全 文 ：第 １４卷第 ４期
２０１６年 ７月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １４ Ｎｏ􀆰 ４
Ｊｕｌ． ２０１６
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１６􀆰 ０４􀆰 ０１０
收稿日期：２０１６－０１－１２
作者简介：张秀芬（１９９０—），女，河北张家口人，研究方向：天然产物的开发应用；潘裕添（联系人），教授，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｘｍｐｙｔ＠ ｓｉｎａ．ｃｏｍ
白芽奇兰茶多酚的提取工艺及其抗氧化活性
张秀芬，陈金妹，姚丽云，潘裕添
（闽南师范大学 菌物产业工程技术中心，福建 漳州 ３６３０００）
摘　 要：通过醇提法探究白芽奇兰茶多酚提取工艺及其体外抗氧化活性的作用。 通过正交试验优化考察乙醇浓
度、液料比、浸提时间和浸提温度对白芽奇兰茶多酚提取率的影响；测定白芽奇兰茶多酚清除·ＯＨ、·Ｏ－２、·ＤＰＰＨ 的
能力，同时测定了对 Ｌ９２９细胞生长的影响及抗 Ｈ２Ｏ２氧化作用的能力。 结果表明：乙醇体积分数 ７０％、液料比 ４０
ｍＬ ／ ｇ、浸提时间 １６５ ｍｉｎ、浸提温度 ７５ ℃，在该条件下，茶多酚提取率最大达 ８１􀆰 ３３ ｍｇ ／ ｇ；白芽奇兰茶多酚具有较强
的抗氧化活性，３０ μｇ ／ ｍＬ时不影响细胞的正常生长，且可以预防 Ｈ２Ｏ２对细胞的损伤。
关键词：白芽奇兰；茶多酚；提取工艺；抗氧化性
中图分类号：ＴＳ２０２．１　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１６）０４－００４８－０７
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｆｒｏｍ ｂａｉｙａｑｉｌａｎ ｔｅａ
ＺＨＡＮＧ Ｘｉｕｆｅｎ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｍｅｉ，ＹＡＯ Ｌｉｙｕｎ，ＰＡＮ Ｙｕｔｉａｎ
（Ｔｈｅ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｍｕｓｈｒｏｏｍ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｍｉｎｎａｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ ３６３０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｂａｉｙａｑｉｌａｎ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｅｔｈａｎｏｌ ｓｏｌｖｅｎｔ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ． Ｆｏｕｒ ｆａｃｔｏｒｓ ａｆｆｅｃｔｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ
ａｑｕｅｏｕｓ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｌｉｑｕｉｄ⁃ｓｏｌｉｄ ｒａｔｉｏ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｗａｓ ｅｖａｌｕａｔｅｄ ｂｙ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ·ＯＨ，·Ｏ－２，ａｎｄ·ＤＰＰＨ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｈ２Ｏ２ ．Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｐｒｏｃｅｓｓ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ
