全 文 ：!１０
"!
１
#
２０１２
$
１
%
€
　
m
　

　
4
　
¿
　
À
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．１０Ｎｏ．１
Ｊａｎ．２０１２
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３６７８．２０１２．０１．００６
OPQI
：２０１１－０７－１５
K½¾!
：
u¦JÐÖMQ§¨LcT
（３１１７１６４３）
RS.T
：
QRY
（１９８７—），
®
，
ãjÍSÉ
，
±¡³´€
，
³´ÍÎ
：
€m-Mšh4À
；
uDT
（
³øÉ
），
ËÌ
，Ｅｍａｉｌ：ｈｚｚｑｚ＠ｓｄｕ．ｅｄｕ．ｃｎ；
U
V
（
³øÉ
），
ʳ´‘
，Ｅｍａｉｌ：ｃｈａｏｙｐ＠ｓｕｎ．ｉｍ．ａｃ．ｃｎ
N9 α \]^_`ÄKabc®dŽ‰
XYbcCü(çg‰n¯
Ž
１，
‘’“
２，
”
　
•
２，
–—˜
１，
™š›
２，
,œ
２
（１．
žŸK5 ¡¢£ ¡¤56
，
 ¡
２６４２０９；２．
hi356 ¥9:lm¦
，
§¨
１００１０１）
7
　
h
：
Ÿ ¡ù
Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ６０２ １
³α ¢£¤¥¦1¼§¨©（αＣＧＴ）¼¸（ｃｇｔ）ª«èßç¬ÂＰＱＥ３０Î，­
®•ÐI¯
ＰＱＥ３０／ｃｇｔ，
/Ƨ¬°±
Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５^ ，
Úè•Ð€
Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）。
¶
ＩＰＴＧ
³|Œæ
Úè©ßç³à²´µ
：ＴＢ
³´¼
，０．０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ，
|Œeý
１６℃，
µ¶©Ê÷6àŠXç
５２０９Ｕ／ｍＬ；
·«
ＩＰＴＧ２４ｈ^ ，¸
·¹º!w¹»Á¼½¾©¿µyÄÀ
。
©Á.;|Œß糲´µË¶
ＴＢ
³´¼Î¸·Ã
1
３０ｇ／Ｌ，
¥¦1
１２ｇ／Ｌ，１６℃
³´
９６ｈ，
©Ê÷6çè
８６３５Ｕ／ｍＬ，
yBŠù
ＩＰＴＧ
|Œ³dÞ
。
YZ
ＳＤＳ
ＰＡＧＥ
»Än¾ÅÝÆ
。
©Ç¬§¬º»ßy
：
•Ð©§¬IJÄÅË
１％
XÈÉÊ
２４ｈ^ ，α ¢£¤（αＣＤ）§
¬ÇXç
３８２％，αwβ³Ë©ÃÊÌË３４∶１，αＣＤDEôŠ³ÍSì，¸ ÎϕÐαＣＧＴ©DEôõ³ä¬
¨¦ÐÑ
。
ijk
：α ¢£¤¥¦1¼§¨©；ＰＱＥ３０；ßç7«¬
lmnop
：Ｑ８１２；Ｑ８１５　　　　
6qrst
：Ａ　　　　
6u;p
：１６７２－３６７８（２０１２）０１－００３０－０７
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔαｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ
ａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎａｌｙｓｉｓ
ＳＯＮＧＢｉｎｇｈｏｎｇ１，ＸＵＥＺｈｉｑｕａｎ２，ＺＨＯＮＧＪｉａｎ２，ＺＨＵＱｉｚｈｏｎｇ１，ＣＨＡＯＹａｐｅｎｇ２，ＱＩＡＮＳｈｉｊｕｎ２
（１．ＭａｒｉｎｅＣｏｌｅｇｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙａｔＷｅｉｈａｉ，Ｗｅｉｈａｉ２６４２０９，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｇｅｎｅｏｆαｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ（αＣＧＴａｓｅ）ｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｂｙｃｏｌｏｎｙＰＣＲｆｒｏｍ
Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ６０２１ｔｏｉｎｓｅｒｔｉｎｔｏｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒＰＱＥ３０，ａｎｄｔｈｅｎｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｓｔｒａｉｎ
Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）．ＴｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆαＣＧＴａｓｅｂｙｔｈｅＩＰＴＧｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｗｅｒｅａｓｆｏｌｏｗｓ：ＴＢｍｅｄｉｕｍ，０．０１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ，１６℃，ｗｉｔｈｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ５２０９Ｕ／ｍＬｃｕｌｔｕｒｅ．Ｉｎ
ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｇｌｙｃｉｎｅａｎｄｍａｎｎｉｔｏｌｗｅｒｅｆｏｕｎｄｔｏｂｅａｂｌｅｔｏｈｅｌｐｓｅｃｒｅｔｉｏｎｏｆｔｈｅαＣＧＴａｓｅ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎ
ａｎｏｐｔｉｍｉｚｅｄａｕｔｏｉｎｄｕｃｉｎｇｍｅｄｉｕｍ，ｉｎｗｈｉｃｈＴＢｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ１２ｇ／Ｌｇｌｕｃｏｓｅａｎｄ３０ｇ／Ｌｌａｃ
ｔｏｓｅ，ａｃｈｉｅｖｅｄ８６３５Ｕ／ｍＬ．ＴｈｅｅｎｚｙｍｅｃａｔａｌｙｔｉｃｔｅｓｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｙｉｅｌｄｏｆαＣＤｒｅａｃｈｅｄ
３８２％ ａｆｔｅｒ２４ｈｉｎｃｕｂａｔｉｏｎｗｉｔｈａｎα∶βｒａｔｉｏｏｆ３４∶１．Ｔｈｕｓ，ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔαＣＧＴａｓｅｓｈｏｗｅｄｂｅｔ
ｔｅｒｉｎｄｕｓｔｒｉａｌｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｉｎｔｈｅαＣＤｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：αｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ；Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）；ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ
　　
abcdeDQfgh
（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，
Wž
ＣＧＴ，ＥＣ２．４．１．１９）
Õα ñ°h¦
Xr`¼Eo‘
［１］。ＣＧＴ
hY-ñ°€úabc
（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ，
Wž
ＣＤｓ），
ÛIdeDiQE?T
Yabcpí αＣＤ（６ô）、βＣＤ（７ô）、γＣＤ
（８
ô
）
Zó€úQxaEp­
［２］，
(
ＣＧＴ
h:ÛI
€ú^mEù¼øsâpí αＣＧＴh、βＣＧＴh、
γＣＧＴh［３］。
VÜabcp­ûöÑ[çŠæçErÜ]þ²/|
，
â÷š[C^²p­ùúJŽm
，
Õ
(TX^²p­Eé-;’
［４］，
R"“Ò¦4
l
［５－６］、
îÒ4l
［７］、
-_¦4l
［８］
þ»%öÙÚ
EPv
。
{"6Š
，
abc“€mUB
、
pq-M
、
yl
、
æçèé6`a4lrˆö:ÙÚE
*P
［９］。
4l|€^abcÒPE
ＣＧＴ
hˆ$JÜb
îcZ×
，
(@Ü αＣＤE¹ºod*P$hÜ-øbîcZ
（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｕｓｍａｃｅｒａｎｓ）
E
ＣＧＴ
h
［１０］。
(@
ＣＧＴ
hQREijòC*P
ｐＥＴ
ø,
Eije²
［１１］。ＰＱＥ３０
Õo¬=Ñije²
，
×Ü
ＰＤＳ
’è¦X
［１２］，
Õ?fg’è
，
ûöÃ:,-E
Dã­ ÅÝ]Zm
：
$JhZ²E
Ｔ５
D㭁
２
ôiDÅÝ­jÇBp
，¸
ï6iDD¹­E/Ž
Õ(D¹
Ｔ５
Dã­Eij
；
ð(öŠEfâ¼
­â÷öŸàtQfrExkÂI©ï‡ij
’èELµ;
。
@AFP=Ñije²
ＰＱＥ３０
@ab
ＣＧＴ
h
EQR½ñ]Ÿij©,-ijkl
，
÷#íab
cExáZ€^ŒµQW
，
Õ(í7“Ò¦
、
yl
6-_¦þñlEÙÚ*P2Gl1
。
１　
vw%xy
１．１　
€vw
１．１．１　
Z_š’è
Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ６０２ １
8ruÖMNµ€m³´Ò
p±©ï+
；
’è
ｐＥＡＳＹＴ１Ｓｉｍｐｌｅ，
ím§
（
’k
）
vw
；
’è
ＰＱＥ３０，Ｑｉａｇｅｎ
vw
；Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５、Ｅ．ｃｏｌｉ
ＤＨ５α，åmÞÖU‡¾ö“vw。
１．１．２　
ù¼2 
“¹;ÑＢａｍＨＩ、ＰｓｔＩ、ＤＮＡｌｉｇａｔｉｏｎｋｉｔｖｅｒ
２．０、ｄＮＴＰ、ＬＡＴａｑ
h
，ＴａＫａＲａ（
x(
）
vw
；^
‹ö
{Dn§Ÿa2 o
，
ÙLj±€mÖUö“v
w
；１ｋｂＬａｄｄｅｒ、
’è£22 o
，
’kå4p‹Ö
Uö“vw
；
ºqQ β Ｄ rtst÷iDè
（ＩＰＴＧ），ＡＭＥＲＳＣＯ
vw
；
âË;ñ°
，
¿ÅuPñ
°™
；
v‘Aøˆœ23m
，Ｏｘｏｉｄ（
vu
）
vw
；
7
M2 ˆípq‰
。
１．１．３　
cåQ
ＬＢ
cåQ
（ｇ／Ｌ）：
‘Aø
１０，
ˆœ23m
５，
ＮａＣｌ５。
`S
Ｅ．ｃｏｌｉ
E[BcåQí
ＴＢ
cåQ
（ｇ／Ｌ）：
‘Aø
１２，
ˆœ23m
２４；¯
¼
４ｍＬ。
ＳＯＢ
cåQ
（１Ｌ）：
‘Aø
２０ｇ，
ˆœ23m
５ｇ，
ＮａＣｌ０５ｇ；１ｍｏｌ／ＬＫＣｌ２５ｍＬ，１ｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２
１０ｍＬ。
ＳＯＣ
cåQ
：
“
ＳＯＢ
cåQrÊçZVE
１ｍｏｌ／Ｌ
deD
２０ｍＬ。
Ｍ９
de wm§cåQ
：
>çDE
［１３］
—î¹
５×Ｍ９
cåQ
（ｇ／Ｌ），
»
ＮＨ４Ｃｌ５、Ｎａ２ＨＰＯ４３０、
ＫＨ２ＰＯ４１５、ＮａＣｌ２５，ÍP&P‚ZçY]£cå
Qõö
１
ï
，
þ7rÊ÷À‚Z˕
１ｍＬ（１ｍｏｌ／Ｌ
ＭｇＣｌ２、１０ｍＬ’™p?í２０％EdeD）。
J[BcåQí“
ＴＢ
cåQQW|Êde
DiDV¹<
。
１．２　
€xy
１．２．１　ＰＣＲ
xžTEÔ÷
Õ
ＮＣＢＩ
?I-rÈyZ_
Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｕｓｍａｃｅｒ
ａｎｓ（ＧｅｎＢａｎｋＡｃｃｅｓｓｉｏｎＡＦ０４７３６３１）
abαＣＧＴh
QRE^è‹Bp
，
í
２１４５ｂｐ，
©ÛI"÷QRB
p÷
Ｐｒｉｍｅｒ５０
\l452m
：
|z2m
Ｆ
í
ＣＧＣＧＧＡＴＣＣＴＣＡＣＣＣＧＡＴＡＣＧＡＧＣＧＴＧＧ（
«ØLp
í
ＢａｍＨＩ
h<{v
）；
Àz2m
Ｒ
í
ＡＡＡＡＣＴＧＣＡ
ＧＴＴＡＡＴＴＴＴＧＣＣＡＧＴＣＣＡＣＣＧ（
«ØLpí
ＰｓｔＩ
h
<{v
），
8’k|րmUBö“vwŽú
。
Y
Ｂａｃｉｌｕｓｓｐ６０２１
Z_½ñ•²cå
，
Z$
ＰＣＲ
xž
TEÔ÷
，
ÞDã
ＰＣＲ
xžkl
：９５℃
tX;
５ｍｉｎ；
ƽñ
３０
ôìa
（９４℃ １ｍｉｎ，５６℃ ４５ｓ，
７２℃ ２ｍｉｎ）；７２℃
I}
１０ｍｉｎ。
^m_
１％
ö{D
n§—~²˜
。
¶VYTEQRÊ¿€e²
ｐＥＡＳＹＴ１Ｓｉｍｐｌｅ
r
。
１．２．２　
ije²
ＰＱＥ３０／ｃｇｔ
E|}
ＰＣＲ
^m6’è
ＰＱＥ３０
ˆP
ＢａｍＨＩ

ＰｓｔＩ
&
h<
，
Y‰-VE
ｃｇｔ
QRš
ＰＱＥ３０
e²Ü
１６℃
(
R
，
Y(RVE`S’èf-¿x‚cZ
Ｍ１５
ƒ7
N<=r
。
PZ$
ＰＣＲ
\Ví;€
，
23’è
，
Æ
Y`S’è&h，
˜B3‡`S&½
。
１３　
!
１
# QRYþ
：`
Sα abcdeDQfghijklE,-67^mno;Epq
１．２．３　
`S‘AαＣＧＴh:E˜µ
ＰＱＥ３０
í=Ñije²
，
“[Bcå/„V
，
ab
１ｍＬ
c啽ñ<=
，
±šab|¢ìí¥h
•
。
™p?í
０２５％
EâË;ñ°Ë•
，
…
†
。
3
０４ｍＬ
Ü
４０℃
ßÝçàr
１５ｍｉｎ，
ÎÚ2
ÚrÊ
０１ｍＬ
h•
，
@çS“h6&—Ê
０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ
˕
１５ｍＬ，
ê
，
ÈÜ
４０℃
ßÝ
çà
１０ｍｉｎ。
C3Sç
０１ｍｏｌ／ＬＨＣｌ
˕
１５
ｍＬ，
ÆÊ
３ｍＬ０１ｍｏｌ／ＬＩ２•6５ｍＬ•ôç，
ê
，
ֆ
７００ｎｍ
蘵
。
“|ÜklÀ
，
Yþp
à·?
１０％
yŒÁ҇Eh™µ‡í
１
ôh:
Šã{
。
àÀm5áh:
：
h:ã{
＝（Ａ－Ａ１）／Ａ×１００×h•õöï?
