０１６年第３７卷第５期
学者对其有进一步研究，但目前对其含量测定方面报
导特别是同时测定的报导并不多见。本文所研究的熊
果酸和齐墩果酸属于三萜类的化合物，此类物质对肝
损伤有一定的保护作用，还具有抗菌、抗炎、抗病毒和
抗肿瘤的活性。本文在参考许多前期文献基础上［７－９］，
利用高效液相色谱，可以让样品进行简单的处理，对香
草兰有效成分熊果酸和齐墩果酸进行同时测定，以期
为香青兰中含量测定及其日后的质量控制提供一定参
考价值。
１　检测仪器与材料　仪器：美国 Ｗａｌｔｅｒｓ高效液
相色谱仪，包括 Ｗａｌｔｅｒｓ１５２０泵，Ｗａｌｔｅｒｓ２４８５双波长
检测器，Ｗａｌｔｅｒｓ７２６自动进样器、Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作
站。药材：药材采自内蒙古自治区小井沟、南天门、蛮
汉山。由中药材专家鉴定所得药材均为唇形科青兰属
植物香青兰。
熊果酸和齐墩果酸的对照品 （批号：２００９２８－
１２０７４２，２００７０４－１２０７０９，中国药品生物制品检定所）；
甲醇为色谱纯，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析
级。
２　色谱条件　ＺＯＲＢＡＸ　Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５ｕｍ），检测波长：２２０ｎｍ；流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ，；
流动相：甲醇－水－冰醋酸－三乙胺（９０∶１０∶０．０４∶０．
０７）；柱温：２５℃。进样量１０μＬ；可以看到此条件下，
样品峰的分离度良好。
图１　香青兰高效液相色谱图
３　溶液的配制　３．１　样品配置方法　将获得的
不同时期香青兰粉碎，选用４０目将粉末进行过筛并进
行精密称定１．０００ｇ（误差不大于１０％），于索氏提取器
中，加入丙酮１００ｍＬ，加热回流约４ｈ～５ｈ，之后将丙酮
转移至蒸发皿中蒸干，用石油醚将残渣浸润２次～３
次，每次１０ｍＬ；２ｍｉｎ～４ｍｉｎ后，弃石油醚上层，用醇
定容至５ｍＬ，震荡摇匀，用滤纸过滤，即得到供试品溶
液。
３．２　对照品溶液的配制　精密称取对照品齐墩
果酸１０．１７ｍｇ，加甲醇定容于１０ｍＬ容量瓶中，之后精
密吸出１ｍＬ于另１０ｍＬ容量瓶，定容至刻度，待用（０．
１０１７ｍｇ／ｍＬ）；精密称取熊果酸对照品１０．２１ｍｇ，加醇
定容至１０ｍＬ，之后精密吸取３ｍＬ于另１０ｍＬ容量瓶，
定容至刻度，待用（０．３０６３ｍｇ／ｍＬ）。
４　方法学考察　４．１　线性关系考察　按照上面
所描述的色谱条件，分别取对照品的熊果酸、齐墩果酸
溶液（１μＬ，５μＬ，１０μＬ，１５μＬ，２０μＬ，２５μＬ）进行测定制
表，横坐标为齐墩果酸溶液、熊果酸进样量，将峰面积
为纵坐标，对所得的数据进行分析，得出回归方程分别
为：熊果酸溶液，回归方程为Ｙ＝３４１７６８Ｘ－２０７５９４（ｒ＝
０．９９９４），在０．１０１７μｇ～２．５４２５μｇ范围内与峰面积呈
良好线性关系；齐墩果酸溶液，回归方程为 Ｙ＝
２９７８１４Ｘ－３９６４５．７０（ｒ＝０．９９９６），在０．３０６３μｇ～７．
６５７５μｇ范围内与峰面积呈良好线性关系。
４．２　稳定性实验　取同一份供试品溶液，室温放