ｗｅｒｅ ｅｔｈａｎｏｌ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ７０％， ｌｉｑｕｉｄ⁃ｓｏｌｉｄ ｒａｔｉｏ ４０ ｍＬ ／ ｇ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ １６５ ｍｉｎ， ａｎｄ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ７５ ℃ ．Ｕｎｄｅｒ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｉｎ ｂａｉｙａｑｉｌａｎ ｗａｓ
８１􀆰 ３３ ｍｇ ／ ｇ．Ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｉｎ ｂａｉｙａｑｉｌａｎ ｐｒｏｔｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ ｆｒｏｍ Ｈ２Ｏ２ ｄａｍａｇｅ ａｎｄ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｎｏｒｍａｌ
ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｒｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ３０ μｇ ／ ｍＬ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｂａｉｙａｑｉｌａｎ ｔｅａ；ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ；ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ
　 　 白芽奇兰茶主产于福建省漳州市平和县，是一
种乌龙茶，其汤色橙黄，香气清高，滋味清爽细腻。
白芽奇兰茶含有丰富的茶多酚 （ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，
ＴＰ），是茶叶中多酚类物质的总称，是一种多功能、
高效能的天然抗氧化剂，在食品、油脂、保健、医
药、精细化工等领域都有广泛的应用，是由约 ３０
种以上的酚性物质组成，按其化学结构可分为儿
茶素、黄酮及类黄酮醇、花色素、酚酸及缩酚酸，其
中以黄烷醇类（主要是儿茶素类化合物）最为重
要，占茶多酚总量的 ６０％ ～８０％，其次是黄酮类，其
他酚类物质含量比较少［１］ 。 茶多酚作为抗氧化剂
可应用于肉制品加工、油脂贮藏及焙烤食品、乳制
品种饮料配制等方面［２］ 。 此外，茶多酚还具有高
效的抗衰老、抗辐射、消除人体过剩的自由基、去
脂减肥、降低血糖血脂和胆固醇、预防心血管疾病
及抑制肿瘤细胞等多种保健和药理功能，在食品
工业、医药行业和日用化工业等领域具有广阔的
应用前景［３］ 。
本文中，笔者利用醇提法［４］研究白芽奇兰茶多
酚的提取工艺，并研究白芽奇兰茶多酚的抗氧化
性，以期为白芽奇兰的开发利用开辟一条新途径。
１　 材料和方法
１􀆰 １　 材料与试剂
白芽奇兰，产于福建平和；福林酚试剂（生化试
剂），国药集团化学试剂有限公司；无水乙醇、无水
Ｎａ２ＣＯ３、ＦｅＳＯ４、Ｈ２Ｏ２、ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＨＣｌ、１，１０
菲咯琳、邻苯三酚（分析纯），西陇化工股份有限公司；
没食子酸（分析纯），天津市永大化学试剂开发中心；
Ｔｒｉｚｍａ ｂａｓｅ（分析纯（≥９９％））、ＤＰＰＨ（生化试剂），
Ｓｉｇｍａ⁃Ａｌｄｒｉｃｈ 公司；ＲＰＭＩ Ｍｅｄｉｕｍ １６４０、胎牛血清，
Ｇｉｂｃｏ公司；ＭＴＳ，Ｎａｌｇｅｎｅ 公司；Ｌ９２９ 细胞，中国科学
院上海细胞库。
１􀆰 ２　 仪器与设备