mr
：Ａ
í@çSEyŒÁ
；Ａ１íC3SEyŒÁ。
１．２．４　
Z²£E˜µ
Z²£PpŒŒ5Ü
６００ｎｍ
˜µ
，
©P
ＯＤ６００ir。
１．２．５　
4ÀZ
ＥｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
E\V6
cå
¬­cå
：
՘–|(3ãZ$
，
RÊùö
５ｍＬＬＢ
cåQE2Úr½ñ¿ˆcå
，
fí
２２０
ｒ／ｍｉｎ，
cåݍí
３７℃。
[Bcå
：
Y¿ˆcå%EZ_à
１％
ERª
fR¿õ
５ｍＬＴＢ
‡ˆcåQE2Úr
，
ÎZ•
ＯＤ６００í０６～０８ë，Y2ÚÈÜþ|１０ｍｉｎ45，
Ê⣍í
００１ｍｍｏｌ／Ｌ
E
ＩＰＴＧ
V÷Y7fó
１６℃
ýÎr½ñ?Ý[Bcå
，９６ｈ
V˜µh:
。
１．２．６　ＳＤＳＰＡＧＥ
pq
Åì>çDE
［１４］。
7rp±§’™p?í
１２％，
£¤§’™p?í
５％，
÷
０１％
%Šh)ƒ
Ｒ ２５０
‰^
。
１２７　
f-^mE
ＨＰＬＣ
pq
™p?í
１％
Eñ°Ë•
，
ޅ†
，
÷
４００Ｕ／ｇ
E™Ê¥h•
，４０℃
f-
２４ｈ。
@2«½
ñèé
、
…†
、
±š3|¢
。
P<ûG¿ûV
，
P
ＨＰＬＣ
½ ñ ² ˜
，
7 r ^ ¯ ¬ í
ＨｙｐｅｒｓｉｌＮＨ２
（２５０ｍｍ×４６ｍｍ×５μＬ）、 ãòí Ｖ（ƒŠ）∶
Ｖ（
ç
）＝７３∶２７、
 í
１０ｍＬ／ｍｉｎ、
²˜B;í
２１０ｎｍ、
¬Ýí
４０℃、
½«™í
２０ｕＬ。
２　
‚ƒ%„)
２．１　
`e@
Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
‰f˜
Ö
１
íQR€ijVEö{Dn§—~Ö
。
_Z$
ＰＣＲ
ｃｇｔ，
ÆÖ
１（ａ）
Òr
；
Y7
Ê¿€e²
ｐＥＡＳＹＴ１Ｓｉｍｐｌｅ
r
，
/æÆÖ
１（ｂ）
Òr
。
Y`S€e²½ñ˜B
，
x¿
Ｂｌａｓｔ
pq‡
Â
：ＧｅｎＢａｎｋ
rEαＣＧＴａｓｅBpö２ô{v‡€ï
X
，
í
Ｇ１８４９Ａ

Ｇ２１１０Ａ；
!Bpab
６８７
ô¢Q
‹
，
7rö
２
ô¢Q‹ö[º
，
í
Ｖ５９０Ｍ

Ｇ６７７Ｓ。
Y&hＰＱＥ３０
½ñ(R
，
|
}
ＰＱＥ３０／ｃｇｔ`
S’è
，
ÆÖ
１（ｃ）
Òr
。
１—ＰＣＲ
xž^m
ｃｇｔ；２—ｐＥＡＳＹＴ１Ｓｉｍｐｌｅ／ｃｇｔ
&h；
３—ｐＥＡＳＹＴ１Ｓｉｍｐｌｅ
’è
；４—ＰＱＥ３０／ｃｇｔ
&h；
５—ＰＱＥ３０／ｃｇｔ
’è
；Ｍ—ＤＮＡ
ò@p­’™rs
m
１　
N9ýgEchb
ＰＣＲ
ó‹‰ijm
Ｆｉｇ．１　ＤｏｕｂｌｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄ
Ö
２
íije²
ＰＱＥ３０／ｃｇｔ
EÖ¯
，`
Se²
EÔ÷J;:í
５５×１０３ｂｐ。
Y`S’èf-
¿x‚cZ
Ｍ１５
ƒ7N<=r
，
<¿ijZ_
ＥｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）。
m
２　
N9®dk¤
ＰＱＥ３０／ｃｇｔ
‰m’
Ｆｉｇ．２　ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｌａｓｍｉｄＰＱＥ３０／ｃｇｔ
２．２　
N9 αＣＧＴcÕ Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
¤llcf®dŽ‰XY
２．２．１　
cåQ@`SαＣＧＴhijEF)
pÇVP
ＬＢ、ＴＢ、ＳＯＣ、ＳＯＢ、Ｍ９
Ä
５
¬‡ˆc
åQ½ñÃ:pq
，
ÆÖ
３
Òr
。
8Ö
３
âï
：
“
ＴＢ
cåQr
，１６℃
cå
９６ｈ
V‡ˆ•
ＯＤ６００j¿
２３
€
　
m
　

　
4
　
¿
　
À
　　
!
