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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第1期
霉菌毒素是由真菌产生的次生代谢产物，污染
的食物种类繁多，对动物和人体都有较强的毒副作
用。玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）是非类固
醇雌激素霉菌毒素，主要源于镰刀菌［1］。ZEN 的产
生是一个长期阴冷潮湿与多因素相互作用的结果，
如谷物的水分含量，感染情况，温度和微生物作用
收稿日期 ：2012-06-11
基金项目 ：国家自然科学基金项目（30860240）, 江西省自然科学基金项目（ 2010GZN0022）
作者简介 ：徐富勇，男，硕士，研究方向 ：生物转化与加工 ; E-mail: xfy218@163.com
通讯作者 ：刘仁荣，男，教授，研究方向 ：生物技术 ; E-mail: lilirenrong@hotmail.com
等，以及其他未知因素［2］。在玉米、高粱、小麦、
大麦燕麦，以及由此为原料制作的食品中都能找到
ZEN 的踪迹［3，4］。在摩洛哥，ZEN 已经在玉米中被
发现，平均含量为 14 ng/g［5］，在保加利亚的小麦中，
ZEN 是主要的霉菌毒素，占 69%，平均含量为 17
ng/g［6］。由于这种霉菌毒素的诱变、遗传毒性和致
噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽
徐富勇1 徐玲2 刘仁荣2 裘雪梅2 朱立鑫2
（1. 南昌大学生命科学与食品工程学院，南昌 330029 ； 2. 江西科技师范大学生命科学学院，南昌 330013）
摘 要 ： 拟用 p Ⅷ 噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮（Zearalenone ，ZEN）模拟表位肽，并验证其反应原性。通过将含有
ZEN 模拟表位序列以及肠激酶酶切位点的寡聚核苷酸与经过 EcoR I 和 BamH I 双酶切的 pC89S4 噬菌粒连接，构建表达载体 pC89-
CZEN。pC89-CZEN 转化感受态 XL1-Blue 得到工程菌 pC89-ek-zen，然后用 KM13 超感染、IPTG 诱导表达，纯化后得到展示有玉米
赤霉烯酮模拟表位的噬菌体颗粒。对 KM13 超感染时菌体浓度 OD600、IPTG 诱导时菌体浓度 OD600、IPTG 加入量以及诱导表达温度
和时间进行优化，以探索最佳表达条件 ；通过 ELISA 测定反应原性，对比肠激酶酶切前后模拟表位肽与 ZEN 抗体的结合效果。结
果显示，成功构建了表达载体 pC89-CZEN，最优表达条件为 KM13 超感染时菌体浓度 OD600 为 0.4、IPTG 诱导时菌体浓度 OD600 为
0.6 以及 IPTG 加入量为终浓度 1.0 mmol/L、诱导表达温度为 24℃、时间 8 h，酶切后结合效果明显高于酶切前。
关键词 ： 噬菌体展示系统 玉米赤霉烯酮 模拟表位 肠激酶
Expression of Zearalenone Mimicking Epitope
Peptide by Phage Display System
Xu Fuyong1 Xu Ling2 Liu Renrong2 Qiu Xuemei2 Zhu Lixin2
（1. School of Life Sciences and Food Engineering，Nanchang University，Nanchang 330029 ； 2. School of Life Science，Jiangxi Science &
Technology Normal University，Nanchang 330013 ）
Abstract: The research was designed to study the expression of Zearalenone（ZEN）mimicking epitope by p Ⅷ phage display system
and verify its reactogenicity. An expression vector pC89-CZEN was constructed by linking the oligonucleotide contained ZEN mimicking epitope
sequence and Enterokinase cleavage sites with the pC89S4 phagemid which had been double digested by EcoR I and BamH I. Engineered bacteria
pC89-ek-zen was obtained after pC89-CZEN being transformed into competent XL1-Blue cells. The phage particles displaying Zearalenone
mimicking peptide were acquired after pC89-ek-zen being super infected by KM13 phage. The optimal expression conditions were also explored.
The reactogenicity was detected by ELISA. ZEN antibody binding capacity（before and after Enterokinase digestion）were also compared. The
results show that the expression vector pC89-CZEN was constructed successfully. The optimal expression conditions were explored by ELISA.
The binding effect is influenced by bacteria concentration when helper phage KM13 and IPTG added, and the final concentration of IPTG in the
medium, induced expression temperature and time. The binding efficiency after enzyme digestion was higher than before.
