全 文 ：珍珠梅提取物在大鼠肝脏化学致癌初期
对 谷 胱 甘 肽 S -转 移 酶 的 影 响
张学武　朴　龙1　张良和
(延边大学医学院生物化学教研室·延吉 133000　1延边大学医学院组织胚胎学教研室·延吉 133000)
摘　要　目的:探讨珍珠梅乙酸乙酯提取物在大鼠肝脏化学致癌初期对谷胱甘肽 S-转移酶(GST-P)表
达的影响。方法:按略改良的 Solt-Farber氏方法制作大鼠肝脏癌前病变模型 , 用草苁蓉提取物饲养大鼠
6w 后处死 ,取肝脏 , 用免疫组织化学 ABC 法检测 GST-P;同步观察电子显微镜下组织学改变。结果:GST
-P在珍珠梅给药组的表达率显著低于癌前病变模型组。结论:珍珠梅乙酸乙酯提取物在大鼠肝脏化学
致癌初期对 GST-P的表达率有抑制作用。
主题词　肝肿瘤/中医药疗法　@珍珠梅提取物/治疗应用　肝肿瘤/超微结构　肝肿瘤/酶学　谷胱甘肽
转移酶/分析　大鼠
　　珍珠梅(Sorbaria sorbifolia)属蔷薇科植物 , 又称“山高
粱” 、“八木条” , 广泛分布于云南 、贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁
夏及东北 , 有活血化瘀 , 消肿止痛 , 治骨折及跌打损伤的作
用[ 1] , 1980 年代初期国内学者研究发现珍珠梅水提物有抗缺
氧作用[ 2] ,我们曾研究过珍珠梅乙酸乙酯提取物对亚硝酸钠
和四氯化碳对急性肝损伤具有保护作用[ 3, 4] , 对四氯化碳致
肝损伤大鼠自由基具有清除作用[ 5] ,对小鼠 S180肉瘤有抑制
作用[ 6] 。本次实验研究珍珠梅乙酸乙酯提取物在化学致癌
初期对GST-P表达的影响。
1　材料
1.1　药物　珍珠梅茎 、叶 、花 , 采集于吉林省延吉市市郊。
乙酸乙酯提取物:乙酸乙酯分 3 次浸泡珍珠梅 , 温度为 40℃,
每次 12h ,合并 3 次滤液 ,用旋转蒸发器减压浓缩 , 获珍珠梅
乙酸乙酯提取物浸膏(1g 珍珠梅有效成分相当于 33.3g 生
药)。
1.2　试剂　ABC 试剂盒 、二乙基亚硝胺和乙酰氨基芴系美
国Sigma公司产品 ,胶体金标记物购于北京军事医学科学院 ,
抗GST-P单抗由日本弘前大学医学部第二生化教室土田成
纪教授提供 ,其他试剂均为国产分析纯。
1.3　动物　Wistar大鼠 , 雄性 , 体重为 140～ 160g , 由延边大
学医学院动物科提供。
2　方法
2.1　造模及给药方法　将 75 只 Wistar雄性大鼠分为 3 个
组 ,除正常组外 , 其余按尹宗柱等报道过的略改良的 Solt-
Farber氏方法[ 7]制作大鼠肝脏癌前病变模型。正常对照组 ,
以生理盐水(0.4ml)代替二乙基亚硝胺腹腔注射 , 3w 后肝脏
部分切除 ,给予标准粉末饲料;癌前病变模型组 , 大鼠腹腔注
射二乙基亚硝胺(200mg/ kg), 2w 后开始在饲料中添加乙酰氨
基芴(0.08g/ kg), 注射二乙基亚硝胺 3w 后进行肝脏部分切除
术;给药组 , 大鼠腹腔注射二乙基亚硝胺 , 2w 后开始在饲料
中添加乙酰氨基芴(0.08g/kg)及珍珠梅(200mg/kg), 注射二
乙基亚硝胺 3w 后进行肝脏部分切除术。 3个组的大鼠共饲
养 8w。
2.2　GST-P 检测及结果判定　8w 后将大鼠处死 , 立即取
肝 , 丙酮固定 3d ,石蜡包埋 , 按照ABC 法试剂说明书进行 GST
-P免疫组织化学检测。GST-P 阳性灶的定量分析:检测直
