全 文 ：植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (5): 572-580, www.chinbullbotany.com
收稿日期: 2007-05-14; 接受日期: 2007-05-30
* 通讯作者。E-mail: xiangcb@ustc.edu.cn
.研究论文.
SOD活性增高的拟南芥晚花突变体具有增强
的非生物胁迫耐受性
汪本勤 1, 2 , 陈曦 1 , 向成斌 1*
1中国科学技术大学生命科学学院, 合肥 230026; 2六安职业技术学院, 六安 237158
摘要 为了研究晚花突变表型和非生物胁迫耐受性之间是否存在相关性, 以遗传背景同为Wassilewskija (Ws-2)的7个拟南
芥(Arabidopsis thaliana L.)晚花突变体(CS2235、CS2238、CS2239、CS2240、CS2246、CS2248和CS6208)为材料,
通过干旱胁迫、盐胁迫和氧化胁迫实验, 发现晚花突变体的耐旱、耐盐和耐氧化性都较野生型(wildtype, WT)强。对叶片失
水速率和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性测定结果也表明, 晚花突变体的保水能力和SOD活性均高于野
生型。相关性回归分析表明SOD活性与耐氧化性、耐旱性、耐盐性之间呈正相关, 耐旱性和耐盐性随耐氧化性增强而增强。
实验结果表明, 这些晚花突变体的表型和非生物胁迫耐受性之间存在相关性。
关键词 拟南芥, 耐旱性, 晚花突变体, 耐氧化性, 耐盐性, SOD活性
汪本勤, 陈曦, 向成斌 (2007). SOD活性增高的拟南芥晚花突变体具有增强的非生物胁迫耐受性. 植物学通报 24, 572-580.
非生物胁迫是农业可持续发展的重要限制因素, 特
别是干旱和盐渍, 使粮食大幅度减产。因此, 植物逆境
生物学一直是植物生物学研究中的一个活跃领域。细
胞代谢过程中会产生活性氧(reactive oxygen species,
ROS), 在正常生长和代谢情况下, 细胞内ROS的产生
和清除处于一种动态平衡。当ROS产生与清除失去平
衡时, 就导致氧化胁迫, ROS使生物大分子、生物膜遭
到可逆及不可逆损伤, 严重时可引起细胞死亡。因此
ROS也是生物开启防御机制的重要信号(Mittler, 2002;
Pitzschke et al., 2006)。细胞内有清除 ROS的非酶
系统(如抗坏血酸、谷胱甘肽等)和酶系统(如超氧化物
歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶
(catalase, CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate
peroxidase, APX)等), 使ROS保持适度的水平, 避免对
细胞的伤害(Noctor and Foyer, 1998; Mittler, 2002)。
其中SOD第一个参与O2-. 的清除反应, 在抗氧化酶类中
处于重要地位。
任何环境胁迫都会干扰细胞的正常代谢, 诱发ROS
的积累从而产生氧化胁迫, 因而氧化胁迫是一种次级胁
迫, 是所有环境胁迫共有的一个组成部分(Smirnoff ,
1998), 提高耐氧化胁迫能力是增强植物环境胁迫耐性的
一个重要部分。
氧化胁迫也是影响生物寿限的一个重要因子。对
动物的研究表明, 生物寿限与氧化胁迫耐性密切相关
(Martin et al.,1996; Hasty et al., 2003; Bubliy and
Loeschcke, 2005; Franceschi et al., 2005)。在高等
植物拟南芥中, 也发现晚花突变体gi-3具有比野生型更
强的耐氧化性, 但并非所有供试的晚花突变体都如此
(Kurepa et al.,1998)。具有较强耐氧化性能的拟南芥
突变体一般也具有寿限延长的表型(Cao et al., 2003)。
我们实验室在研究拟南芥耐逆突变体的过程中也发现,
耐氧化突变体常伴有晚花表型, 并表现出对非生物胁迫
