全 文 ：文章编号:1673-2995(2009)06-0319-04 ·论　著 ·
大孔吸附树脂对珠子参叶总皂苷纯化工艺研究
梁　强 1 ,陆　钊 2＊ ,韩　青1 ,刘小虎 1 ,崔九成 1 ,贾浩洋 3　(1.陕西中医学院 ,陕西 咸阳　712046;2.吉林医药
学院药学院化学教研室 ,吉林 吉林　132013;3.吉林石化分公司电石厂 ,吉林 吉林　132022)
摘　要:目的　研究大孔吸附树脂分离纯化珠子参叶中总皂苷的工艺条件及参数。方法　以珠子参叶总皂苷
的吸附量和解析率为指标筛选大孔吸附树脂 ,并研究所选树脂分离纯化珠子叶参总皂苷的吸附与解吸特性 ,优
化纯化条件 。结果　饱和吸附量为 54.98mg/g,树脂量:上样药材量为 2∶3,上样浓度为 4.8 ～ 5.8 mg/mL,上
样液 pH值 6.0为佳;洗脱用 60%乙醇 16倍柱体积 ,收集 60%乙醇洗脱部分 。结论　HPD-100型大孔树脂对
珠子参叶总皂苷有较好的吸附与解析特性 ,适合用于珠子参叶总皂苷的分离与纯化。
关　键　词:珠子参叶总皂苷;人参皂苷 Rf1;大孔树脂
中图分类号:R28　　　文献标识码:A
StudiesonthepurificationprocessofleavesofRhizomaPanacisMajoris′to-
talsaponinsbymacroporousabsorbentresin
LIANGQiang1 , LUZhao2＊ , HANQing1 , LIUXiao-hu1 , CUIJiu-cheng1 , JIAHao-yang3　(1.ShaanxiUniversityof
ChineseMedicine, Shaanxi, Xianyang, 712046;2.DepartmentofChemistry, JilinMedicalColege, JilinCity, JilinProv-
ince, 132013;3.CalciumCarbideFactoryofPetroChina, JilinPetrochemicalCompanyLimited, JilinCity, JilinProv-
ince, 132022, China)
Abstract:Objective　TostudythepurificationconditionandparameteroftheleavesofRhizomaPanacisMajoris′
totalsaponinsbymacroporousabsorbentresin.Methods　AbsorbancequantityandanalysisrateofRhizomaPanacis
Majoris′totalsaponinswereusedasindicatorstosievemacroporousabsorbentresinandthecharacteristicsofadsorp-
tionanddesorptionofRhizomaPanacisMajoris′totalsaponinswasstudiedtooptimizepurificationcondition.Results
Saturationadsorptionquantity:54.98 mg/g, resinquantity:medicinalherbsontheamountofsample2∶3, concentra-
tionontheamountofsample4.8 ～ 5.8 mg/mL, 60% grainalcoholwasusedforelutionwash16 timesvolumeand
60% ofgrainalcoholelutionwashwascolected.Conclusion　HPD-100 macroporousresinshowedbetercharacter-
isticsofadsorptionanddesorptionandsuitableforpurificationofrhizomapanaoismajoris.
Keywords:theleavesofP.japonicusvarmajor′totalsaponins;GinsenosideRf1;macroporousresin;
　　珠子参叶是五加科植物珠子参羽叶三七干燥带
茎的叶 。珠子参叶分布广泛 ,具有抗炎作用[ 1-2] 、增强
免疫功能 、抗脑缺血[ 3] 、对血液和造血功能的影
响 [ 4] 、抗肿瘤作用 [ 5] 、肝损伤保护作用等多种药理活
性 。开发利用珠子参叶资源成为一项很有意义的工
作 ,自 1984年以来 ,从珠子参叶中得到人参苷 、竹节
参苷 、三七苷 、珠子参苷等十几种皂苷类成分 。本实
通讯作者:陆　钊(1972-),男(满族),讲师 ,本科.
作者简介:梁　强(1985-),男(汉族),在读硕士.