ＡＵＹ１２０型电子分析天平，ＳＨＩＭＡＤＺＵ 公司；美
谱达 ＵＶ １１００ ＰＣ型紫外可见分光光度计，上海圣
科仪器设备有限公司；ＨＨ２ 型数显恒温水浴锅，金
坛市科析仪器有限公司；ＨＢ ＩＩＩ 型循环水真空泵，
河南省予华仪器有限公司；ＲＥ５２ ９９ 型旋转蒸发
仪，上海申生科技有限公司；Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００ ＰＲＯ 全波
长酶标仪，ＴＥＣＡＮ 公司；二氧化碳培养箱，ＥＳＣＯ 公
司；倒置显微镜，ＯＬＹＭＰＵＳ 公司；ＨＦ ｓａｆｅ 生物安全
柜，上海力申科学仪器有限公司。
１􀆰 ３　 实验方法
１􀆰 ３􀆰 １　 白芽奇兰茶多酚的提取流程
白芽奇兰茶→粉碎→乙醇浸提→抽滤→旋蒸
除去乙醇→纯水定容至 １００ ｍＬ→茶多酚提取液。
１􀆰 ３􀆰 ２　 单因素实验
单因素实验参考文献［５］进行。
１）乙醇体积分数对提取率的影响　 称取 ２ ｇ 白
芽奇兰茶叶粉末，分别用体积分数 ２０％、４０％、６０％、
８０％和 １００％的乙醇溶液，按照液料比（ｍＬ ∶ ｇ） ２０ ∶
１，８０ ℃，水浴浸提 ６０ ｍｉｎ，浸提 ２ 次，探究不同体积
分数的乙醇对白芽奇兰茶多酚提取率的影响。
２）液料比对提取率的影响　 称取 ２ ｇ 白芽奇兰
茶叶粉末，８０％的乙醇，８０ ℃，按照液料比（ｍＬ ∶ ｇ）
分别为 ５ ∶ １、１０ ∶ １、２０ ∶ １、３０ ∶ １、４０ ∶ １、５０ ∶ １和 ６０ ∶ １，
水浴浸提 ６０ ｍｉｎ，浸提 ２次，探究液料比对白芽奇兰
茶多酚提取率的影响。
３）浸提时间对提取率的影响　 称取 ２ ｇ 白芽奇
兰茶叶粉末，８０％的乙醇，８０ ℃，液料比（ｍＬ ∶ ｇ）４０ ∶
１分别水浴浸提 ３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０ 和 ２１０ ｍｉｎ，
浸提 ２次，探究浸提时间对白芽奇兰茶多酚提取率
的影响。
４）浸提温度对提取率的影响　 取 ２ ｇ 白芽奇兰
茶叶粉末，８０％的乙醇，液料比（ｍＬ ∶ ｇ）４０ ∶ １，分别在
５０、６０、７０、８０ 和 ９０ ℃，水浴浸提 １５０ ｍｉｎ，浸提 ２
次，探究浸提温度对白芽奇兰茶多酚提取率的影响。
１􀆰 ３􀆰 ３　 正交实验设计
在单因素试验基础上，以乙醇体积分数、液料
比、浸提时间、浸提温度 ４个因子对茶多酚提取率的
影响为研究对象，设计正交试验，以期获得不同提
取方法中各因素对提取茶多酚质量分数的贡献率
及提取率较高的试验组合。
１􀆰 ３􀆰 ４　 茶多酚提取率的测定
１）标准曲线测定 　 称 ０􀆰 １ ｇ 没食子酸，于烧杯
中溶解后定容至 １００ ｍＬ，得到 １ ｍｇ ／ ｍＬ的没食子酸
标准储液。 准确量取 １􀆰 ０、２􀆰 ０、３􀆰 ０、４􀆰 ０ 和 ５􀆰 ０ ｍＬ
没食子酸标准储液至 ｌ００ ｍＬ容量瓶中，分别用水定
容，得到质量浓度为 １０、２０、３０、４０和 ５０ μｇ ／ ｍＬ的没
食子酸标准液［６］。 量取 ５个标准品溶液各 ｌ ｍＬ，分
别置 ２０ ｍＬ比色管中，在每个比色管内分别加入 ５
ｍＬ １０％（体积比）福林酚试剂，摇匀，反应 ５ ｍｉｎ 后
加入 ４ ｍＬ ７５ ｇ ／ Ｌ Ｎａ２ＣＯ３溶液，室温下放置 ６０ ｍｉｎ。
纯水作空白对照，分别测 ７６５ ｎｍ 处的吸光度，得茶
多酚质量浓度ρ（Ｘ） 与吸光度 Ａ（Ｙ）的回归方程：Ｙ＝
０􀆰 ０１３ ０９ρ（Ｘ）＋０􀆰 １４７ ３，Ｒ２ ＝ ０􀆰 ９９９。
２）样品中茶多酚提取率的测定 　 取稀释 １００
倍后的白芽奇兰浸提滤液 １ ｍＬ，加 ５ ｍＬ １０％福林
酚试剂摇匀，反应 ５ ｍｉｎ 后，加 ４ ｍＬ ７５ ｇ ／ Ｌ Ｎａ２ＣＯ３
溶液，室温下放置 ６０ ｍｉｎ，以纯水作空白对照，测
７６５ ｎｍ处的吸光度（Ａ）。 由标准曲线回归方程计
算出茶多酚提取物的浓度，代入 Ｒ＝（ρ×Ｖ×ｎ） ／ （ｍ ×
１ ０００）计算茶多酚的提取率，式中： Ｒ—茶多酚提取
率，ｍｇ ／ ｇ； ρ—提取液中茶多酚质量浓度，μｇ ／ ｍＬ；