径在 0.2mm 以上阳性灶的数量(个/cm2)和面积(mm/ cm2)。
2.3　电子显微镜标本的制备及观察
取新鲜肝组织 ,大小约为 1mm×1mm×1mm ,取 4～ 5 块 ,
迅速放入预冷(4℃)的 30ml/ L的戊二醛溶液中固定 , 继续常
规固定 、包埋 、制作超薄切片 ,免疫胶体金染色和标记步骤按
张学敏等[ 8]报道的方法进行。在 JEM-1200EX 型电子显微
镜下观察 、摄像。
2.4　统计学处理　应用 SPSS-10.0 统计软件进行方差分
析。
3　结果
3.1　免疫组织化学结果
组织切片经 ABC 法染色后 ,正常组无阳性灶 , 模型组阳
性灶平均数目为 1.8个/ cm2 ,阳性面积平均为 0.2mm/ cm2 ,给
药组阳性灶平均数目为 0.4 个/ cm2 , 阳性面积平均为
0.03mm/cm2 , 与模型组有显著性差异(P<0.05)。见附表。
附表 珍珠梅提取物在肝脏化学致癌初期对
大鼠GST-P 表达的影响
组别 例数 GST-P阳性(%) 阳性灶数
阳性面积
(mm/ cm2)
正常组 21 0＊ 　 0＊ 　　0＊
模型组 15 13(86.7) 1.8±1.3 0.20±0.26
给药组 21 6(28.6)＊ 0.4±0.7＊ 0.03±0.04＊
　　与模型组比较 , ＊P <0.01
3.2　组织学改变
电子显微镜下观察正常组的线粒体 、粗面内质网 、细胞
核 、异染色质无 GST-P胶体金颗粒 , 癌前病变模型组的线粒
体 、粗面内质网 、细胞核 、异染色质可见 GST-P胶体金颗粒 ,
给药组的线粒体 、粗面内质网偶见 GST-P 胶体金颗粒。
·346· 　　　　　　　　中国中医药科技 2003 年第 10卷第 6 期
4　讨论
目前 , GST-P已被认为是大鼠肝癌发生过程中出现最
早 、敏感性较强的癌前标志物[ 9 , 10] , 其阳性灶的检测已成为
检验环境致癌物的敏感的体内实验法[ 11] 。本实验研究表
明 ,模型组 15 例中的 13 例(86.7%)大鼠肝脏呈 GST-P阳
性 ,而给药组 21 例中的 6 例(28.6%)大鼠肝脏呈 GST-P阳
性 ,显著低于模型组 ,并且肝脏 GST-P 阳性灶数量 、面积亦
显著低于模型组。GST-P 具有解毒功能而在抗脂质过氧化
反应中起重要作用 ,此酶还可以促使白细胞三烯和前列腺素
的转化[ 12] 。从电镜观察到:用药组的粗面内质网 、线粒体的
GST-P 胶体金颗粒较模型组明显减少。本实验结果表明珍
珠梅乙酸乙酯提取物对二乙基亚硝胺和乙酰氨基芴诱发的
大鼠肝脏化学致癌过程有抑制作用。
(吉林省延边朝鲜族自治州科技发展计划项目)
　　参考文献
1　江苏新医学院编.中华大辞典.上海:上海科学技术出版社 ,
1994:8
2　李亦秀 ,张永春 ,李文汉.中草药山高粱的抗缺氧作用的初步研
究.哈尔滨医科大学学报 1981;4:1
3　张学武 ,金海玲 ,朴春梅 ,等.珍珠梅对亚硝酸钠和四氯化碳所致
肝损伤的保护作用.延边大学医学学报 2001;24(3):186
4　张学武 ,金海玲 ,赵红 ,等.珍珠梅提取物对四氯化碳所致大鼠急
性肝损伤的保护作用.世界华人消化杂志 2002;10(7):783
5　张学武 ,金海玲 ,赵红 ,等.珍珠梅对四氯化碳致肝损伤大鼠自由
基的影响.中国中医药科技 2001;8(6):373
6　金海玲 ,张学武 ,朴春梅 ,等.珍珠梅对小鼠 S180肉瘤的抑制作用.
