全 文 ：4　讨论
肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance ,
MDR)是指肿瘤细胞组织对多种化学结构完全不同 ,
作用机理各异的抗肿瘤细胞药物 ,具有交叉耐受的性
质 ,被确认是多种肿瘤化疗失败的主要原因[ 2] 。人类
基因组中存在两个 MDR 基因 ,即 mdr1 和 mdr2 基
因 ,研究表明只有 mdr1 基因的表达水平与人体肿瘤
细胞耐药有关[ 2] 。MDR的发生 ,主要以肿瘤细胞多
药耐药 mdr-1基因表达的膜糖粘蛋白 P170过度表达为
表现(经典多药耐药性)[ 3] ,耐药 mdr-1 基因引起细胞
膜糖粘蛋白 P170的过度表达 ,可加速化疗药物经跨膜
转运排出细胞从而阻止药物进入细胞核 ,使化疗药物
不能发挥细胞毒性作用 ,产生 P 170介导的 MDR。
细胞凋亡(apoptosis)又称程序性细胞死亡(pro-
g rammed cell death ,PCD),是机体为维护内环境的稳
定 ,通过基因调控而使细胞自动消亡的过程 。细胞凋
亡信号传导途径的研究 ,近年来引人注目的是能诱导
死亡信号的细胞膜受体分子 Fas 蛋白及其配体分子
FasL 与参与其信号途径调控的许多细胞内外因子共
同组成的 Fas系统 。Fas表达于多种肿瘤细胞 ,在不
同组织类型肿瘤细胞中的表达具有明显的异质性[ 4] 。
苦参碱是豆科槐属植物苦豆子中提取物苦参中一
种主要成分 ,实验观察到苦参碱能抑制小鼠 S180肉瘤
细胞生长[ 5] 。我们模拟临床 PFC 化疗方案 ,诱导小鼠
S180细胞表达产生多药耐药性 ,观察苦参碱体内给药对
肿瘤 mdr1细胞基因表达产物 P170 、细胞凋亡率及相关
生物活性物质细胞凋亡因子 Fas 、Trail和细胞黏附因
子 CD 54表达的逆转作用 ,实验结果提示:苦参碱通过
逆转 mdr1基因表达产物 P170的过度表达 ,减少化疗药
物经跨膜转运排出细胞 ,从而增加细胞内药物浓度 ,使
药物发挥细胞毒性作用 ,减少 MDR的产生;通过促进
细胞凋亡相关因子 Fas和 Trail 的表达 ,启动细胞程
序性死亡 ,促进 MDR细胞凋亡;并且明显降低 MDR
细胞的黏附因子 CD54的表达 ,阻滞 MDR细胞的黏附
性转移。通过上述 3个方面 ,说明了苦参碱逆转MDR
的作用及作用机制 ,为临床应用苦参碱干预肿瘤化疗
产生的多药耐药提供依据 。
参考文献:
[ 1] 　尹格平 ,顾清 ,陈铭 ,等.腹水型 S 180细胞系获得性 MDR表达鼠模
型的建立[ J] .上海免疫学杂志 , 2001 , 5(21):282 ～ 285.
[ 2] 　姜文锋 ,徐功利.肿瘤细胞耐药表型及其机制的研究进展[ J] .山
东医药 2001 , 41(5):56 ～ 57.
[ 3] 　Got tesman M M , Pastan I.Biochemist ry of m ult i-d rug resistance
m ecli tated by the mul ti-drug t ran sporter[ J] .Annu Rev Biochem ,
1993 , 62:385 ～ 427.
[ 4] 　Wong GH , Groedel DV.Fasan tigen and p55 TNF recep tor signal
apoptosis th ningh dis tinet pathw ays [ J] .J Imm unol , 1994 , 152
(4):1751.
[ 5] 　李先荣 ,刘德宽 ,张炎炎 ,等.苦参生物碱抗小鼠移植性肿瘤的实
验研究[ J] .中西医结合杂志 , 1982 , 2:42.
