全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第5期
收稿日期 ：2013-03-11
基金项目 ：“重大新药创制”科技重大专项（2012ZX09103301-033），暨南大学科研培育与创新基金杰出人才培育项目（11611206）
作者简介 ：吕芬，女，硕士研究生，研究方向 ：二磷酸核苷激酶 A 抑癌蛋白 ；E-mail ：sunny_lf@126.com
通讯作者 ：熊盛，男，博士，副研究员，研究方向 ：生物技术药物蛋白质结构与功能 ；E-mail ：xiongsheng@jnu.edu.cn
GST-NDPK-A 融合蛋白的原核表达及体外
互作蛋白的检测
吕芬1 刘忠1 银兴峰2 赵振岭1 陈妙娟2 张嘉萱1
陈伟1 钱垂文1 熊盛1
（1. 暨南大学生命科学技术学院 生物医药研究开发基地，广州 510632 ；2. 暨南大学生命科学技术学院
生命与健康工程研究院，广州 510632）
摘 要 : 旨在了解核苷二磷酸激酶 A（NDPK-A）的功能，通过 GST-Pull down 技术寻找与其存在体外相互作用的蛋白。以
含有目的片段的质粒 pBV-NDPK-A 为模板，扩增出相应的目的基因片段，将其插入带有 GST 标签的原核表达载体 pGEX-4T-2，构
建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后，转化至大肠杆菌 BL21，经 IPTG 诱导，Glutathione Sepharose 4B 亲和纯化，通过 SDS-
PAGE 电泳及 Western blot 确定融合蛋白的表达，并与高表达细胞系 A549 孵育，进行 GST-Pull down 试验，并通过 LC-MS/MS 质谱
鉴定体外与 NDPK-A 相互作用的蛋白。结果显示，成功构建 GST-NDPK-A 的原核表达载体 ；在大肠杆菌 BL21 中诱导表达出可溶
性融合蛋白 ；经 Glutathione Sepharose 4B 纯化后，获得了有生物活性的 GST-NDPK-A 融合蛋白，GST-Pull down 试验和质谱鉴定结
果发现 NDPK-A 与 Fussel-18、Rrp12 体外存在相互作用。
关键词 : NDPK-A Fussel-18 Rrp12 表达纯化 相互作用
The Purification of GST-NDPK-A Fusion Protein and Detection of its
Interacting Proteins in vitro
Lü Fen1 Liu Zhong1 Yin Xingfeng2 Zhao Zhenling1 Chen Miaojuan2 Zhang Jiaxuan1
Chen Wei1 Qian Chuiwen1 Xiong Sheng1
（1. Biomedicine Research & Development Center，College of Life Science and Technology，Jinan University，Guangzhou 510632 ；2. Institute
of Life and Health Engineering，College of Life Science and Technology，Jinan University，Guangzhou 510632）
Abstract: It was to understand the function of nucleoside diphosphate kinase A （NDPK-A） and explore its interacting proteins in vitro
through GST-Pull down technique. The target genes were amplified from the templates pBV-NDPK-A and inserted into the prokaryotic expression
vector pGEX-4T-2 with glutathione-S-transferase（GST）tag to construct the expression plasmid. After identified by restriction endonuclease
digestion and sequencing, the recombinant plasmid was transformed into E. coli BL21 strain and exogenous protein expression was induced by
IPTG. After purification using Glutathione Sepharose 4B affinity chromatography, the GST-NDPK-A fusion protein was identified by SDS-PAGE
and Western blot then incubated with A549. GST-Pull down assay was performed to explore the interacting proteins in vitro followed by LC-
MS/MS identification. Results showed that the prokaryotic expression vector of GST-NDPK-A fusion protein was successfully constructed and
expressed effectively in E. coli BL21 strain. The fusion protein with bioactivity was purified using Glutathione Sepharose 4B beads. Furthermore,
GST-Pull down assay indicated that NDPK-A could bind to Fussel-18 and Rrp12 in vitro.