Key words: Phage display system Zearalenone Mimicking epitope Enterokinase
2013年第1期 145徐富勇等 ：噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽
癌作用尚不清楚，国际癌症研究中心（IARC）将其
归为 3 类致癌物质［7］。但是有人提出 ZEN 和人类的
子宫颈癌和子宫内膜增生之间可能存在联系［8］，另
有学者［9，10］在中国发现，ZEN 和食道癌可能有关系。
虽然玉米赤霉烯酮及其衍生物和人类的潜在致癌性
之间的联系仍然存在争议，但在实验室动物试验中，
已取得其具有致癌性的有力证据［11］。
目前常用检测 ZEN 的方法有荧光光度计法［12］、
气相色谱法［13］、高效液相色谱法［14］及液相色谱 -
串联质谱法［15］等，但这些技术都存在操作要求和
成本偏高等问题。ELISA 具有检测速度快，灵敏度
高，可定量，操作简便，成本低等特点，已经被广
泛应用于各种真菌毒素的快速检测。但 ELISA 方法
中需要使用 ZEN 标准品合成人工抗原，由于 ZEN 对
人体有危害性，而且其标准品价格昂贵，获取困难，
所以开发出一种能模拟 ZEN 反应原性，能代替 ZEN
进行试验的无毒物质显得很有必要。本试验在何庆
华等［16］研究的基础上，查询到 ZEN 模拟表位肽为
DAVILLM，多肽对应碱基序列 ：GATGCTGTCATCC-
TGTTGATG。pC89 是带有来源于 f1 噬菌体的 gp Ⅷ、
f1 噬菌体的复制起点，以及在 pMBI 质粒基础上新
添加两个酶切位点 BamH Ⅰ和 EcoR Ⅰ而的到的噬
菌粒。gp Ⅷ较小，适合融合模拟表位这类较小的肽段，
而且 gp Ⅷ拷贝数极多，可达 2 700 个，在高密度表
达方面具有明显的优势。pC89S4 是改进的 pC89，
它在 BamH Ⅰ与 EcoR Ⅰ酶切位点之间引入 Xba Ⅰ
酶切位点，在酶切验证时更直观准确。通过构建
pC89-CZEN 表达载体，将含有玉米赤霉烯酮抗原表
位基因的重组质粒转化大肠杆菌 XL1-Blue 感受态细
胞，用 KM13 超感染后，纯化得到玉米赤霉烯酮抗
原表位的噬菌体颗粒，结合 ELISA 测定方法，验证
表达的模拟多肽的反应原性的同时检测其表达效果，
以期开发出来可以代替 ZEN 标准品的无毒检测 ZEN
毒素的 ELISA 试验方法。
1 材料与方法
1.1 材料
大肠杆菌 TG1、XL1-Blue（江西科技师范学院生
命科学学院保存）； pC89S4 噬菌粒（第三军医大学
免疫研究所万瑛教授惠赠）；辅助噬菌体 KM13（江
西科技师范学院生命科学学院保存）；限制性内切
酶 EcoR I、BamH I、Xba I、T4 DNA 连接酶及 PCR
扩增套装（宝生物工程（大连）有限公司）；质粒
提取试剂盒、PCR 纯化试剂盒（深圳 Fermentas 公
司）；DNA Marker（杭州爱思进生物公司）；人工抗
原 BSA-GMBS-ZEN（本实验室合成）；寡聚核苷酸单
链 T1、T2 由上海 Sangon 合成并测序 ；辣根过氧化
物酶标记羊抗鼠 IgG（Sigma 公司）；ZEN 抗体（南
昌博恒生物工程公司）；洗板机（Thermo 公司）；酶
标仪（Thermo 公司）。
1.2 方法
1.2.1 ZEN-P Ⅷ噬菌体展示载体的构建 ZEN 模拟
表位肽为 DAVILLM，对应碱基序列 ：GATGCTGTC-
ATCCTGTTGATG，考虑到原模拟表位是表达在 p Ⅲ
蛋白的 N-末端［16］，而 P Ⅷ噬菌体展示载体表达的多
肽在其 N-末端会有部分前导肽表达。因此，在模拟
表位前设计一肠激酶酶切位点（DDDDK），在表达后
应用肠激酶酶切，可使模拟表位表达在 p Ⅷ蛋白的 N-
末端。其对应碱基序列为 ：GACGACGACGACAAG，
加上 EcoR I 和 BamH I 酶切位点接头，因此设计 ：