置，以时间间隔为１ｈ，３ｈ，５ｈ，７ｈ，９ｈ，吸取样品进行测
定，测得熊果酸的峰面积分别 ２０４４６３１，２０４７６７７，
２０４５５８６，２０５３７９６，２０４６９９０，ＲＳＤ计算为２．０９％；测
得齐墩果酸的峰面积为６０９２３７，６００８６３，６０３９４７，
６０８８１０，６０８１３９，ＲＳＤ为１．０７％。结果显示，该实验测
定方法稳定性符合要求。
４．３　精密度实验　精密吸取样品溶液１０μＬ，连
续进样５次，得到熊果酸的峰面积分别为２０５７４４０，
２０４９１０９，２０４８４２２，２０４６６３１，２０４９１０３，ＲＳＤ为０．７９％；
齐墩果酸的峰面积分别为６０３３０３，６０２５６２，６０２８２５，
６０３２７９，６０３７２９，ＲＳＤ结果为１．０４％，表明此次制作精
密度符合标准。
４．４　重复性实验　对同批样品进行精密称取１．
０００ｇ（误差不大于１０％），将１００ｍＬ丙酮加入索氏提取
器中，进行４ｈ～５ｈ的加热回流，将加热回流后所得丙
酮转至蒸发皿中晾干，每次对残渣用１０ｍＬ石油醚进
行浸润并重复操作１～２次，每次浸润时间为２ｍｉｎ～
４ｍｉｎ，将石油醚上层溶液分离后用醇定容至５ｍＬ，震
荡摇匀，用滤纸过滤，得到供试品溶液后，进样１０μＬ
进行测定。熊果酸的含量分别为１．２８５ｍｇ／ｇ，１．２５９
ｍｇ／ｇ，１．２７８ｍｇ／ｇ，１．２８８ｍｇ／ｇ，１．２９１ｍｇ／ｇ，１．２８１
ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为０．８９％；齐墩果酸的含量分别为０．４６５
ｍｇ／ｇ，０．４５３ｍｇ／ｇ，０．４５２ｍｇ／ｇ，０．４４９ｍｇ／ｇ，０．４６１
ｍｇ／ｇ，０．４５７ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．３２％。结果表明重复性
检验方法准确度良好。
４．５　回收率实验　对同批样品进行精密称取０．
５０００ｇ（误差不大于１０％），共６份，再分别加入熊果酸和齐
墩果酸对照品溶液０．８ｍＬ，１．０ｍＬ，１．２ｍＬ；取本品粉末精
密称定１．０００ｇ（误差不大于１０％），将１００ｍＬ丙酮加入索
氏提取器中，进行４ｈ～５ｈ的加热回流，将加热回流后所得
３２６陕西中医２０１６年第３７卷第５期
丙酮转至蒸发皿中晾干，每次对残渣用１０ｍＬ石油醚进行
浸润并重复操作１～２次，每次浸润时间为２ｍｉｎ～４ｍｉｎ，
弃石油醚上层，用醇定容至５ｍＬ，震荡摇匀，用滤纸过滤，
得到供试品溶液，并且按照含量测定方法进行测定，得出
熊果酸的平均回收率为９７．１２％，ＲＳＤ为１．０２％；齐墩果
酸的平均回收率９７．２８％为，ＲＳＤ为０．９７％。结果表明准
确度良好（见表１）。
表１　回收率测定结果
序号 称样量（ｇ）
熊果酸
含量（ｍｇ） 加入量（ｍｇ）测得量（ｍｇ）回收率（％）
齐墩果酸
含量（ｍｇ） 加入量（ｍｇ）测得量（ｍｇ）回收率（％）
１　 ０．４９３９　 ０．６３０７　 ０．６４１２　 １．２６１４　 ９９．１７　 ０．２９７４　 ０．２７２７　 ０．５５８９　 ９８．０４
２　 ０．５０３１　 ０．６４２５　 ０．６４７２　 １．２６７７　 ９８．２９　 ０．２９５１　 ０．２８２４　 ０．５７２４　 ９９．１２
