全 文 ：第７卷第２期
２００９年３月
生　物　加　工　过　程
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ．７Ｎｏ．２
Ｍａｒ．２００９
收稿日期：２００８－０７－０９
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０７７６０１７）；北京市自然科学基金资助项目（５０７２０２８）；石河子大学高层次人才科研启动项目（ＲＣＺＸ２００６２９）
作者简介：党艳艳（１９８１—），女，新疆石河子人，硕士研究生，研究方向：生物技术与酶工程；李　春（联系人），教授，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｃｈｕｎ＠ｂｉｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
基于膨润土的层柱黏土固定 β葡萄糖
醛酸苷酶的研究
党艳艳１，冯世江１，栗全营１，李　春１，２
（１．石河子大学 食品学院 新疆兵团化工绿色过程重点实验室，石河子 ８３２００３；
２．北京理工大学 生命科学与技术学院，北京 １０００８１）
摘　要：以膨润土制备的层柱黏土为载体，考察给酶量、固定化 ｐＨ、温度和时间对固定化 β 葡萄糖醛酸苷酶活性
的影响，并对其操作稳定性进行研究。结果表明：给酶量为２７００Ｕ／ｇ，最适 ｐＨ为３６，固定化温度４０℃，固定化
６０ｍｉｎ条件下固定化酶催化活性较高；酶经固定化后其热稳定性及储存稳定性显著提高。
关键词：层柱黏土；β葡萄糖醛酸苷酶；甘草酸；固定化
中图分类号：ＴＱ９２５　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：１６７２－３６７８（２００９）０２－００４４－０４
Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｏｎｐｉｌａｒｅｄｉｎｔｅｒｌａｙｅｒｃｌａｙｓｆｒｏｍｂｅｎｔｏｎｉｔｅ
ＤＡＮＧＹａｎｙａｎ１，ＦＥＮＧＳｈｉｊｉａｎｇ１，ＬＩＱｕａｎｙｉｎｇ１，ＬＩＣｈｕｎ１，２
（１．ＣｏｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＧｒｅｅｎＰｒｏｃｅｓｓｉｎｇｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＢｉｎｇｔｕａｎ，ＳｈｉｈｅｚｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｓｈｉｈｅｚｉ８３２００３，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｏｎｐｉｌａｒｅｄｉｎｔｅｒｌａｙｅｒｃｌａｙｓ（ＰＩＬＣ）ｆｒｏｍｂｅｎｔｏｎｉｔｅｗａｓｓｔｕｄ
ｉｅｄ．ＴｈｅｆａｃｔｏｒｓｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｏｎＰＩＬＣ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅ
ａｍｏｕｎｔｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ｐＨ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄｔｉｍｅｏｆｔｈｅｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．
Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｗｅｒｅａｓｆｏｌｏｗｓ：βｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｄｏｓａｇｅ
ｗａｓ２７００Ｕ／ｇｃａｒｉｅｒ，ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｉｎｇｆｏｒ６０ｍｉｎａｔ４０℃ ａｔｐＨ３６．Ｔｈｅｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｔｈｅｓｔｏｒａｇｅｓｔａ
ｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｅｎｚｙｍｅｗｅｒｅｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄａｆｔｅｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｉｌａｒｅｄｉｎｔｅｒｌａｙｅｒｃｌａｙｓ；βｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ；ｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｎ；ｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ
