全 文 ：ChineseAgriculturalScienceBuletinVol.22No.22006February
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长寿花（Kalanchoeblossfeldiana）是景天科伽蓝菜
属的观叶和观花植物，又名寿星花、矮生伽蓝菜、圣诞
伽蓝菜[1]。长寿花，多年生肉质草本，花色有桃红、橙
红、大红、黄和紫等颜色[2]，是园林花卉市场中发展最
快的盆花之一。长寿花通常采用扦插繁殖，但使用扦插
法存在繁殖系数低和出苗不整齐等问题。而组织培养
以其繁殖系数高、繁殖周期短、成本较低、可周年进行
大规模生产等优点[3]，弥补了长寿花常规繁殖的不足。
而在组织培养中，诱导培养的外植体产生愈伤组织，使
其再分化产生幼小植物体是一项很重要的技术，绝大
多数培养的植物再生植株都是先经过愈伤组织阶
段[4]。
对于长寿花愈伤组织的诱导和植株再生研究，其
报道较少，仅陈利萍等[5]。而采用不同花色品种长寿花
离体培养研究，仅见花序离体培养研究和胚性愈伤组
织的诱导及胚状体再生研究[6,7]。试验则拟以北京植物
园从英国皇家植物园引进的一个红花的长寿花品种为
材料，以茎段和叶片为外植体，对红花长寿花愈伤组织
红花长寿花愈伤组织的诱导和植株再生研究
黄双龙 1,赖钟雄 1,2,林秀莲 1,林玉玲 1,万学锋 1,吴金寿 1,2,柯存祥 2
（1福建农林大学园艺植物生物工程研究所，福州350002；2福建农林大学园艺学院，福州350002）
摘 要:试验采用红花长寿花茎段和叶片作为外植体,在附加不同植物激素组合的培养基中对愈伤组
织的诱导和植株再生进行研究。结果表明:不带叶柄的叶片在MS+2,4-D1.0mg/L+BA0.5mg/L的培养
基上对愈伤组织的诱导和增殖效果最好;在 MS+BA0.25mg/L+2,4-D1.5mg/L+GA0.6mg/L的培养
基上有利于愈伤组织转绿分化;在 MS+NAA0.25mg/L+BA1.5mg/L+GA0.6mg/L的培养基上有利
于丛生芽诱导和增殖;在1/2MS+NAA0.3mg/L+IBA0.7mg/L培养基中生根效果最好。
关键词:红花长寿花;愈伤组织;植株再生
中图分类号:S681 文献标识码:A
CalusinductionandPlantRegenerationinKalanchoeBlossfeldianawithRedFlowers
HuangShuanglong1,LaiZhongxiong1,2,LinXiulian1,LinYuling1,
WanXuefeng1,WuJinshou1,2,KeCunxiang2
(1InstituteofHorticulturalBiotechnology,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002；
2ColegeofHorticulture,FujianAgricultureandForestryUniversity,Fuzhou350002)
Abstract:Thestemsectionsandtheleavesfromtheplantswereusedasexplantsandthecalusinduction
andplantregenerationwereconductedonthemediasupplementedwithdiferentplanthormonecombina-
tionsinKalanchoe blossfeldiana withredflowersinthisexperiment.Theobtainedresultsshowedthat
theMSmediumsupplementedwith1.0mg/L2,4-Dand0.5mg/LBAwasoptimalforthecalusinduction
andpropagationfromleaveswithoutleafstalks;theMSmediumsupplementedwith0.25mg/LBAand1.5
mg/L2,4-Dand0.6mg/LGAwasbeneficialtothediferentiationofgreencalus;andtheMSmedium
supplementedwith1.5mg/LBAand0.25mg/LNAAand0.6mg/LGAwaspropitioustotheinductionand
thepropagationofbudclusters;andthehighestpercentageofrootingwasobtainedonthe1/2MSmedium
adding0.3mg/LNAAand0.7mg/LIBA.
