全 文 ：2006年第3期
所有配套的载体,而重新合成引物则需要等待引物合成的时间,以及随后的扩增和连接过程。而对载体进行
序列分析后,运用实验室常备的工具酶进行酶切、补平操作来调整读码框的方法则非常方便快捷。对经过限
制性内切酶切割 DNA后产生的粘性末端的补平,通常采用 KlenowFragment酶或 T4DNA聚合酶[1]或者一
些公司推出的 DNABluntingKit,但从未见过有使用此外高保真 DNA聚合酶补平 3凹陷端的报道。高保真
DNA聚合酶(如 PfuDNA聚合酶;PyrobestDNA聚合酶等)具有 3-5的外切活性,其 PCR扩增产物的 3端
是平滑末端,与普通 Taq酶的 PCR扩增产物 3末端通常附有一个碱基 A不同。限制性内酶切切割 DNA后
在 3端产生带有-OH末尾,高保真 DNA聚合酶在正常反应体系中会将与另一条 DNA链互补的碱基聚合上
去,直至 DNA粘性末端被补平。但由于高保真酶发生聚合反应的方向为 5-3,因此不能应用于 3突出末端
的 DNA补平。
本研究利用高保真 DNA聚合酶成功地将 NdeⅠ和 HindⅢ双酶切后产生的 3凹陷端平滑化,通过平端
连接得到了读码框正确的重组表达质粒 pET28a-HA,该重组质粒正被转入 BL21(DE3)中,用于原核表达及
禽流感病毒基因工程疫苗制备的研究。本文报道的研究结果将会使研究人员在对 DNA 3凹陷端平滑化、
然后进行读码框调整时多了一个选择。
参 考 文 献
1 萨姆布鲁克丁 J,弗里奇 EF,曼尼阿蒂斯 T.分子克隆试验指南[M](第二版).金冬雁,黎孟枫,等译.北京:科学出版社,1999,267~271.
张国广等:利用高保真酶扩增特性调整基因读码框的方法
中国地方猪ESR基因PvuⅡ多态性及其与产仔数的关系
四川农业大学李明洲等4位研究人员试验采用 PCR-RFLPs方法,研究了中国成华猪、内江猪和太湖猪 3个
地方品种ESR基因的多态性及其与产仔数间的关系。结果表明:成华猪、内江猪、太湖猪的B等位基因频率分别
为0.6389、0.6613、0.6855。在这3个猪品种中,除成华猪检测时只有AB、BB两种基因外,在内江和太湖猪中都检
测到了AA、AB、BB3种基因型。对3个品种不同基因型个体间产仔数的比较研究表明:不同ESR基因型的个体其
产仔数存在一定差异,各品种无论头胎还是经产,总体表现为BB基因型的产仔数高于AB型和AA型个体,而
AB型又高于AA型个体。其中太湖猪BB型个体头胎产活仔数(NBA)11.13头,显著高于产9.42头的AB型个体
(P<0.05)。这证明了基因是对提高产仔数有利的基因,同时还分析了ESR基因PvuⅡ-RFLP的应用前景及其存在
问题。
据报道:中国地方猪二花脸猪,香猪B等位基因频率为0.7321,外来品种则大约克猪、长白猪、“双臀肌”约克
夏B等位基因频率为0.3455,大白猪B等位基因频率分别为0.55~0.75、0.4706。本次试验中B等位基因频率以太
湖猪最高为68.55%,内江猪次之为66.13%,成华猪最低为63.89%。这证明中国地方猪B等位基因频率普遍高于
国外商业品种猪,验证我国地方猪种产仔数高的优良遗传性。
所测ESR基因的PvuⅡ酶切片段长度多态性与成华猪、内江猪和太湖猪的产仔数间存在一定的相关性。总
体表现为BB基因个体的产仔数>AB型个体的产仔数>AA型个体的产仔数。这说明B基因有助于提高产仔性能。
据报导ESR-B基因控制的0.44~1.15头产活仔数/胎。这对育种有一定参考价值。虽然ESR基因为控制猪高产仔
数的主效基因或与主效基因紧密连锁,但与不同的商业猪种对产仔数的影响存在显著品种间和场间差异。另外,
ESR基因型对产仔数的影响在胎次间有差异,通常是对头胎产仔数的影响高于经产。
(下转第72页)
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生物技术通报Biotechnology Buletin 2006年第3期
的 4组碳原子(即—CH3,—CH2,—CH和—COO—基团中的碳原子)。测得的1H-NMR谱图(图 5),在 δ7.256
处的吸收峰由溶剂 CDCl3产生;另外的几个吸收峰(分别位于 δ1.249,δ1.262;δ2.435,δ2.447,δ2.466,δ2.477,
δ2.566,δ2.581,δ2.597,δ2.612;δ5.233,δ5.246),与标准品 PHB的一致,也与徐艳霞报道的球衣菌精制
PHB1H-NMR谱图表征基本一致,分别代表—CH3,—CH2和—CH中的氢原子。
图 5 PHB样品的 1H-NMR图谱
参 考 文 献
1 TakedaM,MatsuokaH,HamanaH,etal.ApplMicrobiolBiotech,1995,43(1):31.
2 陈接锋,许旭萍,佘晨兴,等.工业微生物.2003,33(4):23,31.
3 WiliamJP,AnthonyC.ApplEnvironMicrobiol,1993,59(12):4236.
4 潘贵全,盛青,秦杰.化工冶金,1999,20(3):286.
5 陈银广,陈坚,堵国成.无锡轻工大学学报,1998,17(3):5.
6 尹进,于慧敏,李红旗.生物工程学报,1998,14(3):342.
7 DoiY,KawaguchiY,NakamuraY,etal.ApplEnvironMicrobiol,1989,55(11):2932.
8 徐艳霞,刘世旺.资源开发与市场,2000,16(5):274.
(上接第57页)
由于ESR基因全长在140kb以上,其中包含许多酶切位点,可能存在丰富的酶切位点多态性。要实现对ESR
基因的基因型选择,首先必须全面系统地研究ESR基因的酶切位点多态性及其与产仔性能的关系。不过目前猪
的基因定位已取得重大进展,特别对猪产仔数和早期生长基因的分子遗传学研究有了突破性进展。同时ESR基
因与其他繁殖性状(初生窝重、断奶窝重、有效乳头数等)及生产性状之间(背膘厚、生长速度、胴体重等)的关系仍
要深入研究。当然现已利用ESR基因进行标记辅助选择(MAS),可以提供高窝产仔数。结合标记辅助渗入(MAI)
技术有可能培育出产仔数多、生长快、背膘薄的新母本群体,从而提高经济效益。
秦春圃
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