[ 收稿日期] 2004-06-10
[基金项目] 湖北省自然科学基金(编号:2001ABB134)　[作者简介] 钱骏 ,男 ,博士 ,副教授 ,电话:027-85726432 , E-m ail:qianjun h cc@yahoo.com
白芨应用于大鼠实验性肝细胞癌介入治疗的研究
钱骏1 ,郑传胜1 ,吴汉平1 , Daryusch Vossoughi2 ,Elsie Oppermann2 , Vogl Thomas 2 ,冯敢生1 　(1.华中科技大学同
济医学院附属协和医院 ,湖北 武汉 430022;2.法兰克福大学附属医院 ,德国 法兰克福 60590)
[ 摘要] 　目的:比较白芨和免疫反应调节剂 、抗血管生成药物在介入经肝动脉化疗栓塞术(t ransar terial chemoembo lization , TACE)
治疗 ACI 大鼠肝细胞癌实验中的疗效。方法:在 70 只♂ACI 大鼠肝包膜下植入 Morris Hepatom 3924A 肝癌瘤块(2 mm3),移植
术后13 d进行磁共振(MRI)检查 ,测量肿瘤体积 V1 ,第14天时 , 经腹部切开术及胃十二指肠动脉逆行插管至肝动脉而采取以下介入
治疗方案:(A)丝裂霉素+碘油+肿瘤坏死因子(TNFα)+ 白介素-2(IL-2)(n=10);(B)丝裂霉素+碘油+链球菌提取物(OK-
432)+ IL-2(n=10);(C)丝裂霉素+碘油+烟曲霉素(T NP-470)(n=10);(D)丝裂霉素+碘油+血管内皮抑素+endo sta tin)(n=
10);(E)丝裂霉素+碘油+白芨(n=10);(F)丝裂霉素+碘油+白芨 +肝动脉结扎(n=10);(G)丝裂霉素+碘油(对照组 , n=
10)。 13 d后再次进行 MRI检查以确定肿瘤体积 V 2 变化 ,比较肝肿瘤体积生长率 V2/ V1 。结果:介入治疗后肿瘤体积与治疗前肿
瘤体积之比(V 2/ V 1)分别为 A 组7.30 、B 组6.53 、C 组4.01、D组7.78 、E组6.28、F组1.53、G组9.14。与对照组相比 ,采取 B 、C 、E、
F组的治疗方案能有效抑制肝肿瘤的生长(P<0.05), 而采取 A 、D组的治疗方案在肿瘤生长率方面与对照组差异无显著性(P >
0.05)。其中 , F 组的疗效最佳且未见肝内肿瘤转移。结论:白芨作为肝动脉栓塞剂并结合化疗药和肝动脉结扎术能明显抑制肝细
胞癌的生长 ,具有广泛临床应用的价值。
[ 关键词] 　癌;肝细胞;白芨;介入治疗
[中图分类号] R285.2　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2005)05-0391-04
·391·中国医院药学杂志 2005年第 25卷第 5期 Chin H osp Pharm J , 2005 May , Vol 25 , No.5
Application of Bletilla striata in the interventional therapy of hepatocellular carcinoma:a compara-
tive study in ACI rats
QIAN Jun1 , ZHENG Chuan-sheng1 , WU Han-ping 1 , DARYUSCH V ossoughi2 , ELSIE Oppermann2 , VOGL
Thomas2 ,FENG Gan-sheng1(1.Depar tment of Radiolog y , Xiehe Hospital , Tong ji Medical Colleg e ,H uazhong Unive rsity of Sci-
ence and Techno log y , Hubei Wuhan 430022 , China;2.Depar tment of Radio lo gy , F rankfur t Univ ersity Hospital , F rankfurt 60590 ,
Germany)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To compare the effec ts of B letilla striata and biological re sponse modifier(BRM)/ antiang io genesis drug