３　 ０．４９９７　 ０．６３８１　 ０．６４８４　 １．２５３７　 ９７．４５　 ０．２９３１　 ０．２７０９　 ０．５６９９　 １０１．０５
４　 ０．５０１５　 ０．６４０４　 ０．６５１３　 １．２６３９　 ９７．８５　 ０．２９４８　 ０．２７２４　 ０．５７１４　 １００．７４
５　 ０．５００４　 ０．６３９０　 ０．６５２５　 １．２５８３　 ９７．４３　 ０．２９２６　 ０．２８０１　 ０．５６７２　 ９９．０４
６　 ０．４９７１　 ０．６３４８　 ０．６４５４　 １．２５６９　 ９８．２０　 ０．２９３４　 ０．２７８４　 ０．５６３１　 ９８．４８
平均回收率ＲＳＤ（％）　 ９８．０７％ （０．６６％） ９９．４１％ （１．０２％）
　　５　样品含量测定　取本品粉末３批（２０１２－０８０１、
２０１２－０８０２、２０１２－０８０３），精密称定１．０００ｇ（误差不大于
１０％），将１００ｍＬ丙酮加入索氏提取器中，进行４ｈ～
５ｈ的加热回流，将加热回流后所得丙酮转至蒸发皿中
晾干，每次对残渣用１０ｍＬ石油醚进行浸润并重复操
作１～２次，每次浸润时间为２ｍｉｎ～４ｍｉｎ，将石油醚上
层溶液分离后用醇定容至５ｍＬ，震荡摇匀，用滤纸过
滤，得到供试品溶液。用 ＨＰＬＣ方法进行含量测定，结
果见表２。
表２　香青兰中齐墩果酸、熊果酸的含量比例
批号 熊果酸含量（％）齐墩果酸含量（％）
２０１２－０８０１　 ０．４９　 １．６８
２０１２－０８０２　 ０．５４　 １．９３
２０１２－０８０３　 ０．５２　 １．９１
　　６　讨　论　６．１　选择药品提取检测成分　齐墩
果酸、熊果酸为非极性化学成分，其在乙醇、氯仿、丙酮
等有机溶剂中有较好的溶解性，在水和石油醚中溶解
性差。根据检测成分的化学性质，我们对检测成分的
提取设计了以下几种方式：①乙醇超声提取，②乙醚索
氏提取，③ 甲醇索氏提取，④三氯甲烷超声提取，⑤丙
酮超声提取。结果显示索氏提取的含量较其他方式检
测成分提取含量较高，且采用乙醚提取高于甲醇，故此
采取了乙醚索氏提取，提取时间选择为４ｈ～６ｈ，由于
４ｈ已基本提取完全，为了节约成本，最终选择４ｈ。
６．２　流动相的选择　本实验中所采取的流动相
我们采用了，甲醇／水体系，甲醇／水／冰醋酸体系，以及
甲醇／水／冰醋酸／三乙胺体系，最终确定为甲醇－水－冰
醋酸－三乙胺（９０∶１０∶０．０４∶０．０８），该体系下物质各
成分分离度和峰形均较好。
６．３　流速的选择　本实验中采用的流速是０．
６ｍＬ／ｍｉｎ，预实验时，尝试了两种流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ和
１ｍＬ／ｍｉｎ，结果发现采用０．６ｍＬ／ｍｉｎ的流速可有效对
物质进行分离，且对保留时间无明显影响，因此本次实
验中选择的流速为０．６ｍＬ／ｍｉｎ。
６．４　检测波长的选择　波长小于２００ｎｍ 的时
候，发现信噪比小，定量难度大；波长大于２３０ｎｍ的时
候，发现响应值低，最终选择波长为２２０ｎｍ，此时两个
检测物质能很好分开，待测物质相应高，且杂质相应较
低。
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（收稿２０１５－１２－２４；修回２０１６－０１－１２）
４２６ 陕西中医２０１６年第３７卷第５期