耐受性的增强。虽然上述报道表明拟南芥晚花性状(寿
限延长)与其耐氧化性存在一定的相关性, 但还需要更多
实验证据来证明晚花表型、耐氧化性及非生物胁迫耐
受性之间的关系。
573汪本勤等: SOD活性增高的拟南芥晚花突变体具有增强的非生物胁迫耐受性
拟南芥晚花突变体很多, 但生态型不尽相同。因
此, 我们选择遗传背景同为Wassilewskija(Ws-2)的
7 个拟南芥晚花突变体 ( C S 2 2 3 5、 C S 2 2 3 8、
CS2239、CS2240、CS2246、CS2248和CS6208)
为材料, 通过干旱胁迫实验、NaCl胁迫实验及甲基
紫精(paraquat, PQ)胁迫实验, 发现晚花突变体的耐
旱、耐盐和耐氧化性都较野生型(wildtype, WT)强。
对各晚花突变体和野生型的叶片失水速率测定结果表
明, 晚花突变体的保水能力较野生型强。SOD活性
测定结果表明, 在正常生长和氧化胁迫条件下, 这些晚
花突变体的 SOD活性都显著高于野生型。相关性回
归分析表明, SOD 活性与耐氧化性、耐旱性、耐盐
性之间呈正相关, 耐旱性和耐盐性随耐氧化性增强而
增强 。
1 材料与方法
1.1 实验材料
拟南芥(Arabidopsis thaliana L.)WS-2野生型及其晚花
突变体 CS2235、CS2238、CS2239、CS2240、
CS2246、CS2248和CS6208的种子(表1), 来源于The
Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC, Ohio
State University, USA)。ld-3 突变体由 R. Amasino
提供(Lee et al., 1994)。其余 6个突变体都是 T-DNA
插入突变体, 由K.A. Feldman 提供(Feldman, 1987)。
突变体之间晚花程度不一致, 在长日照下花期较野生型
至少晚 2 周以上。
1.2 实验方法
1.2.1 耐旱实验
将野生型和各突变体的种子于4°C春化处理3天, 播种
于小花盆, 每盆均匀播种约 50粒。每个小盆一半种野
生型, 一半种突变体。小盆置于 22°C温室、每天 12
小时光照培养。待出苗 2周后, 进行干旱胁迫处理, 干
旱胁迫2-3周后, 观察幼苗存活情况。当野生型成活率
约达25%时, 灌水恢复, 并统计各株系存活率。以同样
方法种植一批密度较小的苗, 正常生长3周后测定其失
水率。将突变体和野生型去根取地上莲苔部分, 称其鲜
重, 然后将其置于常温下, 每 10分钟称 1次鲜重, 直至
100分钟。失水率以初始鲜重的百分率表示((起始鲜重
－每 10分钟 1次称得的鲜重)/(起始鲜重)×100%)。每
组实验重复 3 次。
1.2.2 耐盐实验
耐盐发芽实验 取野生型和各突变体的种子分别置于
1.5 mL离心管, 加入 50%的商用漂白液于水平摇床振
荡灭菌10分钟, 然后用无菌水冲洗4次, 于4°C春化处
理3天。春化结束后, 在含190 mmol.L-1 NaCl的MS0
平板培养基(1/2 X MS salts, pH 5.7, 0.2% Gelrite)上
无菌播种, 每皿均匀划分为8个区域, 野生型和7个突变
体各点种约 50粒, 并设对照。于 22°C、连续光照的
培养条件下萌发。2周后统计存活率和生长情况, 并称
量、记录鲜重。
土壤耐盐实验 苗种植法同耐旱实验, 即将野生
型和各突变体的种子于4°C春化处理3天, 播种于小花
盆, 小盆置于 22°C温室、每天 12小时光照培养。待
苗 2周大时, 灌入 280 mmol.L-1 NaCl溶液, 对照用清
水浇灌, 2周后拍照。
1.2.3 耐氧化实验
耐氧化发芽实验 野生型和各突变体的种子灭菌方法
同上。4°C春化处理 3天, 然后将种子分别点在不含
Paraquat (PQ)(对照)和含1.5 mmol.L-1 PQ的MS0培
养基上, 22°C、连续光照培养。10天后统计存活率及
鲜重。
1.2.4 SOD活性测定
在MS0培养基上生长12天的野生型和突变体幼苗用含
2.5 mmol.L-1 PQ的MS0培养液浸泡处理 20小时, 对
