全 文 ：·研究报告·
生物技术通报
B IO TECHNOLOGY　BULL ETIN 2009年第 8期
白腐真菌 SYBC2L2漆酶的分离纯化
及其在毛纺染料脱色中的应用
王志新　施晓燕　蔡宇杰　廖祥儒
(江南大学工业生物技术教育部重点实验室 ,无锡 214122)
　　摘 　要 : 　经过硫酸铵分级盐析、DEAE2cellulose离子交换层析、SephacrylTM S2200柱层析 ,从白腐菌株 Phellinus sp. SYBC2
L2所产的漆酶中纯化得到电泳纯漆酶 Lac3,其纯化倍数为 28. 27,回收率为 14. 76%。Lac3为一种糖蛋白 ,糖含量 29. 66% ,
SDS2PAGE表观分子量约为 64. 3 kD;其催化氧化 DMP (2, 62D imethoxyphenol)的表观 Km值和 Vmax分别为 1. 01 mmol/L和
186. 2 U /mg蛋白。Lac3的最适温度为 60℃,最适 pH为 3. 5;在 30℃～50℃和 pH 4. 5～9. 0范围内稳定。Cu2 + 、SO4 22、CO3 22对
Lac3具有一定促进作用 ,而 Fe3 + 、Fe2 + 、NO3 - 则具有抑制作用。色素的最佳脱色条件为 (Lac3终浓度为 2 U /m l) :媒介元 PV
在温度 50 ℃、pH值 3. 0的条件下反应 2 h,脱色率可达 95. 10% ;弱酸蓝在温度 40 ℃、pH值 4. 0的条件下作用 3 h,脱色率为
75. 09%。
关键词 : 　Phellinus sp. 　SYBC2L2　漆酶 　分离纯化 　酶学性质 　脱色
Pur if ica tion of Laccase from the W hite Rot Fungus Stra in SYBC2L2
and Its Application in Decolor ization of W oolen Dyes
W ang Zhixin　Shi Xiaoyan　Cai Yujie　L iao Xiangru
( The Key Laboratory of Industria l B iotechnology, M inistry of Education, J iangnan University, W uxi 214122)
　　Abs trac t: 　The laccase Lac3 from Phellinus sp. SYBC2L2 was purified by salt p recip itation with ammonium sulphate, DEAE2cel2
lulose ion exchange column chromatography and SephacrylTM S2200 gel column chromatography. Purification of 28. 27 fold was achieved
with an overall yield of 14. 76 %. Lac3 was a glycop rotein with carbohydrate content of 29. 66%. SDS2PAGE showed that the apparent
molecular weight of the laccase was 64. 3 kD. The apparent Km and Vmax of Lac3 for DMP was 1. 01 mmol/L and 186. 2 U /mg p ro2
teins, respectively. The op timum temperature and pH value was 60℃ and 3. 5, respectively. Lac3 was stable within 30℃ to 50℃,
and pH range from 4. 5 to 9. 0. The laccase activity was enhanced by Cu2 + , SO4
2 -
and CO3
2 -
, while inhibited by Fe3 + , Fe2 + and
NO3
-
. The op timal condition was obtained as follows, the decolorization rate of D iamond B lack PV reached 95. 10 % in 2 h at 50℃,
pH 3. 0, and the decolorization rate of disperse black reached 75. 09% in 3 h at 40℃, pH 4. 0.
