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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2011 年第 8 期
人 TRAP1 基因的克隆、原核表达及表达条件优化
张嘉萱 卢嘉欣 王蕊 赵振岭 韩波 彭鑫磊 陈伟 刘忠 任哲
王绍祥 马岩岩 刘凯胜 王一飞
(暨南大学 生物医药研究开发基地，广州 510632)
摘 要: 应用 RT-PCR技术，从人白血病多药耐药细胞株 K562 /ADR中扩增出肿瘤坏死因子受体相关蛋白 1(tumor nec-
rosis factor receptor-associated protein1，TRAP1)基因的 cDNA。选择 NdeⅠ和 XhoⅠ分别作为上下游引物的酶切位点，将 TRAP1
基因克隆到带有 6 × His标签的 pET-28a(+)的载体上。重组质粒转化大肠杆菌 DH5α中，涂布于含卡那霉素的 LB琼脂培养
基上，经双酶切鉴定后的阳性克隆送去测序。测序成功的重组质粒 pET28a(+)-TRAP1 转化大肠杆菌 BL21(DE3)中，在 IPTG
的诱导下，成功表达重组蛋白 TRAP1。通过改变诱导温度、诱导时机、IPTG浓度及诱导时间，找出最佳表达条件，使重组蛋白
TRAP1 表达量最高。结果表明，在 39℃条件下，OD600达到 0. 8 时，经终浓度为 0. 1 mmol /L的 IPTG诱导 6 h，目的蛋白的表达
量最高。该研究为纯化出 TRAP1 蛋白，进一步研究该蛋白的结构和功能奠定了基础。
关键词: TRAP1 Hsp75 克隆 原核表达 优化 pET-28a(+) BL21
Cloning and Expression of Human TRAP1 Gene and
Optimization of Expression Conditions
Zhang Jiaxuan Lu Jiaxin Wang Rui Zhao Zhenling Han Bo Peng Xinlei Chen Wei
Liu Zhong Ren Zhe Wang Shaoxiang Ma Yanyan Liu Kaisheng Wang Yifei
(Biomedicine Research ＆ Development Center，Jinan University，Guangzhou 510632)
Abstract: TRAP1 gene cDNA was amplified by RT-PCR from drug-resistant human chronic myeloid leukemia K562 /ADR cells．
The TRAP1 cDNA was cloned into pET-28a(+)plasmid which has a 6 × His tag，and the restriction enzyme cutting site of sense primer
and antisense primer was NdeⅠand XhoⅠ，respectively． The recombinant plasmid was transformed into competence Escherichia coli
DH5α，and then cultivated on LB broth agar medium with kanamycin． The positive recombinant clones were identified by restriction en-
donuclease digestion and sequencing． The positive recombinant plasmid was transformed into competence Escherichia coli BL21(DE3)．
After induced by IPTG，the recombinant protein was expressed in Escherichia coli BL21(DE3)． Optimum temperature，IPTG concentra-
tion，induction time and OD600 were determined for the highest level of recombinant protein． The results showed that when OD600 was
0. 8，induced with 0. 1 mmol /L IPTG at 39℃ for 6 hours，where the expression level of recombinant protein was high． These results laid
foundation for the purification of TRAP1 and further studies on the structure and function．