照组用MS0培养液浸泡处理20小时。参照张志良和瞿
伟菁(2003)的方法测定 SOD酶的活性。
1.2.5 数据的相关性分析
用Origin 7.0 软件对获得的数据进行相关性分析。
574 植物学通报 24(5) 2007
2 实验结果
2.1 晚花突变体在干旱胁迫条件下的存活率显著
高于野生型
干旱胁迫条件下, 野生型较各晚花突变体更早发生萎
蔫。各突变体的存活率明显高于野生型(图 1A)。各晚
花突变体的存活率在 45%-65%, 平均存活率为 55%,
显著高于野生型的存活率(25%)。离体叶片的失水率除
突变体CS2246与野生型无显著差异外, 其余均低于野
生型(图 1B)。以上结果表明晚花突变体对干旱的耐受
性增强。
2.2 突变体的耐盐性显著高于野生型
在含190 mmol.L-1NaCl的MS0培养基上, 野生型发芽
率显著低于各突变体, 仅为10%, 而各突变体的发芽率
都在90%以上, 没有盐胁迫的对照各组发芽率无显著差
异(图 2)。图 2A、B和 C显示了在盐胁迫条件下(190
mmol.L-1NaCl), 突变体的发芽率显著高于野生型。图
2D显示的是土壤中生长 2周的植物在 280 mmol.L-1
NaCl胁迫处理2周后的结果, 其结果与培养基上的结果
基本相似, 突变体耐盐性较野生型强。这些结果表明,
无论是在培养基上发芽还是在土壤中生长, 突变体的耐
盐性都较野生型的强。
2.3 突变体的耐氧化性显著高于野生型
在 PQ浓度为 0 mmol.L-1的对照条件下, 除突变体
CS2239发芽率为80%之外, 野生型和突变体发芽率基
本上都接近 100%, 无显著差异(P>0.05)。而在 PQ浓
度为1.5 mmol.L-1的氧化胁迫下, 野生型种子发芽率显
著低于突变体种子(P<0.01), 野生型仅为16%, 而突变
体则在 30%-70%之间(图 3C)。图 3A显示突变体抗
氧化能力显著强于野生型。这些结果显示晚花突变体
抗氧化能力显著高于野生型, 即突变体清除氧化自由基
的能力可能比野生型强。
2.4 突变体的SOD酶活性高于野生型
抗氧化酶是氧化胁迫耐受性的主要决定因素。通过
SOD活性测定发现, 在正常生长条件下, 突变体的SOD
活性显著高于野生型(P<0.01), 因此, 突变体显示出了更
强的清除氧化自由基的能力。这和晚花突变体的表型
一致。在氧化胁迫条件下(2.5 mmol.L-1 PQ), 突变体
的SOD活性也显著高于野生型, 野生型SOD的活性受
氧化胁迫诱导而比正常条件下升高了大约50%, 而突变
体中仅 CS2235、CS2239、CS2248和 CS6208的
SOD活性受氧化胁迫诱导比各自正常情况下的SOD活
性分别提高了 38%、21%、20%和 35%, 且增幅低于
野生型; 其余3个突变体在氧化胁迫诱导后, SOD的活
性增幅很小或稍有下降(图 4)。
这些结果说明, 在野生型中SOD基因的表达可能是
受氧化胁迫诱导的, 而在突变体中则可能趋向于组成型
表达。虽然突变体 CS2235、CS2239、CS2248和
表 1 晚花突变体的遗传背景
Table 1 The background of the late-flowering mutants
Seed
Donor Background (ecotype)
Locus of T-DNA
PhenotypeStock # insertion
CS2235 Kenneth A. Feldmann Ws-2 (Wassilewskija) Unknown Late flowering mutant
CS2238 Kenneth A. Feldmann Ws-2 (Wassilewskija) Unknown Late flowering mutant
CS2239 Kenneth A. Feldmann Ws-2 (Wassilewskija) Unknown Late flowering mutant
CS2240 Kenneth A. Feldmann Ws-2 (Wassilewskija) Unknown Late flowering mutant