１０
"
　
６４６，`
SαＣＧＴhÃ:Š]j５２０９Ｕ／ｍＬ，ôý
,Ü7McåQ
。
7äRâ!Õ
：ＴＢ
cåQEbå
úpÃ:‹‰
，
Œ7Ոœ23mEõ™:]
，
â
÷·1ƒ‹E^€
，
žZ²c6cåQEJû
ìP
，
,?TE‘AE,‚þ
，
Õ(2]TE‘A
Eij™
［１５－１６］。
m
３　
YmnKžN9αＣＧＴc®d‰¡U
Ｆｉｇ．３　ＥｆｅｃｔｓｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｍｅｄｉａｏｎｂｉｏｍａｓｓａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆαＣＧＴａｓｅ
２２２　ＩＰＴＧ
£@`SαＣＧＴａｓｅijEF)
pÇÎcåQr~¹ê£E
ＩＰＴＧ（０、００１、
００２、００５、０１、０５、１

２ｍｍｏｌ／Ｌ），
cå
９６ｈ
V˜
h:
，
/æ‹Ö
４。
8Ö
４
âï
：
cåQr¹
ＩＰＴＧ
ö1™‘AEij
，
hÃ:Ší
８１５Ｕ／ｍＬ，
7ä
Râ!“Ü
ＰＱＥ３０
ijø,Õ÷
Ｔ５
Dã­fŽ
qCE
，
“ö[B E&½Àöoµ™E‘A
ij
；
“
ｐＥＴ
ø,r>‘ö¿øEEÑS
［１７］。ＩＰＴＧ
£í
００１ｍｍｏｌ／Ｌ
ë
，
¶xhÃ:Ší
５２０９
Ｕ／ｍＬ，
6V)
ＩＰＴＧ
£E7]
，
h:¹Æ2]
。
m
４　ＩＰＴＧ
8÷žN9αＣＧＴc@¤0ˆbc«f͉¡U
Ｆｉｇ．４　ＥｆｅｃｔｓｏｆＩＰＴＧｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｂｉｏｍａｓｓａｎｄｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆαＣＧＴａｓｅ
２．２．３　
¯¢‹¯’w@
ＥｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
h:ijEF)
pÇVP…
ＩＰＴＧ，
Ê
ＩＰＴＧ２４ｈ
VÆ~
¯¢‹6¯’wEÍ.@`SZ½ñ[Bcå
，
１６℃
Àþ&
１２ｈ
3«˜µh:
，
/æ‹Ö
５。
m
５　
opq¶or£žN9αＣＧＴａｓｅcf®dbsÁnt‰¡U
Ｆｉｇ．５　ＥｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｎｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆαＣＧＴａｓｅ
３３　
!
１
# QRYþ
：`
Sα abcdeDQfghijklE,-67^mno;Epq
　　
8Ö
５（ａ）
âï
：
“cå
１２ｈ
ë
，
hÃ:Šâj
１６３９Ｕ／ｍＬ，
h:ijò@2&
。
ã‰~
ＩＰＴＧ
[
B
９６ｈ，
‡ˆ•hÃ:Ší
４８７８Ｕ／ｍＬ；
(ʯ¢
‹¯’wEhÃ:Šij™“?
（４４０６Ｕ／ｍＬ），
â!8Ü?ò±­EÊ@<=ú6oµE›
”
。
ÕÖ
５（ｂ）
â÷m´
：
cå
２４ｈ
V
，
ÎcåQr
ʯ¢‹¯’w
，
ÂH“
３６ｈ
ë=ŠöLph
:Eöø
；
(ã•~
ＩＰＴＧ
EklÀ
，
3ô[B¿
À‚`ShE=Šöø
，
‡C¯¢‹¯’wâ÷
½`SαＣＧＴhE=Šöø。
２．３　
N9 αＣＧＴcÕ Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
¤ll·uv‰®d
２．３．１　
deD’™£@`S αＣＧＴhijE
F)
pÇVPdeD’™£í
０６、０８、１、１２、
１５

２ｇ／Ｌ，
iD’™£í
１ｇ／Ｌ
½ñJ[Bc
å
（
@çSP
００１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ
[Bcå
）。
¹ê
’™£EdeD@Z²E€;6h:ijEF
)Æi
１
Òr
：
0deD’™£í
１ｇ／Ｌ
ë
，ＯＤ６００
¶xâj¿
１１１（
@çSí
６４６）；
0deD’™
£í
１２ｇ／Ｌ
ë
，ＯＤ６００í１０５，` S αＣＧＴhÃ
:Š¶]í
５８８８Ｕ／ｍＬ，
iôdeDEÊâ÷Â
½Z²E€;
。
®
１　
_`Äýþ8÷ž@¤0ˆbN9αＣＧＴ
cf®d‰¡U
Ｔａｂｌｅ１　Ｅｆｅｃｔｓｏｆｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｎｂｉｏｍａｓｓａｎｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔαＣＧＴａｓｅ
ρ（deD）／
（ｇ·Ｌ－１）
ＯＤ６００
hÃ:Š
／
（Ｕ·ｍＬ－１）
０ ６４６ ５２０９
０６ ９１ ４８７４
０８ ９４ ４９５２
１０ １１１ ５０４３
１２ １０５ ５８８８
１５ ９２ ４７９１
２０ ８７ ４３５９
　　
l
：
@çSí