Key words: NDPK-A Fussel-18 Rrp12 Expression and purification Interaction
核苷二磷酸激酶 A（nucleoside diphosphate kina-
se A，NDPK-A），是 Nm23-H1 基因编码的多功能蛋
白，可以调节细胞增殖、分化、发育、迁移、凋亡，
信号转导等多种生物学活动［1］。Nm23-H1 最早被鉴
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第5期138
Sepharose 4B 凝胶树脂购自 GE Healthcare 公司 ；氨
苄青霉素、IPTG、PMSF 均购自 Sigma 公司 ；完全型
蛋白酶抑制剂 CPI 购自 Roche 公司 ；NP40 细胞裂解
液、BCA 试剂盒均购自碧云天生物公司 ；NDPK-A
鼠单抗购自 Santa Cruz 公司 ；5 cm 分拆式层析柱购
自 Bio-Rad 公司；PCR 引物由上海生工生物公司合成。
1.2 方法
1.2.1 重 组 质 粒 pGEX-4T-NDPK-A 的 构 建 根 据
GenBank 检 索 到 的 人 源 NDPK-A 全 基 因 序 列 以 及
pGEX-4T-2 空载的多克隆位点图谱设计引物。上游引
物为 ：5-CGGGATCCATGGCCAACTGTGAGCGTA-3，
下划线为 BamH I 酶切位点 ；下游引物 ：5-AGCCGG
AATTCTCATTCATAGATCCAGTTCTGAGC -3，下划线
为 EcoR I 酶切位点。以含有人源全长目的基因的质
粒 pBV-NDPK-A 为模板，进行 PCR 扩增，条件为 ：
94℃ 2 min ；98℃ 10 s，66℃ 30 s，68℃ 30 s，30 个
循环 ；68℃ 5 min。将 PCR 产物克隆入 pGEX-4T-2
载体中，PCR 及双酶切鉴定后，交由上海英骏生物
公司广州分公司测序。
1.2.2 GST-NDPK-A 融合蛋白的诱导表达 将测序
正确的 GST-NDPK-A 重组质粒转化至大肠杆菌 BL21
感受态细胞中，在含氨苄青霉素抗性的固体 LB 培
养基上 37℃倒置培养过夜，挑取阳性单克隆，接种
于 5 mL 含氨苄青霉素（100 μg/mL）的 LB 液体培
养基中，37℃振荡（180 r/min）活化培养过夜。为
了尽可能获得足量的可溶性蛋白用于后续试验，将
逐级培养活化后的菌液按 1∶100 的比例接种于 300
mL 含氨苄青霉素的 LB 液体培养基中，培养至 OD600
达到 0.6-0.8 时，加入 IPTG 至终浓度为 0.2 mmol/L，
20℃下 100 r/min 继续诱导培养过夜。
1.2.3 GST-NDPK-A 融合蛋白的纯化、鉴定 离心
收集上述诱导菌体，按 10∶1（V/V）的比例重悬
于 裂 解 缓 冲 液［50 mmol/L Tris-HCl、pH7.6、150
mmol/L NaCl、2 mmol/L EDTA、1% NP40（V/V），及
蛋白酶抑制剂 CPI 和 PMSF］中，并加入终浓度为 1
mg/mL 的溶菌酶，涡旋混匀，冰浴 30 min ；冰浴超
声裂解 15 min 后，将破碎液于 4℃，14 000 r/min，
离 心 30 min， 收 集 上 清。 吸 取 0.5 mL Glutathione
Sepharose 4B 凝 胶 珠 子 混 悬 液 至 5 cm 的 小 层 析 柱
定为肿瘤转移抑制基因以来，一直是肿瘤研究的热
点。针对多种肿瘤细胞株，如黑色素瘤、乳腺癌、
前列腺癌、结肠癌、肝癌等，Nm23-H1 的过表达表
现出抑制细胞迁移的能力 ；然而，在恶性白血病、
神经母细胞瘤、骨肉瘤患者体内，Nm23-H1 的高表
达却使生存率降低 ；在鼻咽癌、直肠癌中，Nm23-
H1 的表达与肿瘤转移并无明显关系［2］。这种复杂
的调节模式使得 Nm23-H1 成为决定肿瘤细胞命运的
关键分子，而成为备受关注的药物作用靶标。关于
Nm23-H1 多功能调节的分子机制，目前还未被透彻
地揭示。众所周知，肿瘤的发生、转移的分子基础
是一个立体、整体水平上的蛋白质间相互作用的结
果。目前，越来越多的研究聚焦于去发现在重要的