验采用大孔吸附树脂纯化珠子参叶总皂苷 ,以总皂苷
含量 、吸附量和解析率为考察指标筛选大孔吸附树
脂 ,考察上样浓度 、水洗体积 、醇洗浓度 、醇洗体积等
参数 ,优化纯化条件。
1　材料及仪器
　　珠子参叶药材(购于陕西宁强县 ,经陕西中医学
院生药教研室雷国莲教授鉴定为珠子参的干燥带茎
叶);大孔吸附树脂(河北沧州远威化工有限公司);
—319—第 30卷　第 6期2009年 12月 　　吉　林　医　药　学　院　学　报Journal　of　Jilin　Medical　Colege　　Vol.30　No.6Dec.2009 　　
人参皂苷 Rf1对照品(珠子参叶化学分离中得到 ,含
量 95%);乙醇 、正丁醇 、高氯酸 、冰醋酸 、甲醇 、香草
醛等试剂均为分析纯 。
UV-1102型紫外 -可见分光光度计(上海天美科
学仪器有限公司);萨多利斯 GB204-电子天平 (瑞
典);SB-3200D超声波清洗机(上海新芝生物技术研
究所)。
2　实验方法与结果
2.1　对照品的选择
　　对照品为化学成分研究中分离出的化合物 ,经鉴
定为人参皂苷 Rf1 ,经高效液相确定含量达到 95%。
2.2　对照品溶液的制备
　　精密称取人参皂苷 Rf1对照品 10.6 mg于 50 mL
容量瓶 ,以甲醇溶解定容 ,配制成 0.212 mg/mL的人
参皂苷 Rf1甲醇溶液作为对照品溶液。
2.3　测定波长的选择及测定方法
　　移取样品溶液 0.1mL于 25mL容量瓶中 ,挥干 ,
精密加入 5%香草醛 -冰醋酸溶液 0.2 mL和高氯酸
0.8mL,摇匀 , 70 ℃水浴加热 20 min,流水冷却至室
温 ,精密加入甲醇 5 mL,摇匀 ,随行试剂做空白 , 用
UV1102紫外光度计在 400 ～ 700 nm范围做全程扫
描 ,得 λmax=550nm,同法对人参皂苷 Rf1进行测定 ,
结果相同 ,故选择 550nm为测定波长。
2.4　标准曲线的绘制
　　精密吸取人参皂苷 Rf1对照品溶液(对照品浓度
0.212 mg/mL)0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4、2.8、
3.2mL分别于 10 mL具塞磨口试管中 ,挥干 ,精密加
入 5%香草醛-冰醋酸溶液 0.2 mL和高氯酸 0.8 mL,
摇匀 , 70℃水浴加热 20 min,流水冷却至室温 ,精密
加入甲醇 5mL,摇匀 ,随行试剂做空白 ,于 550 nm处
比色测定吸光度 A,以人参皂苷 Rf1浓度为横坐标
(X),吸光度(Abs)为纵坐标(Y)绘制标准曲线 。人
参皂苷 Rf1在 0.071 ～ 0.113 mg/mL范围内呈良好线
性关系 ,得回归方程 Y=0.004 5 +8.878 4X, r=
0.998 0(n=9),其中 X=吸取对照品溶液体积 ×对
照品溶液浓度 /(香草醛 -冰醋酸溶液 0.2 mL+高氯
酸 0.8mL+甲醇 5mL)。
3　珠子参总皂苷纯化工艺考察
3.1　树脂预处理
　　将层析柱清洗 ,排净柱内水分 ,加入 95%乙醇 ,
将新树脂投入柱中 ,浸泡 24h,用 95%乙醇以 2BV/h
的流速通过树脂层 ,直至流出液 1mL加 4mL蒸馏水
不呈白色混浊为止 ,然后用蒸馏水以同样流速洗至无
醇味。
3.2　样品溶液制备
　　称取珠子参叶 160 g,按照珠子参总皂苷提取工
艺研究中优选出的最佳乙醇回流提取工艺提取 ,提取
液过滤 、减压回收乙醇 ,浓缩至无醇味 ,以蒸馏水稀释
至 1 000 mL。
3.3　吸附树脂的筛选
　　不同吸附树脂对珠子参叶总皂苷的静态吸附量
实验:称取已处理好的树脂 (HPD-100, HPD-100A,