Ｖ—茶多酚提取液体积，ｍＬ； ｎ—稀释倍数； ｍ—白
芽奇兰茶粉质量，ｇ。
１􀆰 ３􀆰 ５　 白芽奇兰茶多酚提取物抗氧化活性的测定
１）白芽奇兰茶多酚提取物清除·ＯＨ 的能力 　
采用邻二氮菲 Ｆｅ２＋氧化法测定白芽奇兰茶多酚提
９４　 第 ４期 张秀芬等：白芽奇兰茶多酚的提取工艺及其抗氧化活性
取物对·ＯＨ 的清除能力［７－８］。 量取 ２􀆰 ０ ｍＬ 磷酸盐
缓冲溶液（ＰＢＳ）（０􀆰 ２ ｍｏｌ ／ Ｌ，ｐＨ７􀆰 ４）和 ８􀆰 ０ ｍＬ蒸馏
水于 １５ ｍＬ试管中，作空白参比管（Ａ空参）；量取 ２􀆰 ０
ｍＬ ＰＢＳ，１􀆰 ５ ｍＬ １，１０ 菲咯琳（５􀆰 ０ ｍｍｏｌ ／ Ｌ），１􀆰 ０
ｍＬ ＦｅＳＯ４（０􀆰 ７５ ｍｍｏｌ ／ Ｌ）和 ５􀆰 ５ ｍＬ蒸馏水于 １５ ｍＬ
试管中，混匀作未损伤管（Ａ未损）；量取 ２􀆰 ０ ｍＬ ＰＢＳ，
１􀆰 ５ ｍＬ１，１０ 菲咯琳，１􀆰 ０ ｍＬ ＦｅＳＯ４，４􀆰 ５ ｍＬ蒸馏水
和 １􀆰 ０ ｍＬ Ｈ２Ｏ２（０􀆰 １％）于 １５ ｍＬ试管中，作损伤管
（Ａ损）；量取 ２􀆰 ０ ｍＬ ＰＢＳ，１􀆰 ０ ｍＬ 样品液和 ７􀆰 ０ ｍＬ
蒸馏水于 １５ ｍＬ试管中，作样品参比管（Ａ样参）；量取
２􀆰 ０ ｍＬ ＰＢＳ，３􀆰 ５ ｍＬ蒸馏水，１􀆰 ５ ｍＬ １，１０ 菲咯琳，
１􀆰 ０ ｍＬ ＦｅＳＯ４，１􀆰 ０ ｍＬ 白芽奇兰茶多酚提取液和
１􀆰 ０ ｍＬ Ｈ２Ｏ２于 １５ ｍＬ试管中，作样品管（Ａ样品）。 将
上述试管置于恒温水浴锅中，３７ ℃保温 ６０ ｍｉｎ，于
波长 ５３６ ｎｍ处测吸光度（ Ａ）值，平行测定 ３ 次，用
其平均值按式（１）计算·ＯＨ清除率。
清除率 Ｄ ＝ ［（ Ａ样品 － Ａ样参 ） － （ Ａ损 － Ａ空参 ）］ ／
（Ａ未损－Ａ损）×１００％ （１）
２）白芽奇兰茶多酚提取物清除·Ｏ－２的能力　 白
芽奇兰茶多酚的清除·Ｏ－２能力的测定根据文献［９］
并做适当改进。 量取 ２􀆰 ５５ ｍＬ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ （ ０􀆰 ０５
ｍｏｌ ／ Ｌ，ｐＨ＝ ８􀆰 ２）缓冲溶液于 １０ ｍＬ 试管中，向其中
加入 ０􀆰 ０５ ｍＬ 邻苯三酚（４５ ｍｍｏｌ ／ Ｌ 同），再加 ０􀆰 ４
ｍＬ蒸馏水，反应 ４ ｍｉｎ 后于 ３２５ ｎｍ 处测得反应体
系的吸光度值，记作 Ｂ０；按上述方法，将蒸馏水换成
样品溶液，反应 ４ ｍｉｎ后于 ３２５ ｎｍ 处测得反应体系
的吸光度值，记作 Ｂ１；同样按照上述方法，量取 ２􀆰 ５５
ｍＬ Ｔｒｉｓ ＨＣｌ 缓冲溶液和 ０􀆰 ４ ｍＬ 样品，加入 ０􀆰 ０５
ｍＬ蒸馏水，反应 ４ ｍｉｎ 后于 ３２５ ｎｍ 处测定反应体
系的吸光度值，记作 Ｂ２；平行测定 ３ 次，用其平均值
按式（２）计算·Ｏ－２清除率。
清除率 Ｄ＝［Ｂ０－（Ｂ１－Ｂ２）］ ／ Ｂ０×１００％ （２）
３）白芽奇兰茶多酚提取物清除·ＤＰＰＨ 的能力
　 白芽奇兰茶多酚的清除·ＤＰＰＨ 能力的测定依据
文献［１０－１１］并做适当修改，量取 １􀆰 ０ ｍＬ 样品溶液
及 ２􀆰 ０ ｍＬ·ＤＰＰＨ溶液（０􀆰 １ ｍｍｏｌ ／ Ｌ，下同）于 １０ ｍＬ
试管中，避光静置 ３０ ｍｉｎ 后于 ５１７ ｎｍ 处测定其吸
光度 Ｃ２；测定 ２􀆰 ０ ｍＬ·ＤＰＰＨ 溶液与 １􀆰 ０ ｍＬ ７０％
（体积分数）乙醇混合液的吸光度 Ｃ０；再测定 １ ｍＬ
样品溶液与 ２􀆰 ０ ｍＬ ７０％乙醇混合液的吸光度 Ｃ１；
平行测定 ３次，用其平均值按式（３）计算·ＤＰＰＨ 清
除率。
清除率 Ｄ＝［Ｃ０－（ Ｃ２－Ｃ１）］ ／ Ｃ０×１００％ （３）
１􀆰 ３􀆰 ６　 白芽奇兰茶多酚提取物对细胞的影响
１）白芽奇兰茶多酚提取物对 Ｌ９２９ 细胞生长的
影响　 ①样品的准备。 称取冻干后的样品 ０􀆰 １０ ｇ，
用 １０ ｍＬ 纯水完全溶解配成 １０ ｍｇ ／ ｍＬ 的母液，用
完全培养基稀释至 １ ｍｇ ／ ｍＬ，过滤除菌，４ ℃保存。