in the inte rventional ther apy o f hepatocellular car cinoma(HCC)in ACI rats.METHODS　Subcapsula r implantation of a solid Mo rris
Hepatom 3924A(2 mm3)in the liver wa s ca rried out in 70 male ACI rats.Tumor vo lume(V1)w as measured by magne tic r esonance
imaging(M RI)at day 13 after im planta tion.The follow ing differ ent agents of interventional trea tment wer e injected after ret rog rade
ca theteriza tion via gastr oduodenal a rtery (day 14)namely:TACE(T ransa rterial chemoembolization , mitomycin +lipiodol) + Im-
munotherapy(g roup A:TNFα+ IL-2 , g roup B:OK-432+IL-2), TACE + antiangio genesis the rapy (g roup C:TNP-470 , g roup D:
endostatin), TACE + Chinese medicinal the rapy(g roup E:B letilla striata , g roup F:B letil la striata +lig ation o f hepatic arter y)and
TACE a lone in g r oup G(as contro l gr oup).Tumor volume(V 2)was assessed by MRI(day 13 af te r treatment)and the mean tumor
gr ow th ratio (mean V2/ V1)was calcula ted.RESULTS　The mean ratio of V2/ V1 were 7.30 in gr oup A , 6.53 in g roup B , 4.01 in
gr oup C , 7.78 in g roup D , 6.28 in g roup E , 1.53 in g roup F and 9.14 in g roup G , respectively.Compared w ith the contro l g roup
(g roup C), g r oup B , C , E , F showed significant inhibition of tumo r gr ow th(P<0.05), while g roup A , D did no t(P>0.05).Group F
obtained the be st ther apeutic effect in our experiments;also no deve lopment of intr ahepatic me ta sta ses w as detected in this g roup.
CONCLUSION　The combination of TACE and ar terial administ ration of Bletilla striata plus ligation o f hepatic a rtery is mo re effec-
tive than o ther therapeutic pro to cols in the trea tment o f HCC in rats.
KEY WORDS:carcinoma , hepatocy te;bletilla striata;interv entional therapy