T1 ：5- AATTCGACGACGACGACAAGGATGCT
GTCATCCTGTTGATG-3，
T2 ：5- GATCCATCAACAGGATGACAGCATCCT
TGTCGTCGTCGTCG-3。
将 T1 和 T2 加 ddH2O 分别配成 20 nmol/mL 的寡
聚核苷酸单链溶液，各取 10 μL，混匀后置于 PCR
仪，99℃保温 5 min 后缓慢降至室温，-20℃保存。
pC89S4 噬菌粒 5 μL，加入 ddH2O 11 μL，酶切缓冲
液 2 μL，EcoR I 和 BamH I 各 1 μL，混匀后 37℃双
酶切 2 h，按照 PCR 纯化试剂盒所述步骤纯化酶切
产物。退火寡聚核苷酸链与质粒双酶切产物在 T4
DNA 连接酶作用下 16℃连接 8 h，乙醇沉淀法纯化。
连接液全量电转化入大肠杆菌 XL1-Blue 感受态细胞，
加入 SOC 培养基，37℃振荡培养 1.5 h 后涂布含 50
μg/mL 氨苄青霉素的 LB 平板，37℃过夜培养。挑取
单菌落用于扩增细胞，质粒提取试剂盒提取质粒。
提取的质粒依次用 Xba I、EcoR I 和 BamH I 进行单
酶切，时间 2 h，之后用 1.0% 琼脂糖凝胶电泳观察。
酶切验证为阳性的质粒采用 M13-40 引物测序。
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第1期146
1.2.2 敏感宿主菌的制备及辅助噬菌体的扩增
（1）将 TG1 接种至 2 mL LB 培养基中，37℃，
220 r/min 培养活化 2 次。活化后的菌液接种至加富
M9 培养基平板，37℃培养过夜。第 2 天于加富 M9
平板上挑取 10 个单菌落分别接种至 2 mL LB（含
40 μg/mL 四环素）中，培养至对数期。经过适度稀
释的 KM13 噬菌体原液与对数期的 TG1 菌液混合，
37℃静置水浴 20 min 后与顶层琼脂混匀，将顶层琼
脂倾倒于 LB 平板，37℃培养过夜，观察噬菌斑，鉴
定细菌对 KM13 噬菌体的敏感性。
（2）选择对 KM13 噬菌体敏感的细菌制备铺平
板细菌。将敏感菌划线接种加富 M9 平板，37℃培
养过夜。第 2 天挑取单菌落接种 2 mL LB（含有终
浓度 40 μg/mL 四环素），37℃，220 r/min 培养至对
数早期。准备 KM13 噬菌体 10-1 至 10-12 稀释度的
LB 悬液，取 10-8 至 10-12 稀释度各 10 μL 与铺平板
细菌混合均匀，37℃静置水浴 20 min 后与 45℃温育
的顶层琼脂快速混合倒于 LB 平板，37℃培养过夜。
（3）挑取一个完整噬菌斑接种至对数期的 2 mL
TG1 菌液中，37℃，220 r/min 培养 1 h 后将菌液转
入 20 mL LB（含 40 μg/mL 四环素，40 μg/mL 卡那霉
素），37℃，220 r/min 培养过夜。
1.2.3 辅助噬菌体提取纯化及滴度测定 过夜培养
的菌液转移至 50 mL 离心管中，4℃，5 000 r/min，
20 min 离心去除细菌，上清加入总体积 1/6 的 20%
PEG8000，2.5 mol/L NaCl 溶液，冰浴 1 h。再 4℃，
10 000 r/min，20 min 弃上清，沉淀用 2 mL 50 mmol/L
TBS（pH7.5）溶解后加入总体积 1/6 的 20% PEG80-
00，2.5 mol/L NaCl 溶液，冰浴 1 h。4℃，10 000 r/min，
20 min 弃上清，沉淀用 2 mL 50 mmol/L TBS（pH7.5）
溶解后 4℃，10 000 r/min，5 min，收集上清液。
用 LB 培养基将收集到的上清液按梯度稀释为
10-1-10-11，每个稀释度做 3 个重复。按照 1.2.2 的方
法进行噬菌斑的计数，计算公式 ：
PFU（mL）=（噬菌斑数 / 接种噬菌体积） ×（1/