Key words: TRAP1 Hsp75 Cloning Prokaryotic expression Optimization pET-28a(+) BL21
收稿日期:2011-01-25
基金项目:国家十一五“863”课题(2007AA02Z142)
作者简介:张嘉萱，女，硕士研究生，研究方向:抗肿瘤药物药效药理学;E-mail:79910552@ qq. com
通讯作者:王一飞，男，教授，博士生导师，研究方向:靶向抗肿瘤药物开发及抗病毒药物筛选及作用机制;E-mail:twangyf@ jnu. edu. cn
热休克蛋白 90(heat shock protein 90，Hsp90)作
为细胞内重要的分子伴侣，可以分解、重折叠以及复
性错误折叠的蛋白质，促进新生多肽折叠成天然结
构，并且能够在细胞受到破坏性刺激(如高温刺激)
后，保护细胞免受损害及促进已受损害的细胞恢复
正常［1 － 3］。基于分子进化，Hsp90 在脊椎动物中被
分为 3 组，分别是细胞质中的 Hsp90α和 Hsp90β，内
质网中的葡萄糖调节蛋白 94(glucose-regulated pro-
tein94，GRP94)以及线粒体中的肿瘤坏死因子受体
相关蛋白 1(tumor necrosis factor receptor-associated
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 8 期
protein1，TRAP1)［4］。
TRAP1 是线粒体内的 Hsp75，它不是热诱导的，
而是在缺糖损伤、氧化损伤和紫外线 A 照射的情况
下才表达上调，在主动防御微生物及其致病因子的
过程中起着决定性作用［5 － 7］。在肿瘤细胞中，
TRAP1 选择性表达上调，并与 Hsp90 以及亲环素 D
形成复合体，共同维持肿瘤细胞线粒体内稳态。
TRAP1 是线粒体凋亡通路的关键组分，它可以拮抗
亲环素 D诱导的细胞死亡，抑制线粒体外膜通透性
的增加、细胞色素 C 的释放、肿瘤细胞凋亡的发生，
使肿瘤细胞产生耐药，因而有可能成为恶性肿瘤细
胞的生物标记。通过抑制 TRAP1 的活性，可以有效
逆转肿瘤细胞对一些药物产生的耐药［8，9］。
本研究选择带有 6 × His 标签的 pET-28a(+)
为载体，利用 RT-PCR 的方法对 TRAP1 基因进行克
隆及原核表达，并进行表达条件优化，为获得 TRAP1
蛋白提供必要条件。通过蛋白质结晶技术获得
TRAP1 的蛋白质晶体结构，在计算机的辅助下，模
拟出蛋白质的空间结构，进行药物分子的虚拟筛选，
从而有助于筛选出有活性的抗肿瘤药物及有效的肿
瘤多药耐药逆转剂，也有助于进一步阐明肿瘤多药
耐药产生的机制。纯化的 TRAP1 蛋白还可用于各
种细胞水平及动物水平的试验，以研究 TRAP1 的生
物学功能以及 TRAP1 在细胞内外作用的机制。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 菌种、质粒和细胞系 原核表达载体 pET-
28a(+)及大肠杆菌(Escherichia coli)DH5α、BL21
(DE3)为本实验室保存。K562 /ADR 细胞株由
K562 细胞株经 ADR 诱导而成，由郑州大学医学研
究中心王庆端教授赠送。
1. 1. 2 主要试剂 DNA Marker、限制性内切酶 Nde
Ⅰ、XhoⅠ、T4 DNA连接酶均购自大连宝生物有限公
司。M-MLV逆转录试剂盒、Trizol 购自 Invitrogen 公
司。DNA凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒购自 O-
MEGA公司。增强型 HRP-DAB 底物显色试剂盒、
2 × Taq PCR MasterMix 酶购自 TIANGEN 公司。
KOD-Plus-Neo 酶购自 TOYOBO公司。预染蛋白 Mark-
er购自 Fermentas公司。引物由生工生物工程(上海)
有限公司合成。
1. 2 方法
1. 2. 1 引物设计 在 GenBank 上查找到人源
TRAP1 的基因序列，其 CDS 序列长为 2 115 bp，共
编码 704 个氨基酸。用 Primer Premier 5. 0 软件进
行上下游引物的设计。上游引物为:5-TTAGTAA-
CATATGGCGCGCGAGCTGCGG-3，下划线为 NdeⅠ
酶切位点;下游引物:5-TTCCTCGAGTTAGTGTCGC-
TCCAGGGCCTT-3，下划线为 XhoⅠ酶切位点，预计
扩增长度为 2 134 bp。上、下游引物均稀释成 10
μmol /L备用。
1. 2. 2 RT-PCR扩增 TRAP1 基因 800 r /min 离心
收集对数期 K562 /ADR 细胞，根据 Invitrogen 公司