００１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ。
２３．２　
iD’™£@`SαＣＧＴhijEF)
iDâìí
Ｃ
h[B D<=FP
，
x¿C3
¸µ6deDE¶·’™£í
１２ｇ／Ｌ，
R"VPo
øp¹ê’™£
（０６、１、２、３

４ｇ／Ｌ）
EiD½ñ[
Bij
（
@çSP
００１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ
[Bcå
），
/æ
‹i
２。
8i
２
âï
：
0
１０ｇ／Ｌ
iDë
，
2â÷[B`
ShEij
；
0iD’™£í
３ｇ／Ｌ
ë
，
Òij`S
hEÃ:Š¶]
，
j¿
８６３５Ｕ／ｍＬ（
Ã@çS2]
１７
ï
）。
)iD’™£Ež
，
Z²EcÌÍÀ
,
，
nôiD’™£–]¹FÜZ²E€;
。
®
２　
wÄýþ8÷ž@¤0ˆbαＣＧＴcf®d‰¡U
Ｔａｂｌｅ２　Ｅｆｅｃｔｓｏｆｌａｃｔｏｓｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｎｂｉｏｍａｓｓａｎｄ
ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔαＣＧＴａｓｅ
ρ（iD）／
（ｇ·Ｌ－１）
ＯＤ６００
hÃ:Š
／
（Ｕ·ｍＬ－１）
０ ６５ ５２０９
０６ ９１ ４９８６
１０ ９３ ５８８８
２０ ８９ ７９７１
３０ ８７ ８６３５
４０ ５９ ３５９１
　　
l
：
@çSí
００１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ。
　　
8i
２
óâï
：
x¿@4ÀZ
ＥｃｏｌｉＭ１５
（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
Eijkl½ñ,-
，
‡Â“
ＴＢ
‡ˆ
cåQrÊ⣍í
００１ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ
öFÜ
αＣＧＴhEij，¶âhÃ:Šj¿５２０９Ｕ／ｍＬ；
@4ÀZ½ñJ[Bcå
，
‡ÂdeDiDE’
™£pÇí
１２、３ｇ／Ｌ
ë
，
öFÜ`ShEij
，
h:âj
８６３５Ｕ／ｍＬ。
Ｍ—
rs¦ò@p­’™
；１，２—
@çSE=ÑâË;Sp
、
¹Ë;Sp
；３，４—ＩＰＴＧ
[BÀE=ÑâË;Sp
、
¹Ë;Sp
；５，６—
iD[BÀ<¿EâË;Sp
、
¹Ë;Sp
m
６　
xyuvxyžN9αＣＧＴc®d‰
ＳＤＳＰＡＧＥ
n¯
Ｆｉｇ．６　ＳＤＳＰＡＧＥａｎａｌｙｓｅｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｍｅｔｈｏｄｓｏｎｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆαＣＧＴａｓｅ
２４　
N9sÁ‰®db
ＳＤＳＰＡＧＥ
n¯
ab¹êklÀ
（
¹[B 
，
îP
００１ｍｏｌ／Ｌ
ＩＰＴＧ
[B
，
îP
３ｇ／Ｌ
iD[B
）
cå
９４ｈ
EZ²
，
<
=>WV
，
„‚•±š3|¢
，
©YJ—²P‚\Ë
‚
，
pÇ3„‚•|¢6˂VEJ—²½ñ
ＳＤＳ
ＰＡＧＥ
²˜
，
/æ‹Ö
６。
8Ö
６
âï
：
“ò@p­’™
４３
€
　
m
　

　
4
　
¿
　
À
　　
!
１０
"
　
:７２×１０４
è
，
öTE‘Akß
，
t˜Eò@p­’
™x£ò˜
。
!/æšh:˜µE/æ>ò™Ž
，
P
３ｇ／Ｌ
iD½ñJ[Bcå
，
¶]hÃ:Ší
８６３５Ｕ／ｍＬ。
R"VPiD[BijTE‘A
。
２５　
N9αＣＧＴcaYzü{|0CαＣＤ
ë*²ørâË;ñ°E’™p?í
１％，
à
４００Ｕ／ｇ
h:ã{Ê¥h•
，
f-
２４ｈ
V
，
P
ＨＰＬＣ
pq^m&½
。
Ö
７（ａ）、７（ｂ）
pÇí߀
（ｎａｔｉｖｅ）
`S
（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ）αＣＧＴhY-ñ°f
-€ú αＣＤ、βＣＤ、γＣＤE ＨＰＬＣÖ¯。i ３í
αＣＤ、βＣＤ、γＣＤ３¬^mښEÃÁ，7r8`
SαＣＧＴhY-€ú３¬^mEÛpÇÕ７４％、
２１７％

４３％。
ò@Ü߀hY-ñ°f-VE
αšβñ+ÌÃí２４，` ShY-€úE αＣＤÒ
šÃ›:]
（ᚠβñ+ÌÃí ３４），â‹`S
αＣＧＴhûöQ]EαＣＤ°º;。
m
７　
aYCü‰
ＨＰＬＣ
m’n¯
Ｆｉｇ．７　ＡｎａｎｌｙｓｉｓｐｒｏｄｕｃｔｓｂｙＨＰＬＣ
®
３　
züaYCü‰« 
Ｔａｂｌｅ３　Ｒａｔｉｏｏｆｓｕｂｓｔｒａｔｅｃｏｎｖｅｒｔｅｄｉｎｔｏｐｒｏｄｕｃｔｓ
2«
œm
／
（Ｕ·ｇ－１）
ñ+ÌÃ=
／％
α β γ
α∶ β∶ γ α∶ β
