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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2015, 31(2):167-172
葡萄糖淀粉酶（glucoamylase，EC 3.2.1.3）俗称
糖化酶，是一种由微生物分泌的胞外酶，可水解淀
粉非还原性末端的葡萄糖苷键，产生葡萄糖［1］。作
为一种重要的酶制剂，葡萄糖淀粉酶被广泛应用于
食品和发酵工业中，且需要量与日俱增。工业生产
使用的葡萄糖淀粉酶多为液态酶，具有一定的局限
性，如易失活、热稳定性差、酸性反应环境和水解
时间长等缺点［2］。因此世界各国科学家对葡萄糖淀
粉酶的固定化进行了大量的研究，获得了稳定性强、
可反复使用、适于生产的连续化和自动化等多项优
收稿日期 ：2014-07-07
基金项目 ：吉林省教育厅资助项目（吉教科合字［2013］第 354 号）
作者简介 ：隋春红，女，博士，副教授，研究方向 ：纳米材料 ；E-mail ：suichunhong@163.com
葡萄糖淀粉酶在高压静电纺 PEI/PVA 纳米纤维膜上的
离子吸附固定
隋春红1  王程2  董顺福1  韩丽琴1
（1. 吉林医药学院药学院，吉林 132013 ；2. 吉林医药学院基础医学院，吉林 132013）
摘 要 ： 旨在应用离子结合法将葡萄糖淀粉酶固定在 PEI/PVA 纳米纤维膜上并对其理化性质进行研究。采用高压静电纺丝
技术制备聚乙烯亚胺（PEI）/ 聚乙烯醇（PVA）纳米纤维膜，采用热交联方法使其具备水稳定性后，再利用离子吸附法固定葡萄
糖淀粉酶。结果显示，利用红外光谱（FT-IR）表征固定有葡萄糖淀粉酶的 PEI/PVA 纳米纤维膜，表明葡萄糖淀粉酶可成功固定在
静电纺丝形成的 PEI/PVA 纳米纤维膜表面。通过固定化葡萄糖淀粉酶的酶学性质鉴定，发现固定化葡萄糖淀粉酶的最适反应温度
为 65℃，比游离的葡萄糖淀粉酶提高了 6℃ ；固定化葡萄糖淀粉酶的适用 pH 值范围明显变宽 ；热稳定性和存贮稳定性显著增强且
可以重复使用。利用离子吸附法能简便地将蛋白质分子固定于纳米纤维膜上，具有一定的应用前景。
关键词 ： 静电纺丝 ；PEI/PVA 纳米纤维膜 ；葡萄糖淀粉酶 ；离子吸附 ；固定化
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.02.025
Immobilization of Glucoamylase onto the Electrospinning PEI/PVA
Composite Nanofiber Membrane via Ionic Adsorption
Sui Chunhong1 Wang Cheng2 Dong Shunfu1 Han Liqin1
（1. Department of Pharmacy，Jilin Medical College，Jilin 132013 ；
2. Department of Basic Medical Sciences，Jilin Medical College，Jilin 132013）
Abstract ： It was to study the physical and chemical properties of immobilization of glucoamylase on the PEI/PVA nanofibers via ion
bonding. Polyethyleneimine（PEI）/polyvinyl alcohol（PVA） composite nanofiber membrane was prepared by electrospinning technology, and
thermal crosslinking was applied to make it possess water stability. Glucoamylase was immobilized onto the electrospinning PEI/PVA composite
nanofiber membrane via ion adsorption. Results showed that fourier transform infrared spectrum（FT-IR） indicated that glucoamylase can be
successfully fixed on the surface of the electrospinning PEI/PVA composite nanofiber membrane. Then, the enzymatic properties of immobilized
glucoamylase were identified. The results have shown that the optimum reaction temperature of immobilized glucoamylase is 65℃, 6 degrees
higher than free glucoamylase, and the applicable pH range of immobilized glucoamylase is wider than free glucoamylase significantly. In
addition, immobilized glucoamylase also has good thermal stability, storage stability and reusability. The use of ion adsorption can help the
protein molecules easily fixed onto the nanofiber membrane, so this method processes a certain application.