Keywords:Kalanchoeblossfeldianawithredflowers,Calus,Plantregeneration
基金项目:农业部948计划资助项目“植物保鲜相关基因的引进及其在亚热带园艺作物上的应用”（No.991029）。
第一作者简介:黄双龙，男，1982年出生，硕士生。研究方向：园林植物生物技术。通信地址：350002福建省福州金山福建农林大学园艺植物生物工程
研究所。Tel：0591-83789165，E-mail:dbldragon@163.com。
通讯作者:赖钟雄，男，1966年出生，博士，研究员，博士生导师。研究方向：园艺植物生物技术与遗传资源。E-mail:Laizx01@163.com。
收稿日期:2005-11-21，修回日期：2005-11-28。
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的诱导和植株再生进行探讨，为不同花色品种长寿花
组织培养及其工厂化生产提供借鉴和参考，也为长寿
花其他生物技术方面的研究奠定一定的基础[8]。
1材料与方法
1.1材料
试验材料于2004年2月取自北京植物园，品种为
红花长寿花（代号BJBG201）。在连续晴天3d以上、枝
条无露水时进行取样。
1.2方法
1.2.1外植体的消毒 从完整植株上剪取生长健壮、芽
体充实、洁净且无病虫害的枝条，剪成2~3cm长的带
腋芽和不带腋芽茎段，并剪下带叶柄和不带叶柄的叶
片，获得4种不同外植体。用自来水洗去灰尘和表面微
生物，再用洗衣粉液轻洗表面，流水漂洗30min左右，
沥干后置于干净的烧杯中备用。
在无菌操作台上将预处理过的外植体用 70%酒
精浸泡消毒30s，取出后放入0.1%HgCl2溶液中消毒
5min，然后用无菌水冲洗5~6次，获得无菌材料。
1.2.2培养基 愈伤组织诱导培养基：
01MS+2,4-D1.0+BA0.5（单位mg/L，下同）
02MS+NAA0.1+BA2.0
愈伤组织继代增殖培养基：
03MS+2,4-D1.0+BA0.5
愈伤组织转绿分化培养基：
Ⅰ1MS+BA0.75+2,4-D1.5+GA0.6
Ⅰ2MS+BA0.75+2,4-D1.0+GA0.3
Ⅰ3MS+BA0.75+2,4-D0.5
Ⅱ1MS+BA0.5+2,4-D1.5+GA0.3
Ⅱ2MS+BA0.5+2,4-D1.0
Ⅱ3MS+BA0.5+2,4-D0.5+GA0.6
Ⅲ1MS+BA0.25+2,4-D1.5
Ⅲ2MS+BA0.25+2,4-D1.0+GA0.6
Ⅲ3MS+BA0.25+2,4-D0.5+GA0.3
愈伤组织诱导丛生芽培养基：
第一组：GA因素的分析
Ⅳ1MS+NAA0.25+BA1.5+GA1.0
Ⅳ2MS+NAA0.25+BA1.5+GA0.6
Ⅳ3MS+NAA0.25+BA1.5+GA0.2
Ⅳ4MS+NAA0.25+BA1.5
第二组：NAA因素的分析
Ⅴ1MS+GA0.6+BA1.5+NAA0.25
Ⅴ2MS+GA0.6+BA1.5+NAA0.5
Ⅴ3MS+GA0.6+BA1.5+NAA0.75
第三组：BA因素的分析
Ⅵ1MS+NAA0.25+GA0.6+BA1.5
Ⅵ2MS+NAA0.25+GA0.6+BA1.0
Ⅵ3MS+NAA0.25+GA0.6+BA0.5
丛生芽继代增殖培养基：
ⅦMS+BA1.5+NAA0.25+GA0.6
生根培养基：
Ⅷ11/2MS+NAA1.0
Ⅷ21/2MS+NAA0.5
Ⅷ31/2MS
Ⅷ41/2MS+IBA0.5
Ⅷ51/2MS+IBA1.0
Ⅷ61/2MS+NAA0.3+IBA0.7
以上培养基均附加蔗糖20%，琼脂7%(或琼脂粉
6%)，pH值5.8，并在1.1kg/cm2、121℃下消毒20min。
1.2.3培养条件 以上各培养阶段中培养室温度均为
(25±2)℃；对愈伤组织诱导和增殖培养基进行暗培
养处理；对愈伤组织转绿分化培养基分别进行暗培
养和光培养对比处；对愈伤组织诱导丛生芽培养基、
丛生芽继代增殖培养基和生根培养基均进行光培养
处 理 。 光 培 养 处 理 过 程 中 光 照 强 度 均 为
1000~1500Lx，光照时间均为12h/d。
2结果与分析
2.1植株茎段及叶片外植体愈伤组织诱导培养
2.1.1外植体类型对愈伤组织诱导效果的影响 将带
腋芽茎段、不带腋芽茎段、带叶柄叶片和不带叶柄叶
片 4种不同类型的外植体分别置于 MS+2,4-D1.0
