全 文 ：　＊通迅作者:高丽 ,女 ,正高级工程师。 Tel:0871-6606221 Fax:0871-8417776 , E-mai l:gaoli0527@yahoo.com.cn。
高效液相色谱法测定不同产地珠子参中齐墩果酸的含量
许银凤1 , 2 , 张晓南2 , 高　丽1＊
(1.云南省药物研究所 , 云南 昆明 650111;2.云南中医学院 , 云南 昆明 650200)
　　摘　要:目的:建立高效液相色谱法测定珠子参中齐墩果
酸含量的方法。方法:选用 XTe rra MS C18色谱柱(4.6mm×
250mm , 5μm), 以甲醇-0.2%磷酸溶液(88∶12)为流动相 ,
流速 1.0m L/min , 柱温 30℃, 检测波长为 207nm。 结果:在
1.00～ 10.04μg 范围内 , 齐墩果酸的进样量与峰面积积分值
呈良好的线性关系 , r =0.9999。平均回收率为 98.41%,
RSD=2.48%(n=6)。不同产地珠子参中的齐墩果酸含量不
同 ,其中德钦产的含量最高 , 大姚与丽江产的次之且含量相
近。结论:本法准确 、分离度高 , 可用于珠子参中齐墩果酸的
含量测定。
关键词:珠子参;齐墩果酸;高效液相色谱法
中图分类号:R927.2 文献标识码:A
文章编号:1007-2349(2009)03-0049-02
珠子参 ,别名珠儿参 、野三七 、钮子七 、疙瘩七等。 为五加
科植物人参属珠子参[ Panax japonicus C.A.May.var.majo r
(Burk.)C.Y.Wu e t K.M.Feng]或羽叶三七[ Panax japonicus
C.A.May.va r.bipinnatifidus(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng]
的干燥根茎。味苦 、甘 , 微寒。归肝 、肺 、胃经。 具有补肺 , 养
阴 ,活络 , 止血之功。用于气阴两虚 , 烦热口渴 , 虚劳咳嗽 , 跌
打损伤 ,关节疼痛 , 咳血 ,吐血 , 外伤出血[ 1] 。在云南民间代三
七使用。主产云南 、四川 、陕西等地 , 具有较高的药用价值。
珠子参根茎化学成分中以齐墩果烷型三萜皂苷为主[ 2] , 常选
用其水解产物齐墩果酸为指标性成分进行测定。但目前还未
见采用高效液相色谱法对珠子参中齐墩果酸含量进行测定的
文献报道。中国药典收载该药至今还未有含量测定项 , 仅对
该成分进行了薄层色谱鉴别。本文采用高效液相色谱法对珠
子参中齐墩果酸的含量进行测定 , 并对德钦 、大姚 、丽江等地
的珠子参进行了比较。另外 , 由于民间习用珠子参根茎中的
膨大节 ,而对其细小的节间少用或限用 ,故本文还对同一产地
的节和节间之间进行了对比 , 为进一步提高和完善珠子参的
质量标准提供了理论依据及实际指导意义。
1　仪器与试药
LC-2010A 日本岛津高效液相色谱仪 , LCsolution 工作
站;FA2004N 电子天平(上海精密科学仪器有限公司)。齐墩
果酸对照品(批号:110709-200304 , 含量测定用)购于中国药
品生物制品检定所。珠子参药材由云南省药物研究所制药厂
提供 ,采收于云南德钦 、大姚 、丽江。经云南省药物所究所天
然药物资源研究中心高丽正高级工程师鉴定为五加科植物人
参属珠子参[ Panax japonicus C.A.May.var.majo r(Burk.)