CS2246 Kenneth A. Feldmann Ws-2 (Wassilewskija) Unknown Late flowering mutant
CS2248 Kenneth A. Feldmann Ws-2 (Wassilewskija) Unknown Late flowering mutant
CS6208 Rick Amasino Ws-2 (Wassilewskija) AT4G02560 (ld-3) Late flowering in both long and short
days, delay of flowering time is more
extreme in short days
575汪本勤等: SOD活性增高的拟南芥晚花突变体具有增强的非生物胁迫耐受性
CS6208的SOD活性受氧化胁迫诱导, 但诱导幅度显著
低于野生型, 而在其它 3个突变体中则趋于组成型表
达。SOD表达模式由诱导型转变为组成型, 很可能是
突变体抗氧化能力增强的一个原因。
2.5 SOD活性、耐氧化性、耐盐性、耐旱性之
间的相关性分析
以SOD活性为横坐标,分别以NaCl胁迫对植株生长抑制
的百分率、氧化胁迫对植株生长抑制的百分率、干旱
胁迫下植株存活率为纵坐标进行相关性回归分析, 得到
3 条回归曲线(图 5 A , B , C ) , 相关系数 r 分别为
-0.639 85、-0.679 13和 0.497 7。可见 SOD活性
与NaCl胁迫对植株生长抑制率、氧化胁迫对植株生长
抑制率呈负相关, 与干旱胁迫下植株成活率呈正相关, 也
即 SOD活性与耐氧化性、耐盐性、耐旱性呈正相关。
同样可以得到氧化胁迫对植株生长抑制率与NaCl胁迫
对植株生长抑制率呈正相关(r = 0.749 53), 即耐氧化性
与耐盐性呈正相关(图5D)。以同样方法, 也可获得耐氧
化性与耐旱性之间呈正相关。这与先前的报道是一致
的(Gueta-Dahan et al., 1997; Inan et al., 2004; Taji et
al., 2004)。这表明 7个突变体的 SOD活性与耐氧化
性、耐盐性、耐旱性之间呈正相关。
3 讨论
为了证实晚花突变体表型和非生物胁迫耐受性之间的相
关性, 我们选择了7个遗传背景相同的晚花突变体, 这使
得可比性更强, 而且避免了数据处理的复杂性。其中 6
个突变体都是T-DNA插入突变, 由K.A. Feldman 提供
(Feldman, 1987)。这些突变体T-DNA插入的基因位点
还没有被鉴定, 留给我们进一步探究鉴定这些被标记基
因的空间。另外一个突变体 C S6 2 0 8( l d - 3 )由 R .
Amasino提供 (Lee et al., 1994), 该突变体是由于
LUMINIDEPENDENS (LD)基因缺失而致。
我们比较了 7 个晚花突变体和野生型拟南芥的
SOD活性与对非生物胁迫的耐受性, 发现突变体的耐逆
性都比野生型强, 耐氧化性与非生物胁迫耐受性呈正相
图 1 野生型和突变体在干旱胁迫下的存活率及离体叶片失水速
率的比较
(A) 干旱胁迫下的存活率比较, 出苗 2周后停止供水, 干旱胁迫处
理 2周, 统计平均存活率。每盆种 50株, 突变体和野生型各半, 3
次重复, 标准差见图。所有突变体的存活率都显著高于野生型(P
<0.01);
(B) 离体叶片失水速率比较, 在莲座阶段, 取突变体和野生型地上
莲苔部分叶子, 称鲜重后放在空气中失水, 按图上标明的时间间隔
记录鲜重
Figure 1 Comparison of the survival rate under drought
stress and water loss rate from the detached leaves between
the WT and mutants
(A) survival rate under drought stress. Two weeks old plants
were stressed for 2 weeks without watering and the survival
plants were counted at the end of the drought tolerance assay.