噬菌体稀释度）
1.2.4 辅助噬菌体超感染及噬菌体展示模拟表位
的提取纯化 将经测序鉴定成功的工程菌 pC89-ek-
zen 划线于 LB 平板（含 50 μg/mL 氨苄青霉素，40
μg/mL 四环素），37℃培养过夜。第 2 天挑取取单菌
落接种至 20 mL LB 培养基中培养至对数早期。通常
OD600=2.0 时，细菌密度约为 1.6×10
9 细胞 /mL［17］。
取 1 mL 菌液，按照感染复数为 40 加入已测定滴度
的噬菌体后混匀［18］，37℃静置 20 min 超感染 ；超感
染后的菌液转入至 60 mL LB 液体培养基中，37℃，
220 r/min 培养至对数期 ；再加入异丙基 -β-D-硫代
吡喃半乳糖苷（IPTG）继续 24℃，220 r/min 诱导
表达［19］。
1.2.5 噬菌体展示模拟表位高效表达的 ELISA 检
测 将 提 取 纯 化 的 表 位 噬 菌 体 用 50 mmol/L TBS
（pH7.5）稀释至 A280=0.3，稀释后的噬菌体每 100
μL 加入 1 μL 肠激酶，22℃，酶切 16 h。酶切后的
噬菌体用 0.01 mol/L 的 PBS 进行适当稀释，连接有
BSA 的 5 μg/mL 人工抗原 ZEN-BSA 作为阳性对照，
0.01 mol/L 的 PBS 作为阴性对照，每孔包被 100 μL，
37℃孵育 2 h ；以 PBS-T20 为清洗液，洗板机洗板 3
次，5% 脱脂乳 37℃下封闭 1 h ；PBS-T20 洗板 4 次，
每孔加入 1 ：10 000 的 ZEN 抗体 100 μL，37℃孵育
45 min ；然后 PBS-T20 洗板 4 次，加入 1∶3 000 的
辣根过氧化物酶标记的二抗 100 μL，37℃孵育 45
min ；接着用 PBS-T20 洗板 5 次，TMB 显色液显色
10 min 后加入 50 μL 2 mol/L H2SO4 终止反应，酶标
仪测定 450 nm 处吸光值。
1.2.6 噬菌体展示模拟表位的表达优化
1.2.6.1 超 感 染 时 菌 体 浓 度 OD600 的 优 化 待 菌 体
OD600 分别达到 0.2、0.4、0.6、0.8 后加入感染复数
为 40 的辅助噬菌体超感染，超感染后的菌液转入
至 60 mL LB 液体培养基中，37℃，220 r/min 培养至
OD600 为 0.6，再加入 IPTG 至终浓度为 1.0 mmol/L，
24℃进行诱导表达 8 h，提取纯化的表位噬菌体进行
ELISA 检测 。
1.2.6.2 加入 IPTG 诱导时菌体浓度 OD600 的优化 菌
体 OD600 为 0.4 时加入感染复数为 40 的 KM13 超感染，
超感染后的菌体加入至 60 mL 培养基，待菌体 OD600
分别达到 0.2、0.4、0.6、0.8 时，再加入 IPTG 至终
浓度为 1.0 mmol/L ，24℃进行诱导表达 8 h，提取纯
化的表位噬菌体进行 ELISA 检测。
1.2.6.3 IPTG 终浓度的优化 菌体 OD600 为 0.4 时加
入感染复数为 40 的 KM13 超感染，超感染后的菌体
加入至 60 mL 培养基，37℃，220 r/min 培养至 OD600
2013年第1期 147徐富勇等 ：噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽
为 0.6，再加入 IPTG 至终浓度为 0.1、0.5、1.0、1.5
mmol/L，24℃进行诱导表达 8 h，提取纯化的表位噬
菌体进行 ELISA 检测。
1.2.6.4 表达温度的优化 菌体 OD600 为 0.4 时加入
感染复数为 40 的 KM13 超感染，超感染后的菌体加
入 至 60 mL 培 养 基，37 ℃，220 r/min 培 养 至 OD600
为 0.6，再加入 IPTG 至终浓度为 1.0 mmol/L，分别