　　β葡萄糖醛酸苷酶（βｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ）是一种糖
苷类水解酶，能催化各种类型的β 葡萄糖醛酸苷水
解，不同生物来源的β 葡萄糖醛酸苷酶具有催化不
同底物和反应的特性［１－３］。本课题组筛选得到的菌
种ＰｅｎｉｃｉｌｉｕｍｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍＬｉ３可定向催化甘草酸
合成单葡萄糖醛酸基甘草次酸 （ｇｌｙｃｙｒｈｅｔｉｎｉｃａｃｉｄ
ｍｏｎｏｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ，ＧＡＭＧ）［４］。化学水解法水解甘草酸
生成ＧＡＭＧ和甘草次酸２种物质，无法完成由甘草酸
定向水解生成ＧＡＭＧ。由于游离酶催化反应存在很
多无法避免的缺点［５］，使生产ＧＡＭＧ的成本较高，限
制了其工业化生产。层柱黏土（ｐｉｌａｒｅｄｉｎｔｅｒｌａｙｅｒ
ｃｌａｙｓ，ＰＩＬＣ）是一种类似分子筛的新型催化材料，具有
比表面积大、热稳定性高、孔径和酸性可调控等特点，
在催化及吸附领域已引起广泛关注［６］。
本文利用新疆夏子街膨润土制备的层柱黏土
固定β葡萄糖醛酸苷酶以解决游离酶催化过程的
不足，并探讨固定化的适宜条件。
１　材料与方法
１１　菌种与试剂
菌种ＰｅｎｉｃｉｌｉｕｍｐｕｒｐｕｒｏｇｅｎｕｍＬｉ ３为北京理
工大学生命科学与技术学院生物催化室保存菌种。
单葡萄糖醛酸基甘草次酸标准品由南京工业
大学赠送，甘草酸单铵盐标准品购自Ｓｉｇｍａ公司，甲
醇为色谱级，其余试剂均为分析纯。
１２　 载体的制备
层柱黏土的制备参照文献［７］，将提纯处理的
膨润土按一定质量比缓慢添加到柱化剂中，所得反
应物抽滤、洗涤、室温干燥得粉末状试样，试样于马
弗炉内７２３～７７３Ｋ空气中煅烧６ｈ得层柱黏土。
１３　粗酶液的制备及酶活力测定
粗酶液的制备：Ｐｅｎｉｃｉｌｉｕｍｓｐ．Ｌｉ ３发酵产酶
结束后的菌体细胞用 ｐＨ４２的醋酸钠 冰醋酸
（ＮａＡｃＨＡｃ）缓冲液洗涤、重悬后，于冰浴条件下超
声破碎细胞，离心取上清液即为粗酶液。
以甘草酸为底物，酶活力测定参照文献［８－
９］。固定化β葡萄糖醛酸苷酶酶活的测定是将测
定游离酶酶活方法中的１ｍＬ粗酶液用１ｍＬ蒸馏水
和一定量的固定化酶来代替，其余步骤同游离酶酶
活的测定。
１４　酶的固定化实验
采用吸附法固定化酶，将一定量的载体加入到
β葡萄糖醛酸苷酶的粗酶液中，室温下搅拌一定时
间后离心分离。由固定化时加入酶的总酶活和固
定化后滤液中的酶活总量计算 β 葡萄糖醛酸苷酶
固定率。
１５　酶活力回收计算
活力回收＝固定化酶总活力／加入酶的
总活力×１００％
２　结果与讨论
２１　固定化载体的选择
利用新疆夏子街日月雷原矿为原料，对其进行
提纯、钠化改型等处理，得到钙基膨润土、钠化膨润
土、酸性白土３类膨润土，在酸性、室温碱性、８０℃
碱性条件下以上述３类膨润土为原料制备层柱黏
土。合成条件分别为：１）钠化膨润土、碱性、８０℃；
２）酸性白土、碱性、８０℃；３）钙基膨润土、碱性、
８０℃；４）钠化膨润土、酸性、常温；５）酸性白土、酸
性、常温；６）酸性白土、碱性、常温；７）钠化膨润土、
碱性、常温；８）钙基膨润土、碱性、常温；９）钙基膨润
土、酸性、常温。将合成的这９类载体于马弗炉内
７２３～７７３Ｋ空气中煅烧６ｈ，得相对应的层柱黏土用
于固定化酶，以测得的最高酶活力为１００％计算各
相对酶活力，结果见图１。
图１　不同层柱黏土固定化效果
Ｆｉｇ．１　ＥｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔＰＩＬＣｌｏａｄｉｎｇｏｎｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
　　由图１可知，钙基膨润土酸性常温条件下合成
的层柱黏土固定化效果最好。不同的合成条件对
酶的固定化影响很大，同样用钙基膨润土为原料，
酸性常温条件下合成的层柱黏土固定化效果较好，
而碱性条件下合成的层柱黏土负载酶蛋白量较少，
平均负载量为３３２ｍｇ／ｇ，虽然有酶蛋白负载在载体
上，但因所用固定化酶为粗酶液，含有较多的杂蛋
白，故固定化酶几乎没有酶活。此外，酸性与碱性
条件下合成的孔径尺寸不同［１０］，导致固定化效果有
所差异。同时，在实验合成过程中发现，选择钙基
膨润土酸性常温条件下合成的层柱黏土其机械强
度明显好于其他条件合成，更适合用于催化反应。
