全 文 ：牛 B-乳球蛋白基因 5c调控成分的分离、克隆及序列分析
西北农林科技大学生物工程研究所石玉强等 5位先生利用 PCR 方法克隆了牛 B-乳球蛋白基因 5c调控
成份( 1 449bp) ,其中包括 5c侧翼序列( 645bp) , 第一外显子及第一内含子( 804bp)。PCR产物回收纯化后,
克隆在 pMD18-T Vector 的 T 位点。序列分析表明,该序列与牛 B-乳球蛋白 A 型基因、牛 B-乳球蛋白 B型
基因山羊和绵羊 B-乳球蛋白基因的同源性分别为 98. 55%, 99. 79%, 90. 70%, 90. 09%。这表明此调控成分
含有诸多调节因子结合位点或反应元件。其中包括视黄酸反应元件( RARE)、佛波酯反应元件( TRE)、乳腺
特异性因子( M SBF)和核因子 1( NF1)结合位点等, 并提示此调控成分可调控外源基因在乳腺细胞中高效表
达,可用于构建乳腺特异性表达载体。
由于外源基因在乳腺细胞中特异性表达受诸多因素的影响, 故研究内含子及其位置效应有重要意义。
如第一内含子对外源基因的正确剪接、修饰及提高表达效率有重要作用,同时位置效应表达构件在宿主染色
体上的整合位点强烈影响外源基因的表达,若整合在宿主的异染色区,则表达就会受到强烈抑制。另外乳腺
细胞中BLG基因启动子区存在 DNasel超敏感位点,此位点是诸多反式作用因子识别和作用的位点,与基因
的表达关系密切。
本研究通过对牛 BGL 基因启动子区的克隆及序列分析, 发现其调控成分存在 RARE、T RE、MSBF 和
NF1等诸多调节因子结合位点, 这对调节外源基因在乳腺上皮细胞特异性的表达非常重要;同时克隆牛 BLG
基因第一外显子,主要与之其中的信号肽序列在指导外源基因特异性表达和分泌中的活动是很重要的。
用 RAPD标记中国小型地方猪品种的遗传多样性
在我国大型品种猪肉全部占领市场和改变肉食品结构的今天,我国地方品种的小型猪家畜资源显得十
分宝贵,诸如香猪、滇南小耳猪、五指山猪、藏猪等,特别对它们的分子遗传研究就更是迫近眉梢。
目前华中农业大学动物科技学院动物分子生物学与育种实验室樊斌博士等 8位专家教授采用随机扩增
多态 DNA( Random amplif ied palymorphic DNA, RA PD)法,在周俊玲等和刘德武等人对其他猪遗传变异的
检测与分析和猪群体结构的基础上,采集了 4种小型猪、二花脸猪和杜洛克猪的血液样品, 应 RAPD进行检
测,所得数据进行统计分析并制成品种间 NJ聚类图。樊斌博士选用的其他研究者呈多态的 25条 RAPD引
物中, 只发现 8条具有多态性, 并在 RAPD的两种检测法(池 DNA 法和个体 DNA 法)中选用个体 DNA 法
研究各小型猪品种的遗传结构,现已得结果:
1 品种内的遗传变异
RAPD片段观测数目平均( 6个品种)在 4. 75~ 6. 37之间,可变数在 2. 87~ 5. 12之间。此为各品种的
遗传相似性系数,而 Shannon则为多样性指数。在各品种遗传相似性系数中, 二花脸猪品种相似性系数最
低,顺次为藏猪、五指山猪、得猪、滇南小耳猪和杜洛克猪。而 Shannon多样性指数则是二花脸猪最高, 杜洛
克最低。在综合各个品种的指标分析中,二花脸猪的品种内遗传程度最大,杜洛克最小。而在小型猪品种内
的遗传变异程度则以藏猪的遗传多样性为大,其次顺序为五指山猪、香猪和滇南小耳猪。
2 品种间的遗传关系
品种间的遗传结构关系, 从以杜洛克为外群的 NJ 聚类分析中显示,香猪和滇南小耳猪同属云贵高原,
地理位置相近, 自然生态环境相似,人为饲养繁育的历史变动不大, 所以遗传结构关系较近而紧密。而藏猪
则由于内陆康藏高原,饲养粗放, 且多牧放,所以遗传结构关系与其他品种较远。另外,总群体的 Shannon
多样性指数为 1. 54,品种平均 Shannon多样性指数为 1. 17,群体间的变异占 24. 16%;说明各品种间遗传结
构已明显不同。 秦春圃
生物技术通报
# 国内信息# BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2005年第 5期