全 文 ： 收稿日期：2004-03-15
基金项目：浙江省自然科学基金项目（399277）资助
作者简介：蔡洁洁（1983-），女，浙江临海人，在读学士。

七子花不同花器官的愈伤组织诱导效应
蔡洁洁，徐冬青，章月琴
（浙江师范大学 生物科学系, 浙江 金华 321004）

摘 要： 以七子花的不同花器官（花萼、花瓣、花丝、花柱、花药及幼蕾）在MS + 6-BA 1.0mg/L + 2,4-D 0.6mg/L
培养基上进行培养。结果表明，在上述 6 种器官中，以幼蕾、花萼、花瓣为外植体具有较高的诱导率，且增
殖速度快。
关键词：七子花；花器官；愈伤组织诱导
中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2004)03-0034-03

The Effects of Different Flower Organs of Heptacodium miconioides on the
Callus Inducement
CAI Jie-jie, XU Dong-qing, ZHANG Yue-qin
(Department of Biological Science, Zhejiang Normal University, Jinhua 321004，Zhejiang China)

Abstract: Different flower organs (including calyx, petal, filament, style, anther and flower bud) of
Heptacodium miconioides were cultured on MS + 6-BA 1.0mg/L + 2,4-D 0.6mg/L medium for
callus inducement. The result showed that there was a higher inducement percentage when taking
flower bud, calyx and petal as explants, and the callus grew quickly.
Key words: Heptacodium miconioides; flower organ; callus inducement

七子花(Heptacodium miconioides)为七子花属落叶灌木或小乔木，属忍冬科的单种属植物，为我国
特有的二级濒危重点保护植物之一[1]。由于生境不断恶化，七子花种群逐渐变小，数量日益减少，分
布范围缩小[2]，因此，保护其种质资源已成为当务之急。
近年来，组织培养已被越来越广泛地用于种质资源保护，但七子花尚未有非常成功的报道。刘鹏
等[3]以七子花的越冬芽及嫩叶诱导愈伤组织，但所得愈伤组织易褐变，影响七子花组培的进一步研究。
基于上述现状，我们结合实际研究工作，并参考有关资料[4-7]，采用七子花不同的花器官为外植体，
对其愈伤组织的诱导进行研究，以期为七子花组培研究提供依据。
1 材料和方法
1.1 材料
于 2003年 8月 6日采集金华北山野生七子花，取其花萼、花瓣、幼蕾、花丝、花柱、花药 6种器
官作为外植体。
1.2 方法
1.2.1 幼蕾消毒及接种 将幼蕾连同花托用自来水冲洗干净，75%酒精消毒 1min，后用饱和 Ca(ClO)2
消毒 10min，再用无菌水冲洗 4～5次。将幼蕾从花托上取下，对半切开，接入培养基。
1.2.2 花瓣消毒及接种 将已成熟但未开放的花蕾，用自来水冲洗干净，75%酒精消毒 1min，后用饱和

