全 文 ：第 17卷第 1期
19 9 4年 3月
云南中医学院学报
J o u m al of Yn n u an C oll e ge
of T r ad it in o al h C in e s e M ed ic in e
V ol
.
1 7N o
.
l
3
,
19 94
珠子参总皂贰对白细胞介素一 1 白细胞介素一2 的影响
李惠兰 李存德
(昆明医学院药理教研室 65 0 3 1)
内容提要 研究了珠子参总皂贰对白细胞介素一 1 , 白细胞介素一 2 的影响 , 结果表明珠子参总
皂贰对大肠杆菌脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞产生白细胞介素一 1有明显的增强作用 ; 并能对抗
环磷酞胺对小鼠腹腔巨噬细胞产生白细胞介素一 1 的抑制作用 。 珠子参总皂贰对刀豆素诱导的小鼠
脾细胞产生白细胞介素一 2 有明显的促进作用 ; 并能对抗环磷酞胺对白细胞介素一2 产生的抑制作
用 。
关键词 珠子参总皂贰 白细胞介素一 1 白细胞介素一 2
珠子参系 五加科人参属植物 ( 尸an a x
少只p o n i e u s C ,A M e y V a M aj o r B u r k ) ; 珠子
参总皂贰为其串珠状根的提取物 。 珠子参具
有 抗 心 律 失 常 , 增 强 免 疫 功 能 等 作
用 〔 ’ 、 2 、 3〕 , 本实验研究珠子参对白细胞介
素一 l ( I L一 l ) , 白细胞介素一 2 ( I L一2 ) 产
生的影响 。
1 材 料
1
.
1 药品 珠子参总皂贰白色粉末 (由珠
子参粗粉 , 95 % 乙醇回流提取 4 次 , 乙醇提
取液减压回收至干 , 加蒸馏水溶解 , 石油醚
脱脂 , 挥去石油醚 , 继用水饱和正丁醇萃取
4 次 , 回收正丁醇后少量甲醇溶解 , 加人到
丙酮中沉淀 , 过滤 , 于 60 ℃ 以下减压抽干
即成 ) , 可溶于水 , 由我院化学教研室提
供 。
.1 2 主要试剂 刀豆素 (C o n A )美国 is gm a
公 司 生 产 。 大 肠杆 菌脂 多糖 (L P s) 美 国
D i e o l a b o r a t o ” e s 产品 . 3H 一 T d R (3 H一胸腺
啥吮核昔 ) 中国科学院原子能研究所产品 .
.I 了 动 物 C 57 B L 两周龄纯种小鼠 .
2
. 方法与结果
取体重 18一 229 两周龄 C 5 7B L 纯系小
鼠 60 只随机分为 4 组 , 对照组每天给生理
盐水每 10 9 灌胃 o . Zm l , 珠子参总皂贰组每
天灌 胃给药 20 0m g / k g 一次 , 连续 21 天 ,
珠子参总皂贰加免疫抑制剂组给药同第 2
组 , 实验前 6 天给环磷酞胺 30 m g / k g 腹腔
注射 , 隔日 1次 , 共 3 次 。 免疫抑制剂组给
珠子参总皂贰同第 1组 , 于实验前 6 天给环
磷酞胺 30 m g / k g 腹腔注射 , 隔 日 1 次 , 共
3 次 。
2
.
1 珠子参总皂武对 IL 一 I 产生的影响
无菌条件下处死小鼠 , 腹腔 内注人含
10% F C S R PM I一 164 0 液 ( 10% 小牛血清
R P M I一 164 0 液 ) , 轻揉腹腔 , 吸 出腹腔
液 , 离心洗涤 3 次 , 并配成 2 x l护个 / m l
小鼠腹腔 巨噬细胞悬液 , 加人 24 孔塑料培
养板中 , 每孔 l m l。 置 37 ℃ , 5% C o : 培养
箱中培养 .3 5 小时后 , 洗涤 2 次 , 除去非附
壁细胞获单层 巨噬 细胞 , 并在其 中加人
L P S ( 20拼g / m l ) l m l , 置 3 7 ℃ , 5% C 0 2
培养箱中继续培养 4 0 小时 , 收集培养液离
心 2000 转 / 分 , 10 分钟 , 收集上清液过滤
除菌待测 I L一 1 的活性 。
2
.
1
.