②ＭＴＳ法检测茶多酚对 Ｌ９２９ 细胞生长的影响。 收
集生长状态良好的 Ｌ９２９ 细胞［１２］，以 ３×１０３ ｃｅｌｌ ／孔、
８×６孔接种至 ９６孔板中，５％（体积分数）ＣＯ２、３７ ℃
孵育 ２４ ｈ 后加药，质量浓度分别是 ０、 １５􀆰 ６２５、
３１􀆰 ２５、６２􀆰 ５、１２５、２５０、５００和 １ ０００ μｇ ／ ｍＬ，０ μｇ ／ ｍＬ
的作为对照组，其他浓度的是处理组，不接种细胞
直接加药的是空白组。 加药 ２４ ｈ 后，每孔加入 ２０
μＬ ＭＴＳ（暗条件下操作），３７ ℃孵育 ２􀆰 ５ ｈ 后，酶标
仪测其 ４９０ ｎｍ 处的 ＯＤ 值，细胞存活率 ＝ （处理组
ＯＤ－空白组 ＯＤ） ／ （对照组 ＯＤ－空白组ＯＤ）×１００％。
２）白芽奇兰茶多酚提取物对 Ｌ９２９细胞抗 Ｈ２Ｏ２
氧化作用能力的测定　 收集生长状态良好的 Ｌ９２９
细胞，以 ３×１０３ 个 ／孔、８×６ 孔接种至 ９６ 孔板中，５％
ＣＯ２、３７ ℃孵育。 试验组 １培养 ２４ ｈ 后换完全培养
基，继续培养 ４ ｈ 后不换液，作为空白对照组；试验
组 ２培养 ２４ ｈ后换含 ３０ μｇ ／ ｍＬ白芽奇兰茶多酚的
完全培养基，继续培养 ４ ｈ后不换液，考察药剂对细
胞生长的影响；试验组 ３培养 ２４ ｈ后换含 ３０ μｇ ／ ｍＬ
白芽奇兰茶多酚和 ５０ μｍｏｌ ／ Ｌ Ｈ２Ｏ２的完全培养基，
继续培养 ４ｈ后换为完全培养基，考察掺入药剂后的
Ｈ２Ｏ２对细胞生长的影响；试验组 ４培养 ２４ ｈ后换含
５０ μｍｏｌ ／ Ｌ Ｈ２Ｏ２的完全培养基，继续培养 ４ ｈ 后换
为完全培养基，考察完全培养基对被损害细胞的修
复作用；试验组 ５培养 ２４ ｈ后换含 ５０ μｍｏｌ ／ Ｌ Ｈ２Ｏ２
的完全培养基，继续培养 ４ ｈ后换为含 ３０ μｇ ／ ｍＬ白
芽奇兰茶多酚的完全培养基，考察药剂是否能修复
细胞受到的损害；试验组 ６ 培养 ２４ ｈ 后换含 ５０
μｍｏｌ ／ Ｌ Ｈ２Ｏ２的完全培养基，继续培养 ４ ｈ 后不换
液，考察 Ｈ２Ｏ２对细胞的损害情况。 换药 ２４ ｈ 后取
出细胞培养板，直接加入ＭＴＳ，２０ μＬ ／孔，继续 ３７ ℃
孵育 ２􀆰 ５ ｈ，酶标仪测其 ４９０ ｎｍ 处的 ＯＤ值，细胞存
活率＝（处理组 ＯＤ－空白组 ＯＤ） ／ （对照组 ＯＤ－空白
组 ＯＤ）×１００％。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 单因素试验结果
２􀆰 １􀆰 １　 乙醇体积分数对提取率的影响结果
探究乙醇体积分数对白芽奇兰茶多酚提取率
０５ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷　
的影响，结果如图 １所示。 由图 １可知：随着乙醇体
积分数的升高，茶多酚的得率逐渐增大；当乙醇体
积分数为 ６０％时，茶多酚得率达最大，为 ９１􀆰 ２５
ｍｇ ／ ｇ；随着乙醇体积分数再升高，茶多酚得率反而
降低。 当乙醇体积分数为 ８０％时，茶多酚得为 ９０􀆰 ６
ｍｇ ／ ｇ，和 ６０％时的得率相差无几，这是因为茶多酚
是有机物，在水中的溶解度较小，且水中溶有 Ｏ２，易
使茶多酚氧化，用乙醇不仅溶解度增大，而且乙醇
中 Ｏ２溶解度很小，可以防止茶多酚被氧化。 综上所
述，确定白芽奇兰茶多酚提取的乙醇体积分数以
８０％为宜。
图 １　 乙醇体积分数对茶多酚提取率的影响
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｔｈａｎｏｌ ｖｏｌｕｍｅ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｔｅａ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ
２􀆰 １􀆰 ２　 液料比对提取率的影响结果
探究液料比对白芽奇兰茶多酚提取率的影响，
结果如图 ２所示。 由图 ２可知：整体而言，液料比小