Key words ： electrospinning ；PEI/PVA composite nanofiber membrane ；glucoamylase ；ionic adsorption ；immobilization
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.2168
点的固定化酶［3］。酶的固定化方法主要有共价键结
合法、吸附法、包埋法、交联法等［4］。其中，吸附
法因其工艺简单、反应条件温和、载体材料丰富而
备受青睐，包括物理吸附和离子吸附两种类型［5］。
利用吸附法制备的固定化酶暴露于载体之外，而且
酶的空间结构几乎不发生改变。目前，用于固定化
酶的载体已达上百种，包括明胶、磁性微球、活性
炭、有序介孔材料、硅藻土和亲水性微滤膜等［6］。
纳米材料作为一种新型的酶固定化载体越来越受关
注，根据物理形态的差异性大致可以分为纳米粒（包
括纳米球、纳米囊）、纳米纤维（包括纳米管、纳米
线）、纳米膜等［7］。静电纺丝法制备的纳米纤维膜
具有比表面积大、孔隙率高和易于分离回收等优点，
可以作为一种优良的酶固定化载体，而且制备成本
低、工艺简单［8，9］。
本研究采用静电纺丝法制备出携带正电荷的聚
乙烯亚胺（PEI）/ 聚乙烯醇（PVA）纳米纤维膜，
热交联使其具备水稳定性后通过离子间相互作用力
将带有负电荷的葡萄糖淀粉酶吸附在纳米膜上，达
到固定化的目的，同时鉴定固定化葡萄糖淀粉酶的
酶学特征，旨在为进一步研究利用新型固定化酶材
料和方法提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
H-7500 型场发射环境扫描电子显微镜（SEM）
（Japan，HITACHI）；Magna 560 型傅立叶红外光谱
（FT-IR）仪（USA，NICOLET），其扫描范围为 4 000-
400 cm-1 ；UV-2550 紫外 - 可见分光光度计（Japan，
SHIMADZU）；高压静电纺丝装置（吉林大学化学学
院自组装）；振荡培养箱（上海精密仪器仪表公司）。
聚乙烯亚胺（PEI，平均分子量为 70 000）购于阿
拉丁试剂公司 ；聚乙烯醇（PVA，聚合度 175±50）
购于安徽皖维高新材料股份有限公司 ；50% 戊二醛
（GA）购于美国 Sigma 公司 ；葡萄糖淀粉酶购于苏
柯汉（潍坊）生物工程有限公司；可溶性淀粉、乙酸、
碘化钾、碘、盐酸、氢氧化钠、硫酸、硫代硫酸钠、
碳酸钠等分析纯试剂均购于北京化工厂。
1.2 方法
1.2.1 PEI/PVA 复 合 纤 维 的 制 备 将 50%（M/M）
的 PEI 溶 液 和 10%（M/M） 的 PVA 溶 液 按 质 量 比
1∶15 混合，获得 12.5%（M/M）的 PEI/PVA 溶液，
使混合高聚物溶液中 PEI 与 PVA 的质量比为 1∶3。
再将混合高聚物溶液倒入带有电极的塑料管中，调
节合适的静电纺丝参数，进行高压静电纺丝。静电
纺丝的各项指标参数分别为 ：工作电压为 20 kV，喷
口与接收板的距离为 10 cm，溶液流速为 1.5 mL/h。
所制备的复合纳米纤维膜进行热交联（120℃保温
12 h）处理，使其具有疏水性后置于真空干燥器中
备用。
1.2.2 葡萄糖淀粉酶的固定化 葡萄糖淀粉酶的等
电 点（isoelectric point，pI） 在 3.8-5.6 之 间［2］。 将
葡萄糖淀粉酶分别溶解于 pH 为 6、7、8 和 9 的磷
酸盐缓冲液（PBS）中，使酶分子携带负电荷，以
便有效地与带有正电荷的复合纤维膜发生离子吸附。
再将疏水性的 PVA/PEI 纳米复合纤维薄膜浸入不同
pH 值的葡萄糖淀粉酶溶液（0.5 g/L）中，在 25℃的