延边大学医学学报 2002;24(1):14
7　Yin Z , Sato K , Tsuda H , et al.Change in activities of uridene diphate-
glucuronyl transferases during chemical hepatocarcinogensis.Gann(Jpn J
Cancer Rea)1982;73:239
8　张学敏 ,等.肺癌组织细胞胎盘型谷胱甘肽 S-转移梅的免疫电
镜定位.中华医学杂志 1992;72:294
9　Sato K ,Kitahara A , Satho K , et al.The placental form of glutathione S-
transferase as a new marker protein for preneoliasia in rat chemical hepato-
carcinogenesis.Gann(Jpn J Cancer Res).1984;75:199
10　Sato K.Glutathione S-transferases and hepatocarcinogenesis.Jpn J Can-
cer Res(Gann).1988;79:556
11　Tsuda H ,Matsumoto K , Ogino H , et al.Demonstrat ion of init iation poten-
tial of carcinogens by induction of preneoplastic glutathione S-trans-
ferase P-form-positive liver cell foci:possible in vivo assay system for
envi romental carcinogens.Jpn J Cancer Res 1993;84:230
12　金海玲 ,尹宗柱 ,方承哲 ,等.胎盘型谷胱甘肽 S-转移梅在人胃
癌 、大肠癌及肾癌细胞中异常表达的免疫电镜定位.延边医学院
学报 1993;16(3):174 (收稿:2002-12-24)
利 胆 化 石 汤 治 疗 胆 石 症 50 例
陈永哲　(山东省枣庄市峄城区中医院·枣庄 277300)
1　临床资料　所有胆石症患者均为我院门诊及住院患者 ,按入院时
间的先后 ,随机分为治疗组和对照组。治疗组 50例 , 男 31 例, 女 19
例 ,年龄最大者 72例 ,最小者 39岁;病程最长者 30d ,最短者 3d ,平均
13.6d。胆囊结石者 36例 ,胆总管结石 11例 ,肝内胆管结石 3例 ,其
中胆囊结石呈泥沙样者 19例 , B超有明显胆汁淤积者 13例 ,伴有明
显黄疸者 21例。对照组 50例 ,男 29例 ,女 21例 ,年龄最大者 76岁 ,
最小者 41岁;病程最长者 32d,最短者 2d ,平均 14.3d。胆囊结石者 39
例 , 胆总管结石 9例 ,肝内胆管结石 2例 ,其中胆囊呈泥沙样者 32例 ,
B超有明显胆汁淤积者 12例 ,伴有明显黄疸者 20例。两组一般资料
经统计学处理 ,无明显差异(P >0.05),具有可比性。诊断标准根据
《中医病证诊疗标准》 [ 1]制定。
2　治疗方法　治疗组:用利胆化石汤治疗。组成:金钱草 30g 、海金
沙 30g 、柴胡 10g 、黄芩 10g 、栀子 10g 、茵陈 30g 、茯苓 30g、鸡内金 30g、郁
金 12g 、川楝子 12g、延胡索 15g、白芍 15g、白术 10g、甘草 6g。取上述诸
药投入砂锅中 ,加水 1000ml ,稍搅拌后将水滤出 ,再加水 2000ml ,煮沸
20min ,取汁 500ml;二煎加水 750ml ,煮沸 20min ,取汁 500ml , 两煎药液
混合入干净容器备用。每日 2次 ,每次 500ml ,温服 ,每日 1剂。服药
30d后统计疗效。服药期间多饮水 ,调节劳逸 ,动静适宜 ,饮食以清淡
为主 ,切忌暴饮暴食及食用膏梁厚味 ,勿酗酒。对照组:服用排石饮
液(黑龙江地王医药股份有限公司出品)每次 10ml ,每日 3次 ,疗程同
治疗组。
3　治疗结果
3.1　疗效标准　治愈:症状消失 ,结石排出 ,经 B超 、CT等检查结石
阴影消失。有效:结石缩小或减少 1/ 2以上 ,临床症状明显减轻。无
效:经治疗 30d症状改善不明显 , B超 、CT 等检查 ,结石阴影无变化。
3.2　治疗结果　见附表。
附表 两组疗效比较[ n(%)]
组别 n 治愈 有效 无效 总有效
治疗组 50 24(48.0) 19(38.0) 7(14.0) 43(86.0)＊
对照组 50 8(16.0) 14(28.0) 28(56.0) 22(44.0)
　　＊P<0.01
4　体会　胆结石为临床常见病 、多发病 , 中医学认为其形成与饮食
偏嗜 、忧思 、暴怒 、外邪侵袭 、湿热久蕴等关系密切。 其病机为气滞 、
热郁 、瘀血 、沙石 、湿热致使肝胆气郁 , 胆失通降 ,日久不愈 ,反复发
作 ,而致痰浊湿热久酿成石。方中金钱草 、海金沙 、鸡内金 、郁金利胆
化石 、排石 ,清利肝胆之湿热;茵陈 、栀子 、黄芩清热利湿退黄;柴胡疏
肝利胆 ,与上述诸药共用 , 有协同效力 ,共同发挥利胆 、化石 、排石之
功用。现代药理研究[2]认为金钱草 、海金沙 、鸡内金 、郁金有明显增
加胆囊收缩 ,促进胆汁排泄作用;茵陈 、柴胡 、黄芩、栀子利胆退黄。
全方利而不伤正 ,清而不败胃 ,祛邪与扶正并用 , 治标与治本同施。
全方共奏利胆化石 、清热利湿 、排石止痛之功效 ,从而使胆腑气机功
能通降失常归于正常 ,胆囊结石能承顺下行,顺利排出。 且临床应用
未发现不良反应。值得进一步研究。
　　参考文献
1　王立恒 ,等.中医病证诊疗标准.黄河出版社 , 1990:77
2　李希新 ,等.当代内科难治病中医治疗.济南出版社 , 1997:392
(收稿:2003-03-13)
·347·2003年第 10 卷第 6 期 中国中医药科技　　　　　　　　
EFFECT OF XINTONGLING PILL PRECONDITIONING ON APOPTOSIS AND
EXPRESSION OF RELATED GENES IN RABBITSMYOCARDIAL
CELLS DURING ISCHEMIC REPERFUSION
Tan Yuan-shen ,et al
(The First Affiliated Hospital of Hunan College of Traditional Chinese Medicine , Changsha 410007)
Objective:To explore the effects of xintongling pill(XTL)preconditioning on apoptosis and Bcl-2 , Bax expression in rabbits myocardial cells
during myocardial ischemic reperfusion(I/ R).