　　肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一 ,多年来 ,我们
对中药白芨介入治疗肝癌进行了系统的实验和临床应
用研究并证实 ,白芨具有阻断肝癌供血动脉及其侧枝
循环的功效 ,能有效抑制肝癌的生长和复发[ 1] 。但至
今为止 ,在临床上尚未能找到白芨介入治疗肝癌的最
佳方案 ,并缺乏足够的临床应用白芨赖以为基础的实
验研究 。另一方面 ,近年来 ,生物免疫治疗 、抗肿瘤血
管生成治疗日益成熟并逐渐步入临床 ,它们是否能与
介入治疗相结合运用及其疗效如何尤令人关注。
本研究旨在通过建立肝细胞癌大鼠模型 ,在此动
物模型上考察以白芨微粒作肝动脉栓塞剂 、与抗血管
生成药物 、免疫反应调节剂相比介入治疗大鼠肝细胞
癌的疗效 。
1　材料
肝细胞癌瘤株(Morris Hepatom 3924A ,德国海
德堡癌症研究中心);TNFα(德国 Sigma 公司);I L-2
(德国 Sigma公司);OK-432(日本 Chugai Pharmaceu-
tical Co.);TN P-470(日本 Takeda 公司);endo statin
(德国 Calbiochem 公司);白芨微粒(华中科技大学附
属同济医学院协和医院制备 ,产地:湖北省咸宁 ,药用
部位:块茎 ,有效成分:薜苈果多糖 ,粒径:45μm);ACI
大鼠(体重:210 ～ 250 g , ♂,德国 Harlan动物公司)。
2　方法
2.1　肝细胞癌同种移植术　第 1天时 ,在 1只 ACI
大鼠胁部皮下注入 5 ×106肿瘤细胞 , 14 d后长出直径
约1.5 cm的肿瘤结节 ,切取2 mm 3新鲜瘤块并植入另
外 70只大鼠肝包膜下。
2.2　术前磁共振(MRI)检查　第 27天时 ,选择磁共
振仪测量肿瘤术前体积。选择手部小线圈进行无间距
横断面扫描 ,在 T 2 加权像上利用公式 V =0.5×d1 ×
d2
2计算肿瘤体积(d1 :肿瘤最大径 , d2 :与之呈垂直方
向的最小径)。
2.3　介入治疗　第 28天时 ,再一次作大鼠正中腹切
开术 ,经胃十二指肠动脉逆行插管至肝动脉并注药。
另外 ,采取动脉结扎方案时 ,于 TACE后用丝线结扎
肝固有动脉以代替临床上明胶海绵栓塞术。实验所采
用的介入治疗方案为 A 组:经肝动脉注入0 .1 mg丝裂
霉素 +0.1 mL碘油 +7 .5 μg TNFα+ IL-2(5 ×103
IU);B组:经肝动脉注入 0.1 mg丝裂霉素 +0 .1 mL
碘油+0 .05 mg OK-432 +IL-2(5 ×103 IU);C 组:经
肝动脉注入0.1 mg丝裂霉素 +0.1 mL碘油+5.0 mg
TNP-470;D 组:经肝动脉注入 0.1 mg丝裂霉素 +
0.1 mL碘油+0.8 mg endosta tin;E 组:经肝动脉注
入0.1 mg丝裂霉素+0.1 mL碘油+1.0 mg白芨;F
组:经肝动脉注入0.1 mg丝裂霉素 +0.1 mL碘油+
1.0 mg白芨 ,然后结扎肝动脉;G组(对照组 , n =10):
经肝动脉注入0 .1 mg丝裂霉素+0.1 mL碘油。
2.4　术后 MRI 检查　采取各介入治疗方案13 d后 ,
·392· 中国医院药学杂志 2005年第 25卷第 5期 Chin Hosp Pharm J , 2005 May , Vol 25 , No.5
再次行MRI检查 ,测得肝肿瘤体积V2 。计算肿瘤治疗
前后的体积变化 V2/V 1 。
2.5　资料处理　采取 Dunnet ts t检验比较各治疗组
组与对照组平均 V2/V1 差异的显著性 ,采取 S tudent-
Neuman-Keuls检验比较各治疗组之间平均 V2/V1 差
异的显著性。
3　结果
排除麻醉以外 ,实验中所有动物均存活 ,肝癌移植
率为 100%, MRI检查均发现肿瘤 。介入治疗后肿瘤
体积与治疗前肿瘤体积之比(mean V2/V1)分别为 A
组7.30 ,B组6.53 、C组4.01 、D组7 .78 、E组6.28 、F 组
1.53 、G组(对照组)9.14。与对照组相比 ,采取 B 、C 、
E 、F 组的治疗方案能有效抑制肝肿瘤的生长(P <
0.05),而采取 A 、D 组的治疗方案在肿瘤生长率方面