Trizol试剂说明书的步骤提取细胞总 RNA。用 M-
MLV逆转录试剂盒，按照说明合成 cDNA 第一链。
用 2 × Taq PCR MasterMix 酶做梯度 PCR 扩增
TRAP1 基因，产物经 0. 5%琼脂糖凝胶电泳检测后，
根据各泳道 PCR 产物的亮度，确定最佳退火温度。
反应程序:94℃ 3 min;94℃ 30 s，63℃ to 68℃ 30 s ，
72℃ 2. 5 min，30 个循环;72℃ 5 min。确定最适退
火温度为 66℃后，用 KOD-Plus-Neo 酶进行 PCR 扩
增 TRAP1 基因。反应程序:94℃ 3 min;94℃ 30 s，
66℃ 40 s，68℃ 2. 5 min，30 个循环;68℃ 5 min。
PCR反应产物经 0. 5%琼脂糖凝胶电泳检测后，使
用 DNA胶回收试剂盒回收目的基因片段。
1. 2. 3 重组表达质粒 pET28a(+)-TRAP1 的构建
及测序 分别用 NdeⅠ和 XhoⅠ双酶切 pET-28a
(+)质粒和 TRAP1 cDNA。酶切产物进行 0. 5%琼
脂糖凝胶电泳，用 DNA 胶回收试剂盒回收酶切产
物。用 T4 DNA连接酶将质粒与 TRAP1 基因片段连
接起来，然后转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞，吸取
20 μL菌液涂布于含卡那霉素(50 μg /mL)的 LB 琼
脂培养基平板上，37℃培养箱中倒置培养过夜。挑
单菌落接种于 4 mL 含卡那霉素(50 μg /mL)的 LB
液体培养基中培养，菌液 PCR 初步筛选出阳性克
隆，再抽提重组质粒用 Nde Ⅰ和 Xho Ⅰ双酶切进一
步鉴定，最后送去上海英骏生物技术有限公司测序。
测序结果正确的阳性克隆命名为 pET28a(+ )-
TRAP1。
1. 2. 4 重组表达质粒 pET28a(+)-TRAP1 在大肠
杆菌 BL21(DE3)中的表达及鉴定 将重组表达载
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2011 年第 8 期 张嘉萱等:人 TRAP1 基因的克隆、原核表达及表达条件优化
体 pET28a(+)-TRAP1 转化大肠杆菌 BL21(DE3)
感受态细胞中，吸取 10 μL 菌液涂布于含卡那霉素
的 LB 琼脂培养基平板上，37℃培养箱中倒置培养
过夜。挑单菌落接种于 4 mL 含卡那霉素的 LB 液
体培养基中，37℃摇床培养过夜。分别吸取 50 μL
菌液于 4 μL 新鲜的含卡那霉素的 LB 液体培养基
中，共 3 管。其中一管用于保种:37℃，180 r /min 培
养 4 － 6 h，吸取 700 μL 菌液于灭菌 EP 管中，加入
300 μL灭菌 50%甘油，封口膜封口，置于 － 20℃保
存。另一管培养至 OD600为 0. 8时，加入 IPTG至终浓
度为 1 mmol /L，继续培养 4 h。分别吸取加入 IPTG
和未加 IPTG 的菌液 100 μL 于两个灭菌 EP 管，
10 000 r /min离心 1 min，倒去培养基，用 30 μL 灭菌
超纯水重悬菌体，然后加入 30 μL 2 × SDS Loading
Buffer，100℃加热变性 10 min。用 8%的 SDS-聚丙烯
酰胺凝胶检测目的蛋白的表达情况。
Western blotting鉴定重组蛋白。SDS-聚丙烯酰
胺凝胶电泳分离蛋白质后，切下 72 kD与 96 kD之间
的条带，电转移至 PVDF膜上，用 5%脱脂奶粉室温封
闭2 h，加入 anti-TRAP1单克隆抗体，4℃过夜，加入鼠
二抗，室温摇床上孵育 1 h，用 HRP-DAB 底物显色试
剂盒显色。
1. 2. 5 pET28a(+)-TRAP1在大肠杆菌 BL21(DE3)
中表达的条件优化 分别改变诱导温度、IPTG 浓
度、诱导时机及诱导时间，找出最佳诱导条件，使目
的蛋白表达量最高。选取的温度分别为 20℃、
25℃、30℃、37℃和 39℃。IPTG 终浓度分别为 0. 1、
0. 3、0. 5、0. 7 和 1. 0 mmol /L。OD600分别达到 0. 4、
0. 6、0. 8 和 1. 0 时加入 IPTG 进行诱导。诱导温度
低于 30℃时，选取 8、12、16 和 20 h 作为诱导时间。
诱导温度高于或等于 30℃时，选取 4、6、8 及10 h作
为诱导时间。具体操作步骤如下:接种 BL21 重组
子于含有 300 mL LB 液体培养基(含卡那霉素)的
摇瓶中，接种量为 3%。37℃摇床培养，摇床转速为
180 r /min，达到 OD值后，吸取 100 μL 菌液于灭菌
EP管，标记为对照;然后向摇瓶中加入 IPTG，置于
诱导温度下继续培养，达到诱导时间后，吸取 100
μL诱导后的菌液于灭菌 EP 管，标记好诱导温度、
