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ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｈｙｄｒａｔｉｏｎｏｆ３（４ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｇｌｕｔａｒｏｎｉｔｒｉｌｅ
ＬＩＱｉａｎ，ＲＥＮＪｉｅ，ＦＥＮＧＪｉｎｈｕｉ，ＷＵＱｉａｑｉｎｇ，ＺＨＵＤｕｎｍｉｎｇ
（ＮａｔｉｏｎａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＥｎｚｙｍｅｓ，ＴｉａｎｊｉｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＩｎｄｕｓｔｒｉａｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３０８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅ（ＮＨａｓｅ）ｉｓｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓｏｆｎｉｔｒｉｌｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．ＧｅｎｏｍｅＭｉｎｉｎｇｗａｓｕｔｉｌｉｚｅｄ
ｔｏａｃｑｕｉｒｅｔｈｅＮｈａｓｅｇｅｎｅ（ｈｓｎ１）ｆｒｏｍＨｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｕｍｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅＳｍＲ１．Ｔｈｅｐｌａｓｍｉｄｈｓｎ１／ｐＥＴＤｕｅｔ１ｗａｓ
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥ．ｃｏｌｉＢＬ２１．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｎｚｙｍｅ（ＨＳＮ１）ｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓａｃｏｂａｌｔ
ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｔｙｐｅＮＨａｓｅ．ＴｈｅｓｕｂｓｔｒａｔｅｐｒｏｆｉｌｅｏｆＨＳＮ１ｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｔｈｅｗｈｏｌｅｃｅｌｒｅａｃｔｉｏｎｓ．ＨＳＮ１ｓｈｏｗｅｄ
ｔｈｅｅｘｃｅｌｅｎｔｒｅｇｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙａｎｄ ｔｈｅｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｆｏｒｔｈｅｈｙｄｒａｔｉｏｎ ｏｆ３（４ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）
ｇｌｕｔａｒｏｎｉｔｒｉｌｅ．Ｔｈｅ３（４ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）４ｃｙａｎｏｂｕｔｙｒａｍｉｄｅｃｏｕｌｄｂｅｇｉｖｅｎ，ｔｈｕｓｉｔｃｏｕｌｄｂｅｃｏｎｖｅｒｔｅｄｔｏ
ｂａｃｌｏｆｅｎｂｙｏｎｅｓｔｅｐｃｈｅｍｉｃａｌｒｅａｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：３（４ｃｈｌｏｒｏｐｈｅｎｙｌ）４ｃｙａｎｏｂｕｔｙｒａｍｉｄｅ；ｈｙｄｒａｔｉｏｎ；ｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅ
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（ｓ，２Ｈ），３５８～３５４（ｍ，１Ｈ），２８３～２７２（ｍ，３Ｈ），
２６５～２６１（ｍ，１Ｈ）。１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，６００ＭＨｚ），δ
（１０－６）：１７１６８（ＣＯ），１３９１３（Ｃ′６），１３３７６（Ｃ′
１），１２９２６（Ｃ′２，Ｃ′４），１２８４６（Ｃ′３，Ｃ′５），
１１７８８（ＣＮ），３９８２（Ｃ ４），３７２５（Ｃ ３），２４０４
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［１］ ＨｏｕｒａｉＳ，ＭｉｋｉＭ，ＴａｋａｓｈｉｍａＹ，ｅｔａｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｎｉｔｒｉｌｅ
ｈｙｄｒａｔａｓｅｆｒｏｍａｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｉｃＢａｃｉｌｕｓｓｍｉｔｈｉｑ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ
ＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓｅＣｏｍｍｕｎ，２００３，３１２：３４０３４５．
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［２］ ＮａｇａｓｈｉｍａＳ，ＮａｋａｓａｋｏＭ，ＤｏｈｍａｅＮ，ｅｔａｌ．Ｎｏｖｅｌｎｏｎｈｅｉｎｅｉｒｏｎ
ｃｅｎｔｅｒｏｆｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅｗｉｔｈａｃｌａｗｓｅｔｉｎｇｏｆｏｘｙｇｅｎａｔｏｍｓ
［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，ｌ９９８，５：３４７３５１．
［３］ ＢｉｓｈｏｐＡＯＴ，ＳｅｗｅｌＴ．Ａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｔｏｐｏｓｓｉｂｌｅｓｕｂｓｔｒａｔｅ
ｂｉｎｄｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｆｏｒｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ
ＲｅｓＣｏｍｍｕｎｉ，２００６，３４３：３１９３２５．
［４］ ＮｏｊｉｒｉａＭ，ＮａｋａｙａｍａｃＨ，ＯｄａｋａＭ，ｅｔａｌ．Ｃｏｂａｌｔｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄｆｅ
ｔｙｐｅｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅｏｆＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．Ｎ７７１［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔ，
２０００，４６５：１７３１７７．
［５］
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［Ｊ］．
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，１９９１，３１（２）：１１５１２１．
［６］ ＫｏｂａｙａｓｈｉＭ，ＨｉｄｅｎｏｂｕＫ，ＳａｋａｙｕＳ，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎａｎｄ
ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｏｆＩＳ１１６４ｔｈａｔｅｘｉｓｔｓｉｎｔｈｅｈｉｇｈｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓ
ｎｉｔｒｉｌｅ ｈｙｄｒａｔａｓｅ ｇｅｎｅ ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆｔｈｅ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｍｉｃｒｏｂｅ
ＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｒｈｏｄｏｃｈｒｏｕｓＪ１［Ｊ］．ＰｒｏｃＪｐｎＡｃａｄＢ：ＰｈｙｓＢｉｏｌＳｃｉ，
１９９７，７３（６）：１０４１０８．
［７］
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．
X×@|%Ï9RÇwXxÔ235
［Ｊ］．
,&)+ÖC
，２０１１，３１（９）：１１７１２３．
［８］ ＰｒａｓａｄＳ，ＢｈａｌａＴＣ．Ｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅｓ（ＮＨａｓｅｓ）：ａｔｔｈｅ
ｉｎｔｅｒｆａｃｅｏｆａｃａｄｅｍｉａａｎｄｉｎｄｕｓｔｒｙ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＡｄｖ，２０１０，２８：
７２５７４１．
［９］ Ｗａｎｇ Ｍｅｉｘｉａｎｇ， Ｌｉｕ Ｃｈｕｓｈｅｎｇ， Ｌｉ Ｊｉｓｈｅｎｇ． Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ
ｄｅｓｙｍｍｅｔｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ３ａｌｋｙｌａｎｄ３ａｒｙｌｇｌｕｔａｒｏｎｉｔｒｉｌｅｓ，ａｓｉｍｐｌｅ
ａｎｄ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｏｐｔｉｃａｌｙ ａｃｔｉｖｅ ４ａｍｉｎｏ３
ｐｈｅｎｙｌｂｕｔａｎｏｉｃａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ，２００１，１２：
３３６７３３７３．
［１０］ ＷａｎｇＭｅｉｘｉａｎｇ．Ｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｏｆｎｉｔｒｉｌｅｓｉｎ
ｏｒｇａｎｉｃｓｙｎｔｈｅｓｉｓ［Ｊ］．ＴｏｐＣａｔａｌ，２００５，３５：１２．
［１１］ ＳｏｎｇＬｉｙａ，ＹｕａｎＨｏｎｇｊｉｅ，ＬｅｅＣｏｆｅｙ，ｅｔａｌ．Ｅｆｉｃｉｅｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎ
Ｅ．ｃｏｌｉｏｆａｎｅｎａｎｔｉｏｓｅｌｅｃｔｉｖｅｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅｆｒｏｍＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓ
ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＬｅｔ，２００８，３０：７５５７６２．
［１２］ ＫｅｎｔＷＪ，ＨｓｕＦ，ＫａｒｏｌｃｈｉｋＤ，ｅｔａｌ．Ｅｘｐｌｏｒｉｎｇｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓａｎｄ
ｍｉｎｉｎｇｄａｔａｗｉｔｈｔｈｅＵＣＳＣｇｅｎｅｓｏｒｔｅｒ［Ｊ］．ＧｅｎｏｍｅＲｅｓ，２００５，
１５：７３７７４１．
［１３］ ＬｉＭｉｃｈａｅｌＨＴ，ＵｎｇＰｅｔｅｒＭＵ，ＺａｊｋｏｗｓｋｉＪ，ｅｔａｌ．Ａｕｔｏｍａｔｅｄ
ｇｅｎｏｍｅｍｉｎｉｎｇｆｏｒｎａｔｕｒａｌｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．ＢＭＣＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，
２００９，１０：ｄｏｉ．１０．１１８６／１４７１２１０５１０１８５．
［１４］ ＰｅｄｒｏｓａＦＯ，ＭｏｎｔｅｉｒｏｌＲ Ａ，Ｗａｓｓｅｍ Ｒ，ｅｔａｌ．Ｇｅｎｏｍｅｏｆ
ＨｅｒｂａｓｐｉｒｉｌｕｍｓｅｒｏｐｅｄｉｃａｅｓｔｒａｉｎＳｍＲ１，ａｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄｄｉａｚｏｔｒｏｐｈｉｃ
ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｏｆｔｒｏｐｉｃａｌｇｒａｓｓｅｓ［Ｊ］．ＰｌｏｓＧｅｎｅｔ，７（５）：ｅ１００２０６４．
ｄｏｉ：１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｇｅｎ．１００２０６４．
［１５］ ＭｉｙａｎａｇａＡ，ＦｕｓｈｉｎｏｂｕＳ，ＩｔｏＫ，ｅｔａｌ．Ｃｒｙｓｔａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｃｏｂａｌｔ
ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，
２００１，２８８：１１６９１１７４．
［１６］ ＢｒａｄｙＤ，ＢｅｅｔｏｎＡ，ＺｅｅｖａａｒｔＪ，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎｏｆｎｉｔｒｉｌａｓｅ
ａｎｄｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅｂｉｏｃａｔａｌｙｔｉｃｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００４，６４：７６８５．
［１７］ ＫｕｂáＤ，ＫａｐｌａｎＯ，ＥｌｉáｋｏｖáＶ，ｅｔａｌ．Ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆ
ｎｉｔｒｉｌｅｓｔｏａｍｉｄｅｓｕｓｉｎｇｓｏｌｕｂｌｅａｎｄｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｎｉｔｒｉｌｅｈｙｄｒａｔａｓｅ
ｆｒｏｍＲｈｏｄｏｃｏｃｃｕｓｅｒｙｔｈｒｏｐｏｌｉｓＡ４［Ｊ］．ＪＭｏｌＣａｔａｌＢ：Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，
２００８，５０：１０７１１３．
［１８］ ＳｈｉＹｕｅ，ＹｕＨｕｉｍｉｎ，ＳｕｎＸｕｄｏｎｇ，ｅｔａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇｏｆｔｈｅｎｉｔｒｉｌｅ
ｈｙｄｒａｔａｓｅｇｅｎｅｆｒｏｍＮｏｃａｒｄｉａｓｐ．ｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉａｎｄＰｉｃｈｉａ
ｐａｓｔｏｒｉｓａｎｄ ｉｔｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｓｉｔｅｄｉｒｅｃｔｅｄ
ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．ＥｎｚｙｍｅＭｉｃｒｏｂＴｅｃｈｎｏｌ，２００４，３５：５５７５６２．
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