HPD-300, ywD01G3 , D101)各 2g,精密吸取样品溶液
20 mL,置 100 mL锥形瓶中 ,摇匀 ,将树脂投入其中 ,
静置 24 h,使其充分吸附 ,精密移取上清液 1 mL,定
容至 10mL,准确移取 0.2 mL,按前述方法测定吸收
值并计算皂苷量。饱和吸附量(mg/g)=(原液皂苷
量 -吸附后皂苷量)/树脂重量(mg/g),结果不同吸附
树脂对珠子参叶总皂苷的静态吸附量(mg/g)HPD-
100:54.98, HPD-300:49.35, HPD-100A:51.5,
ywD01G3:46.97, D101:50.31。
不同吸附树脂对珠子参叶总皂苷静态洗脱性能
考察实验:将已吸附饱和的树脂滤出 ,于滤纸上吸干
样液 ,精密加入 60%乙醇 30 mL于锥形瓶中 ,振摇
30 s/10 min,持续 2 h,静置后 ,精密移取 0.1 mL,按
前述方法测定吸收值并计算皂苷量 。洗脱率(%)=
洗脱皂苷量 /吸附皂苷量 ×100%,结果不同吸附树脂
对珠子参叶总皂苷的静态洗脱率(%)HPD-100:82,
HPD-300:76 , HPD-100A:63, ywD01G3:81 , D101:76。
从以上结果可以看出 ,无论是饱和吸附量还是洗
脱率 , HPD-100均表现出了最佳性能 , 故选择 HPD-
100型大孔吸附树脂对珠子参叶总皂苷进行纯化实
验 。
3.4　样品溶液浓度对吸附的影响
　　称取已处理好的大孔吸附树脂 5份(5 g/份),湿
法装柱 ,蒸馏水冲洗至无醇味 ,精密移取 5份上样液
(50 mL/份),分别加入 0 mL、10 mL、20 mL、30 mL、
40 mL水 ,混匀后 ,上柱 ,以 2 BV/h的流速过柱 ,过柱
液定容至 500 mL容量瓶 ,移取 0.5 mL,按前述方法
测定吸收值并计算皂苷量 ,结果见表 1。浓度是影响
大孔树脂吸附纯化效果的重要因素 ,上样液浓度越
大 ,大孔吸附树脂吸附皂苷量越多 ,由表 1结果可知 ,
—320— 吉林医药学院学报　2009年 12月　第 30卷
珠子参叶水液上样浓度保持在 4.8 ～ 5.8 mg/mL最
好 。
表 1　浓度对吸附的影响结果
原溶液浓度
(mg/mL)
吸附后浓度
(mg/mL)
吸附量
(mg)
泄漏量
(mg)
5.827 2 0.704 770 256.121 5 35.238 52
4.856 0 0.736 449 254.537 6 36.822 43
4.162 3 1.106 027 236.058 6 55.301 36
3.642 0 0.968 755 242.922 2 48.437 76
3.237 3 0.831 483 249.785 8 41.574 15
3.5　样品溶液 pH值对吸附的影响
　　精密移取样品溶液 20mL(4份),分别置 100 mL
锥形瓶中 ,用 5% HCl及 5% NaOH分别调节 pH值
为:4、5、6、7。精密称取已处理好的 HPD-100干树脂
2 g,投入样液中 ,振摇 30 min,静置 12 h,充分吸附 ,
过滤 、浓缩 、定容至 20 mL,精密移取 0.2mL,按前述
方法测 定 吸 收 值 并计 算 皂 苷 量 , 总 皂 苷 量
11.654 4mg,饱和吸附量(mg/g)分别为:4.170868、
4.170868、4.514048、4.276462。
3.6　泄漏曲线的绘制
　　称取处理过的 HPD-100大孔树脂 5 g,湿法装
柱 ,用水冲洗至无醇味 ,上样 , 10 mL/份 ,薄层检测流
出液 , 直至有大量泄漏为止 , 每份流出液定容至