Key wo rds: 　Phellinus sp. 　SYBC2L2　Laccase　Purification　Properties　Decolorization
收稿日期 : 2009203226
基金项目 :长江学者和创新团队发展计划 ( IRT0532)
作者简介 :王志新 (19802) ,女 ,博士研究生 ,主要研究方向为白腐真菌漆酶 ; E2mail: wangzhixin8002@yahoo. com. cn
通讯作者 :廖祥儒 (19642) ,男 ,教授 ,博士生导师 ,主要研究方向为生物化学和分子生物学 ; E2mail: liaoxiangru@163. com　　漆酶 (Laccase,ρ2diphenoloxidase, EC 1. 10. 3. 2)是一种含铜的多酚氧化酶 ,其作用底物广泛 ,能够催化酚类、芳胺类、羧酸类、生物色素和非酚类物质的氧化 ,使之生成相应的醌类化合物、羰基化合物和水。漆酶广泛存在于自然界中 ,主要分为漆树漆酶( rhus lactase)和真菌漆酶 ( fungal lactase)两大类 ,其 中大部分漆酶来源于白腐真菌 [ 1 ]。目前 ,我国工业废水对环境的污染十分严重 ,其中染料工业是化学工业中对环境污染最为严重的产业之一。纺织工业中的活性织物染料有 90%没有经过处理而排入河流 ,其中含有很多有毒物质 ,如靛类染料、偶氮和蒽醌型染料。此外 ,通常这些染料被
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2009年第 8期 王志新等 :白腐真菌 SYBC2L2漆酶的分离纯化及其在毛纺染料脱色中的应用
设计成一类防水、抗光照、抗氧化的生物难降解的化
合物 ,因此 ,染料工业废水的综合治理问题已成为当
今国内外环境科学界亟需解决的一大难题。由于白
腐真菌漆酶具有单电子氧化还原电位高、催化活性
强等特点 ,可以氧化芳香环化合物 ,对纺织染料的脱
色及降解效果明显。近年来 ,随着人们环保意识的
增强 ,漆酶在污水治理方面的作用显得越来越重要 ,
成为酶工程与环境保护交叉领域研究的热点 [ 2～6 ]。
白腐菌发酵周期较长 ,极易被污染 ,因而利用白
腐菌进行染料脱色有一定的技术难度。对 Phellinus
sp. SYBC2L2所产漆酶进行了分离纯化和酶学性质
研究 ,同时研究了纯酶 Lac3对两种结构不同的毛纺
染料的脱色作用 ,以期为今后的研究和工业生产提
供一定的理论依据。
1　材料与方法
111　菌种
菌株 Phellinus sp. SYBC2L2,分离自无锡青山湾
香樟树。
112　主要试剂
ABTS [ 2, 2′2Azino2bis ( 32ethylbenzothiazoline262
sulfonic acid) ]、DMP (2, 62D imethoxyphenol) , DEAE2
cellulose购自 Sigma公司 ;蛋白质分子量标准 (宽 )
mark购自大连宝生物 ;其他试剂均为国产分析纯。
色素 (弱酸蓝、媒介元 PV)取自无锡某毛纺印染厂。
113　漆酶活性测定
按文献 [ 7 ]方法进行 ,以每分钟氧化 1μmol的
DMP生成 3, 5, 3′, 5′2四甲氧基二苯醌 (ε=49. 6 mmol21·
L·cm21 )所需要的酶量定义为 1个酶活力单位 (U)。
114　蛋白质含量测定
采用考马斯亮蓝 G2250方法进行蛋白质含量测
定 ,以牛血清白蛋白为标准 [ 8 ]。
115　漆酶的分离纯化
11511　粗酶液提取 　菌株 Phellinus sp. SYBC2L2
固态发酵 9 d,然后将发酵的酶曲与水按 1∶5的比例
浸泡过夜 , 8 000 g、4℃条件下离心 ,得上清液 ,即为
粗酶液。
11512　硫酸铵分级盐析 　粗酶液中缓慢加入硫酸
铵 ,并进行搅拌 ,使其逐级达到 10% ～90% (w / v)的
饱和度 ,待充分沉淀后 ,在 8 000 g, 4℃条件下离心
10 m in,取少量上清液测定各部沉淀后的漆酶酶活 ,
以确定硫酸铵分级沉淀的范围。
11513　DEAE2cellulose柱层析 　将装填有 DEAE2