温度下震荡 24 h，用 PBS（pH 为 7.4）快速冲洗 3 遍，
真空干燥待测。
1.2.3 酶活力测定 葡萄糖淀粉酶活力单位定义 ：
在 pH4.6、温度为 58℃时，1 h 内葡萄糖淀粉酶水解
淀粉释放出 1 mg 还原糖所需要的酶量为一个酶活力
单位（U）。酶比活力定义 ：单位重量的游离酶或载
酶 PEI/PVA 纳米纤维膜所具有的酶活力单位数，计
量单位为 U/g。反应液是由 10 mL 的质量浓度为 2%
的淀粉溶液和 5 mL 的 pH4.6 的醋酸缓冲液混合而成。
在 58℃水浴条件下加热 10 min 后，加入 0.5 g 载酶
PEI/PVA 纳米纤维膜，在 58℃恒温反应 20 min。反
应结束后，立刻将反应液置于沸水浴中 10 min，终
止酶反应。以葡萄糖的含量（mg）为横坐标，540
nm 处吸光度值（OD540）为纵坐标绘制标准曲线，生
成的葡萄糖量采用 3，5- 二硝基水杨酸（DNS）法测
定［10］。
1.2.4 酶促反应动力学参数测定 取 0.1 g 游离酶和
0.5 g 固 定 化 酶， 分 别 以 0.5%、1%、1.5%、2% 和
2.5% 浓度的可溶性淀粉为底物［S］，按酶活力测定
方法测定葡萄糖的生成量，计算出酶促反应速度 V。
采用 Linweaver-Burk 作图法（即双倒数作图法），以
1/［S］为 X 轴，1/V 为 Y 轴，经一元线性回归拟合，
所拟合直线在 X 轴上的截距为 -1/Km，在 Y 轴上的
2015,31(2) 169隋春红等：葡萄糖淀粉酶在高压静电纺 PEI/PVA 纳米纤维膜上的离子吸附固定
截距为 1/Vmax，由此求出 Km 和 Vmax。
2 结果
2.1 静电纺丝法制备的PEI/PVA纳米纤维膜
由 图 1-A 展 示 出 PEI/PVA 纳 米 纤 维 膜 在 宏 观
上呈现纤维毯状结构，机械强度优良。PEI/PVA 纳
米纤维膜的场发射环境扫描电子显微照片（图 1-B）
显示，PEI/PVA 纳米纤维构建出具有三维孔道结构
2.2 葡萄糖淀粉酶在PEI/PVA纳米纤维膜上的固定
PEI/PVA 复合纳米纤维在 3 335 cm-1 出现的最
大吸收峰归属于羟基（O-H）和亚氨基（N-H）的伸
缩振动 ；2 926 cm-1 的吸收峰为甲基（C-H）的不对
称伸缩振动 ；2 865 cm-1 较弱的吸收峰为来源于次甲
基（C-H）的对称振动 ；1 660、1 631 和 930 cm-1 两
处的吸收峰分别来源于 PEI 分子中伯胺基团（N-H）
A B C
A ：宏观的 PEI/PVA 纳米纤维膜 ；B ：扫描电镜下的 PEI/PVA 纳米纤维膜 ；C ：热交联后的复合纤维膜
图 1 静电纺丝法制备的 PEI/PVA 纳米纤维膜
的膜性材料，而且纤维表面平滑、直径均匀（约为
600±5 nm），经过热交联处理（图 1-C）后，纤维直
径有所降低（约为 500±5 nm）。在热处理过程中水
分的蒸发导致纤维直径减小，从而增加了纤维膜的
比表面积和孔隙率，说明经过热交联处理后纳米纤
维薄膜表面暴露出更多的功能基团，引起纤维表面
对糖化酶的吸附位数量的增加，更加有利于提高纤
维薄膜对糖化酶的静电吸附作用。
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
PEI-
PVA
-Glu
coam
ylase
in p
H 9
PEI-P
VA-G
lucoa
myla
se in
pH 8
PEI-P
VA-G
lucoa
myla
se in
pH 7
PEI-P
VA-G
lucoa
mylas
e in p
H 6
PEI/
PVA
nan
ofibe
rs
ᕪᓖa.u.