与对照组比较差异无显著性(P >0.05)。其中 ,采取 F
组即丝裂霉素+碘油+白芨+肝动脉结扎的治疗措施
其疗效最佳且未见肝内肿瘤转移 ,而对照组的疗效最
差 ,见表 1。
表 1　采取不同介入治疗方案肝肿瘤体积的变化(mean V2/
V1 , n=70)
Tab 1　The changes of mean tumor volume ra tio(mean V2/ V1)
in diffe rent interventional therapeutic g r oups(n=70)
大鼠 A 组 B组 C组 D组 E组 F 组 G 组
1 5.98 8.79 3.55 8.22 6.48 0.86 5.63
2 9.84ab 7.33 4.38 7.72 5.70 1.46 9.51
3 7.97 5.24 5.61b 7.14 6.25 1.65 10.51b
4 6.77 5.59 3.01 5.49 7.89 1.39 7.74
5 9.96 6.06 3.87 6.29 7.80 1.66 8.64
6 5.38 7.81b 5.75b 9.67 7.48 1.69 8.20
7 8.49 5.37 3.67 8.98 5.57 0.90 8.37
8 6.02 5.47 3.72 10.01ab 6.83 1.95 8.54a
9 7.31 4.78 3.28 6.88 5.58 1.96 b 11.53
10 5.28 8.84 3.30 7.42 3.22 1.81 12.72a
注:a肝内肿瘤转移 , b肝肿瘤不完全性坏死
4　讨论
目前 ,经肝动脉化疗栓塞术(TACE)被公认为治
疗不可切除性中 、晚期肝癌的一种重要手段 ,其在抑制
肿瘤生长 、提高患者生存率等方面取得明显进展 ,但迄
今为止 ,其总体生存率和疗效仍欠佳 ,经 TACE 治疗
后肝功能 、免疫功能的下降和肿瘤侧枝循环的生成是
其中最主要的原因。
提高肝癌总体疗效依赖于综合治疗已成为共识。
近年来 ,局部免疫疗法和抗肿瘤血管生成疗法令人青
睐 ,部分药物已进入 3期临床试验用于治疗肝癌。有
关生物反应调节剂(BRM)肿瘤坏死因子α(TNFα)联
合碘油以及链球菌提取物(OK-432)联合肝动脉结扎
术的实验结果显示 ,综合免疫介入疗法可产生协同作
用 ,提高任一单一疗法的疗效 ,并克服经 TACE 治疗
后机体免疫功能下降的弊端[ 2 , 3] ,但尚缺乏有关 TNFα
和 OK-432联合 TACE 实验的报道 。本实验证明:运
用肝动脉注射 OK-432+IL-2联合 TACE疗法能有效
抑制肝肿瘤的生长 , TNF 与 OK-432 相比其疗效欠
佳。
抗肿瘤血管生成治疗因具有抑制肿瘤侧枝循环的
生成 、所需药量较小 、特异性良好 、不良反应少 、不易产
生耐性药等特点[ 4.5] 。其中 ,烟曲霉素(TNP-470)和血
管内皮抑素(endo statin)分别进入临床 3期和 2期试
验 ,它们与介入治疗联合应用具有强大的抗癌优势 ,一
方面能利用化学药物直接杀死肿瘤细胞 ,并利用栓塞
剂栓塞局部血管以减缓药物的清除 ,最大效能地发挥
抗肿瘤血管生成药物的作用 ,另一方面可大大增强切
断肿瘤灶血供和抑制肿瘤侧枝循环生成的作用[ 5.6] 。
本实验证明:经肝动脉灌注 TNP-470联合 TACE 治
疗具有较好的疗效 , 20%大鼠出现肿瘤不完全性坏死 ,
但 endostatin未能有效抑制肿瘤的生长 ,推测其原因
乃 endostatin需在一定量的生理盐水中溶解 ,使化疗
药和栓塞剂在一定程度上被稀释 ,其作用减弱 。目前
对其疗效尚不肯定 ,还需做进一步的深入研究 。
中药白芨是一种集“载体 、栓塞 、缓释和自身抗肿
瘤作用”于一体的较理想的外周性血管栓塞剂 ,具有阻
断肝癌供血动脉及其侧枝循环的功效 ,能有效抑制肝
癌的生长和复发[ 7] , 与传统的“碘油-化疗药-明胶海
绵”治疗法相比 ,能明显提高患者的生存率 ,在大肝癌 ,
经 TACE 治疗后患者 1 ,2 , 3年生存率分别为81.9%,
44.9 %,33.6%(白芨组)和 48.9%, 31.1 %和 16 .0%
(明胶海绵组)[ 7] 。本实验证明:白芨作为肝动脉栓塞
剂并结合化疗药和肝动脉结扎术能明显抑制肝细胞癌