cellulose离子交换介质的层析柱 (1. 6 cm ×30 cm )
用 pH6. 0、20 mmol/L柠檬酸 2磷酸氢二钠缓冲液平
衡 ,上样后 ,先用同样的缓冲液进行洗脱 ,然后分别
用含 NaCl浓度为 0、0. 1、0. 2和 0. 3 mol/L的缓冲
液进行梯度洗脱。记录 A280吸光值并测定漆酶活
性 ,收集有活性的组分备用。
11514　SephacrylTM S2200柱层析 　将 SephacrylTM S2
200柱 (柱体积为 120 m l)用 pH 6. 0、20 mmol/L柠
檬酸 2磷酸氢二钠缓冲液平衡 ,上样后用同样的缓冲
液洗脱 ,记录 A280吸光值并测定漆酶活性 ,收集有活
性的组分备用。
116　酶学性质
11611　同功酶酶谱检测　采用 Native2PAGE:浓缩胶
5% ,分离胶 10% [ 9 ]。样品经 Native2PAGE后 ,放入含
0. 5 mmo1 /Lα2萘酚的 pH 4. 5、0. 1 mmol/L醋酸缓冲
液中染色 30 m in,漆酶氧化α2萘酚而显紫褐色。
11612　表观分子量测定 　采用 SDS2PAGE:浓缩胶
5% ,分离胶 12%。
11613　糖含量测定 　采用硫酸 2苯酚法 ,以葡萄糖
为标准 [ 10 ]。
11614　最适反应温度及其热稳定性 　在不同温度
(30～90℃)下 ,以 DMP为底物 ,测定漆酶酶活 ,以
最高酶活时的反应温度为最适反应温度 ;将一定量
的酶液分别放置在不同温度 ( 30～70℃)下保温 1
h,以 DMP为底物测定残余酶活 ,以未保温酶液的酶
活计为 100% ,计算相对酶活。
11615　最适反应 pH及其 pH稳定性 　用不同 pH
(2. 0～6. 0)的柠檬酸 2磷酸氢二钠缓冲液 ,在最适温
度下以 DMP为底物 ,测定漆酶酶活 ,以酶活最高时
的反应 pH为最适反应 pH值 ;在不同 pH的缓冲液
中加入一定量的酶液 , 30℃保温 24 h后 ,以 DMP为
底物测定残余酶活 ,以未处理的酶液的酶活计为
100% ,计算相对酶活。
11616　无机离子对漆酶的影响 　在纯酶溶液中分
别添加不同的无机离子 ,使其终浓度为 1 mmol/L和
5 mmol/L, 30℃保温 5 m in后 ,在最适条件下测定漆
酶酶活 ,以未添加离子的酶液的酶活计为 100% ,计
算相对酶活。
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11617　动力学常数 Km值的测定 　在最适温度和
最适 pH条件下 ,酶液与不同浓度的底物反应 ,采用
L inewear2Burk双倒数作图法 ,求出漆酶氧化底物
DMP的 Km和 Vmax。
117　漆酶对染料脱色的研究
11711　染料吸收光谱的测定 　配制染料溶液 ,以去
离子水为参比 ,在 UV23100紫外可见分光光度计上
对其进行紫外 2可见光区 ( 200～800 nm )光谱扫描 ,
得到染料的最大吸收波长。
11712　染料脱色试验及脱色率的计算 　脱色的反
应体系 :染料的终浓度为 100 mg/L ,纯酶活力为 2. 0
U /m l,同时添加一定量的介质 ABTS,在不同温度
(30～60℃)和 pH ( 2. 0～7. 0)下 ,每隔一定时间记
录染料在特征波长处的吸光值 A1 ,相同试验条件
下 ,加入等量灭活酶液作为对照 ,测定吸光值为 A0 ,
脱色率 ( % ) = (A0 2A1 ) /A0。
2　结果与分析
211　同功酶酶谱检测
菌株 Phellinus sp. SYBC2L2发酵的粗酶液经 N2
ative2PAGE后 ,通过活性染色获得漆酶同功酶酶谱 ,
图 1显示 ,该菌株至少合成 3种漆酶同功酶。依据
条带显色快慢和深浅 ,可知 Lac3含量最多 ,而其余
两个同功酶的含量很低。
图 1　漆酶同功酶电泳
212　漆酶的分离纯化
首先将粗酶液用不同饱和度的硫酸铵沉淀 ,通
过测定上清液活力发现 (图 2) ,当硫酸铵饱和度低
于 40%时 ,大部分漆酶未被沉淀下来 ;而当硫酸铵
饱和度达到 60%时 ,上清液中的酶活急剧下降 ,此