The survival rates represent the means of three replicas (about
50 plants for each replica) for each mutant and the WT. The
error bar indicates SD. The survival rates of the mutants are all
significantly higher than that of the WT (P<0.01);
(B) water loss rate from detached leaves of the WT and the
mutants. Leaves from rosette-stage plants were detached and
left in the air and their water loss as fresh weight loss was
recorded at the indicated time intervals
576 植物学通报 24(5) 2007
关, 说明 SOD活性在耐逆性中起重要作用。生物寿限
的延长反映了衰老过程的延缓。衰老的“自由基理论”
认为在衰老过程中, 氧自由基产量增高, 其大量聚积引起
生物大分子 DNA、蛋白质和脂质的氧化降解, 破坏细
胞的结构, 加速了衰老的过程( Harman, 1956; Fridovich,
1978)。在我们的耐氧化实验中, 以 PQ作为超氧自由
基的诱发剂, 人为制造氧化胁迫, 发现这些晚花突变体耐
氧化能力较野生型更强(图3), 说明它们抗衰老的能力增
强。SOD作为植物体内第一个清除 ROS的关键抗氧
化酶, 其活性的高低反映了植物清除ROS(O2-. )能力的强
弱。当然, 这还需要其它酶的协同作用, 如过氧化氢
酶、 抗坏血酸过氧化物酶、过氧化物酶和谷胱甘肽还
原酶(Foyer, 1993)。通过 SOD活性测定, 发现在正常
生长条件下7个晚花突变体SOD活性均比野生型高(图
图 2 盐胁迫下突变体和野生型发芽率和存活率比较
(A) 野生型和突变体种子在含 0与 190 mmol.L-1NaCl的MS0培养基上发芽情况, 拍摄时苗龄为 1周;
(B) (A)图中各株系在皿上的分布示意图;
(C) NaCl胁迫下野生型和突变体发芽率比较, 皿的每个区域点种约 50粒, 3次重复取平均值, 标准差见图(P<0.01);
(D) 盐胁迫下土壤生长的苗存活和生长情况比较, 每盆上半部是突变体, 下半部是野生型, 二者对照, 在 0与 280 mmol.L-1NaCl胁迫下,
照片显示胁迫 2周后的状况
Figure 2 Seed germination and plant survival rate of the wildtype (WT) and the mutants under salt stress
(A) photo documentation of seed germination. Seeds of the WT and the mutants were germinated on MS0 medium with indicated
NaCl concentrations. The plates were photographed when seedlings were one week old;
(B) the key for plates in (A);
(C) comparison of seed germination rate between the WT and the mutants on medium with indicated NaCl concentrations as in (A).
The values represent the mean of three replica plates. About 50 seeds were used per replica for each mutant and the WT. Error
bar represents SD. Under 190 mmol.L-1NaCl stress, the germination rates of all the mutants were significantly higher than that of
the WT (P<0.01);
(D) comparison of survival and growth under salt stress. Each mutant (upper half) was grown with the WT control (lower half) in
the same pot and treated with the indicated NaCl concentrations. The photograph was taken after two weeks salt stress
577汪本勤等: SOD活性增高的拟南芥晚花突变体具有增强的非生物胁迫耐受性
图 3 野生型和突变体种子在氧化胁迫条件下的萌发比较
(A) 照片显示野生型和突变体种子在含 0与 1.5 mmol.L-1 Paraquat (PQ)的MS0培养基上发芽的情况, 拍摄时苗龄为 1周;
(B) (A)图各株系在培养皿上的分布;
(C) PQ胁迫后野生型和突变体种子发芽率比较, 培养皿的每个区域点种约 50粒, 3次重复取平均值, 标准差见图(P<0.01)
Figure 3 Seed germination of the WT and the mutants under oxidative stress
(A) photo documentation of seed germination of the WT and the mutants on MS0 medium containing paraquat of indicated
concentrations. The plates were photographed when seedlings were one week old;
(B) the key for plates in (A);
(C) comparison of germination rates between the WT and the mutants. The values represent the means of three replica plates.