的生长 ,其疗效在各试验组中最佳 。经此方案治疗后 ,
肝肿瘤体积仅增长1 .53倍 ,未见肝内肿瘤转移 ,动物对
白芨栓塞具有良好的耐受性。白芨作为外周性栓塞剂
结合中央性栓塞剂其介入治疗的疗效优于单纯外周性
栓塞 ,这对临床有效治疗肝癌病人具有重要的指导意
义。我们推测白芨作用的机理可能与白芨含有薜苈果
多糖而呈粘液性胶样物质 、易于缓慢渗透到肿瘤周围
血管而明显抑制肿瘤的侧枝循环有关 ,其优点是栓塞
肿瘤供血动脉和治疗作用时间较长 、但不至于引起侧
枝循环的生成[ 1] 。
中药白芨是一种安全 、有效的抗癌药物和肝动脉
栓塞剂 ,运用于动物实验治疗肝癌时 ,其疗效优于免疫
反应调节剂 、抗血管生成药物以及传统的单纯 TACE
治疗 。白芨介入治疗肝癌具有其优越性和广阔的发展
前途 。
参考文献:
[ 1] 　Qian J , Vossou ghi D ,Woitasch ek D , et a l .Combined t ran sarterial
chem oemboli zation and arterial administ ration of Bletill a st riata in
the t reatm ent of liver tumo r in rat s[ J] .World J ou rnal of Gast ro-
enterology , 2003 , 9(12):2676 ～ 2680.
[ 2] 　Watanabe D , Ueo H , Inoue H , et al .An ti tum or effect s of int raar-
t erial infusion of tumor necrosis factor/ lipiodol emulsion on hepat-
·393·中国医院药学杂志 2005年第 25卷第 5期 Chin H osp Pharm J , 2005 May , Vol 25 , No.5
ic tumo r in rab bit s[ J] .Oncology , 1995 , 52(1):76 ～ 81.
[ 3] 　Yoshida T ,S ak on M , Umeshi ta K , et a l .Appraisal of t rans arterial
im munoembolizat ion for hepatocellular carcinoma:a clinicopath o-
l ogic s tu dy[ J] .J Clin Gast roen terol , 2001 , 32(1):59 ～ 65.
[ 4] 　Qian J , Feng GS , Vogl T.Combined in terven tional th erapies of
h epatocel lular carcinoma[ J] .World Jou rn al of Gast roenterology ,
2003 , 9(9):1885 ～ 1891
[ 5] 　钱骏 ,冯敢生.原发性肝癌的综合介入治疗[ J] .中华肿瘤杂志 ,
2003 , 25(5):417 ～ 419.
[ 6] 　Westphal JR , Ruiter DJ , De Waal RM .Ant i-angiogenic t reatment
of human cancer:pit fall s and promises[ J] .Int J Cancer , 2000 , 86
(6):870 ～ 873.
[ 7] 　Zheng C , Feng G , Liang H .Blet illa st riata as a vascular emboliz-
ing agen t in in tervent ional treatment of primary hepatic carcinoma
[ J] .Chin M ed J , 1998 , 111(12):1060 ～ 1063.
[ 收稿日期] 2004-12-17
[基金项目] 国家自然科学基金资助课题(编号:39570820)　[ 作者简介] 杨红英 ,女 ,硕士 ,主管药师 ,电话:0755-25533018 , E-mail:sz jiayang@sohu .