时大部分漆酶已被沉淀下来。因此确定首先采用
40%饱和度的硫酸铵去除部分杂蛋白 ,然后再添加
硫酸铵至饱和度 60%沉淀漆酶。
图 2　硫酸铵分级盐析
将硫酸铵盐析所得的粗酶液 ,经过 DEAE2cellu2
lose离子交换层析 ,如图 3所示 ,得到 a～d 4个蛋白
洗脱峰 ,其中大部分漆酶集中在 b蛋白峰 ,此峰对应
的 NaCl浓度为 0. 1 mol/L; a与 c蛋白峰处分别有一
个小的酶活力峰 ,但酶活量明显低于主酶活峰 ,故试
验仅对主峰的漆酶进行了分离纯化。收集 b蛋白峰
中酶活高的部分进行分子筛层析。经过 SephacrylTM
S2200柱层析 ,得到 a、b、c 3个蛋白洗脱峰 ,其中 a
峰检测到漆酶活性 (图 4) ,收集 a峰中酶活高的部
分进行 SDS2PAGE电泳验证。
图 3　D EAE - cellulose离子交换层析
漆酶的分离纯化结果见表 1。粗酶液经各步纯
化后比活力为 127. 81 U /mg,纯化倍数为 28. 27,回
收率为 14. 76%。该酶样品经 SDS2PAGE检测只显
示一条蛋白带 (图 5) ,表明纯化后的漆酶 (Lac3)为
单一组分 ,已达到电泳纯。
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图 4　SephacrylTM S2200凝胶过滤层析
表 1　漆酶分离纯化结果
纯化步骤 总酶活(U)
总蛋白
(mg)
比活力
(U /mg) 纯化倍数
回收率
( % )
粗酶液 5594. 08 1237. 61 4. 52 1 100
硫酸铵盐析 4251. 44 403. 59 10. 53 2. 33 76. 0
DEAE2cellu
lose column
1569. 78 20. 82 75. 40 16. 68 28. 06
SephacrylTM
S2200 825. 69 6. 46 127. 81 28. 27 14. 76
213　酶学性质
21311　表观分子量 　根据 SDS2PAGE的试验结果
(图 5) ,计算得到 Phellinus sp1SYBC2L2胞外漆酶
Lac3的分子量约为 64. 3 kD。
21312　糖含量的测定 　多数真菌胞外漆酶是糖蛋
白 [ 11 ] ,经硫酸 2苯酚法测定 ,漆酶 Lac3的糖基化含
量为 29. 66% ,糖含量较高 ,是一种典型的糖蛋白。
21313　最适温度及其热稳定性 　漆酶 Lac3的最适
图 5　漆酶 Lac3 SD S - PAGE电泳
温度测定结果 (图 6)表明 ,在 30～50℃的范围内 ,
酶活没有明显变化 ,在 60℃时酶活明显上升 ,达到
最高 ,然后随着温度的升高又开始下降 ,可见 Lac3
的最适温度为 60℃。
图 6　温度对 Lac3活性的影响
由图 6漆酶 Lac3的热稳定性分析结果可见 ,
Lac3在 30～45℃保温 1 h能保存 90%以上的活
力 , 50℃仍有 80%以上的活力 ,到 60℃时还能保
存将近半数的酶活力 ,说明该酶的温度适用范围
比较广泛。
图 7　pH对 Lac3活性的影响
21314　最适 pH值及其 pH稳定性 　由图 7可知 ,
Lac3的最适 pH为 3. 5,但在 pH 2. 0～4. 5范围内 ,
Lac3的酶活力在 60%以上 ,可见 Lac3在偏酸性的
环境下可以发挥最大作用。
由图 7 Lac3的 pH稳定性可见 ,在 pH 6. 0～8. 5
的范围内 Lac3的稳定性较好 ,剩余活力均保持在
80%以上 ,特别是在 pH 6. 0的条件下 ,其剩余活力
接近 100% , 可见 Lac3 在偏碱性的条件下比较
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稳定。
21315　无机离子对漆酶的影响 　无机离子对酶活
性具有重要的影响 ,由表 2可知 ,在具有相同的阴离
子 SO4 2 - 时 , Fe3 + 、Fe2 +对 Lac3的抑制作用较明显 ,
而 Cu2 +和 5 mmol/L的 Na+以及 1 mmol/L的 Mn2 +
