全 文 ：生物技术通报Biotechnology Buletin 2006年第3期
参 考 文 献
1 FireA,XuS,MontgomeryMK,etal.Nature,1998,391:806～811.
2 MontgomeryMK,XuS,FireA,etal.ProcNatlAcadSciUS,1998,95
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3 JorgensenR.TrendsBiotechnol,1990,8(12):340～344.
4 StarkCR,KerIM,WiliamsBR,etal.AnnuRevBiochem,1998,67:
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5 ElbashirSM,Harbotrh,LwndleckW,etal.Nature,2001,411:494～
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6 MiyagishiM,HayashiM,Taira.AntisementNucleicAcidsRes,
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11 KetingRF,FischerSE,BernsteinE,etal.Genesdev,2001,15(20):
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12 ProvostP,SilversteinRA,DishartD,etal.ProcNatlAcadSciUSA,
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13 CoxDN,ChaoA,BakerJ,ChangL,QiaoD,LinH.GenesDev.1998,12
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14 BilyE,BronadniV,ZhangHetal.ProcNatlAcadSciUSA,2001,98
(25):14428～14433.
15 SharmaAK,NelsonMC,BrandtJE,etal.Blood,2001,97(2):426～
434.
植物性转基因食品的检测与验证方法
厦门大学生命科学学院刘光明、宋思扬、龙敏南等6位科研人员根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病
毒启动子(CaMV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列。设计并合成了两对不同的引物,建立了 PCR-酶切分-
Southern杂交检测并确定认为转基因成分 35S启动子和 NOS终止子的方法,并用此法对马铃薯、大豆、玉米、甜
椒、番茄等实物样品进行检测,发现13份样品中有6份检出35S启动子和NOS终止子,7份样品结果为阴性。结
果表明,建立的检测与验证方法能有效检出转基因作物及其食品中的35S启动子和NOS终止子,具有灵敏度高,
特异性好和结果准确的特点,可应用于进出境(口)产品的转基因成份的检测。
若用PCR法检测植物性转基因食品,先要了解重组DNA信息,以后设计引物。不同作物、不同的改良目标则
重组DNA不同,转基因作物的种类及性状繁多,但其基本序列结构相似,即含启动子、目的基因、终止子、标记基
因或抗生素基因,针对商品化生产的转基因作物中绝大多数含有CaMV35S启动子和NOS终止子的特点,自行设
计两对引物建立PCR检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法,用于快速检测含有这两种序列的转基因
植物及其食品,此法同时检测CaMV 35S和NOS基因双元件,在一定程度上可避免某些植物因自然感染花椰菜
花叶病毒或根癌农菌产生的假阳性结果。
为保证PCR检测,提取纯化DNA是整个研究的关键,目前转基因食品DNA是整个提取的主要方法有CTAB
法和SDS法。应用CTAB法提取样品基因组DNA,其实验方法简便、快速,提取的DNA浓度高,完整性好,特别适
用于大批量样品的检测。但由于PCR技术的非常灵敏,易出现假阳性、假阴性结果,因而在进行PCR检测时,首先
要设立阴性、空白和阴性对照,其中用阳性质粒对照先确定的PCR扩增温度,时间和循环次数等反应条件,还要
用3个对照检查扩增系统看其能否正常工作,以排除假阳性及假阴性结果;其次在实物检测过程中,每个样品都
做了两个平行实验以保证结果的准确性;最后,对阳性检测结果进行酶切和Southern杂交来确认,以验证结果的
可靠性。
在检测口岸进出境(口)13份实物样品中,显示6份样品检出了CaMV35S启动子和NOS终止子,其余6份
样品均未检出。该法具有灵敏、直观、准确等特点,适于大豆、马铃薯、玉米、甜椒、番茄等多种农作物及其食品的检
测与验证,结果提示了口岸进境(口)的马铃薯、大豆、玉米中含有转基因产品,应加强今后进境(口)产品的检验与
管理。 秦春圃
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