２２　给酶量对酶固定化的影响
为确定一个最佳的载体结合酶量，向每克载体的
体系中分别加入 ９００、１８００、２４００、３６００、４５００、
５４００Ｕ的酶量以制备固定化酶，结果见图２。由图２
可知，固定化酶活随着给酶量的增大而增大，当给酶
量达到４５００Ｕ时，获得最大固定化酶活，且载体上酶
量吸附达到饱和。一般在给酶量较少的情况下，随着
给酶量增多，酶与载体结合越多，固定化酶活增大，但
因载体与酶的结合位点有限，给酶量过多会造成空间
位阻的增大，使底物与产物不能及时扩散，造成固定
化酶催化效率下降。综合固定化酶活和酶的活力回
收实验选取每克载体最佳给酶量为２７００Ｕ。
５４　第２期 党艳艳等：基于膨润土的层柱黏土固定β葡萄糖醛酸苷酶的研究
图２　给酶量对固定化酶活及活力回收的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｅｃｔｏｆｄｉｆｅｒｅｎｔｅｎｚｙｍｅａｍｏｕｎｔｓｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅａｎｄａｃｔｉｖｉｔｙ
ｒｅｃｏｖｅｒｙｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
２３　ｐＨ对酶固定化的影响
研究β 葡萄糖醛酸苷酶的最适固定化反应
ｐＨ，结果见图３。由图３可知，β 葡萄糖醛酸苷酶
在ｐＨ３０～４２范围内固定时，固定化酶具有较高
的催化活性，随着ｐＨ的增大，固定化酶活呈现下降
趋势，说明β葡萄糖醛酸苷酶适宜在较低的 ｐＨ固
定，其最适固定化ｐＨ为３６。
图３　ｐＨ对酶固定率的影响
Ｆｉｇ．３　ＥｆｅｃｔｏｆｐＨｏｎｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
２４　温度对酶固定化的影响
考察在２５～４５℃范围内温度对酶固定化影响，
结果见图 ４。由图 ４可知，β 葡萄糖醛酸苷酶在
４０℃固定时酶活力达到最大值，温度的提高有利于
固定化反应速度加快，但温度过高会引起酶的失活，
故β葡萄糖醛酸苷酶在４０℃左右固定比较合适。
２５　固定化时间对酶固定化的影响
分别用不同时间制备固定化酶，结果见图 ５。
由图５可见固定化时间为６０ｍｉｎ时酶活较高，低于
６０ｍｉｎ，时间太短，酶与载体还没有得到充分结合导
致酶活不高；高于６０ｍｉｎ，随着固定化时间的增加，
酶活力反而略有下降，这可能是在温度相对较高的
情况下随着时间的延长酶易失活。
图４　温度对酶固定率的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｅｃｔｏｆｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｎｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｒａｔｅｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
图５　时间对酶固定率的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｅｃｔｏｆｔｉｍｅｏｎｉｍｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ
βｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
２６　固定化 β 葡萄糖醛酸苷酶对热及 ｐＨ的稳
定性
　　研究固定化酶在３０～７０℃范围内的稳定性，以
测得的最高酶活力（每克载体吸附酶活为１７５４Ｕ）
为１００％计算各相对酶活力，结果见图６。由图６结
果发现，固定化酶在７０℃保温３０ｍｉｎ，其剩余酶活
力仍然在９０％以上。而前期对游离酶的热稳定性
研究表明，游离酶在６０℃保温３０ｍｉｎ后剩余酶活力
不到初始酶活的２０％［１１］，说明 β 葡萄糖醛酸苷酶
经固定化后对热稳定性有较大程度的提高。
图６　固定化酶对温度的稳定性
Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅｒｍａｌｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
６４ 生　物　加　工　过　程　　 第７卷　
将游离酶和固定化酶分别置于不同 ｐＨ缓冲液
中于４℃条件下放置２４ｈ，考察酶 ｐＨ稳定性，结果
见图７。由图７可知，游离酶在 ｐＨ５４左右相对较
稳定，固定化酶对 ｐＨ的稳定性与游离酶相比略向
碱性方向偏移，在 ｐＨ６２具有较好的稳定性，同时
固定化酶与游离酶相比，其稳定性大幅提高。
图７　ｐＨ对固定化酶的稳定性
Ｆｉｇ．７　ｐＨｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