+BA0.5愈伤组织诱导培养基中进行暗培养并对比观
察，28d后观察记录结果如表1所示。
由表1可知，诱导红花长寿花愈伤组织的最佳外
植体是不带叶柄叶片切块。虽然 4种外植体在
MS+2,4-D1.0+BA0.5中均能诱导出愈伤组织，但诱导效
果有所区别。带腋芽茎段在MS+2,4-D1.0+BA0.5中获
得的愈伤组织诱导率低，生长势差。究其原因，一方
面可能是腋芽分生能力强，较易直接诱导成芽，另一
方面可能是不适培养基不利于愈伤组织的诱导；而
不带腋芽茎段和带叶柄叶片则比较容易形成愈伤组
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诱导作用，配以较低浓度的 BA，其开始萌动时间较
短，只需要7d，且诱导率达到94.10%。而在较高浓度
BA的情况下，NAA对长寿花叶片愈伤组织的诱导
效果则很差，不仅开始萌动的时间较长，而且其诱导
率也极低。在2组试验中外植体开始萌动时均在伤
口边缘出现白色小颗粒状突起，继续培养在28d后
均诱导出淡黄色、表面鲜亮、质地居中、不均匀的愈
伤组织块（图版I—A）。
2.2愈伤组织继代增殖培养
鉴于愈伤组织在诱导培养基中的生长状态表现良
好，笔者初步选取MS+2,4-D1.0+BA0.5作为愈伤组织
继代增殖培养基。试验中将由 MS+2,4-D1.0+BA0.5诱
导出的每块愈伤组织切成大小表面约0.5cm×0.5cm
的4小块，分别接种在继代增殖培养基上进行暗培
养。35d后，材料未出现褐化现象，继代增殖后仍获得
数量较多的淡黄色、表面鲜亮、质地居中、不均匀的
织，但其诱导率均低于75%，所形成的愈伤组织生长
势一般，表面比较暗，容易褐变，可能是不带腋芽的
茎段和带叶柄叶片疏导组织发达，从而促进了生长
素的输送和传递的原因；在不带叶柄叶片切块的诱
导过程中生长较快且不易褐化，28d后获得诱导率为
93.75%的淡黄色、表面鲜亮、质地居中、不均匀的愈
伤组织块。从损伤刺激的角度看，可能与长寿花肉质、
厚实叶片机械损伤表面积大，能更好地与外界进行气
体和营养物质交换从而有利于愈伤组织的诱导有关。
2.1.2外源激素组合对叶片诱导愈伤组织效果的影
响 采用 2,4-D、NAA和 BA3种植物生长调节物质
不同浓度组合，附加在MS培养基中进行暗培养，28d
后统计试验数据，结果如表2所示。
由表2可知，2,4-D对长寿花叶片愈伤组织有强
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同时，在激素组合、处理数以及统计方法与光培养
条件下不同激素组合的优化过程相同的前提下，笔
者还对比了光暗培养条件对愈伤组织转绿分化的影
响。结果发现，虽然均不易褐变，但在光培养条件下
愈伤组织转绿分化的效果明显好于暗培养条件，而
且其生长速度也较快。
2.4愈伤组织诱导丛生芽
在无菌操作台中，将转绿分化后所获得的愈伤组
织切成大小相当的4小块分别接种于3组(9种)含不
同激素组合的培养基中进行培养，考察不同激素组
合的培养基对愈伤组织诱导丛生芽的影响，结果如
表4所示。
结果表明，9种培养基均能诱导出芽（图版 I—
D）；在开始萌动时愈伤组织颜色仍然为淡绿色；从
BA/NAA溶度比值角度来看，比较BA/NAA溶度比
值分别为2、4和6时的诱导效果发现，当BA/NAA
溶度比值为2时，其诱导效果居9种培养基之末，芽
苗长势也较差，当BA/NAA溶度比值为4时，其诱导
率明显提高15%左右，当BA/NAA溶度比值为6时，
其诱导率最高则可达到93.75%左右，苗芽生长良好；
从NAA与GA作用对比来看，不同NAA浓度变化
对于诱导率的影响较大，而不同GA浓度变化对于诱
愈伤组织块（图版I—B）。
2.3愈伤组织转绿分化培养
采用正交试验设计对淡黄色愈伤组织转绿分化培
养基进行优化，选用BA、2,4-D、GA3种激素进行试
验，每种激素3个水平（浓度均为mg/L）。在无菌操作
台中，将继代增殖后的愈伤组织切成大小相当的 4
小块，分别接种在转绿分化培养基上进行光培养。
35d后统计数据如表3所示.所获得的愈伤组织为淡
绿色愈伤组织块（图版I—C）。
直观分析结果表明，3种激素在不同浓度下对愈
伤组织的转绿分化效果不同，因素 A(BA)不同浓度
的诱导效果为 A3>A2>A1，以 A3(即 BA0.25mg/L)
的诱导效果最好，为 90.8%；因素 B(2,4-D)为 B1>