信号转导途径中，与 NDPK-A 相互作用的伙伴蛋白。
如 GTP 结合蛋白［3］、转录调控因子［4］、SET 复合
物［5］等以及与相关蛋白结合参与信号转导，如 Erk
Map 激酶途径［6］、TGF-β 信号途径［7］等，证据表明，
NDPK-A 与这些蛋白相互作用、相互影响、共同调
控，涉及肿瘤细胞的发生、增殖、迁移、凋亡、分
化、血管生成、DNA 修复等各个方面的相关性。为
了进一步研究 NDPK-A 在细胞中扮演的角色，本研
究通过基因工程技术体外构建表达载体，诱导可溶
性 GST-NDPK-A 融合蛋白的高效表达，亲和纯化，
利用 GST-Pull down 技术在肺腺癌 A549 细胞中筛选
与 NDPK-A 结合的蛋白质，并经 SDS-PAGE 电泳分离，
LC-MS/MS 质谱分析进行鉴定，试图寻找与 NDPK-A
相互作用的靶蛋白，旨在为研究 NDPK-A 的功能和
作用机制提供一个新的切入点。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种、质粒和细胞系 大肠杆菌（Escherichia
coli）DH5α、BL21（DE3）为本实验室保存、质粒
pBV-NDPK-A 由本实验室构建并保存 ；pGEX-4T-2
质粒购自上海希匹吉生物公司 ；肺腺癌细胞株 A549
由本实验室储备。
1.1.2 主要试剂 限制性内切酶 BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ、
T4 DNA 连接酶均购自 TaKaRa 公司 ；DNA 凝胶回
收试剂盒、质粒提取试剂盒均购自 Omega 公司 ；
KOD-Plus-Neo 酶 购 自 TOYOBO 公 司 ；Glutathione
2013年第5期 139吕芬等 ：GST-NDPK-A 融合蛋白的原核表达及体外互作蛋白的检测
内，静置 30 min ；沉降完全后，加入 6 倍柱体积
的 EBC 缓冲液清洗平衡纯化柱 ；然后，将收集的
细菌裂解液上清过柱 ；通过使用不同盐浓度梯度的
washing buffer 洗脱杂蛋白 ；经 EBC 缓冲液平衡柱子
后，收集偶联有目的融合蛋白的凝胶珠子于 0.5 mL
的 EBC 缓冲液中，并直接储存于分拆式小层析柱
内。取适量凝胶珠子溶于 2×SDS-PAGE buffer 中，
100℃加热变性，离心取上清，进行凝胶电泳分析。
并以 NDPK-A 鼠单抗为一抗，鼠源 IgG 为二抗进行
Western blot 验证。
1.2.4 GST-Pull down 试验 在 8 个 100 mm 培养皿
中 培 养 A549 细 胞， 待 单 层 细 胞 长 至 约 95% 融 合
时，用细胞刮收集细胞于 2 mL 含有蛋白酶抑制剂的
NP40 裂解缓冲液中，混匀冰浴裂解 40 min，每间隔
10 min 震动一次。裂解完全后，13 200 r/min，4℃
离心 30 min，收集上清，即为细胞总蛋白（全细胞
裂解液）。BCA 法测定蛋白浓度后，立即用于 GST-
Pull down 试验。
取含 GST 蛋白的纯化珠子与全细胞裂解液在
4℃旋转孵育 1 h，离心后，转移上清至新的离心管
中，即为预吸附后的全细胞裂解液。将其均分为 2 份，
一份加入含融合蛋白的纯化珠子，另一份加入含
GST 的纯化珠子，根据 BCA 法测定的蛋白浓度，调
整加入体积，确保二者珠子上结合的总蛋白量一致，
在 4℃下旋转孵育过夜。之后，用预冷的 washing
buffer 温和清洗珠子上非特异性结合的杂蛋白，重复
4 次，经 SDS-PAGE 电泳后，银染分析。
1.2.5 差异蛋白条带的酶解及质谱鉴定 数次银染
分析后，鉴定出有重复性差异的蛋白条带，继而将
蛋白样品扩大上样量，进行 SDS-PAGE 电泳，考马
斯亮蓝染色后，从 SDS-PAGE 胶上切取差异条带，
经过常规的脱色、还原、烷基化、胰酶酶解、肽段
萃取等处理，后续样本冻干、溶解、Trap 柱脱盐及
LC-MS/MS 质谱分析。
2 结果
2.1 重组质粒pGEX-4T-NDPK-A的构建
以 pBV-NDPK-A 为模板进行 PCR 扩增，获得分
子量约 500 bp 的目的片段（图 1）。将 PCR 扩增获
得的全长 NDPK-A 克隆至原核表达载体 pGEX-4T-2