Methods:Myocardial ischemia reperfusion injury models were established in atherosclerosis(AS)rabbit by ligating the left descending anterior
coronary artery for 30 min , followed by 120 min of reperfusion in vitro.Apoptosis was identified by TUNEL and apoptosis index(AI)was ob-
tained.The protein expression of Bcl-2 and Bax genes was investigated by S-P immunohistochemical stain.
Results:The AI was significantly increased during myocardial ischemic reperfusion , whereas protein expression of Bcl-2 gene was decreased
and protein expression of Bax gene was increased.The AI and the average OD value of Bax protein significantly lowed , while the average OD
value of Bcl-2 protein was significantly higher in XTL group and IPC group than that in I/ R group(P<0.01).There was synergic effect on
apotosis in AS rabbit myocardial cells between XTL preconditioning and ischemic preconditioning.
Conclusion:XTL preconditioning can inhibit myocardial cells apoptosis induced by ischemia reperfusion in AS rabbit.The mechanism may be
associated with upregulating protein expression of Bcl-2 gene and downregulating protein expression of Bax gene.
EFFECT OF SORBARIA SORBIFOLIA EXTRACTION ON GLUTATHIONE S-TRANSFERASE
AT EARLY STAGE OF RAT S CHEMICAL HEPATOCARCINOGENESIS
Zhang Xue-wu , et al
(The Medical College of Yanbian University , Yanji 133000)
Objective:To study the effect ethyl ester extract of Sorbaria Sorbifolia on glutathione S-transferase at early stage of rat s chemical hepatocar-
cinogenesis.
Methods:Hepatic preneoplastic lesions in rats were induced by modified Solt-Farber protocol and rats were killed after feeding with the water
extract from Sorbaria Sorbifolia for six weeks , glutathione S-transferase was detected by using the immunohistochemical ABCmethod , and the
histological changes were synchronously observed by electronic microscope.
Results:The rate of the expression of glutathione S-transferase was lower in test group than that in model group.
Conclusion:The ethyl ester extract of Sorbaria Sorbifolia can reduce the rate of expression of glutathione S-transferase at early stage of rat s
chemical hepatocarcinogenesis.
EXPERIMENTAL STUDY ON THE PROTECTIVE EFFECT OF RHAMNUS CRENATA EXTRACTION
ON CARBON TETRACHOLORIDE-INDUED LIVER DAMAGE IN MICE
Liang Rong-gan , et al
(Guilin Medical College , Guilin 541004)
Objective:To evaluate the anti-hepatotoxic and antioxidant activity of extract from Rhamnus Crenata on carbon tetrachloride(CCl4)-induced
toxicity in the mice s liver.
Methods:Following consecutively oral administration of water-extract of Rhamnus Crenata , twice a day for 7 days , CCl4was given by i.p to the
mice.The levels of serum AST , ALT and hepatic MDA were determined , and liver s histological change was also evaluated.
Results:Levels of serum AST and ALT were increased by administration of CCl4 and significantly reduced by Rhamnus Crenata extract treated.
Histological changes and oxidation damage induced by CCl4 also benefited from Rhamnus Crenata extract.
Conclusion:The results show that Rhamnus Crenata extract has both hepatoprotective and antioxidant effect on carbon tetrachloride-induced
liver damage in mice.