25 mL,精密移取 0.2 mL,按前述方法测定吸收值并
计算皂苷量 ,结果见表 2。从表中可以看出 ,从第 5
份开始有大量泄漏 ,树脂 5 g, 50mL上样液折合药材
8 g,因此树脂∶药材以 2∶3较为合适 。
表 2　动态吸附及泄漏结果
样品号 泄漏皂苷量(mg) 累计泄漏皂苷量(mg)
1 - -
2 - -
3 154 154
4 152 306
5 170 334
6 178 476
7 185 661
3.7　洗脱条件选择
　　洗脱剂的选择:称取 HPD-100大孔树脂 5g, 以
95%乙醇湿法装柱 ,用蒸馏水冲洗至无醇味。精密量
取上样液 60 mL, 上样 ,水洗 50 mL,然后以 20%、
40%、60%、70%、80%乙醇分别洗脱 25 mL,检测洗
脱液 ,结果水及不同浓度乙醇洗脱洗脱皂苷量(mg)
分别为:2.051 6、 2.477 8、 31.795 4、 65.970 3、
13.146 6、0.558 0。实验结果表明 ,皂苷比较容易用
醇水洗脱 , 60%乙醇对珠子参叶皂苷的洗脱能力最
强 ,因此确定采用 60%乙醇洗脱 。
洗脱剂用量的选择:称取已处理好的 HPD-100
大孔吸附树脂 3g,蒸馏水充分溶胀 ,装柱 ,精密移取
100 mL上样液 ,以 2 BV/h速度上柱 ,用 50 mL蒸馏
水快速洗去树脂表面残留的药液 ,按照优选出的水洗
除杂工艺 , 60 mL蒸馏水洗除杂 ,用 60%乙醇洗脱 ,每
份 25 mL,浓缩定容至 25mL,移取 0.2mL,按含量测
定法测定吸收度 ,计算总皂苷量 。结果不同用量洗脱
剂洗脱皂苷量 (mg)分别为 66.057 0、 15.835 5、
5.687 1、0.307 3、0.007 4、0。实验结果表明 ,样品 5
中含少量有效成分 ,样品 6中几乎不含有效成分 ,所
以 60%乙醇的用量为 50 mL即可 ,即 16倍柱体积 ,
因此 ,确定洗脱乙醇的用量为 16倍柱体积。
3.6　树脂重复利用次数考察
　　取 5份上样液(100 mL/份),按以上优选工艺进
行操作。洗脱液中的皂苷量和浸膏量结果见表 3。
实验结果表明 ,树脂重复使用 5次时 ,珠子参叶总皂
苷依然能够达到要求 ,因此使用周期为 5次 。
表 3　树脂重复利用次数考察
洗脱次数 浸膏量(g) 皂苷量(mg) 皂苷含量(%)
1 0.3044 132.5408 43.54
2 0.2568 108.3810 42.20
3 0.2500 107.3673 42.95
4 0.2375 115.1390 48.48
5 0.2438 111.9019 49.18
综上 ,本实验以人参皂苷 Rf1含量计总皂苷含量
为考察指标 ,采用新纯化技术大孔吸附树脂纯化总皂
苷 ,考察了纯化工艺参数 ,选择 HPD-100型大孔吸附
树脂作为上柱树脂 ,饱和吸附量为 54.98 mg/g,树脂
量:上样药材量为 2∶3,上样浓度为 4.8 ～ 5.8 mg/
mL,上样液 pH值 6.0为佳;洗脱用 60%乙醇 16倍柱
体积 ,收集 60%乙醇洗脱部分。本法为大量生产提
供了一定理论依据 ,仅使用纯净水和乙醇为洗脱试
剂 ,溶剂构成简单 ,节省了成本 ,药材前处理速度加
快 ,没有对药材引入二次污染 ,具有操作环境和条件
—321—第 6期　梁　强 ,等.大孔吸附树脂对珠子参叶总皂苷纯化工艺研究
易于实现 ,节省电热能源等优点 。
参考文献:
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实验研究 [ J] .时珍国医国药 , 2004, 15(8):465-466.