中，构建 pGEX-4T-NDPK-A 重组质粒。挑选阳性单
克隆，重组质粒提取后，进行 PCR 鉴定和双酶切鉴
定（图 2）。PCR 鉴定获得一特异性的目的条带，双
酶切结果与预期结果吻合。测序结果表明目的片段
序列完整且按通读框方式插入 pGEX-4T-2 载体中。
2000
bp
M 1
1000
750
500
250
M ：DNA Marker ；1 ：PCR 产物
图 1 目的基因的 PCR 扩增
5000
bp
M1 1 2 3 4 5 M2
4000
3000
2000
1000
500
bp
M1 ：1 kb DNA Marker ；1 ：pGEX-4T-NDPK-A ；2 ：pGEX-4T-NDPK-A/BamH I ；
3 ：pGEX-4T-NDPK-A/EcoR I ；4 ：pGEX-4T-NDPK-A/ BamH I+EcoR I ；5 ：PCR
产物 ；M2 ：DL2000 DNA Marker
图 2 重组表达质粒的鉴定
2.2 GST-NDPK-A融合蛋白的表达、纯化
如图 3 所示，已成功对可溶性上清分布的融合
蛋白 GST-NDPK-A、GST 蛋白进行诱导表达纯化，
纯度达到 90% 以上。
2.3 GST-NDPK-A融合蛋白的鉴定
如图 4 所示，融合蛋白 GST-NDPK-A 能发生特
异性的抗原抗体反应，具有免疫学特异性。
2.4 GST-Pull down筛选及复合蛋白的SDS-PAGE
分离
以 GST-NDPK-A 融合蛋白为诱饵蛋白从 A549
全细胞裂解液中捕获的蛋白质经 SDS-PAGE 电泳后，
银染与考马斯亮蓝染色的结果（图 5）对应显示，
与对照组蛋白带比较，发现在 25 kD 左右处存在明
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第5期140
显的差异蛋白带，即在 A549 细胞中找到与 NDPK-A
潜在性特异结合和相互作用的蛋白。切取考马斯亮
蓝染色的差异蛋白带并将对照 GST 蛋白 Pull down 组
中相应位置的胶也切下，一起进行 LC-MS/MS 鉴定。
70
kD
M 1 2 3
A
4 5 6 7
55
40
35
15
25
B
70
kD
M 1 2 3 4 5 6 7
55
40
35
15
25
M ：蛋白 Marker ；1 ：未诱导 ；2 ：诱导 ；3 ：细菌裂解液上清 ；4 ：细菌裂解液沉淀 ；5 ：杂蛋白洗脱液 ；
6 ：过柱后的细菌裂解液上清 ；7 ：纯化蛋白
图 3 GST-NDPK-A 蛋白（A）和 GST 蛋白（B）诱导表达及纯化
40
kD kD
1 2
25
17
43
15
1 ：GST-NDPK-A ；2 ：A549 全细胞裂解液
图 4 融合蛋白 GST-NDPK-A 的 Western blot 鉴定
70
kD
M 1 2 3 4
55
40
35
25
15
A
70
kD
M 1 2 3 4
55
40
35
25
15
10
B
图 5 GST-Pull down 银染分析（A）及考染分析（B）
A ：M ：蛋白 Marker ；1 ：纯化的 GST 蛋白 ；2 ：对照组，GST 与 A549 细胞裂解液 Pull down ；3 ：试验组，GST-
NDPK-A 与 A549 细胞裂解液 Pull down ；4 ：纯化的 GST-NDPK-A 蛋白 ；箭头所指为差异带
B ：M ：蛋白 Marker ；1 ：纯化的 GST 蛋白 ；2 ：纯化的 GST-NDPK-A 蛋白 ；3 ：对照组，GST 与 A549 细胞裂解
液 Pull down ；4 ：试验组，GST-NDPK-A 与 A549 细胞裂解液 Pull down ；箭头所指为差异带
2.5 NDPK-A相互作用蛋白的质谱鉴定
LC-MS/MS 鉴定出的初级数据处理后用 Mascot
搜索引擎进行 IPI human protein database（V3.68）搜
库。结果（图 6，表 1）分析显示，Fussel-18（functional
Smad-suppressing element on chromosome 18）和 Rrp12
（ribosomal RNA processing 12）成为 NDPK-A 潜在的
体外相互作用蛋白。