1 I L一 1 活性检测
用胸腺细胞增殖法 .(4 6〕 将正常 C 5 7B L
纯系小鼠摘眼球处死 , 无菌取胸腺 , 用生理
盐水洗涤 3 次 , 用含 10 % F cs R PM I一 1科0
液配成 1 . 9 x l0 7 个 / m l 细胞悬液 , 并加人
2 7
4 19 9年 云南中医学院学报 第 17卷
%孔平底塑料培养板中 , 每孔 80 川 . 然后
每孔加人稀释成 1 : 4 的 I L一 1待测液 10 0川
及浓度为 6拜g / m l 的 C o nA 20川 , 总容量
为 200拼 l , C o n A 的终浓度为 3户g / m l , 细
胞 数 为 1 . s x 10 7 / inl , 将 培 养 板 置
37 ℃ 5% c o : 培养箱培养 48 小时 , 终止培养
前 6 小时加人 , H一 T d R o . 5拜e i / 孔 ( 0 . 5 微居
里 / 孔 ) , 培养结束后 , 用多头细胞收集器
把各孔的样品收集于 49 型滤膜上 , 烘干后
测其 C P M 数 。 结果见表 1。
表 l 珠子参总皂贰对 I L一 l 产 生的影响
对照组 珠子参总皂贰组
免疫抑
制剂组 珠十免
动物数 15 15 1气 1 气
3H 一 T d R u p at k e
e P m x 土 S D
10 2 13
士 10 5 1
17 530
士 13 27
68 5 3
士 6 19
115 18
士 120 3
P ( 0
.
o l P ( 0
.
0 1
结果表明 : 珠子参总皂贰给药组与对照
组之间所测得的脉冲数有明显的统计学差异
( P <0
.
0 1)
, 珠子参总皂贰加免疫抑制剂组
与免疫抑制剂组之间所测得的脉冲数也有明
显的统计学差异 (P <0 . 01 ) 。 说明珠子参总
皂贰能增强 L P S 诱导小鼠腹腔巨噬细胞分
泌 I L一 l 的功能 , 并能对抗环磷酞胺对 L P S
诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌 I L一 1的抑制作
用 。
.2 2 珠子参总皂武对 IL 一2 产生的影响
动物分组及给药方法同前 . 将小鼠放血
处死 , 无菌取脾 , 分离脾细胞 , 离心洗涤
巧o 转 / 分钟 , 15 分钟共 3 次 , 低渗液破
坏 红 细 胞 并 迅 速 恢 复 等 渗 . 用 含
10 % F C S R P M I一 164 0 液配成 5 x 10 6 个
/ m l 的细胞悬液 , 加人 24 孔培养板 , 每孔
加人 l m l , 再加浓度为 6# g / m l 的 C o nA
iln l
,
C o n A 的终浓度为 3料g / m l , 将培养
板置 37 ℃ 5%培养箱中培养 40 小时 , 收集
培养液离心 240 0 转 / 分 15 分钟过滤除菌 ,
收集 (含 I L一2) 上清液 , 稀释成 2一 3 放冰箱
待测 .
2
.
2
.
, 靶细胞制备 将正常的 C 57 B L小鼠
处死 , 用上述方法制备脾细胞悬液 , 调整细
胞数为 5 x 10 “ 个细胞 / m l , 在 24 孔塑料培
养板上每孔加脾细胞悬液 l m l , 加浓度为
14拜g / m l C o n A l m l , 总 容 量 Zm l ,
C o n A 的终 浓度 7拜g / m l , 将 培 养板置
3 7℃ C O : 培养箱中培养 72 小时 , 用淋 巴细
胞分层液分离淋母细胞 , 洗涤离心 2 4 00 转
/ 分 巧 分 钟 , 共两 次 , 使细胞 重悬于
10 % F C S R PM I一 16 4 0 液中 , 并调整细胞
数为 5 x 10 6 个 / m l 细胞悬液 。
2
.
2
.
2 I L一 2 活性测定 取 9 6 孔塑料培养
板 、 氮天七帆人靶纵魄 又Q几叭 、 飞 从厂飞魄钱
测稀释样品 10 0川 、 总容量 2 0 川 , 将培养
板置于 37 ℃ 5% C O : 培养箱中培养 72 小
时 , 培养结束前 6 小时加人妞dT OR . 5闪 /
孔 , 培养结束后用多头纽胞收集器把各孔样
品收集于 49 型滤膜上 , 烘干后用 凡一2 10 液
体闪烁仪测 印m 〔4 、 5〕 数。 结果见表 o2
表 2 珠子参总皂贰对 I L一 2产生的影响
对照组 珠子参总皂贰组
免疫抑
制剂组 珠
十免
动物数
3 H一 T d R u P at k e
p m x 士 S D
1 103 5
士 12 15
189 8 5
土 102 5
73 2 1
士 64 8 . 5
105 9 8
土 10 45
P ( 0
.
o l P ( 0
.