于 24℃和 37℃进行诱导表达 8 h，提取纯化的表位
噬菌体进行 ELISA 检测。
1.2.6.5 诱导表达时间的优化 菌体 OD600 为 0.4 时
加入感染复数为 40 的 KM13 超感染，超感染后的
菌体加入至 60 mL 培养基，37℃，220 r/min 培养至
OD600 为 0.6，再加入 IPTG 至终浓度为 1.0 mmol/L，
于 24℃进行诱导表达 4、6、8、10 h，提取纯化的
表位噬菌体进行 ELISA 检测。
2 结果
2.1 ZEN-PⅧ噬菌体展示载体的构建
退火寡聚核苷酸链与质粒双酶切产物连接纯化
后，电转化入大肠杆菌 XL1-Blue 感受态细胞。从单
菌落扩增出来的细胞中提取重组质粒后，用 Xba I、
EcoR I 和 BamH I 进 行 单 酶 切。pC89S4 具 有 两 个
Xba I 酶切位点，相距 147 bp，经 Xba I 酶切后能产
生两段大小不同的片段。但重组质粒中插入的目的
片段取代了一个 Xba I 酶切位点，因此 3 种酶都只
有一个酶切位点。由图 1 可知，重组质粒经过 Xba I、
EcoR I 和 BamH I 酶切之后都能得到同等大小的单一
条带，说明质粒可能是重组质粒。重组质粒经过测序，
结果显示其序列与预期一致，证明表达载体 pC89-
CZEN 构建成功，如图 2。
M ：DNA marker ；1 ：Xba I 酶切 ；2 ：EcoR I 酶切 ；3 ：BamH I 酶切
图 1 单酶切验证结果
图 2 重组质粒测序波形图（下划线标记为互补序列）
2.2 辅助噬菌体滴度测定
经平板计数，稀释度为 10-8 时噬菌斑平均大于
300 个，10-9 时平均为 67 个，10-10 时平均为 8 个，
因此选取稀释度为 10-9 进行计算 ：
KM13 滴度 = （噬菌斑数 / 接种噬菌体体积）×
（1/ 噬 菌 体 稀 释 度 ） = （67/0.01） × （1/10-9） =6.7×
1012/mL
2.3 噬菌体展示模拟表位的表达优化
2.3.1 超感染时菌体浓度 OD600 的优化 由图 3 可
知，当菌体浓度 OD600 为 0.4 时进行超感染，提取的
ZEN 模拟表位肽与抗体结合后的 A450 值最高。
2.3.2 加入 IPTG 诱导时菌体浓度 OD600 的优化 由
图 4 可知，加入 IPTG 诱导表达的效果随菌体浓度的
上升有所增加，但不是很明显，至 OD600 为 0.6 时最
高，随后降低。
2.3.3 IPTG 终浓度的优化 由图 5 可知，随着 IPTG
终浓度的提高，A450 也随之提高，但不是很明显。
当终浓度为 1.5 mmol/L 时，A450 下降较快，是由于
IPTG 对细胞存在毒性，浓度过高时会抑制细菌的
生长。
2.3.4 表达温度的优化 由图 6 可知，虽然 37℃为
大肠杆菌的最适生长温度，但在此温度下表达的模
4000
M 1 2 3
3476
3000
bp bp
1100 120 130 140 150
T T T T T T T T T T T T T T CCCCCCCCCCCCCCCG G G G G G G G G G G G G AA AAAAAAAAAA
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第1期148
拟表位与抗体的结合效果却不如 24℃，说明在 24℃
时更利于模拟表位的表达。
0
0.5
1.0
1.5
2.0
0.2 0.4 0.6 0.8
OD600
A
45
0
图 3 超感染时菌体浓度与结合效果的关系
0
0.5
1.0
1.5
2.0
0.2 0.4 0.6 0.8
OD600
A
45
0
图 4 加入 IPTG 诱导时菌体浓度与结合效果的关系
0
0.5
1.0
1.5
2.0
0.1 0.5 1.0 1.5
ITPG㓸⎃ᓖ mol/L
A
45
0
图 5 IPTG 终浓度与结合效果的关系