3 讨论
寻找互作蛋白能够为深入揭示 NDPK-A 在细胞
中的功能提供新的依据和线索。GST-Pull down 技
术是体外确定两个已知蛋白之间是否存在相互作用
以及筛选与已知融合蛋白相互作用的未知蛋白的有
效方法。因此，本研究构建 GST-NDPK-A 融合蛋白
表达载体，以最优条件诱导获得部分可溶性 GST-
NDPK-A 融合蛋白，上清过柱后，亲和固化在谷胱
2013年第5期 141吕芬等 ：GST-NDPK-A 融合蛋白的原核表达及体外互作蛋白的检测
甘肽琼脂糖珠上，此为纯化后的诱饵蛋白。而前期
经 Western blot 验证 NDPK-A 蛋白在肺腺癌 A549 细
胞系中高表达，说明可在此细胞系中寻找 NDPK-A
的相互作用蛋白。诱饵蛋白与 A549 细胞裂解液以
最佳时间孵育后，捕捉到细胞中有特异性相互作用
的目的靶蛋白，最后 GST 融合蛋白 - 目的蛋白复合
物一起被谷胱甘肽琼脂糖珠沉降下来，沉淀的复合
物经过 SDS-PAGE 电泳分离，从电泳结果发现，在
25 kD 左右处出现新的条带，说明在 A549 中成功筛
选到了 NDPK-A 潜在的相互作用蛋白。
目前蛋白质的鉴定常用的有两种质谱分析技
术［8］：其中，MALDI-TOF-MS 鉴定蛋白质是依靠肽
质量指纹图（PMF）来实现，要求待分析的蛋白质
样品纯度较高，而 SDS-PAGE 分离的蛋白质带通常
含有多个蛋白质。并且，对于蛋白质分子普遍存在
的翻译后修饰，如多肽侧链上的糖基化、磷酸化、
乙酰化等化学修饰，MALDI-TOF-MS 无法鉴定，不
能获得多肽序列，造成鉴定结果准确性不够。而本
研究采用 LC-MS/MS 鉴定蛋白质，通过液相色谱分
离多肽片段，样品不纯对分析影响较小，不仅可以
准确测定蛋白质和肽段的分子量，还能获得肽段
的序列标记及其侧链化学修饰等数据，提高了蛋
白质鉴定结果的准确性。此外，我们不仅对 GST-
NDPK-A 融合蛋白 Pull down 的差异蛋白条带进行了
质谱鉴定，而且对相应位置处 GST 标签 Pull down 的
蛋白亦做了鉴定，以 GST 标签 Pull down 的质谱结
果为对照，删除了一些可能与 GST-NDPK-A 融合蛋
白中的 GST 标签结合的互作蛋白，如 ：Glutathione
S-transferase P，通 过 试 验 过 程 中 GST 标 签 蛋 白 的
预吸附和质谱鉴定结果的对照设定，大大提高了
NDPK-A 互作蛋白筛选的准确性。
质谱鉴定出两个可能与 NDPK-A 结合的相互作
用蛋白，分别是 Fussel-18（functional Smad-suppres-
sing element on chromosome 18） 和 Rrp12（ribosomal
RNA processing 12），两者均为文献中之前未见报
道的新的 NDPK-A 结合蛋白。NDPK-A 广泛的分布
于细胞浆中，少量存在于细胞核、细胞膜、线粒
体、微管和组织液中［9］，其功能的发挥与它在细胞
中的定位关系密切。鉴定到的 Fussel-18 主要定位
于细胞核与细胞质，而 Rrp12 表达于细胞核，这与
NDPK-A 的分布是相一致的。这说明重组融合蛋白
GST-NDPK-A 是有功能的，并且适合于招募细胞中
存在的相互作用蛋白伙伴。
Fussel-18，属于癌蛋白 Ski 家族［10］。研究发现，
100
80
60
40
R
el
at
iv
e A
bu
nd
an
ce
20
0
0 200 400 600
m/z
800 1000 1200
100
A B
80
60
y 2
y 2
y 1
y 4
y 8 b 10
y 3
y 5
b 1
0 +
+
y*
12
++
a 1
2 +
+
b 11
++
b 12
++
b 13
++
y 3 b
11
b 6
y 7
y 8
b 10
y 10
b
11
b 12
40
R
el
at
iv
e A
bu
nd
an
ce
20
0
0 200 400 600
m/z
800 1000 1200 1400 1600
A ：peptide sequence tags（EELQKVLFEQIDLR）of FUSSEL-18 protein ；B ：peptide sequence tags（TLGMAISERPDLR）of RRP12 protein