C.Y.Wu e t K.M.Feng ] 或 羽 叶 三 七 [ Panax japonicus
C.A.May.var.bipinnatifidus(Burk.)C.Y.Wu et K.M.Feng]
的干燥根茎。水为重蒸馏水 , 甲醇为色谱纯 ,磷酸及其他试剂
均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　Waters XTer ra MS C18(4.6mm ×250mm ,
5μm);流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液(体积比为 88 ﹕ 12);
流速 1.0mL/ min;柱温 30℃;检测波长为 207nm [3 ～ 5] ;理论塔
板数按齐墩果酸计算应不低于 5000 , 见图 1。
A —对照品　B—供试品
图 1　高效液相色谱图
2.2　对照品溶液的制备 　精密称定齐墩果酸对照品
25.09mg ,置于 25mL 容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 制成
1.0036mg/ mL 的对照品溶液备用。使用前过 0.45μm 的微孔
滤膜过滤。
2.3　供试品溶液的制备　精密称取珠子参粉末(过四号筛 ,
孔径 0.3mm)0.1g 于椎形瓶中 , 用适量水润湿 ,加水饱和的正
丁醇 10mL ,摇匀 , 密塞静置过夜 , 超声 15min , 过滤 , 锥形瓶与
过滤器用 10m L水饱和的正丁醇冲洗 , 合并正丁醇蒸干 ,残渣
加硫酸与 30%乙醇的混合液(1:20)10m L , 加热回流 3h ,用三
氯甲烷 50mL 分 4 次萃取 ,分取三氯甲烷层 ,用 20m L水洗涤 ,
弃去洗液 ,蒸干 , 残渣加甲醇溶解 , 转移至 10mL 容量瓶中 , 用
甲醇稀释至刻度 , 摇匀 ,用 0.45μm 的微孔滤膜滤过 , 取续滤液
492009 年第 30 卷第 3 期　　　　　　　　　　云 南 中 医 中 药 杂志DOI :10.16254/j.cnki.53-1120/r.2009.03.033
作为供试品溶液。
2.4　线性关系的考察　分别吸取已配制好的对照品溶液
1mL 、2mL、4m L、6mL 、8mL置 10mL 容量瓶中 ,加甲醇稀释至
刻度 , 溶液浓度分别为 0.1mg/ mL 、0.2mg/m L、0.4mg/ mL 、
0.6mg/ mL 、0.8mg/ mL , 分别精确吸取上述 6 个对照品溶液
10μL进样 , 测定峰面积。以对照品浓度(C)为横坐标 X , 峰面
积(A)为纵坐标 Y , 绘制标准曲线 , 得回归方程:Y=645508
X-14895 , r=0.9999 ,(n=6)。结果表明 , 齐墩果酸在 1.00 ～
10.04μg 范围内呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验　取同一浓度的齐墩果酸对照品溶液
10μL , 重复进样 6 次 ,分别测定峰面积值 , 得峰面积平均值为
2821866 , RSD=0.31%(n=6)。
2.6　重现性试验　取同一批珠子参样品 6 份 , 按“ 2.3”项下
方法制备供试品溶液 ,分别测定齐墩果酸峰面积值 , 得峰面积
平均值为 2548560 , RSD=1.51%(n=6)。结果表明该方法重
现性良好。
2.7　稳定性试验　取同一供试品溶液 , 分别于配制后的 0h 、
1h 、2h、3h、6h 、12h、24h 依法测定其峰面积值 , 结果齐墩果酸
RSD=1.67%(n=7)。表明该溶液在 24h 内基本稳定。
2.8　加样回收率试验　取 6 份已知含量的珠子参样品
约 0.1g ,精密称定 , 分别加入一定量的齐墩果酸对照品溶液 ,
按“ 2.3”项下的方法制备供试品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,
得平均加样回收率为 98.41%, RSD=2.48%(n=6)。说明该
方法准确可靠。见表 1。
表 1　齐墩果酸加样回收率试验结果(n=6)
样品中齐墩
果酸含量(mg)
加入量
(mg)
实测含量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
39.74 79.84 97.81
39.32 79.92 99.01
40.31
41.00 79.80 96.31 98.41 2.48
38.78 80.11 100.92
41.02 80.04 95.17
38.54 80.04 101.23
2.9　样品测定　取珠子参样品按“ 2.3”项下方法制备供试品
溶液 ,依照上述色谱条件进行测定 , 结果见表 2。
表 2　样品含量测定结果
产地 齐墩果酸含量(m g/ g)节 节间
德钦 36.33 29.01
大姚 16.05 13.11
丽江 15.40 14.17
3　讨论
3.1　波长的选择　用紫外分光测定仪对齐墩果酸对照品溶
液进行全波长扫描 ,结果在 203nm 处有最大吸收峰 ,但在该波
长处溶剂峰干扰大 , 检测器相应值小 ,且基线不平稳。为了减
少干扰 ,提高信噪比 , 结果在 207 处得到满意峰形 , 且基线
平稳。
3.2　流动相的选择　分别以甲醇-水(体积比)=90∶10 、
84∶16 、86∶14 、88∶12 为流动相来进行测定 ,结果 90∶10 的
峰对称度较差;84∶16 的对照品后又一小峰无法分开;86∶14
的对称度可以 , 但保留时间较长 , 在 16 ～ 17min 左右出峰;
88∶12的比例不仅峰对称度高 , 且分离效果较好 , 基线平稳 ,
加之保留时间较 86∶14 的提前近 5min ,但发现在保留时间上
不够稳定 ,会在 11 ～ 13.5min 之间波动。后又将其中的水改