About 50 seeds were used per replica for each mutant and the WT. Error bar represents SD (P<0.01)
图 4 野生型和突变体 SOD酶活性比较
SOD活性的测定按材料和方法描述的进行, 分两种情况, 野生型和
突变体的苗用 2.5 mmol.L-1 PQ处理或不用 PQ处理(control), 测
定 3次取平均值, 标准差见图(P<0.01)
Figure 4 Comparison of SOD activities between the WT and
mutants under normal and oxidative stress conditions
SOD activities were assayed as described in Materials and
Methods for the WT and the mutant seedlings with or without
2.5 mmol.L-1 PQ treatment. Values are the means of three rep-
lica assays. Error bar represents SD (P<0.01)
578 植物学通报 24(5) 2007
图 5 SOD活性与氧化胁迫、盐胁迫、干旱胁迫耐受性的相关性
(A) SOD活性与 NaCl胁迫下植株生长被抑制率呈负相关;
(B) SOD活性与甲基紫精胁迫下植株生长被抑制率呈负相关;
(C) SOD活性与干旱胁迫下植株存活率呈正相关;
(D) 甲基紫精胁迫下植株生长被抑制率与 NaCl胁迫下植株生长被抑制率呈正相关
Figure 5 Correlation analyses between SOD activities and the tolerance to oxidative, salt, and drought stress
(A) Negative correlation between SOD activities and the growth inhibition by NaCl;
(B) Negative correlation between SOD activities and the growth inhibition by paraquat (PQ);
(C) Positive correlation between SOD activities and the survival rate under drought stress;
(D) Positive correlation between the growth inhibition by paraquat (PQ) and the growth inhibition by NaCl
4)。这些结果说明晚花突变体耐氧化性增强是寿限延长
即晚花表型的一个重要原因。
所有的非生物胁迫都会干扰植物体内ROS代谢的
平衡, 即增加 ROS的产生, 造成对细胞的伤害。轻中
度胁迫下, ROS清除酶的活性增加, ROS造成的伤害得
以缓解, 植物的抗氧化能力提高, 耐逆性强的株系清除
ROS的能力一般较强(Bowler et al.,1989, 1991,
1992)。通过实验发现晚花突变体具有更强的耐氧化
性、耐旱性和耐盐性, 表明其清除ROS的能力增强了,
突变体的 SOD活性较野生型高也进一步证实了这一
点。在正常生长条件下 7个晚花突变体SOD活性都比
野生型高, 这也正可能是晚花突变体耐逆性强的原因。
579汪本勤等: SOD活性增高的拟南芥晚花突变体具有增强的非生物胁迫耐受性
SOD活性、耐氧化性、耐盐性及耐旱性之间的相关性
分析发现它们呈正相关。以上研究表明生物寿限长
短、SOD 活性水平高低、耐氧化能力强弱、耐逆性
强弱有着内在的联系(Zhu, 2002; 陈玮等, 2003)。
突变体 ld-3缺失 LD基因, 该基因编码一个核蛋白
(Lee et al., 1994), 其晚花表型可被Landsberg erecta
的等位基因 FLC抑制 (Sanda and Amasino,1996)。
最近报道, LD是FLC的一个转录激活因子, 和SUF4相
互作用(Kim et al., 2006)。尽管LD作为开花自主促进
途径的一个正效应子已经研究得很清楚, 但ld-3突变体
中SOD活性是怎样被提高的还不清楚。其它 6个晚花
突变体突变基因及功能也有待进一步研究。
拟南芥中有大量的晚花突变体, 影响晚花的因素多,
机制也不同, 耐氧化性增强仅是其中一个方面, 也并非所
有晚花突变体都具有增强的耐氧化性(Kurepa et al.,
1998)。
致谢 感谢The Arabidopsis Biological Resource Cen-
ter提供拟南芥突变体种子。
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Arabidopsis Late-flowering Mutants with Elevated SOD Activities
Show Enhanced Tolerance to Abiotic Stresses
Benqin Wang1, 2, Xi Chen 1, Chengbin Xiang1*
1School of Life Sciences, University of Sciences and Technology of China, Hefei 230027, China;
2Liu’an Vocation College, Liu’an 237158, China
Abstract To study whether a correlation exists between late-flowering phenotype and abiotic stress tolerance, seven Arabidopsis
late-flowering mutants with the same genetic background of Wassilewskija ecotype were tested for tolerance to drought, salt, and
oxidative stress. These mutants displayed significantly higher tolerance to the stresses tested than the wildtype(WT). In addition,
the rate of water loss from detached leaves and superoxide dismutase(SOD) activity were also compared between the WT and the
mutants. It was found that the mutants showed a much better water conservation and higher superoxide dismutase activity than
the WT. A positive correlation was found between SOD activity and abiotic stress tolerance, suggesting that oxidative stress
tolerance plays an important role in abiotic stress tolerance.
Key words Arabidopsis, drought tolerance, late-flowering mutants, oxidative tolerance, salt tolerance, SOD activity
Wang BQ, Chen X, Xiang CB (2007). Arabidopsis late-flowering mutants with elevated SOD activities show enhanced tolerance to
abiotic stresses. Chin Bull Bot 24, 572-580.
* Author for correspondence. E-mail: xiangcb@ustc.edu.cn
(责任编辑: 白羽红)
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