⌒䮯cm-1
图 2 红外光谱图
的弯曲振动和平面外（N-H）的弯曲振动。而且在
1 140 cm-1 处出现的吸收峰是 PVA 晶体化的主要标
志，说明经过热交联后制备的复合纤维属于疏水性
材料，将更有利于提高葡萄糖淀粉酶的固定化程度
和材料的重复使用性能。当把经过热处理的疏水性
复合纤维浸入到不同 pH 值溶液中时，通过红外谱
图（图 2）可以看出，经过葡萄糖淀粉酶负载后在
1 610 cm-1 和 972 cm-1 处出现了新的特征吸收峰，分
别归属于酰亚胺基团（-CONH-）和 C-S 键的伸缩振动；
而且在 1 515 cm-1 和 1 505 cm-1 出现的另外两个特征
峰归属于酰胺中的 N-H 变形振动，即酰胺化合物的
吸收带Ⅱ，这说明葡萄糖淀粉酶已经成功固载于纳
米复合纤维膜之上。pH 数值越大即溶液的碱性越强，
对应的糖化酶的特征吸收峰也越明显，说明在碱性
条件下更加有利于葡萄糖淀粉酶的固定化。特别是
当溶液的 pH 值为 9 时，特征吸收峰明显变宽且强
度增大，这说明葡萄糖淀粉酶与载体之间存在着相
互作用。
2.3 固定化葡萄糖淀粉酶的理化性质
2.3.1 酶活力 以吸光度值为纵坐标，葡萄糖浓
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.2170
度（mg/mL）为横坐标，测定并计算出回归方程为
y=1.840 6x+0.012 8（R2=0.999 8）。分别测定在不同
pH 条件下制备的固定化葡萄糖淀粉酶的活力、比活
力和固化率，结果（表 1）显示，酶的固化率随固
化环境 pH 值的增大而增加 ；此外，与游离的葡萄
糖淀粉酶相比，固定化酶的活力明显降低，约为游
离酶的 1/10。
表 1 pH 条件下制备的固定化葡萄糖淀粉酶活力、比活力
和固化率
pH 值 固定化酶活力 /U
固定化酶比活力 /
（U·g-1）
固化率 /
（mg·g-1）
6 520.59±13.18 939.07±13.10 10.08±1.50
7 604.94±11.09 1034.80±14.56 13.67±1.58
8 732.48±12.88 1221.53±16.99 18.12±1.23
9 564.19±14.33 919.34±13.71 21.60±1.46
2.3.2 最适反应 pH 和最适反应温度 测定固定化
的葡萄糖淀粉酶与游离的葡萄糖淀粉酶在不同 pH
和温度下的酶比活力。结果发现，游离酶与固定
化酶的最适 pH 基本相同，分别为 4.61 和 4.57（图
3）；固定化前后的葡萄糖淀粉酶的最适催化反应温
度发生较大改变，游离酶的最适反应温度为 59.3℃，
与产品说明一致，而固定化酶的最适反应温度为
65.1℃，比游离酶提高了约 6℃（图 4）。固定化酶
的适用温度范围和 pH 适用范围均较游离酶明显变
宽，这可能是由于 PEI/PVA 纳米纤维膜的保护降低
了酶对环境的敏感性。
2.3.3 酶促反应动力学参数 根据底物浓度及酶促
反应速度作 Lineweaver-Burk 双倒数曲线图，结果见
2.3.4 热稳定性和贮存稳定性 通过在 pH4.6 的醋
酸缓冲液中，分别测定固定化葡萄糖淀粉酶和游离
的葡萄糖淀粉酶在不同温度下保持 1 h 后的酶活力
来鉴定其热稳定性。结果（图 6）显示，在高温环
境下，酶活力均明显下降，但固定化酶的热稳定性
要明显优于游离酶。另将一批游离酶溶液和固定于
PEI/PVA 纳米纤维膜上处于湿态的葡萄糖淀粉酶于
4℃贮存于密封的容器中，每隔 2 d 取出一定量分别
测定酶的活力，观察酶活力的降低趋势，鉴定其贮
存稳定性。结果（图 7）显示，固定化葡萄糖淀粉
酶和游离葡萄糖淀粉酶的活力均随着储存时间的延
长而降低，但经 PEI/PVA 纳米纤维膜固定化后的葡
萄糖淀粉酶储存稳定性显著提高。储存 20 d 后，游
离酶只能保留初始酶活力的 21.61%，固定化酶仍能
2 3 4 5 6 7 8 9 10
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
പᇊॆ䞦⑨⿫䞦⴨ሩ䞦⍫/%
pH
30 40 50 60 70 80
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