于 ４０ ｍＬ ／ ｇ 时，随着液料比的增大，茶多酚得率增
大；在 ４０ ｍＬ ／ ｇ 时，茶多酚得率达最大，为 ７１􀆰 ９
ｍｇ ／ ｇ；液料比大于 ４０ ｍＬ ／ ｇ 时，随着液料比的增加，
茶多酚得率变化不大。 综上所述，提取白芽奇兰茶
多酚适宜的液料比是 ４０ ｍＬ ／ ｇ。
图 ２　 液料比对茶多酚提取率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄ⁃ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ
２􀆰 １􀆰 ３　 浸提时间对提取率的影响结果
探究浸提时间对白芽奇兰茶多酚提取率的影
响，结果如图 ３ 所示。 由图 ３ 可知：整体而言，浸提
时间小于 １５０ ｍｉｎ时，随着浸提时间的延长，茶多酚
得率增大；在 １５０ ｍｉｎ 时，茶多酚得率达最大，为
７９􀆰 ２８ ｍｇ ／ ｇ；浸提时间大于 １５０ ｍｉｎ 时，随着浸提时
间的延长，茶多酚得率呈现降低的趋势，也许是浸
提时间太长，茶多酚被氧化转变成其他物质，导致
一部分茶多酚丢失。 由此确定，提取白芽奇兰茶多
酚适宜的浸提时间是 １５０ ｍｉｎ。
图 ３　 浸提时间对茶多酚提取率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ
图 ４　 浸提温度对茶多酚提取率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｔｅａ
ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒａｔｅｓ
２􀆰 １􀆰 ４　 浸提温度对提取率的影响结果
探究浸提温度对白芽奇兰茶多酚提取率的影
响，结果如图 ４ 所示。 由图 ４ 可知：随着浸提温度
不断升高，茶多酚得率呈增大趋势；在 ８０ ℃时，茶
多酚得率达最大，为 ７１􀆰 ９ ｍｇ ／ ｇ；浸提温度超过 ８０
℃后，温度升高，茶多酚得率反而降低，可能是温
度升高使得部分茶多酚降解导致的。 由于 ７０ ℃
时茶多酚得率是 ７１􀆰 ６ ｍｇ ／ ｇ，与 ８０ ℃时的最大量
几乎一样，考虑到乙醇的沸点，同时本着节约能源
的原则，把 ７０ ℃作为提取白芽奇兰茶多酚适宜的
１５　 第 ４期 张秀芬等：白芽奇兰茶多酚的提取工艺及其抗氧化活性
浸提温度。
２􀆰 ２　 正交试验结果
根据单因素试验确定的范围，选择影响茶多酚
提取率的 ４ 个因素：浸提温度（Ａ）、乙醇浓度（Ｂ）、
浸提时间（Ｃ）、液料比（Ｄ），通过正交试验［１３］确定
醇提法浸提茶多酚最佳的工艺条件，各因素水平及
结果见表 １和表 ２。
表 １　 正交试验设计及结果
Ｔａｂｌｅ １　 Ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ
试验号
Ａ
浸提温
度 ／ ℃
Ｂ
φ（乙醇） ／
％
Ｃ
浸提时
间 ／ ｍｉｎ
Ｄ
液料比 ／
（ｍＬ·ｇ－１）
提取率 ／
（ｍｇ·ｇ－１）
１ ６５ ７０ １３５ ３５ ６５􀆰 ６２
２ ６５ ８０ １５０ ４０ ６０􀆰 ３８
３ ６５ ９０ １６５ ４５ ７４􀆰 １５
４ ７０ ７０ １５０ ４５ ７０􀆰 ５４
５ ７０ ８０ １６５ ３５ ６１􀆰 １１
６ ７０ ９０ １３５ ４０ ７２􀆰 ８０
７ ７５ ７０ １６５ ４０ ８１􀆰 ３３
８ ７５ ８０ １３５ ４５ ６７􀆰 ３３
９ ７５ ９０ １５０ ３５ ６５􀆰 １３
∑Ⅰ ６６􀆰 ７２ ７２􀆰 ５０ ６８􀆰 ５８ ６３􀆰 ９５
∑Ⅱ ６８􀆰 １５ ６２􀆰 ９４ ６５􀆰 ３５ ７１􀆰 ５０
∑Ⅲ ７１􀆰 ２６ ７０􀆰 ６９ ７２􀆰 ２０ ７０􀆰 ６７
表 ２　 正交试验误差分析
Ｔａｂｌｅ ２　 Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｖａｒｉａｎｃｅ
水平
Ａ
浸提温度 ／
℃
Ｂ
φ（乙醇） ／
％
Ｃ
浸提时间 ／
ｍｉｎ
Ｄ
液料比 ／