0 1
结果表 明 : 珠子参总皂贰给药组 的
印m 数显 著大 于对 照 组 的 cP m 数 ( P
< .0 01 ) ; 珠子参总皂贰加免疫抑制剂组的
印m 数也明显大于免疫抑制剂组的 cP m 数
( P < .0 01 )
。 说 明珠 子参 总 皂 贰 能增 强
C o n A 诱导 小鼠淋 巴细胞产生 I L一2 的功
能 , 并能对抗环磷酞胺对 C o n A 诱导小鼠
淋巴细胞产生 I L一 2 的抑制作用 。
3 讨 论
由巨噬细胞产生的 I L一 1 , 不仅能诱导
T 淋巴细胞分泌 I L一2 , 促进 B 细胞增殖 ,
诱导 T 、 B 细胞前体分化和增殖 , 而且能增
第 1期 李惠兰等 : 珠子参总皂贰对白细胞介素一 1白细胞介素一2 的影响
强 N K细胞对靶细胞的 杀伤作用 , 表明
I L一 1 在免疫调节中起重要作用 . 珠子参总
皂贰能增强 L P S 诱导的小鼠腹腔 巨噬细胞
产生 I L一 1 , 并能对抗环磷酞胺对 L P S 诱导
的小鼠腹腔巨 噬细胞产生 I L一 1 的抑制作
用 , 说明珠子参对免疫功能有明显的增强作
用 。
I L一 2 是在巨噬 细胞分泌 I L一 1 存在的
条件下 , T H 细胞受到 P H A 、 C o n A 或抗原
刺激所产生 , 具有广泛的作用 , 除维持 T
细胞的生长外 , 可增 强 N K 细胞的活性 ,
又是一种生理性的干扰诱生剂 。 近年来的研
究表明 : 衰老与 T c 细胞成熟速度减慢 , T
细胞依赖性免疫缺损及 I L一 2 的合成能力降
低有关 。 增强 N K 细胞和 T 细胞杀伤功能
及促进干扰素的生成是防治肿瘤的有效措
施 ; 爱滋病 ( A ID s) 是一种获得性免疫缺
损综合征 , 表现为 T H 细胞数量减少 , T 细
胞及 B 细胞激活功 能缺损 。 这些免疫缺损
与 I L一2 生成减少有关 。 自身免疫性疾病也
与 I L一 2 , 生成减少有关 。 此外 , 临床常见
病如感冒 、 肝炎等也引起机体免疫功能一定
程度的改变 。
本研究表明 : 珠子参能促进 C o n A 诱
导的小鼠脾细胞产生 I L一 2 , 并能对抗环磷
酞胺对 C o n A 诱导的小鼠脾细胞产生 IL 一 2
的抑制作用 。 提示珠子参在多种疾病中具有
防治作用 , 其作用与临床应用值得进一步深
人探讨 。
参考文献
l 李惠兰 , 等 .珠子参抗心律失常作用 . 中国药
理通讯 , 198 6 , 3 (2 ) : 2 6
2 王愁德 , 等 .珠子参对小鼠巨噬细胞吞噬功
能的影响 . 中国药理通讯 , 1984 , l (3 、 4 ) : 28
3 朱新华 , 等 .珠子参的免疫药理作用 .昆明医
学院学报 , 19 9 0 , 1 1 (4 ) : 52
4 郑禁 , 等 .应用小鼠胸腺细胞测定白细胞介
素 2 及 白细胞介素 l 的条件和局限性 . 中国免疫学
杂志 , 19 8 8 , 4 ( 2 ) : 80
5 翁晓春 , 等 .免疫调变剂对大鼠 I L一2 产生
的影响 .中国免疫学杂志 , 19 87 , 3 (2) : 70
6 王学洋 , 等 .检测白介素 1 (I L一 l) 三种方
法初步探讨 . 中国免疫学杂志 , 19 87 , 3 ( l) : 26
(收稿 日期 : 19 9 3刃 6一 28 )
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