IPTG浓度、OD 值和诱导时间。4℃，8 000 r /min 离
心 10 min 收集摇瓶中的菌体，用 90 mL 1 × PBS 重
悬菌体，超声波破碎菌体后，4℃，12 000 r /min离心
30 min分离上清和沉淀，吸取 30 μL上清于灭菌 EP
管，标记为上清。倒去剩余上清，沉淀用 90 mL 1 ×
PBS重悬，吸取 30 μL 于另一灭菌 EP 管，标记为沉
淀。SDS-PAGE检测各条件下目的蛋白的表达量，
以及在上清和包涵体中的分布情况。样品处理:诱
导前和诱导后的菌液样品，12 000 r /min 离心 1
min，倒去培养基，用 30 μL灭菌超纯水重悬菌体，然
后加入 30 μL 2 × SDS Loading Buffer，100℃加热变
性 10 min。上清和沉淀的样品加入 30 μL 2 × SDS
Loading Buffer，100℃加热变性 10 min。
2 结果
2. 1 RT-PCR产物琼脂糖凝胶电泳鉴定
0. 5%琼脂糖凝胶电泳检测 RT-PCR 产物，结果
(图 1)显示，在 2 000 bp 处，有一条明亮的条带，与
预期扩增长度 2 134 bp相符。
M． DNA分子量标准;1． RT-PCR 产物(2 134 bp) ;2．经 NdeⅠ和 XhoⅠ双酶切后的重组质粒 pET28a(+)-TRAP1(5 291 bp) ;3．
经 NdeⅠ和 XhoⅠ双酶切后的质粒 pET-28a(+) (5 291 bp) ;4．经 XhoⅠ酶切后的重组质粒 pET28a(+)-TRAP1(7 474 bp) ;5．
经 XhoⅠ酶切后的质粒 pET-28a(+) (5 369 bp) ;6．重组质粒 pET28a(+)-TRAP1(7 474 bp) ;7． pET-28a(+) (5 369 bp)
图 1 RT-PCR产物与重组质粒 pET28a(+)-TRAP1 的限制性酶切结果
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生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2011 年第 8 期
2. 2 重组载体 pET28a(+)-TRAP1的双酶切鉴定及
测序
0. 5%琼脂糖凝胶电泳检测双酶切阳性重组质
粒的产物，结果(图 1)显示在 2 000 bp 处出现了一
条与 RT-PCR 产物大小一样的条带，在 5 000 bp 处
出现了与 pET-28a(+)双酶切后大小一样条带，初
步判断目的基因已经成功连接在载体上。测序结果
说明连接在载体上的序列与 GenBank 上公布的序
列(NM_016292. 2)一致，重组载体 pET28a(+)-
TRAP1 构建成功。
2. 3 pET28a(+)-TRAP1 在大肠杆菌 BL21(DE3)
中的表达及鉴定
SDS-PAGE结果显示，与诱导前相比，经 IPTG
诱导后在 72 kD 与 96 kD 之间出现了一条蛋白条
带，与理论值 75 kD相符。Western blotting 结果(图
2)显示在 72 kD与 96 kD 之间有条带，说明诱导后
出现的蛋白条带即为重组蛋白 TRAP1。对重组蛋
白进行可溶性分析，发现重组蛋白在上清和沉淀之
中都有分布。
M．预染蛋白分子质量标准;1． 在 39℃条件下，经终浓度
为 0． 1 mmol /L IPTG 诱导 6 h 后重组菌 BL21(DE3)/
pET28a(+)-TRAP1 的总蛋白;2．在 39℃条件下，经终浓
度为 0． 1 mmol /L IPTG 诱导 6 h 后重组菌 BL21(DE3)/
pET28a(+)-TRAP1 总蛋白的可溶部分;3． 在 39℃条件
下，经终浓度为 0． 1 mmol /L IPTG 诱导 6 h 后重组菌
BL21(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 总蛋白的沉淀部分
图 2 重组蛋白 TRAP1 的Western blotting分析
2. 4 pET28a(+)-TRAP1在大肠杆菌 BL21(DE3)中
表达的条件优化
2. 4. 1 温度对 pET28a(+)-TRAP1 表达的影响
将重组菌以 3%的接种量接种于含卡那霉素的 LB
液体培养基中，置于 37℃摇床中，180 r /min 培养至
OD600达到 0. 8，加入终浓度为 0. 1 mmol /L 的 IPTG，
然后分别置于 20℃、25℃、30℃、37℃及 39℃摇床
中，继续培养。最后通过 SDS-PAGE 检测不同诱导
温度下，重组蛋白 TRAP1 的表达量。结果(图 3)显
示，诱导温度低于 30℃时，目的蛋白表达量很低。
39℃下诱导，表达量最高。所以选择 39℃为诱导温
度。39℃下诱导 6 h 目的蛋白表达量达到最大，所
以选择 6 h为诱导时间。
M．预染蛋白分子质量标准;1． IPTG诱导前重组菌 BL21