B3>B2，以 B1(即 2,4-D1.5mg/L)的效果为最佳，为
74.2%；因素C(GA)为C1>C2>C3，以C1(GA0.6mg/L
)的诱导率高，为75.0%。由此可知，长寿花愈伤组织
转绿分化最优化的激素组合应为A3B1C1，即BA0.25
mg/L+2,4-D1.5mg/L+GA0.6mg/L。
导率的影响则较小；从GA溶度来看，适当溶度的
GA对于愈伤组织诱导丛生芽有良好的促进作用，但
笔者同时发现，较低溶度的GA或不添加GA的诱导
效果均一般，且所诱导的芽苗数量居中，矮短或比较
矮短，芽苗密集，长势一般，而当GA溶度为1.0mg/L
时，会出现生长过旺，茎明显但偏细等不良生长现
象；综合来看，在 MS+NAA0.25+BA1.5+GA0.6培养基
中能够较早分化出不定芽，启动率和诱导率均最为
理想。
2.5芽苗继代增殖培养
将无菌萌发的愈伤组织诱导的芽苗接种在继代培
养基上，28d后即可长成约2cm小芽，不定芽的增殖
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速度较快，平均每个材料可增殖3.60倍，苗芽生长良
好，茎明显而健壮，叶宽厚，色浓绿（图版I—E）。
2.6芽苗生根培养
取分化增殖所得到的高约3~5cm芽苗接种到生
根培养基上进行生根诱导培养，35d后结果见表5。
试验结果显示，适当浓度的NAA和IBA组合有
利于长寿花芽苗生根。在6种生根培养基上培养12d
后，芽苗基部膨大；18~20d后，有少部分在茎基部可
见白色根尖长出，其生根速度较慢，可能与材料前期
培养过程中所用生长素浓度有关；为提高长寿花生
根效率，22d后分别转接到原生根培养基上，35d后
根长可至 1cm左右，但生根的效果有所不同：在
1/2MS+NAA0.3+IBA0.7的培养基中诱导芽苗生根率
最高，达到90%左右，每丛芽苗生根数约为4-8条，且
苗根粗度适宜，出苗成活率高，长势良好（图版 I—
F）；在附加中等浓度NAA或IBA的培养基中生根率
在80%左右，苗势一般；在不加任何生长素的1/2MS
培养基中诱导的芽苗生根率在70%左右，苗势劣于
前二者；而在附加较高浓度NAA或较高浓度IBA的
培养基中诱导的根笔直，较细短，生根率较低，均低
于60%，且苗长势不尽很好。
3讨论
在试验中发现，对于红花长寿花不同外植体愈伤
组织的诱导，初步确定不带叶柄的叶片效果最好，但
其具体原因还有待进一步深入研究。而不同激素对
愈伤组织的诱导效果的影响，也初步确定了2,4-D对
长寿花叶片脱分化效果好于NAA，该试验结果与陈
利萍等[5]的结论一致，也证明了在植物组织培养中
2,4-D的启动能力高于NAA[9]。
在愈伤组织转绿分化培养基的优化上，笔者选择
正交试验设计方案进行筛选。试验中虽然在所设计的
MS+BA0.25+2,4-D1.5培养基中愈伤组织转绿分化率达
到97.5%，但直观分析结果表明，对于愈伤组织转绿分
化的最佳培养基为MS+BA0.25+2,4-D1.5+GA0.6。这不
仅提高了试验的正确性和可靠性，也证实了植物细胞
的分化是一个复杂的生理生化过程[10]，不同浓度激素
组合有利于愈伤组织转绿分化。另外，从转绿分化过程
中愈伤组织的生长速度看，愈伤组织在暗培养条件下
比光培养条件下生长速度慢。而从转绿分化过程中愈
伤组织的褐变情况看，虽然光照可以增强多酚氧化酶
活性导致褐变[11]，但红花长寿花愈伤组织在光培养条
件和暗培养条件下均不易褐变。
从愈伤组织诱导丛生芽过程中的结果来看，适当
的BA/NAA溶度比对于愈伤组织再分化的效果较好，
若比例不当则不利于芽增殖，会出现繁殖系数减小的
现象。而一定的GA浓度对于芽苗的伸长有促进作用，
这一试验结果对于激素组合控制器官形成过程的研究
具有初步意义，但其原因还有待进一步深入研究。
综观试验各个过程笔者发现，对于红花长寿花愈
伤组织的诱导和植株再生，期间经历植株外植体、淡黄
色愈伤组织、绿色愈伤组织、丛生芽直至完整植株，说
明了在长寿花组织培养过程中，其器官发生是可以通
过间接途径来实现的。这一试验结果对于离体条件下
植物器官的发生理论的研究具有初步意义。
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（责任编辑：陶冶之）
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