２７　固定化β 葡萄糖醛酸苷酶的操作稳定性
　　操作稳定性研究结果见图８。由图８可知，固
定化β葡萄糖醛酸苷酶在第２次使用时酶活就出
现大幅下降，仅为初始酶活的４５％，随后５次的循
环使用相对酶活均保持在４０％以上，说明利用层柱
黏土直接固定化β葡萄糖醛酸苷酶易脱落，在第一
次催化反应后的上清液中检测有蛋白存在（蛋白质
量浓度为００１３ｍｇ／ｍＬ）。经对层柱黏土表征后得
出合成材料孔径在１５～８５ｎｍ，孔径较大酶易进入
层柱黏土层间，进入层间的酶分子与载体吸附牢
固，部分与载体结合力较弱的酶分子易脱落，故第
一次催化反应后酶活下降较快，但随后酶活能保持
较长时间的稳定。固定化酶首次使用后酶活下降
较快的问题还需进一步研究。
图８　固定化酶的循环使用稳定性
Ｆｉｇ．８　Ｒｅｃｙｃｌｉｎｇｓｔａｂｉｌｉｔｙｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ
３　结　论
１）通过实验探讨了利用不同基质膨润土合成
的层柱黏土对β 葡萄糖醛酸苷酶固定化活性的影
响，筛选出钙基膨润土酸性常温条件下合成的层柱
黏土为固定化载体。β 葡萄糖醛酸苷酶经层柱黏
土固定后，其热稳定性得到显著提高。
２）确定了最佳的固定化条件：每克载体最佳给酶
量２７００Ｕ，最适ｐＨ３６、温度４０℃、时间６０ｍｉｎ。
参考文献：
［１］　ＣａｌａｎａｎＭＪ，ＲｕｓｓｅｌＷ Ｍ，ＫｌａｅｎｈａｍｍｅｒＴＲ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ
Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｕｓβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｂｙｒａｎｄｏｍｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．
Ｇｅｎｅ，２００７，３８９（２）：１２２１２７．
［２］　ＢｅａｕｄＤ，ＴａｉｌｉｅｚＰ，ＡｎｂａＭｏｎｄｏｌｏｎｉＪ．Ｇｅｎｅｔｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ｔｈｅβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｅｎｚｙｍｅｆｒｏｍａｈｕｍａｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｒｕ
ｍｉｎｏｃｏｃｃｕｓｇｎａｖｕｓ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，１５１（７）：２３２３２３３０．
［３］　ＺｈｅｎＬ，ＢａｕｍａｎｎＨ，ＮｏｖａｋＥＫ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｓｉｇｎａｌｆｏｒｒｅｔｅｎｔｉｏｎｏｆ
ｔｈｅｅｇａｓｙｎｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｃｏｍｐｌｅｘｗｉｔｈｉｎｔｈｅｅｎｄｏｐｌａｓｍｉｃｒｅｔｉｃｕ
ｌｕｍ［Ｊ］．ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ，１９９３，３０４（２）：４０２４１４．
［４］　ＦｅｎｇＳｈｉｊｉａｎｇ，ＬｉＣｈｕｎ，ＸｕＸｉａｏｌｉｎ，ｅｔａｌ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｓｔｒａｉｎｓｆｏｒｄｉ
ｒｅｃｔｅｄｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆβｄｍｏｎｏｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅｇｌｙｃｙｒｈｉｚｉｎａｎｄｋｉ
ｎｅｔｉｃｓｏｆｅｎｚｙｍｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＣａｔａｌｙｓｉｓＢ：
Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ，２００６，４３（１／４）：６３６７．
［５］　罗贵民．酶工程［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２００３：５５７６．
［６］　ＭｅｉＪＧ，ＹｕＳＭ，ＣｈｅｎｇＪ．Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｃａｔａｌｙｔｉｃｗｅｔｐｅｒｏｘｉｄｅｏｘｉｄａ