图 6 用 LC-MS/MS 质谱鉴定 SDS-PAGE 分离的差异蛋白条带
表 1 结合蛋白的分类
Protein IDs Gene Names Protein Name Mol. Weight（kD） Sequence Coverage（%）
IPI00101186 RRP12 RRP12-like protein 143.702 3.2
IPI00886728 FUSSEL18
Functional Smad-suppressing element on
chromosome 18
33.354 1.1
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2013年第5期142
在神经系统中，Fussel-18 与 Smad2 和 Smad3 蛋白相
互作用，抑制了 TGF-β 的信号转导［10］。TGF-β 信
号的传递过程由 Smad 家族蛋白参与调控，并与细
胞的生长、增殖、分化、凋亡相关［11，12］。有报道
显示，TGF-β 受体的相互作用蛋白之一 STRAP（丝
苏氨酸激酶受体相关蛋白），它通过促进 TGF-β 受
体与 Smad7 蛋白作用的稳定性，实现对 TGF-β 信号
传递的抑制［13］。另有研究显示，NDPK-A 与 STRAP
可以利用半胱氨酸残基上二硫键交联的方式，直接
结合互相作用，不仅能够对 STRAP 介导的 TGF-β 信
号的抑制作用起到增强效应，还能对 TGF-β 调节的
凋亡和生长带来影响［7］。这里暗示 NDPK-A 通过与
STRAP 的直接结合，可能成为 TGF-β 信号的负调
控者。此外，TGF-β 在癌症生物学中被认为能够抑
制正常细胞的增殖，反而促进转移性肿瘤细胞的增
殖［14］。这些结果引导我们提出疑问 ：NDPK-A 介导
调节 TGF-β 信号是否与 NDPK-A 肿瘤转移抑制功能
相关。因此，进一步研究 NDPK-A 与 Fussel-18 的相
互作用关系，预期能更深层次地揭示 NDPK-A 调节
TGF-β 信号的分子机制及与肿瘤抑制相关的生物学
功能。
本研究鉴定到的另一个蛋白 Rrp12，作为前体
40S 和 60S 亚基的一个稳定组成部分，参与调节核
糖体亚基成熟与出口［15］。这暗示着 NDPK-A 在细
胞内可能与核糖体组装有关。近来研究发现，Rrp12
影响着细胞周期的进程，Rrp12 的缺失会导致 S 期
进入障碍、S 期以及有丝分裂期的延滞［16］。随着对
细胞周期研究的不断加深，人们发现细胞周期紊乱
与肿瘤的发生有密切关系，并提出“肿瘤可能是一
类细胞周期性疾病”。前期研究发现，NDPK-A 可以
使宫颈癌细胞 Caski 和 SiHa 细胞周期延滞在 G1 期，
并有效抑制细胞增殖［17］。此外，也有报道，Rrp12
参与了 DNA 损伤反应的调节［16］。在 NDPK-A 众多
生物学活性中，3-5 核酸外切酶活性，与其具备的
DNA 损伤修复功能密切相关［18］。NDPK-A 的低表达
削弱了 DNA 损伤修复功能，基因发生突变，染色体
异常，随之会发生细胞癌变。因此，验证 Rrp12 与
NDPK-A 的相互作用关系，探讨这二者在细胞周期
及 DNA 损伤反应中的机理与意义，有助于研究它们
在肿瘤发展过程中的生理功能。
通过初步的试验结果可知，NDPK-A 与 Fussel-
18 及 Rrp12 在 体 外 可 能 存 在 相 互 作 用， 但 是
NDPK-A 与这二者在体内外的相互作用情况、及具
体的结合区段，还需要进一步的研究确证，它们相
互作用的生物学功能及意义也有待阐明，这将为基
于 NDPK-A 的药靶研究增加可靠的试验及理论依据。
4 结论
本研究结合经典分子生物学与蛋白组学方法，
通过构建融合蛋白表达载体、高效诱导可溶性表
达、与谷胱甘肽琼脂糖珠亲和层析，实现了 GST-
NDPK-A 的原核表达和纯化，并采用 GST-Pull down
联合 LC-MS/MS 质谱分析技术筛选鉴定到两个与
NDPK-A 的互作蛋白，分别为 Fussel-18、Rrp12。
参 考 文 献
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（责任编辑 马鑫）