则具有一定的促进作用 ;在具有相同的阳离子 Na+
时 , SO4 2 - 、CO3 2 - 对 Lac3具有促进作用 ,其中以 5
mmol/L的 SO4 2 - 的促进作用最为明显 ,而 NO3 - 则
使 Lac3的活性略有下降。
表 2　无机离子对 Phellinus sp1
SY BC2L2漆酶 Lac3酶活的影响
无机
离子
相对活力 (% )
1 mmol/L 5 mmol/L
无机
离子
相对活力 (% )
1 mmol/L 5 mmol/L
Con
trol
100 100 KCl 94. 35 ±4. 73 89. 19 ±5. 39
Na2
SO4
107. 52 ±6. 53 124. 08 ±5. 64
Fe2
(SO4) 3
16. 28 ±1. 32 10. 11 ±0. 57
Na2
CO3
106. 93 ±7. 44 101. 21 ±5. 01
Fe
SO4
20. 55 ±3. 01 13. 46 ±2. 89
Na
NO3
87. 75 ±4. 50 80. 49 ±4. 85
Cu
SO4
103. 71 ±5. 87 111. 52 ±6. 07
Na
Cl
98. 24 ±5. 42 101156 ±3. 29 MnSO4 104. 90 ±5. 92 98. 27 ±6. 31
　注 : x ±s, n = 3
21316　动力学常数 Km值的测定 　对于一个酶反应
来说 , Km值是酶学性质的一个重要数据 ,它反映了酶
同底物的亲和力大小。本试验以 DMP为底物 ,其浓
度为 8、6、4、2、1、1 /2、1 /4、1 /6、1 /8 mmol/L,在最适温
度 60 ℃,最适 pH 3. 5条件下测定 Lac3的活力。按
照 L ineweaver2Burk作图 ,计算出漆酶 Lac3的表观
Km为 1. 01 mmol/L,Vmax为 186. 2 U /mg蛋白。
214　漆酶 Lac3对染料脱色的研究
21411　染料吸收光谱的测定 　目前使用的工业染
料以偶氮和蒽醌类居多 ,因此本试验以偶氮类染料
媒介元 PV和蒽醌类染料弱酸蓝进行染料脱色影响
因素的研究。对染料吸收光谱测定可知 ,媒介元
PV、弱酸蓝在可见光范围内的最大吸收峰分别在
535 nm和 625 nm处。
21412　反应温度对漆酶 /ABTS介质脱色率的影响
　不同来源的漆酶最适作用温度不同 ,一般介于 30
～60℃。固定试验的 pH值为 3. 0,试验温度分别为
30、40、50和 60℃,考察温度对漆酶 /ABTS介质系统
在两种毛纺染料脱色中的影响 ,反应 2 h,结果见
图 8。
图 8　温度对漆酶 /ABTS介质脱色的影响
由图 8可知 ,脱色 2 h,媒介元 PV的脱色率要
远远高于弱酸蓝。对于媒介元 PV ,当温度为 40～
50℃时 ,漆酶 /ABTS介质脱色能力好 ,脱色率均在
80%以上 ,其中以 50℃时的脱色能力最好 , 2 h脱色
率可达到 94. 70% ;而对于弱酸蓝 , 40℃时的脱色率
只能达到 61. 81% ,且随着温度的升高脱色率逐渐
下降。因此 ,下面的试验分别采用 50℃和 40℃作为
漆酶 /ABTS介质脱色媒介元 PV和弱酸蓝的最适作
用温度。
21413　反应 pH对漆酶 /ABTS介质脱色率的影响
图 9　pH值对漆酶 /ABTS介质脱色的影响
　研究表明 pH值可能会对染料的颜色有影响 ,因
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此首先考查了缓冲液 pH对染料脱色的影响。结果
表明 ,在 pH 2. 0～7. 0范围内 pH对染料吸光度无
明显影响。脱色 2 h,结果见图 9。
由图 9可见 ,媒介元 PV 和弱酸蓝分别在 pH
3. 0和 pH 4. 0时脱色效果最好 ,而当 pH达到 7. 0时
脱色率明显低于其它 pH条件。可能是由于 Phelli2
nus sp. SYBC2L2漆酶 Lac3在 pH > 6. 0时活性受到
抑制 ,催化效率降低 ,从而影响漆酶 /ABTS介质的
脱色效果。
21414　反应时间对染料脱色的影响 　Phellinus sp.