（ｍＬ·ｇ－１）
极差 Ｒ ４􀆰 ５５ ９􀆰 ５６ ６􀆰 ８５ ７􀆰 ５５
通过表 １ 和表 ２ 可以发现，影响提取效率 ４ 个
因素由大到小依次为 Ｂ、Ｄ、Ｃ、Ａ，最优提取工艺的水
平选定为 Ａ３Ｂ１Ｃ３Ｄ２，即白芽奇兰茶多酚提取率达最
大时浸提温度是 ７５ ℃，乙醇体积分数是 ７０％，浸提
时间是 １６５ ｍｉｎ，液料比是 ４０ ｍＬ ／ ｇ，此时提取率为
８１􀆰 ３３ ｍｇ ／ ｇ。
２􀆰 ３　 白芽奇兰茶多酚抗氧化活性
２􀆰 ３􀆰 １　 白芽奇兰茶多酚清除·ＯＨ实验结果
考察白芽奇兰茶多酚清除·ＯＨ 的效率，结果如
图 ５所示。 由图 ５ 可知：当白芽奇兰茶多酚的质量
浓度低于 ０􀆰 ４ ｍｇ ／ ｍＬ 时不能清除·ＯＨ，从 ０􀆰 ４
ｍｇ ／ ｍＬ开始，随着茶多酚浓度的增加，·ＯＨ 的清除
率增大，且具有一定的剂量依赖性。
图 ５　 白芽奇兰茶多酚对·ＯＨ清除率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ·ＯＨ
ｒａｄｉｃａｌ⁃ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
２􀆰 ３􀆰 ２　 白芽奇兰茶多酚清除·Ｏ－２实验结果
考察白芽奇兰茶多酚清除·Ｏ－２的效率，结果见
图 ６。 由图 ６可知：当白芽奇兰茶多酚浓度很低时，
白芽奇兰茶多酚不能清除·Ｏ－２，随着浓度的升高，清
除·Ｏ－２的效率骤然增大，质量浓度大于 ２ ｍｇ ／ ｍＬ时，
清除率增长幅度减小。
图 ６　 白芽奇兰茶多酚对·Ｏ－２清除率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ６　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｏｎ·Ｏ－２
ｒａｄｉｃａｌ⁃ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
２􀆰 ３􀆰 ３　 白芽奇兰茶多酚清除·ＤＰＰＨ实验结果
考察白芽奇兰茶多酚清除·ＤＰＰＨ的效率，结果
如图 ７ 所示。 由图 ７ 可知：白芽奇兰茶多酚对
·ＤＰＰＨ的清除率随着浓度的升高而逐渐增大，当质
量浓度为 ０􀆰 ４ ｍｇ ／ ｍＬ 时， 清除率最大， 达到
９５􀆰 ２５％。 但当浓度继续升高时，清除率反而降低。
２􀆰 ４　 白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９细胞的影响
２􀆰 ４􀆰 １　 白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９ 细胞正常生长的
影响
考察白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９细胞的影响，结果
２５ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷　
图 ７　 白芽奇兰茶多酚对·ＤＰＰＨ清除率的影响
Ｆｉｇ􀆰 ７　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｏｎ·ＤＰＰＨ
ｒａｄｉｃａｌ⁃ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
图８　 白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９细胞正常生长的影响
Ｆｉｇ􀆰 ８　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｏｎ ｔｈｅ
ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ｌ９２９
见图 ８和图 ９。 由图 ８ 可知：白芽奇兰茶多酚质量
浓度在 １５和 ３０ μｇ ／ ｍＬ时，细胞存活率分别为 ９９％
和 １０２％，和空白组的相差无几，可见低浓度白芽奇