߀
４００ ６６２ ２７９ ５９ １１２∶４７∶１ ２４
`S
４００ ７４ ２１７ ４３ １７２∶５∶１ ３４
３　
‚
　
)
úÿ|}6
Ｅ．ｃｏｌｉＭ１５（ＰＱＥ３０／ｃｇｔ）
4ÀZ_
，
©½ñ6‡ˆklE,-
：
“
ＴＢ
‡ˆcåQr
，
ＩＰＴＧ
£í
００１ｍｍｏｌ／Ｌ，
ݍí
１６℃
ë
，
h:â
j
５２０９Ｕ／ｍＬ，
ù[B 2]6
６４
ï
；
Î
ＴＢ
‡ˆcåQrʯ¢‹¯’wâ÷ÂHLp
‘Aöø¿=Š
。
*PJ[BcåQ
，
‡ˆ•h:
j¿
８６３５Ｕ／ｍＬ，
ý;]Ü÷
ＩＰＴＧ
í[B ëE
‘Aij&½
。
8Ü[BcåQûö?B
、
}
、
͋E,v
，
ùŽÜ4lxáZ*P
。
`Sh‘Af-âË;
ñ°C3iô
：`
S αＣＧＴhûö:]E αＣＤf
-^=
，
öËPÜαＣＤE4l-€^。
M¼6q
：
［１］　ＬｏｗＫＯ，ＭａｈａｄｉＮＭ，ＲａｈｉｍＲＡ，ｅｔａｌ．Ａｎｅｆｅｃｔｉｖｅｅｘｔｒａｃｅｌｕ
ｌａｒｐｒｏｔｅｉｎｓｅｃｒｅｔｉｏｎｂｙａｎＡＢＣｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓｙｓｔｅｍｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉ：ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｍｏｄｅｌｉｎｇａｎｄｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏ
ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓｅｃｒｅｔｏｒｙｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＩｎｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，
２０１１，３８：１５８７１５９７．
［２］　ＬｉＺＦ，ＷａｎｇＭ，ＷａｎｇＦ，ｅｔａｌ．γＣｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ：ａｒｅｖｉｅｗｏｎｅｎ
ｚｙｍａｔｉｃｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈ
ｎｏｌ，２００７，７７：２４５２５５．
［３］　ＱｉＱ，ＺｉｍｍｅｒｍａｎｎＷ．Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ：ｆｒｏｍ
ｇｅｎｅｔｏａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．ＡｐｐｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００５，６６
（５）：４７５４８５．
［４］　ＶａｌｅＤｅｌ，ＭａｒｔｉｎＥＭ．Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓａｎｄｔｈｅｉｒｕｓｅｓ：ａｒｅｖｉｅｗ
［Ｊ］．ＰｒｏｃｅｓｓＢｉｏｃｈｅｍ，２００４，３０：１０３３１０４６．
［５］　ＳｚｅｎｔｅＬ，ＳｚｅｊｔｌｉＪ．Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓａｓｆｏｏｄｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｔｒｅｎｄｓ
ＦｏｏｄＳｃｉＴｅｃｈ，２００４，１５（３／４）：１３７１４２．
［６］　ＳｈｉｍＪＨ，ＳｅｏＮＳ，ＲｏｈＳＡ，ｅｔａｌ．Ｉｍｐｒｏｖｅｄｂｒｅａｄｂａｋｉｎｇ
ｐｒｏｃｅｓｓｕｓｉｎｇＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅｄｉｓｐｌａｙｅｄｗｉｔｈｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ
ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ［Ｊ］．ＪＡｇｒｉＦｏｏｄＣｈｅｍ，２００７，５５
（１２）：４７３５４７４０．
［７］　ＤａｖｉｓＭＥ，ＢｒｅｗｓｔｅｒＭＥ．Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ：ｂａｓｅｄｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ—
ｐａｓｔ，ｐｒｅｓｅｎｔ，ｆｕｔｕｒｅ［Ｊ］．ＮａｔｕｒｅＲｅｖｉｅｗｓ，２００４，３（１／２）：
１０２３１０３５．
［８］　ＨｏｌａｎｄＬ，ＲｉｚｚｉＧ，ＭａｌｔｏｎＰ，ｅｔａｌ．Ｃｏｓｍｅｔｉｃｃｏｍｐｏｓｔｉｏｎｓｃｏｍｐｒｉ
５３　
!