(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 的总蛋白;2，3． 分别在在
39℃和 37℃条件下，经终浓度为 0. 1 mmol /L IPTG 诱导
6 h后重组菌 BL21(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 的总蛋
白;4．在 30℃条件下，经终浓度为 0. 1 mmol /L IPTG 诱
导 10 h后重组菌 L21(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 的总
蛋白;5，6．分别在 25℃和 20℃条件下，经终浓度为 0. 1
mmol /L IPTG诱导 20 h 后重组菌 BL21(DE3)/pET28a
(+)-TRAP1 的总蛋白
图 3 温度对重组蛋白 TRAP1 表达的影响
2. 4. 2 IPTG浓度对 pET28a(+)-TRAP1 表达的影
响 将重组菌以 3%的接种量接种于含卡那霉素的
LB液体培养基中，置于 39℃摇床中，180 r /min培养
至 OD600达到 0. 8，分别加入终浓度为 0. 1、0. 3、0. 5、
0. 7 及 1. 0 mmol /L的 IPTG，继续培养 6 h。最后通
过 SDS-PAGE检测经不同 IPTG浓度诱导，重组蛋白
TRAP1 的表达量以及在上清和沉淀中的分布情况。
结果(图 4)显示，0. 1 mmol /L 的 IPTG 能够诱导目
的蛋白的表达，并且增加 IPTG 的浓度，重组蛋白的
表达量没有提高。不同 IPTG 浓度对于诱导重组蛋
白 TRAP1 可溶性表达无明显影响(图 5)。IPTG 有
毒性，会影响菌体的生长，并且价格昂贵，考虑到这
些因素，再结合试验结果，选择 0. 1 mmol /L 作为
IPTG的诱导浓度。
2. 4. 3 诱导时机对 pET28a(+)-TRAP1 表达的影
响 处于对数期的细菌生长状态好，表达的蛋白多，
所以一般选择在细菌对数期加入 IPTG进行诱导。
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2011 年第 8 期 张嘉萱等:人 TRAP1 基因的克隆、原核表达及表达条件优化
M．预染蛋白分子质量标准;1． IPTG诱导前重组菌 BL21
(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 的总蛋白;2 － 6． 在 39℃条
件下，经终浓度为 0． 1、0． 3、0． 5、0． 7、1． 0 mmol /L IPTG
诱导 6 h后重组菌 BL21(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 的
总蛋白
图 4 IPTG浓度对重组蛋白 TRAP1 的影响
M．预染蛋白分子质量标准;1． IPTG诱导前重组菌 BL21
(DE3)/pET28a(+)-TRAP1 的总蛋白;2． 在 39℃条件
下，经终浓度为 0． 1 mmol /L IPTG 诱导 6 h 后重组菌
BL21(DE3)/pET28a(+ )-TRAP1 的总蛋白;3 － 7． 在
39℃条件下，经终浓度为 0． 1、0． 3、0． 5、0． 7 和 1． 0
mmol /L IPTG 诱导 6 h 后重组菌 BL21(DE3)/pET28a
(+)-TRAP1 总蛋白的可溶部分
图 5 IPTG浓度对重组蛋白 TRAP1
可溶性表达的影响
将重组菌以 3%的接种量接种于含卡那霉素的 LB
液体培养基中，置于 39℃摇床中，180 r /min 培养至
OD600分别达到 0. 4、0. 6、0. 8 及 1. 0 时，加入终浓度
为 0. 1 mmol /L 的 IPTG，继续培养 6 h。最后通过
SDS-PAGE检测重组蛋白 TRAP1 的表达量。结果
显示，诱导时机对于目的蛋白的表达量影响不大，
OD600达到 0. 8 时添加 IPTG 进行诱导，蛋白的表达
量略高于其他 3 个 OD600值，故选择在菌液 OD600达
到 0. 8 时添加 IPTG诱导目的蛋白表达。
综上所述，最终确定的最佳表达条件为 39℃，
OD600达到 0. 8 时，经终浓度为 0. 1 mmol /L 的 IPTG
诱导 6 h，目的蛋白的表达量最高。
3 讨论
目前 Hsp90 已成为了肿瘤治疗的一个靶标，许
多 Hsp90 抑制剂都已进入临床阶段，如格尔德霉素
衍生物 17-AAG、坦螺旋霉素 KOS-953、瑞他霉素
IPI-504 等［10］。但由于肿瘤细胞产生多药耐药，使
得多种有活性的抗肿瘤药物药效降低，甚至没有药
效。多药耐药是指细胞选择性对一种药物产生耐药
后，也会对其他结构和机制不相关的药物产生交叉
耐药［11］。肿瘤多药耐药产生的机制目前尚不完全
清楚。多药耐药是肿瘤化疗失败的主要原因，是肿