2004,33(3):34-36.
Subtropical Plant Science
第 3期 蔡洁洁,等：七子花不同花器官的愈伤组织诱导效应 ﹒35﹒
Ca(ClO)2消毒 10min，无菌水冲洗 4～5次，将花瓣撕碎放入培养基。
1.2.3 花萼消毒及接种 将花托用自来水冲洗干净，75%酒精消毒 15～20s，后用 HgCl2消毒 10～12min，
再用无菌水冲洗 5次。用解剖刀将花托压碎，将萼片接入培养基。
1.2.4 花柱、花丝和花药的消毒及接种 将成熟未开放的花蕾用自来水冲洗干净，75%酒精消毒 10～
15s，后用 HgCl2消毒 10～12min。剥去花瓣，将完整的花柱、花丝及花药接入培养基。
1.3 培养基
在MS培养基中附加 2%蔗糖、0.8%琼脂的基础上，添加 1.0mg/L 6-BA和 0.6mg/L 2,4-D。调节 pH
值为 5.8～6.0，在 121℃，1kg/cm2压力下灭菌 20min。
1.4 培养条件
于 25℃下光照培养箱中暗培养。
2 结果与分析
2.1 不同外植体灭菌效果比较
由于花冠由薄壁细胞组成[8]，细胞通透性较强，较容易受重金属的毒害，故幼蕾和花瓣采用酒精
+Ca(ClO)2灭菌。此法对花瓣灭菌效果尚可（污染率为 24.4%），但对幼蕾污染率较高（50.0%）。因此，
幼蕾的灭菌方法还需进一步探索。
由于七子花的花萼为合生萼，且萼片内长有绒毛，采用渗透能力较强的酒精+HgCl2灭菌，效果仍
不理想，污染率为 40.0%。
花药、花丝和花柱的体积较
小，不易单独灭菌。我们经过反
复比较，采用连同花冠一起灭菌
的方法，灭菌后取下所需部分进
行接种。结果表明 (见表 1)，此
方法灭菌效果较佳。
2.2 不同花器官离体培养中的反应
2.2.1 幼蕾 幼蕾接入培养基中，7d后体积有不同程度的增大，呈半透明状。14～17d开始形成愈伤组
织，约 20d后愈伤组织开始增殖。愈伤组织增殖速度快，量多，颜色为白色，絮状，结构松散。
2.2.2 花瓣 花瓣接入培养基中，部分花瓣约 7d后体积有不同程度的增大，15d后形成愈伤组织。而其
中约 60%的外植体在形成少量的愈伤组织后，停止增殖，并逐渐褐化；部分花瓣于基部形成白色颗粒
状愈伤组织，能保持稳定的增殖。
2.2.3 花萼 花萼接入培养基中，逐渐变褐色。约 12d后，在其边缘部分出现白色颗粒状愈伤组织。愈
伤组织能保持稳定的增殖。
2.2.4 花药 花药接入培养基中，逐渐由黄色变成褐色，约 20d后才在少量的外植体中形成灰白色的愈
伤组织，约 60d后愈伤组织大量增殖。
2.2.5 花丝 将花丝由花蕾中撕下接入培养基后有不同程度的伸长、变粗，约 17d左右，于花丝上形成
少量愈伤组织，直到 40d左右才开始大量增殖。
2.2.6 花柱 将花柱由花蕾中撕下接入培养基，其中约 50%的柱头褐化，另外 50%的花柱有不同程度的
伸长，其中有一花柱，由 4mm伸长至 13mm，弯曲伸长于培养基中。但只有少量能形成愈伤组织，且
愈伤组织量少，呈灰黄色。
2.3 不同花器官对愈伤组织的诱导作用
2.3.1 对愈伤组织生长的影响 试验结果（表 2）表明，由幼蕾和花萼诱导的愈伤组织均能保持稳定的
增殖，而花瓣诱导的愈伤组织只有部分能保持稳定的增殖，其余部分褐化；增殖的速度以幼蕾最快，
花萼和花瓣次之；幼蕾和花萼产生的愈伤组织结构松散、柔软、潮湿，花萼产生的愈伤组织相对前两
表 1 七子花不同外植体的污染率
外植体 灭菌方法 接种数(块) 污染数(块) 污染率(%)
幼蕾 酒精 1min + Ca(ClO)21min 48 24 50.0
花瓣 酒精 1min + Ca(ClO)21min 45 11 24.4
花萼 酒精 15~20s、HgCl210~12min 50 20 40.0
花药 酒精 15~20s、HgCl210~12min 39 2 5.1
花丝 酒精 15~20s、HgCl210~12min 34 0 0
花柱 酒精 15~20s、HgCl210~12min 23 0 0
第 33卷 ﹒36﹒
者稍微致密，也较为柔
软、潮湿。产生的愈伤组
织均为白色。
花药和花丝在诱导
出愈伤组织以后，有一个
较长的过渡期，分别需经
过 60d和 40d才产生大量
的愈伤组织；但花药的诱
导率极低，仅为 5.12%。
愈伤组织为白色偏淡黄色，结构较为致密、柔软，表面干燥。
花柱在诱导出愈伤组织后不能大量增殖，愈伤组织量少，呈灰黄色。
2.3.2 对诱导率的影响
对表 2结果进行 X2独立性检验，结果表明，不同花器官对愈伤组织诱导存在极显著差异，表明以
幼蕾、花萼和花瓣进行愈伤组织诱导具有较高的增殖速度和质量。
3 讨 论
本研究结果表明，七子花不同的花器官都可用于愈伤组织诱导，且幼蕾、花萼和花瓣作外植体诱
导率高，增殖速度快，为七子花生物多样性保护提供了新的途径。与此同时，我们用花器官诱导的七
子花愈伤组织普遍较松软，结构松散，比较适用于悬浮细胞培养。
目前，在植物愈伤组织培养中，一般采用营养器官进行诱导，用花器官，尤其是用花柱来诱导愈
伤组织的研究较少。刘鹏等[3]以七子花越冬芽及嫩叶诱导愈伤组织取得成功，但所诱导的愈伤组织极
容易变褐，对其进一步深入研究不利。我们用花器官进行诱导，尤其用幼蕾、花萼和花瓣的诱导，产
生的愈伤组织不易变褐，能保持稳定增殖，对进一步的培养很有利。但与营养器官相比，花器官诱导
周期相对较长；赵军[9]等用西红花的花柱诱导愈伤组织，也发现诱导周期长。因此，从经济效率的角
度出发，如何提高花器官诱导七子花愈伤组织的速度，仍需进一步探索。
致 谢：本实验得到刘鹏教授和徐根娣高级实验师的指导，特此深表谢意！
参考文献：
[1] 国家环境保护局,等. 中国珍稀濒危保护植物名录(第1册)[M]. 北京: 科学出版社, 1987.
[2] 刘鹏,等. 七子花分布限制因子初探[J]. 世界元素医学, 2000,7(1): 106-107.
[3] 刘鹏,等. 七子花愈伤组织诱导初探[J]. 北京林业大学学报, 2001,11(6): 63-65.
[4] 朱广廉. 植物组织培养中外植体的灭菌[J]. 植物生理学通讯, 1996,32(6): 444-446.
[5] 王喆之,等. 灯笼果组织培养的研究[J]. 西北植物学报, 1991,11(1): 44-49.
[6] 张德华,等. 银杏组织培养研究. I.不同培养条件对银杏愈伤组织形成的影响[J]. 西北植物学报, 1994,14(6): 29-32.
[7] 罗紫娟. 银杏茎段的组织培养[J]. 植物生理学通讯, 1985,(1): 35-36.
[8] 陆时万,等. 植物学(上册,第二版) [M]. 北京: 高等教育出版社, 1991.
[9] 赵军,等. 西红花愈伤组织的诱导与花柱愈伤组织的继代、悬浮培养[J]. 四川大学学报(自然科学版), 2001,38(3):
421-424.

表 2 不同外植体对愈伤组织诱导和生长的影响
外植体 形成愈伤组织块数 未形成愈伤组织块数 诱导率(%) 愈伤组织形成速度
幼蕾 20 4 83.33 +++
花瓣 32 2 94.11 ++
花萼 20 10 66.67 ++
花药 2 35 5.40 +
花丝 21 13 61.76 +
花柱 6 17 26.09 －
注：+++为较快，++为快，+为较慢，－为极慢