为 0.2%磷酸 ,比例不变 , 很好解决了保留时间波动这一问题 ,
得到满意结果(见图 1)。故将最终的流动相确定为甲醇-
0.2%磷酸=88∶12。
3.3　提取方法的筛选　笔者对本试验的样品提取方法进行
了单因素考察 , 分别就提取回流时间 、提取方法 、提取溶剂进
行了筛选 ,结果发现回流时间 1h 、2h 、3h 所得齐墩果酸含量相
差不大 ,但对于前面的杂质峰回流时间越长峰越小 , 故最终选
择了 3h 的回流时间;提取方法方面考察了静置过夜 、超声
30min 、静置过夜+超声 15min , 结果静置过夜+超声的提取
方法齐墩果酸含量明显高于其他 2 种方式;其次 , 还分别考察
了以甲醇 、95%乙醇 、75%乙醇 、水饱和的正丁醇为提取溶剂
的齐墩果酸的含量测定 , 结果甲醇 、95%乙醇的含量较低 ,
75%乙醇及水饱和的正丁醇的含量较高且相近 , 但 75%乙醇
的杂质峰较高较多。故最终将回流时间定为 3h , 提取方法为
静置过夜加超声 15min , 提取溶剂为水饱和的正丁醇。
3.4　产地及不同药用部位的对比　从测定结果可以看出 , 德
钦产的珠子参齐墩果酸含量明显高于大姚及丽江产 , 这可能
与采收季节及当地的采收加工方法有关。由于珠子参药材含
淀粉较多 ,加之很多地方由于湿气较重而采取蒸煮的方法来
防止药材霉变 ,对此有待进一步深入研究。其次 , 虽说其药用
部位为根茎 , 但在实际生活中 ,人们习惯用其膨大的节间 , 而
对其细长的节间是限用或不用。就齐墩果酸的含量来看 , 其
节及节间相差不大 , 可以充分利用其节间入药 , 以扩大药用部
位及有效利用自然资源。
齐墩果酸是珠子参的有效成分之一 ,且在珠子参中的含
量很高 ,可作为珠子参的指标性成分之一。首次采用高效液
相色谱法对该成分进行了测定 , 对提高和完善珠子参的质量
标准提供了理论依据及实际指导意义。
参考文献:
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业出版社 , 2005:192.
[ 2] 王答祺.秦岭产珠子参根茎的皂苷成分[ J] .植物学报 , 1988 ,
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含量[ J] .广东药学院学报 , 2007 , 23(5):513.
[ 4] 蒙毅.高效液相色谱法测定鹰不扑中齐墩果酸的含量[ J] .中国中
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[ 5] 靳学海.HPLC法测定肝速康胶囊中齐墩果酸的含量[ J] .中国药
事 , 2007 , 21(12):995.
(收稿日期:2008-10-21)
50 云 南 中 医 中 药 杂 志　　　　　　　　　　2009 年第 30 卷第 3 期
Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica
Vol.30.N o.3 (General No.189) Marcg , 2009
Main Content
Clinical Observation on the Effect of Telbivudine Combined with Kushenin on the Treatment on HBeAg Positive Chronic　　Hepatitis B Patients CHEN Li , GENG Gao-Pu , ZHANG Jin-Liang , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Content Determination of Oleanolic Acid in Rhizoma PanzcisMajoris of Dif ferent Areas by HPLC　　 XU Yin-feng , ZHANG Xiao-nan , GAO Li⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Nootropic Effect of DengYin Nao Tong Capsule on AgingMice　　 LI Te , YANG Hui , ZH ANG Song , et al⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Study on Quality Standard of Wei Shu San　　 QI Hong , LIU Chuan-tong⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯
Clinical Observation on the Effect of Telbivudine Combined with Kushenin
on the Treatment on HBeAg Positive Chronic Hepatitis B Patients
CH EN Li , GENG Gao-Pu , ZHANG Jin-Liang , et. al(Depar tment of Live r and Gall , Ruikang H ospital affiliated to Guangxi Univer sity of T r aditional Chinese Medicine , Nanning , 530011)
Abstract:Objective:To observe the effect o f Telbivudine combined with Kushenin on the treatment on chronic hepa titis B patients.