0
0.5
1.0
1.5
2.0
24 37
㺘䗮ᓖ ć
A
45
0
图 6 表达温度与结合效果的关系
0
0.5
1.0
1.5
2.0
4 㺘䗮ᰦ䰤 h
A
45
0
6 8 10
图 7 表达时间与结合效果的关系
2.3.5 诱导表达时间的优化 由图 7 可知，随着诱
导表达时间的延长，结合效率不断提高，到 8 h 后基
本不变，出于节约时间成本的目的，选择诱导为 8 h。
0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
䞦࠷ࡽ 䞦࠷ਾ
A
45
0
图 8 酶切前后 ZEN 模拟表位与抗体结合效果比较
2.4 肠激酶酶切对抗体结合效果的影响
纯化后的噬菌体展示模拟表位经酶切后与未酶
切的同样进行 ELISA 测定。经酶切与未酶切的噬菌
体展示模拟表位与抗体的结合结果比较如图 8。从
图 8 可以看出，酶切后的结合效果明显高于酶切前。
3 讨论
本试验采用的是丝状噬菌体展示系统，在丝状
噬菌体展示系统中，主要的展示蛋白是 p Ⅷ和 p Ⅲ
蛋白。用于丝状噬菌体展示的载体主要有噬菌体载
体和噬菌粒载体。噬菌粒是带有丝状噬菌体复制起
点的质粒。pC89S4 就是在具有 ColE1 复制起点及
氨苄青霉素抗性选择标记的质粒上再加上单拷贝的
丝状噬菌体主要基因间隔区。克隆于 pC89S4 内的
T1T2 片段，可以像质粒一样用常规方法进行增殖。
而当带有重组质粒的 XL1-Blue 被 KM13 辅助噬菌体
超感染后，在病毒的基因Ⅱ蛋白影响下，质粒的复
制方式发生改变。基因Ⅱ产物与质粒所携带的基因
2013年第1期 149徐富勇等 ：噬菌体展示系统表达玉米赤霉烯酮模拟表位肽
间隔区相互作用，启动滚换复制，以产生质粒 DNA
一条链的拷贝。这些质粒 DNA 的单链拷贝经切割产
生切口，然后环化，最后被包装进子代噬菌体颗粒
中，进而将目的多肽展示在噬菌体表面。
本研究在成功构建 pC89-CZEN 噬菌粒载体的基
础上，对 3 个表达条件进行了优化。发现菌体处于
对数前期时，更利于辅助噬菌体的吸附侵染。IPTG
是一种十分有效的乳糖操纵子的诱导剂，可与阻遏
蛋白结合成复合物，而使阻遏蛋白构象发生改变，
阻遏蛋白就不能结合到大肠杆菌中的 Lac 启动子
上，从而使乳糖操纵子能够被转录，诱导蛋白的表
达。IPTG 诱导的效果与菌体的状体和自身的浓度有
很大关系。在对数期时，生长代谢旺盛，对一切诱
导药物和环境因素的作用最为敏感，若加入时间过
早，可能会抑制宿主菌的生长，加入太迟，菌体已
成熟，菌体内各种酶的合成能力降低，表达量也减
少［20］。IPTG 的使用量也有要求，IPTG 具有细胞毒性，
浓度过高时会抑制细菌的生长，进而降低蛋白的表
达。在进行低温 24℃表达时，更有利于融合蛋白的
可溶性蛋白表达及向胞外分泌，37℃时更多地以包
涵体的方式表达。诱导表达 8 h 后，噬菌体量达最大，
对应的模拟表位肽的量也达到最大，时间再延长基
本不变。
pC89S4 所表达的外源片段其 N-末端残留有 5
肽。本实验室在研究中发现 ZEN 模拟表位 N-末端的
5 肽影响了 ZEN 抗体与模拟表位的结合。为解决这
一问题，在 ZEN 模拟表位 5 端引入了肠激酶酶切位
点，构建出噬菌粒 pC89-CZEN。肠激酶可沿序列的
羧基端切下。成熟的 ZEN 模拟表位 -p Ⅷ融合蛋白
经肠激酶酶切后，ZEN 模拟表位暴露出来，提高了
与抗体的结合几率，为后续建立无毒 ELISA 方法检
测真菌毒素打下了基础。
4 结论
本试验成功构建了噬菌粒 pC89-CZEN，利用此
载体实现了 ZEN 模拟表位在噬菌体表面的成功展示。
展示有 ZEN 模拟表的噬菌体纯化方法简单。ELISA
检测证实 ZEN 模拟表位 -p Ⅷ融合蛋白具有良好的
反应原性。
参 考 文 献
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（责任编辑 李楠）