１
# QRYþ
：`
Sα abcdeDQfghijklE,-67^mno;Epq
ｓｉｎｇｃｙｌｉｃｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓａｎｄｆｒａｇｒａｎｃｅ：ＷＯ，２００００６７７１６［Ｐ］．
２０００１１１６．
［９］　ＨｅｄｇｅｓＡＲ．Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌａｐｐｌｉｃｔｉｏｎｓｏｆｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ［Ｊ］．Ｃｈｅｍ
Ｒｅｖ，１９９８，９８（５）：２０３５２０４４．
［１０］　
U8‹
．
\-øbîcZα abcdeDQfgh“x‚
cZrEij67^m°º;pq
［Ｄ］．
‚ž
：
Żx
M
，２００９．
［１１］　
ÁŸ­
，
 ¡¢
．
hÜx‚cZ‘AEij
、
•ò^¯q;6
‰-W½¾
［Ｊ］．
ruÖM-M
：Ｂ

，２００９，３９（８）：７１１７２７．
［１２］　ＢｕｊａｒｄＨ，ＧｅｎｔｚＲ，ＬａｎｚｅｒＭ，ｅｔａｌ．ＡＴ５ｐｒｏｍｏｔｅｒｂａｓｅｄｔｒａｎ
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｆｏｒｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄ
ｉｎｖｉｖｏ［Ｊ］．ＭｅｔｈｏｄｓＥｎｚｙｍｏｌ，１９８７，１５５：４１６４３３．
［１３］　ＬｅｅＫＷ，ＳｈｉｎＨＤ，ＬｅｅＹＨ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｏｖｅｒｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆ
βｃｙｌｃｏｄｅｘｔｒｉｎｇｌｕｃａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｉｎａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＥ．ｃｏｌｉｕｓｉｎｇ
ｓｅｃｒｅｔｉｖｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．ＪＭｉｃｒｏｂｉｏｌＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２００２，１２
（５）：７５３－７５９．
［１４］　
£hv
Ｆ，
Û¤°
Ｒ，
§h¥
ＲＥ，
þ
．
cap­€mMC3
f»
［Ｍ］．
§8¦
，
JŽr
，
 ­Ã
，
þ
．
’k
：
ÖM´“
o
，１９９８．
［１５］　ＨａｒｉｓｏｎＪＳ，ＫｅｓｈａｖａｒｚＭＥ，ＤｕｎｎｉｌＰ，ｅｔａｌ．Ｆａｃｔｏｒｓａｆｅｃｔｉｎｇ
ｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｖｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｌｙｓｏｚｙｍｅｂｉｎｄｉｎｇａｎｔｉｂｏｄｙｆｒａｇ
ｍｅｎｔｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＢｉｏｅｎｇ，１９９７，５３（６）：
６１１６２２．
［１６］　ＰａｎｄａＡＫ，ＫｈａｎＲＨ，ＭｉｓｈｒａＳ，ｅｔａｌ．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓｏｆｙｅａｓｔｅｘｔｒａｃｔ
ｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃｃｅｌｕｌａｒｙｉｅｌｄｏｆｏｖｉｎｅｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅｄｕｒｉｎｇｆｅｄｂａｔｃｈ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ［Ｊ］．ＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，
２０００，２２（５）：３７９３８３．
［１７］　ＴａｋｅｕｃｈｉＳ，ＭａｎｄａｉＹ，ＯｔｓｕＡ，ｅｔａｌ．Ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｂｅ
ｔｗｅｅｎｈｕｍａｎαａｎｄβｃｒｙｓｔａｌｉｎｐｒｏｔｅｉｎｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ
ｃｏｌｉｃｅｌｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｃｏｌｄａｎｄｅｘｔｒｅｍｅｐＨ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍＪ，
２００３，３７５（ｐｔ２）：
櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒櫒
４７１－４７５．
,012
#$Œ}~ôV€Ö§‚
vu¤§xMuÁMNþX|E³´É‘“
《
ÖM
》
gŽ|Ѩn
，
Mk~&6C3f|ˆ<=“â!
7¿CüR\›”ëEë*°›
。
|ˆ<=Õ{܀©i+E<=
，
˜k_ð+ÍCüR\Eª©
，
ÃÆ
ˆÝŠiE|ˆ<=n7¿.ŠØç5EF)
，
(«L|ˆ<=n7¿y¬EF)
。
vuֳɑx¿~&‡Â
，
|ˆ<=“7¿-ÜCüR\ª©ë
，
nöø´o¬°lp­
，
-¬p­
nw:_ÐEêë<=
，`
˜k­®Ûôöâ!üXE|ˆ<=
。
7š"êë
，
C3f¯²7ML{Eê
ëSa>öD-¬p­w:6
，
3ôêëø,ÑCöø´x™8²
，
-¬&ùšX²¿Û뇀Eë*
òê
。
“¿Ûë
，
êëø,E-¬ë*Õí6¢{½Ê²ÑEO°þ¿Ûä
，
(“8ü
“
ãX
”
E]HÀ
，
êë
ø,E|Üë*Õí6°œ¢{±Ü8ܪ©R\(^€E
、
â!CüEB，
,?²ü¹³
。
ƒ„…†#0ü‡‘ˆ5Ü&@‰Š
VfnF´vw45Eo¬
“
€m"
”
!íy•µ¶Eñ92GÝ·}EŒ
。
-¬8oøp¸¹É
€SúE°l"*PE‡ŒÍm
，
šº»€^€E€m¼ŒÍmo«
。
-ܸ¹É€Jõ€m¼Œ，
˜k“RS½ºën‡´>^¼Œ
。
Øm€mM¦Ç¾
·
¿À¶Áir
，
-¬ZsՓ³â÷JuJÃ
EŒhÍ+Ï。
Mn
：“
˜óðûöy2Š
，
-ÕRí˜o
２
¬“xð&½Àۏ¹ÄŸEj
Æ/Ž“oq
。
ºAíŹÆËþôÉöÑC“J¦cå，
7ÕìíÇÇ-oY.EÍm
，
˜ò0öÈ
。
±ÑDç)EÉñSÉÆ"øEàÍ
，
±Ü‡¼2GêʌhEàÍ2Õ*P-cW‡ô
EéY6à
。”
nF´vwAí
，
!UBâ÷FP‡ŒØmç)˟£S
。
（
&V3
）
６３
€
　
m
　

　
4
　
¿
　
À
　　
!
１０
"