Methods:All selected chronic hepatitis B patients were randomly divided into one Telbivudine trea tment group(g roup A)and one
combination trea tment g roup(group B).Group A w as given 600mg of Telbivudine once a day fo r 48 w eeks.Group B w as given w ith
0.2g of Kushenin three times a day be sides the same dosage of Telbivudine as Group A for 48 weeks.The liver function indicato rs ,
HBV-DNA nega tiv e, HBeAg negative conver sion rate and HBeAg se rum conver sion rate of the tw o g roups w ere observed and
compared.Results:In G roup A , the H BV-DNA negative conver sion ra te , HBeAg nega tive conversion rate and HBeAg serum
conver sion rate were 46.9%、21.9% and 12.5% respectively after 24 weeks , but the HBV-DNA negative conversion rate, HBeAg
nega tive conversion rate and H BeAg serum conver sion rate w ere and 65.5%、37.5% and 18.8% respectively af ter 48 w eeks. In Group
B , the HBV-DNA negative conversion rate , HBeAg negative conver sion rate and HBeAg serum conversion rate we re 65.6%、37.5%
and 18.8% respectively af ter 24 weeks , but the HBV-DNA negative conversion r ate , HBeAg negative conve rsion ra te and HBeAg
serum conver sion rate were 84.4%、56.3% and 40.6% respectively after 48 weeks.Conclusion:Telbivudine has an obvious effect on
the treatment of the chronic hepatitis B patients and ex tended hours will improve the effectiveness.When combined with Kushenin ,
Telbivudine shows a better effect than the single use of Telbivudine.
Key word:Telbivudine;Kushenin;hepa titis B
Content Determination of Oleanolic Acid in Rhizoma PanzcisMajoris of Dif ferent Areas by HPLC
XU Yin-feng , ZHANG Xiao-nan , GAO Li(Yunnan Institute of Materia Medica , Kunming , Yunnan , 650111)
Abstract:Objective:To e stablish a HPLC method for the content determination of oleanolic acid in Rhizoma Panzcis Majoris.
Methods:XTerra MS C18 column(4.6 mm×250 mm , 5μm)was used.Mobile phase w as me thano l-0.2%pho spho ric(88∶12), w ith
a flow rate of 1.0mL/min and 207nm detection wavelength at 30 ℃ column temperature.Results:The sample size of oleanolic acid
showed a good linea r relation with the integ ral value of peak a rea at the range of 1.00～ 10.04 μg(r2 =0.9999).The average recovery
rate of oleano lic acid was 98.41% with RSD=2.48%(n=6).The oleanolic acid of diffe rent o rigins had a different content , of w hich
the oleanolic acid in Rhizoma Panzcis Majo ris produced in Deqin area w as the highest w hile the o leanolic acid in Da yao and Lijiang areas
came nex t w ith similar content.Conclusion:This method is accurate with a high-deg ree separa tion and can be applied to control the
quality of the oleano lic acid in Rhizoma Panzcis Majo ris effectively.
Key word:Rhizoma Panzcis Majo ris;oleanolic acid;HPLC
Nootropic Effect of DengYin Nao Tong Capsule on AgingMice
LI Te , YANG Hui , ZH ANG Song , et al(Pharmacy Section , Yuxi Peoples Hospital , Yuxi , Yunnan , 653100)
Abstract:Objective:To study the noo tropic effect of DengYin NaoTong capsule on aging mice.Methods:An aging animal model
was made by injecting D-galactose in the rear of the eyeball of ICR mice.The mice were g rouped and infused into their stomaches w ith
different doses of DengYin Nao Tong capsule(0.5、1 、2g/kg)once a day for tw o weeks and then examined the effect of the drug on the
aging animal intellig ence. Results:Deng Yin NaoT ong capsule could improve the learning result of the mice in the experiment of
platfo rm-jumping and maze and strengthen their memory.Conclusions:Deng Yin Nao Tong capsule has a nootropic effect on the
expe rimental animal.
Key word:Deng Yin Nao Tong capsule;noo tropic effect;ag ing
Study on Quality Standard of Wei Shu San
QI Hong , LIU Chuan- to ng(The Peoples Hospital o f Shimen County , Shimen , Hunan , 415300)
Abstract:Objective:To establish a quality standard for Wei Shu San.Methods:TLC was used to differentiate Radix Notoginseng
and Radix G lycy rrhizae.The content of gly cy rrhizinate in Wei Shu San w as determined by HPLC.Results:TLC could obviously de tect
No to ginseng and G lycy rrhizae.The content of gly cy rrhizinate showed a good linear relation.Regression equa tion was Y=805683.982X
+7559.569 , r=0.9997.The ave rage recovery rate of the ammonium gly cy rrhizinate was 99.23%, RSD was 0.52%.Conclusion:The
me thod is simple and accurate with a good reappea rance and can be used fo r the quality contro l of the g ranule s.
Key word:Wei Shu San;ammonium gly cy rrhizinate;HPLC;TLC