⴨ሩ䞦⍫% ⑙ᓖćപᇊॆ䞦⑨⿫䞦
图 3 pH 对葡萄糖淀粉酶活力的影响
图 4 温度对葡萄糖淀粉酶活力的影响
图 5。通过回归方程求得固定化葡萄糖淀粉酶的 Km
值 为 17. 82 mg/mL，Vmax 为 5.33 mg/（mL·h）；游
离 的 葡 萄 糖 淀 粉 酶 的 Km 值 为 8.07 mg/mL，Vmax 为
10.80 mg/（mL·h）。
-150 -100 -50 0 50 100 150 200 250
-0.1
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1.0
Immobilized Glucoamylase
y = 0.00334 x + 0.1874R2=0.9976
Free Glucoamylase
y = 0.00075 x + 0.9256R2=0.99891/Vh·mL/mg
-1
1/[S]/mL·g-1
图 5 葡萄糖淀粉酶 Lineweaver-Burk 双倒数曲线
2015,31(2) 171隋春红等：葡萄糖淀粉酶在高压静电纺 PEI/PVA 纳米纤维膜上的离子吸附固定
保持初始酶活力的 59.52%。
2.3.5 重复使用性 衡量固定化酶在工业上是否具
有广泛的应用性的一个重要指标就是固定化酶的重
复使用性。取反应后的固定化葡萄糖淀粉酶用蒸馏
水冲洗 3 次，以去除表面的底物和产物溶液，然后
再在 pH 值 4.6，60℃下重复使用，连续重复使用 10
次并测定其酶活力。结果（图 8）显示，在第 3 次
使用后酶活力开始有一定幅度下降，从第 7 次使用
开始酶活力下降的趋势减缓，在此之后再次使用时
能保持在一个稳定的水平，但酶活力偏低。
3 讨论
与传统纺丝法相比，静电纺丝法制备聚合物纳
米纤维具有设备简单、操作容易以及高效等特点，
因此被认为是制备聚合物纳米纤维最有效的方法。
因此，基于携带大量正电荷的 PEI 为主体的高分子
材料制备纳米复合纤维薄膜可以与带负电荷的糖化
酶通过静电作用而结合［11］，从而达到固定糖化酶的
目的。通过离子结合法制备的固定化糖化酶可以提
高酶的利用率和重复使用性，为进一步研究利用新
型固定化酶材料提供依据。
从不同 pH 条件下制备的固定化葡萄糖淀粉酶
活力、比活力和固化率的结果可以看出，酶的固化
率随固化环境 pH 值的增大而增加，这可能是由于
在较大 pH 环境下，酶蛋白所带负电荷较多，与带
有正电荷的 PEI/PVA 纳米纤维膜的吸附结合更加牢
固［12］。然而固定化葡萄糖淀粉酶的活力在 pH=9 时
并没有增高，反而降低，说明在过高 pH 环境下，
酶蛋白发生结构上的变化，即酶蛋白发生变性，从
而导致酶活力的降低。此外，与游离的葡萄糖淀粉
酶相比，固定化酶的活力明显降低，其原因在于固
定后的酶分子的活动自由度受纳米纤维膜载体的限
制而显著降低。
由酶促反应动力学参数比较发现，固定化葡萄
糖淀粉酶 Km 值 > 游离葡萄糖淀粉酶的 Km 值，并且
固定化酶的最大酶促反应速度 Vmax< 游离酶的 Vmax。
这说明固定化糖化酶对底物的亲和力要小于游离酶，
即酶的固定化使酶对底物的亲和性降低，这与固定
化载体的空间障碍和扩散限制作用有关，即载体限
制了酶分子的空间自由度，使酶与底物分子接触受
阻。另外一种可能是固定后的酶分子活性中心的空间
构象发生变化，影响了酶活性中心对底物分子的定
位作用［13］。
固定化葡萄糖淀粉酶的热稳定性和贮存稳定性
均优于游离酶，说明酶分子经过固定化后，受到了
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
⴨ሩ䞦⍫% ᰦ䰤dപᇊॆ䞦⑨⿫䞦
图 7 固定化葡萄糖淀粉酶的贮存稳定性
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
0
20
40
60
80
100
⴨ሩ䞦⍫% 䟽༽֯⭘⅑ᮠ
图 8 固定化葡萄糖淀粉酶的重复使用性
60 70 80 90
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
⴨ሩ䞦⍫% ⑙ᓖćപᇊॆ䞦⑨⿫䞦
图 6 固定化葡萄糖淀粉酶的热稳定性
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.2172