瘤治疗的重大障碍，也是肿瘤患者预后不良的主要
原因之一。如果能研发出一种有效的逆转剂逆转肿
瘤多药耐药，使得肿瘤细胞恢复对药物的敏感性，将
大大增加化疗的成功率，为肿瘤患者带来福音，具有
巨大的市场前景。
线粒体分子伴侣 TRAP1 可以发挥抗凋亡抗氧
化的作用，在多种多药耐药肿瘤细胞中高表达，是导
致肿瘤细胞产生多药耐药的重要原因之一［9，12，13］。
抑制 TRAP1 的活性，可以有效逆转肿瘤细胞对一些
药物产生的耐药，从而使多药耐药肿瘤细胞株恢复
对药物的敏感性，增加化疗的成功率［8，9］。
本研究选择带有 6 × His 标签的 pET-28a(+)
为载体，成功构建了重组表达载体 pET28a(+)-
TRAP1，用 Ni-NTA His-Bind树脂层吸柱即可简单方
便地纯化出目的蛋白。并且，在 5端的组氨酸标签
与目的蛋白之间有一个凝血酶酶切位点，可以在纯
化完成后切去融合标签。纯化得到的 TRAP1 蛋白
通过蛋白质结晶技术可获得 TRAP1 的蛋白质晶体
结构，在计算机的辅助下，模拟出蛋白质的空间结
构，进行药物分子的虚拟筛选，从而有助于筛选出有
活性的抗肿瘤药物及有效的肿瘤多药耐药逆转剂，
也有助于进一步阐明肿瘤多药耐药产生的机制。纯
化的 TRAP1 蛋白还可用于各种细胞水平及动物水
平的试验，以研究 TRAP1 的生物学功能以及 TRAP1
在细胞内外作用的机制。
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参 考 文 献
［1］Beere HM． Death versus survival:functional interaction between the
apoptotic and stress-inducible heat shock protein pathways． J Clin
Invest，2005，115(10) :2633-2639．
［2］Chaudhury S，Welch TR，Blagg BSJ． Hsp90 as a target for drug de-
velopment． Chemmedchem，2006，1(12) :1331-1340．
［3］Yonehara M，Minami Y，Kawata Y，et al． Heat-induced chaperone ac-
tivity of HSP90． J Biol Chem，1996，271(5) :2641-2645．
［4］Nagahori K，Iwamoto S，Maruyama A，et al． Basic characterization of
90 kDa heat shock protein genes HSP90AA1，HSP90AB1，HSP90B1
and TRAP1 expressed in Japanese quail(Coturnix japonica)． Anim
Sci J，2010，81(4) :513-518．
［5］ Cechetto JD，Gupta RS． Immunoelectron microscopy provides evi-
dence that tumor necrosis factor receptor-associated protein 1
(TRAP-1)is a mitochondrial protein which also localizes at specific
extramitochondrial sites． Exp Cell Res，2000，260(1) :30-39．
［6］ Voloboueva LA，Duan M，Ouyang Y，et al． Overexpression of mito-
chondrial Hsp70 /Hsp75 protects astrocytes against ischemic injury
in vitro． J Cerebr Blood F Met，2008，28(5) :1009-1016．
［7］ Song HY，Dunbar JD，Zhang YX，et al． Identification of a protein
with homology to hsp90 that binds the type 1 tumor necrosis factor
receptor． Journal of Biological Chemistry，1995，270 (8) :3574-
3581．
［8］Landriscina M，Amoroso MR，Piscazzi A，et al． Heat shock proteins，
cell survival and drug resistance:the mitochondrial chaperone
TRAP1，a potential novel target for ovarian cancer therapy． Gynecol