com
褪黑素对谷氨酸所致大鼠神经细胞损伤及一氧化氮释放增加的影响
杨红英1 ,贾孟良1 ,李经才2 ,董淳1 　(1.深圳市人民医院 , 广东 深圳 518020;2.沈阳药科大学药理学研究室 , 辽宁 沈阳
110015)
[ 摘要] 　目的:研究褪黑素(melatonin;MT)对谷氨酸(L-g lutamate;L-Glu)引起的神经细胞损伤及一氧化氮释放增加的影响。 方
法:取乳大鼠的神经细胞进行原代培养 , 加入谷氨酸造成神经元损伤模型;分别以四甲基偶氮唑蓝比色(MT T)法测定细胞存活率 ,
Gre ss 法测定一氧化氮的释放量 , 通过这两种指标考察 M T 对谷氨酸神经毒性的对抗作用。结果:谷氨酸 500 μmol·L-1造成神经
细胞的 MT T 活性显著降低(P<0.05),同时一氧化氮释放量非常显著的增加(P<0.01);而 M T(10 -5 , 10-4 mo l·L-1)可使 MT T
活性显著增强(P< 0.05 , P<0.01), 同时亦明显抑制一氧化氮的释放(P<0.05)。结论:提示 M T 可通过抑制谷氨酸引起的一氧
化氮释放增加对抗其神经毒性 ,保护神经细胞免受损伤。
[ 关键词] 　褪黑素;神经细胞损伤;一氧化氮释放增加
[中图分类号] R977.1　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2005)05-0394-03
Effects of melatonin on the neuronal damage and the release of NO in cultured neurons induced by L-
glutamate
YANG Hong-y ing 1 , JIA Meng-liang1 , LI Jing-cai2 , DONG Chun1(1.Shenzhen people s ho spital , Guangdong Shenzhen
518020 , China;2.Chronopha rmacology Lab , Shenyang Pharmaceutical Univ ersity , Liaoning Shenyang 110015 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the effects o f melatonin(M T)on the neuronal damage and the release o f NO in cultured neurons
induced by L-g lutamate(L-Glu).METHODS　The co rtical neurons of new bo rn rats we re cultured ar tificially , then adding the L-g lu-
tama te 500 μmol·L -1 to make neuronal damage model;Cell viability wa s tested by MTT assay and the release of NO w ere de tected
by Gress assay in o rde r to study the inhibito ry effects of M T on the neuro tox icity of L-g lutamate.RESULTS　The L-g lutamate 500
μmol· L-1 could remarkedly reduce the M TT activ ity of neuron and increase the relea se of NO.MT(10-5 , 10-4 mol ·L -1)added
with L-g lutmmate could remarkedly increase the M TT activ ity of neur on and inhibit the release o f NO.CONCLUSION　It w as sug-
gested that M T could inhibit the neuro to xicity of L-glutama te and protect the neurons by inhibiting the relea se of NO induced by L-
glutama te.
KEY WORDS:melatonin;neurona l cell damage;nitric ox ide(No);anti-ag ing
　　褪黑素(MT)主要是由松果腺分泌的一种激素。
近年来的许多研究显示 ,M T 是一种天然的抗衰老物
质[ 1] 。已知衰老动物脑内兴奋性神经递质-谷氨酸的
含量升高 ,从而持续激活 N-甲基-D-天门冬氨酸受体
(NMDA受体),受体过度兴奋 ,产生大量自由基 ,导致
神经系统损伤 ,最终引起多方面衰老体征的出现[ 2] 。
另外 ,研究证明谷氨酸受体的持续激活和钙离子大量
内流所引起的谷氨酸的神经毒性 ,内源性 NO 参与了
这一过程[ 3] 。因此 ,抑制由谷氨酸导致的神经细胞
NO过量释放 ,有可能减轻兴奋性谷氨酸的神经毒性 ,
延缓动物机体衰老体征的出现 。本研究用谷氨酸造成
大鼠神经细胞损伤模型 ,分别以 M TT 法检测神经细
胞存活率 ,G re ss法测定 NO 释放量 ,观察 MT 对谷氨
酸所致神经细胞毒性的影响 ,探讨 MT 的抗衰老作用
机制 。
1　材料
721分光光度计(上海第三分析仪器厂);褪黑素
(MT ,美国 Sigma 公司 ,批号 25H0904);L-谷氨酸(上
·394· 中国医院药学杂志 2005年第 25卷第 5期 Chin Hosp Pharm J , 2005 May , Vol 25 , No.5