纳米纤维膜载体的保护作用，一定程度上屏蔽了外
界环境对酶蛋白的影响。经重复使用后，固定化葡
萄糖淀粉酶活力有所下降，表明薄膜材料随着使用
次数的增加，会有少量的酶从纤维膜上脱附下来［14］，
随着酶含量的减少，酶活力也随之下降。
4 结论
运用高压静电纺丝技术制备带有大量正电荷的
纳米复合纤维薄膜（PEI/PVA），使其作为载体通过
正负离子间作用力将葡萄糖淀粉酶固定化。通过扫
描电镜和红外光谱进行表征，从而确定复合纤维的
形貌及葡萄糖淀粉酶负载后分子的内部结构特征，
同时对其理化性质进行研究。结果表明，固定化的
葡萄糖淀粉酶保持了较高原酶（游离酶）的活性，
同时对游离酶及固定化糖化酶的最适反应温度、最
适 pH 及热稳定性和贮存稳定性进行了比较，研究
发现，葡萄糖淀粉酶被纳米复合纤维薄膜 PEI/PVA
固载后，拓宽了其最适反应条件、提高了酶的利用
效率和重复使用性。
参 考 文 献
［1］ Slivinski CT, Machado AVL, Iulek J, et al. Biochemical characteris-
ation of a glucoamylase from Aspergillus niger produced by solid-
state fermentation ［J］. Braz Arch Biol Technol, 2011, 54（3）：
559-569.
［2］ Kumar P, Satyanarayana T. Microbial glucoamylases ：characteristics
and applications ［J］. Crit Rev Biotechnol, 2009, 29（3）：225-
255.
［3］ Homaei AA, Sariri R, Vianello F, et al. Enzyme immobilization ：an
update ［J］. J Chem Biol, 2013, 6（4）：185-205.
［4］ 隋颖 . 生物酶固定化方法的研究新进展［J］. 山东化工 , 2013,
42（8）：71-72.
［5］ 游金坤 , 余旭亚 , 赵鹏 . 吸附法固定化酶的研究进展［J］. 化
学工程 , 2012, 40（4）：1-5.
［6］ 董炎炎 , 刘长虹 , 马霞 . 酶固定化载体材料的研究进展［J］.
上海应用技术学院学报 ：自然科学版 , 2013, 13（4）：295-298.
［7］ 高启禹 , 徐光翠 , 陈红丽 , 等 . 纳米材料固定化酶的研究进
展［J］. 生物技术通报 , 2013（6）：20-24.
［8］ 代云容 , 牛军峰 , 殷立峰 , 等 . 静电纺丝纳米纤维膜固定化酶
及其应用［J］. 化学进展 , 2010, 22（9）：1808-1817.
［9］Greiner A, Wendorff JH, Yarin AL, et al. Biohybrid nanosystems with
polymer nanofibers and nanotubes ［J］. Appl Microbiol Biotechnol,
2006, 71（2）：387-393.
［10］王程 , 董顺福 , 韩丽琴 , 等 . 以高压静电纺 PVA 纳米纤维膜
为载体化学合成法固定葡萄糖淀粉酶［J］. 化工新型材料 ,
2013, 41（12）：124-127.
［11］卢艳敏 , 崔海信 , 崔金辉 , 等 . 磁性纳米颗粒作为基因转染载
体的研究［J］. 生物技术通报 , 2012（8）：199-204.
［12］王彦芳 , 陈奇 , 叶蕊芳 , 等 . 明胶 /PEG 制备多孔性 SiO2 载体
及葡萄糖淀粉酶的固定［J］. 无机化学学报 , 2007, 23（11）：
1959-1964.
［13］刘洪 , 张小云 , 曾美霞 . 微波辐射下双酶催化淀粉水解的动力
学研究［J］. 精细化工 , 2010, 27（1）：70-73.
［14］李靖 , 陈欢林 , 柴红 . 金属螯合亲和膜吸附分离与纯化溶菌酶
的研究（Ⅱ）- 不同金属螯合亲和膜对溶菌酶的吸附性能［J］.
高等学校化学学报 , 1999, 20（8）：1322-1327.
（责任编辑 马鑫）