Oncol，2010，117(2) :177-182．
［9］Kang BH，Plescia J，Dohi T，et al． Regulation of tumor cell mitochon-
drial homeostasis by an organelle-specific Hsp90 chaperone network．
Cell，2007，131(2) :257-270．
［10］Zhang H，Neely L，Lundgren K，et al． BIIB021，a synthetic Hsp90
inhibitor，has broad application against tumors with acquired multi-
drug resistance． Int J Cancer，2010，126(5) :1226-1234．
［11］Gottesman MM，Fojo T，Bates SE． Multidrug resistance in cancer:
role of ATP-dependent transporters． Nat Rev Cancer，2002，2(1) :
48-58．
［12］Landriscina M，Laudiero G，Maddalena F，et al． Mitochondrial chap-
erone Trap1 and the calcium binding protein Sorcin interact and
protect cells against apoptosis induced by antiblastic agents． Cancer
Res，2010，70(16) :6577-6586．
［13］Gesualdi NM，Chirico G，Pirozzi G，et al． Tumor necrosis factor-as-
sociated protein 1(TRAP-1)protects cells from oxidative stress and
apoptosis． Stress，2007，10(4) :342-350．
(责任编辑 李楠
櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧櫧
)
(上接第 160 页)
［15］中国渔业年鉴［M］．北京:中国农业出版社，2008．
［16］Kumar S，Nei M，Dudley J，Tamura K． MEGA:A biologist-centric
software for evolutionary analysis of DNA and protein sequences．
Briefings in Bioinformatics，2008，9(4) :299-306．
［17］徐建勇，陈松林．牙鲆肌肉生长抑制素(MSTN)基因克隆．水产
学报，2008，32(4) :4-10．
［18］Robert SB，Goetz FW． Myostatin protein and RNA transcript levels
in adult and developing brook trout． Molecular and Cellular Endo-
crinology，2003，210(1-2) :9-20．
［19］张红卫． 发育生物学(第 2 版) ［M］． 北京:高等教育出版社，
2006:178-179．
［20］Sawatari E，Seki R，Adachi T，et al． Overexpression of the domi-
nant-negative form of myostatin results in doubling of muscle-fiber
number in transgenic medaka(Oryzias latipes)． Comparative Bio-
chemistry and Physiology，Part A，2010，155(2) :183-189．
［21］阮井玲，甄鑫，刘娣，等． Myostatin 通过 Smad3 下调 MyoD 的表
达来抑制骨骼肌卫星细胞的分化．中国生物工程杂志，2008，28
(5) :99-103．
［22］Amali AA，Lin CJF，Chen YH，et al． Overexpression of Myostatin2
in zebrafish reduces the expression of dystrophin associated protein
complex(DAPC)which leads to muscle dystrophy． Biomed Science
Citation Index，2008，15(5) :595-604．
(责任编辑 李楠)
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