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的研究 [ J] .时珍国医国药 , 2005, 16(10):F0003-F0004.
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胞凋亡效应及机制研究 [ J] .肿瘤 , 2006, 26(2):144-
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(收稿日期:2009-09-23)　　
文章编号:1673-2995(2009)06-0322-03 ·论　著 ·
被动吸烟大鼠肺组织超微结构的变化
薛鹏杰 1 ,方　青 2 ,姜艳霞 2 ,孙路阳 2 ,曹慧玲 2＊　(1.四平市神农医院 ,吉林 四平　136000;2.吉林医药学院 ,吉
林 吉林　132013)
摘　要:目的　观察被动吸烟大鼠肺组织超微结构的变化。方法　Waster大鼠 36只 ,雌雄各半 ,分为 3组:对
照组 、低剂量被动吸烟组 、高剂量被动吸烟组 ,每组 12只 。每天被动吸烟 2次 ,每次 2 h,共 35 d。结果　随着
被动吸烟剂量的增大肺泡壁越宽厚;炎细胞浸润多;Ⅰ型肺泡细胞核不规则 ,核基质和胞质致密 ,细胞器扩张;
Ⅱ型肺泡细胞游离面微绒毛减少 ,核基质和胞质致密 ,空泡结构增多;肺泡内可见巨噬细胞。结论　被动吸入
的烟雾越多 ,肺泡超微结构损害越大 。
关　键　词:被动吸烟;肺组织;超微结构
中图分类号:R364.3　　　文献标识码:A
Correlationbetweensmokeexposureandultra-structuralchangesofpulmo-
narytissue
XUEPeng-jie1 , FANGQing2 , JIANGYan-xia2 , SUNLu-yang2 , CAOHui-ling2＊　(1.ShennongHospital, Siping, Ji-
linProvince, 136000;2.JilinMedcialColege, JilinCity, JilinProvince, 132013, China)
Abstract:Objective　Toobservetheultra-structuralchangesofthetissuesfromtheratsexposedtosmoke.Meth-
ods　36 Wasterratsweredividedonaverageintothreegroups:controlgroup, lowdoseexposedgroup, highdoseex-
posedgroup;femaleandmalewere50∶50andwereseparatedinto3diferentgroups, 12eachgroup).Theywereex-
posedtosmokefor35days, 2timesperdayand2hourspertime.Results　Thehighersmokeexposuredosewas, the
widerandthickeralveolarwalswere;theinflammatoryinfiltrationincreased;type-Ⅰalveolarcelnucleuswasiregular
withpykno-matrixandcytoplasm, celularorgansdilated;lib-surfaceoftype-Ⅱ alveolarcelhaddecreasedmicrovili,
phkno-marixandcytoplasm, vacuoleincreased;macrophageswasthusclearinalveoli.Conclusion　Thehigher
smokeexposuredosewas, thegreaterdamagepulmonarytissuegot.
Keywords:mokeexposure;pulmonarytissue;ultra-structure
通讯作者:曹慧玲(1959-),女(汉族),教授 ,本科.
作者简介:薛鹏杰(1966-),男(汉族),主治医师 ,本科.
　　香烟燃烧过程中产生的一氧化碳 、甲醛等有毒物
质可通过被动吸烟危害人群健康 ,引起头疼 、眩晕 、恶
—322— 第 30卷　第 6期2009年 12月 　　吉　林　医　药　学　院　学　报Journal　of　Jilin　Medical　Colege　　Vol.30　No.6Dec.2009