SYBC2L2漆酶 Lac3分别与媒介元 PV和弱酸蓝在
最适条件下反应 ,每隔一段时间测定各个脱色体系
λmax处的吸光值。结果如图 10所示 ,漆酶 Lac3作
用于媒介元 PV的前 1. 5 h内 ,脱色率增加显著 ,达
到 83. 85%的脱色率 ,随后增加的比较缓慢 ,至 3 h
基本可以脱色完全 ;而对于弱酸蓝 ,随着时间的延长
脱色率也逐渐增加 ,但是明显低于媒介元 PV,脱色
3 h只能达到 75. 09%的脱色率。
21415　不添加 ABTS介质对染料脱色的影响 　本
文同时考察了不添加小分子氧化还原介质 ABTS时
对媒介元 PV和弱酸蓝脱色率的影响。结果表明 ,
Phellinus sp. SYBC2L2纯化的漆酶 Lac3可直接作用
于媒介元 PV和弱酸蓝这两种染料 ,反应 3 h后脱色
率分别为 17. 67%和 34. 66% ,而添加一定量的小分
子介质后脱色速度会迅速增加。
图 10　时间对漆酶 /ABTS介质脱色的影响
3　讨论
大多数白腐真菌可以同时分泌木质素降解的 3
种酶 [ 12 ] :木质素过氧化物酶 ( lignin peroxidase)、锰
过氧化物酶 (manganese peroxidase)以及漆酶 ( lacca2
se) ,但是通过对 Phellinus sp. SYBC2L2的发酵研究
发现 ,该菌株所产酶系单一 ,经测定只产生漆酶 ,而
不含有另外两种木质素降解酶 ,这就方便了下一步
的分离纯化操作。
一般对不同来源漆酶的分离纯化多是采用超
滤、硫酸铵分级沉淀、离子交换柱和凝胶柱进行分
离 [ 13～15 ]。本试验利用硫酸铵沉淀、DEAE2cellulose
和 SephacrylTM S2200柱层析 ,得到了 3个同功酶 ,由
于其中 Lac1、Lac2 的分泌量极低 (图 1 ) ,故仅对
Lac3进行了分离纯化 ,经 SDS2PAGE电泳鉴定为单
一蛋白质 , Lac3的比活力为 127. 81 U /mg蛋白 ,纯
化倍数为 28. 27倍 ,回收率为 14. 76% ,其比活和回
收率相对较低可能与粗酶液中至少含有 3个同功酶
组分有关。
大多数漆酶的最适反应温度在 20～50℃,最适
反应 pH值在 4. 0～6. 0。对分离纯化所获得的漆酶
Lac3进行了酶学性质研究 ,发现其酶学性质与已报
道的漆酶性质基本一致。Phellinus sp. SYBC2L2漆
酶 Lac3最适温度较高 ( 60℃) ,最适 pH值偏低 ( 3.
5) ,这些特征表明 Lac3可以在偏酸和较高温度的环
境中发挥作用。Lac3的 pH稳定性范围较广 ,在 pH
4. 5～9. 0的范围内均能保持 60%以上的活性 ,而且
随着 pH的上升 ,稳定性也在上升 ,特别是在 pH 6. 0
～8. 5下保温 24 h,还能保持 90%以上的活力 ,说明
Lac3的工业应用范围很广 ,这也为其在工业上的应
用提供了一定的理论依据。
早期研究结果显示 Phellinus sp. SYBC2L2的发
酵液对两类偶氮类染料 (媒介元 PV )和蒽醌类染料
(弱酸蓝 )有比较好的脱色效果 ,但发酵液中漆酶对
色素的具体作用需要用纯酶做进一步的验证 [ 13, 16 ]。
本试验结果表明 Phellinus sp. SYBC2L2漆酶 Lac3
对这两类毛纺染料亦有较好的脱色效果 ,说明漆酶
Lac3参与发酵液在染料脱色过程中的作用。由试
验可知 , Lac3作用于媒介元 PV的前 1. 5 h内 ,脱色
(下转第 165页 )
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2009年第 8期 刘权等 :蛋白激发子 PeaT1的高密度发酵及生理功能检测
本。本试验成功地进行了 PeaT1蛋白的高密度发
酵 ,得到了大量表达的蛋白 ,为生物农药的大规模生
产提供了经验。
作为一种新发现的蛋白激发子 , PeaT1的生理
功能和分子作用机理研究有待进一步深入和完善。
发酵后的蛋白以 H is2Tag做了亲和纯化 ,得到的蛋
白纯度可以满足生理功能研究的需要。在此基础上
检测了纯化蛋白的生理功能 ,结果证明 PeaT1能够
促进低温条件下水稻的生长 ,验证了其蛋白激发子
的功能。另外 ,进一步对该蛋白进行离子交换和分
子筛纯化可以得到纯度更高的蛋白 ,可以用于蛋白
质结构和机理研究 ,也可用于农药审核的标样。
综上所述 ,本研究对 PeaT1蛋白进行了高密度
发酵和纯化以及生理功能检测 ,验证了蛋白的激发
子功能 ,为该蛋白开发为生物农药及其功能和机理
的深入研究奠定了基础。
参 考 文 献
1　 Hahn MG. Annu Rev Phytopathol, 1996, 34: 387～412.
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率增加的比较显著 , 2 h基本可以完全脱色 ;对弱酸
蓝的脱色较缓慢 , 2 h的脱色率为 63. 78%。通过对
纯酶 Lac3在两种染料脱色中的研究发现 Phellinus
sp. SYBC2L2所产漆酶具有较好的工业应用前景 ,同
时对今后的研究和工业生产亦提供了一定的理论
依据。
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