ｔｉｏｎｏｆｐｈｅｎｏｌｏｖｅｒｄｅｌａｍｉｎａｔｅｄＦｅＴｉＰＩＬＣｅｍｐｌｏｙｉｎｇｍｉｃｒｏｗａｖｅｉｒａ
ｄｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＣａｔａｌＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００４，５（８）：４３７４４０．
［７］　王连洲，禹剑，施剑林，等．合成条件对介孔氧化硅材料孔径尺
寸的影响［Ｊ］．硅酸盐学报，１９９９，２７（１）：２２２７．
ＷａｎｇＬｉａｎｚｈｏｕ，ＹｕＪｉａｎ，ＳｈｉＪｉａｎｌｉｎ，ｅｔａｌ．Ｅｆｅｃｔｏｆｓｙｎｔｈｅｔｉｃ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｎｔｈｅｐｏｒｅｓｉｚｅｏｆｍｅｓｏｐｏｒｏｕｓｓｉｌｉｃａｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．
ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅＣｅｒａｍｉｃＳｏｃｉｅｔｙ，１９９９，２７（１）：２２２７．
［８］　鱼红闪，吴少杰，金凤燮，等．酶法改变甘草苷糖醛酸基提高其
甜度的研究（Ⅱ）：能水解甘草苷糖醛酸基酶的提纯与酶性质
研究［Ｊ］．食品与发酵工业，１９９９，２５（４）：５１２．
ＹｕＨｏｎｇｓｈａｎ，ＷｕＳｈａｏｊｉｅ，ＪｉｎＦｅｎｇｘｉｅ，ｅｔａｌ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｇｌｙ
ｃｙｒｈｉｚｉｎｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅｂｙｅｎｚｙｍｅｔｏｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｉｔｓｓｗｅｅｔｎｅｓｓ：ｐｕｒｉｆｉ
ｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉａｔｉｏｎｏｆβｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄａｎｄＦｅｒ
ｍｅｎｔａｔｉｏｎＩｎｄｕｓｔｒｉｅ，１９９９，２５（４）：５１２．
［９］　王小艳，冯世江，李春，等．真菌产３种 βＤＧｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ酶学
性质［Ｊ］．生物加工过程，２００７，５（２）：１７２２．
ＷａｎｇＸｉａｏｙａｎ，ＦｅｎｇＳｈｉｊｉａｎｇ，ＬｉＣｈｕｎｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆ
ｔｈｒｅｅβＤｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｆｒｏｍｆｕｎｇｉ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＢｉｏｐｒｏｃｅｓｓＥｎ
ｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００７，５（２）：１７２２．
［１０］ＨｕｏＱ，ＭａｒｇｏｌｅｓｅＤＩ，ＣｉｅｓｌａＵ，ｅｔａｌ．Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎｏｆｏｒｇａｎｉｃｍｏｌ
ｅｃｕｌｅｓｗｉｔｈｉｎｏｒｇａｎｉｃｍｏｌｅｃｕｌａｒｓｐｅｃｉｅｓｉｎｔｏｎａｎｏｃｏｍｐｏｓｉｔｅｂｉｐｈａｓｅ
ａｒａｙｓ［Ｊ］．ＣｈｅｍＭａｔｅｒ，１９９４，６（８）：１１７６１１９１．
［１１］李春，冯世江，王小艳，等．葡糖酸苷酶生产菌株的筛选及其酶学
特性的研究［Ｊ］．高校化学工程学报，２００７，２１（６）：９７７９８２．
ＬｉＣｈｕｎ，ＦｅｎｇＳｈｉｊｉａｎｇ，ＷａｎｇＸｉａｏｙａｎ，ｅｔａｌ．Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｐｒｏｄｕｃｉｎｇ
ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅｓｔｒａｉｎａｎｄｉｔｓｅｎｚｙｍａｔｉｃｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌｏｆ
ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆＣｈｉｎｅｓｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ，２００７，２１（６）：９７７９８２．
７４　第２期 党艳艳等：基于膨润土的层柱黏土固定β葡萄糖醛酸苷酶的研究