兰茶多酚对 Ｌ９２９ 细胞的生长没有影响；在 ６０
μｇ ／ ｍＬ时细胞存活率为 ８０％，开始对细胞生长产生
一定的抑制作用，当质量浓度大于 ６０ μｇ ／ ｍＬ，随着
浓度增大，Ｌ９２９ 细胞的存活率骤然降低，可见高浓
度白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９ 细胞的生长具有严重的
图 ９　 白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９的影响
Ｆｉｇ􀆰 ９　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｏｎ Ｌ９２９
抑制作用。 从图 ９ 也可以看出：空白对照组细胞贴
壁良好，细胞边缘光滑清晰，低浓度（≤６０ μｇ ／ ｍＬ）
时细胞密度和形态都与空白组无明显差异，高浓度
（≥１２５ μｇ ／ ｍＬ）时细胞密度降低，形态变圆，呈现凋
亡状态。 从图 ８和图 ９ 共同得出，白芽奇兰茶多酚
低浓度时对 Ｌ９２９细胞的生长无影响，高浓度时具有
严重的抑制作用。
２􀆰 ４􀆰 ２　 白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９ 细胞抗 Ｈ２Ｏ２氧化
作用的能力
考察白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９细胞抗 Ｈ２Ｏ２氧化
作用能力的影响，结果如图 １０所示。
ＤＭＥＭ—完全培养基；ＢＴＰ—含白芽奇兰茶多酚的培养基
图 １０　 白芽奇兰茶多酚对 Ｌ９２９细胞抗 Ｈ２Ｏ２
氧化作用的影响
Ｆｉｇ􀆰 １０　 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｅａ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｏｎ Ｈ２Ｏ２
ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
由图 １０ 可知：与对照组（组 １）相比，处理组 ２
中 ３０ μｇ ／ ｍＬ 的白芽奇兰茶多酚作用于 Ｌ９２９ 细胞
时，细胞存活率达 １０６％，与 ２􀆰 ４􀆰 １中的数据一致，对
Ｌ９２９细胞的生长无影响；处理组 ６ 中 Ｈ２Ｏ２作用于
３５　 第 ４期 张秀芬等：白芽奇兰茶多酚的提取工艺及其抗氧化活性
Ｌ９２９细胞时，细胞存活率接近 ０，说明 Ｈ２Ｏ２会抑制
Ｌ９２９细胞的生长；处理组 ４中细胞存活率为 ３􀆰 ８％，
说明完全培养基不能修复 Ｈ２Ｏ２对 Ｌ９２９细胞造成的
损伤；处理 ５中细胞存活率为 １􀆰 ９％，说明 ３０ μｇ ／ ｍＬ
的白芽奇兰茶多酚不能修复 Ｈ２Ｏ２对 Ｌ９２９细胞造成
的损伤；处理组 ３ 中细胞存活率为 ４１􀆰 ８％，说明 ３０
μｇ ／ ｍＬ的白芽奇兰茶多酚能够预防 Ｈ２Ｏ２对 Ｌ９２９细
胞造成损伤。 总之，白芽奇兰茶多酚能够预防 Ｈ２Ｏ２
对 Ｌ９２９细胞的损害，却不能修复 Ｈ２Ｏ２对 Ｌ９２９细胞
造成的损害。
３　 结论
利用正交试验法获得醇提法提取白芽奇兰茶
多酚适宜的工艺条件：当乙醇体积分数为 ７０％，液
料比为 ４０ ｍＬ ／ ｇ，浸提时间是 １６５ ｍｉｎ，浸提温度是
７５ ℃时，白芽奇兰茶多酚提取率达到最高，为 ８１􀆰 ３３
ｍｇ ／ ｇ。 通过测定白芽奇兰茶多酚清除·ＯＨ、·Ｏ－２和
·ＤＰＰＨ的能力评价其抗氧化活性，结果发现：白芽
奇兰茶多酚具有较强的抗氧化能力，是有效的自由
基清除剂。 通过测定细胞存活率，得出 ３０ μｇ ／ ｍＬ
的白芽奇兰茶多酚不影响 Ｌ９２９细胞的生长，且可以
预防 Ｈ２Ｏ２对 Ｌ９２９细胞的损害。
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（责任编辑　 荀志金）
４５ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １４卷