The effects of N (NaNO3) and C (NaAc) source in medium on the expression of tumor necrosis factor-α (TNF-α) gene in transgenic Anabaena sp. PCC 7120 were compared. The data showed that N source stabilized the expression of foreign protein and C source altered the synthesis of cell walls. Comparing several methods for breaking the cells, supersonic was able to extract TNF-α better than others. For purification of TNF-α, transgenic Anabaena cells were broken, the extracts were precipitated with ammonia sulfate, and the impure TNF-α was eluted from DEAE ion exchange chromatography. Electrophoresis (PAGE-SDS) showed a single band at 17 kD position.
TNF-a基因在鱼腥藻7120中的表达及其产物的亲和层析纯化
施定基1* 叶 欣1,2 钟 晖3 蔡以滢1 邵 宁1彭国宏4 董晓军3 王春梅1 欧阳叶新1 李振甲3
（1. 中国科学院植物研究所，北京100093；2. 中国科技大学生命科学学院，合肥230027；
3. 中国人民解放军#&! 医院，北京10085；2. 中国科学院海洋研究所，青岛266071）
摘要： 用转入TNF-a基因并稳定表达了4 年多的丝状体蓝藻———鱼腥藻7120（Anabaena sp.PCC7120），研究比较了在培养液中氮源（NaNO3）和碳源（NaAc）对转基因藻生长和TNF-a基因的不同影响。氮源能稳定外源蛋白的表达，而碳源则影响细胞壁的合成。通过比较几种不同的破碎细胞的方法，发现超声破碎得到的可溶性总蛋白含量和TNF-a含量均要比冻融法高出1 倍左右，经过细胞破碎、硫酸铵分级沉淀、常压离子交换液相层析后，除去杂蛋白及大量容易堵柱的糖类等物质，最后通过亲和柱层析，分离出了纯的目标蛋白———重组肿瘤坏死因子（TNF-a）。经凝胶电泳鉴定为单一的谱带，分子量为17 kD.
关键词： 肿瘤坏死因子a（TNF-a）；转基因蓝藻（鱼腥藻7120）；亲和层析
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