全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊猿冤院园源远远 耀 园源苑园允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园猿鄄园源远远鄄园缘
收稿日期院圆园员员鄄园愿鄄圆圆摇 接受日期院圆园员员鄄员圆鄄猿员
基金项目院浙江省科技厅专项渊圆园园愿悦圆圆杂粤苑远园园园苑冤
作者简介院梁新乐渊员怨远怨鄄冤袁男袁湖北江陵人袁博士研究生袁教授袁研究方向为微生物学遥 栽藻造院 园缘苑员鄄愿愿园苑员园圆源鄄愿缘愿圆曰 耘鄄皂葬蚤造院 凿遭蚤燥贼岳 皂葬蚤造援 扎躁早泽怎援 藻凿怎援 糟灶
绿色产色链霉菌 耘鄄圆员怨菌落的形态分化
梁新乐员 摇 朱摇 静员 摇 金英燕圆
渊员郾 浙江工商大学生物工程系袁浙江杭州摇 猿员园园猿缘曰 圆郾 浙江省东阳玉米研究所袁浙江 东阳摇 猿圆圆员园园冤
摘摇 要院菌株 耘鄄圆员怨 由原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 经远园悦燥 酌诱变及原生质体融合等手段改造后所得袁本文通
过分子荧光探针尧荧光显微镜和电镜对绿色产色链霉菌 耘鄄圆员怨 在固体基质表面的发育分化周期尧斜面培
养时间对阿维拉霉素产量的影响进行了研究袁以为工业发酵选择适当的斜面种子提供理论依据遥 试验
表明该菌株菌落发育过程伴有间断性菌丝凋亡袁分生孢子的产生是活性菌丝分化的结果遥 与原始菌株
相比该菌落形态呈现显著不同袁其孢子萌发形成杂色初生菌丝袁基内菌丝出现二次死亡渊源愿澡冤及其中活
性菌丝片段的二次快速生长袁分生孢子形成数量多遥 原始菌株呈螺旋状孢子丝袁孢子表面带刺袁而 耘鄄
圆员怨 为直线型孢子丝袁分生孢子表面光滑无刺突遥 摇瓶试验表明袁菌种斜面种龄以 员园远澡 左右为宜袁此时
分生孢子活性高袁阿维拉霉素发酵单位可达 员圆园园皂早 辕 蕴遥
关键词院绿色产色链霉菌曰 形态发育分化曰 斜面培养曰 荧光染色曰 种龄
酝韵砸孕匀韵蕴韵郧陨悦粤蕴 阅陨云云耘砸耘晕栽陨粤栽陨韵晕 韵云 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽
耘鄄圆员怨 韵晕 杂韵蕴陨阅 悦哉蕴栽哉砸耘
蕴陨粤晕郧 载蚤灶鄄造藻员 摇 在匀哉 允蚤灶早员 摇 允陨晕 再蚤灶早鄄赠葬灶圆
渊员郾 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠袁 在澡藻躁蚤葬灶早 郧燥灶早泽澡葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园猿缘曰
圆郾 酝葬蚤扎藻 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 在澡藻躁蚤葬灶早 阅燥灶早赠葬灶早袁 阅燥灶早赠葬灶早袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿圆圆员园园冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽 耘鄄圆员怨 憎葬泽 凿藻则蚤增藻凿 枣则燥皂 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨
贼则藻葬贼藻凿 憎蚤贼澡 远园悦燥 酌鄄则葬赠泽 蚤则则葬凿蚤葬贼蚤燥灶 葬灶凿 责则燥贼燥责造葬泽贼 枣怎泽蚤燥灶援 宰蚤贼澡 贼澡藻 澡藻造责 燥枣 枣造怎燥则藻泽糟藻灶贼 责则燥遭藻泽袁 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻
葬灶凿 藻造藻糟贼则燥灶 皂蚤糟则燥泽糟燥责赠袁 贼澡藻 皂燥则责澡燥造燥早赠 葬灶凿 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 耘鄄圆员怨 燥灶 泽燥造蚤凿 泽怎则枣葬糟藻 糟怎造贼怎则藻 憎藻则藻 蚤灶增藻泽贼蚤早葬贼藻凿 蚤灶 贼澡蚤泽
泽贼怎凿赠援 栽澡藻 藻枣枣藻糟贼 燥枣 葬早葬则泽造葬灶贼 糟怎造贼怎则藻 贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 粤增蚤造葬皂赠糟蚤灶 憎葬泽 葬造泽燥 泽贼怎凿蚤藻凿 贼燥 责则燥增蚤凿藻 贼澡藻燥则藻贼蚤糟葬造 遭葬泽蚤泽
枣燥则 蚤灶凿怎泽贼则蚤葬造 枣藻则皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 燥枣 泽藻造藻糟贼蚤灶早 贼澡藻 葬责责则燥责则蚤葬贼藻 泽藻藻凿 贼燥 糟怎造贼怎则藻 燥灶 贼澡藻 葬早葬则泽造葬灶贼 糟怎造贼怎则藻 皂藻凿蚤怎皂援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽
蚤皂责造蚤藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 燥枣 糟燥造燥灶蚤藻泽 燥枣 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽 葬糟糟燥皂责葬灶蚤藻凿 贼澡藻 蚤灶贼藻则皂蚤贼贼藻灶贼 澡赠澡葬藻 葬责燥责贼燥泽蚤泽袁
葬灶凿 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 泽责燥则藻泽 憎葬泽 枣则燥皂 贼澡藻 葬糟贼蚤增藻 皂赠糟藻造蚤怎皂援 栽澡藻 糟燥造燥灶蚤葬造 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 泽贼则葬蚤灶 耘鄄圆员怨 憎葬泽 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠
凿蚤枣枣藻则藻灶贼 枣则燥皂 贼澡藻 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 悦郧酝悦悦源澡员员员怨援 栽澡藻则藻 憎藻则藻 增葬则蚤藻早葬贼藻凿 澡赠责澡葬藻 枣燥则皂葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 泽贼葬早藻 燥枣 泽责燥则藻
早藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 葬灶凿 蚤灶蚤贼蚤葬造 澡赠责澡葬藻 凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 渊员园澡冤 憎蚤贼澡 贼澡藻 造蚤增藻 葬灶凿 凿藻葬凿 泽藻早皂藻灶贼泽 葬造贼藻则灶葬贼藻凿 蚤灶 葬 澡蚤早澡造赠 则藻早怎造葬则 枣葬泽澡蚤燥灶
憎蚤贼澡蚤灶 贼澡藻 泽葬皂藻 澡赠责澡葬援 粤枣贼藻则 贼澡藻 藻葬则造赠 泽蚤灶早造藻 糟燥造燥灶赠 枣燥则皂葬贼蚤燥灶袁 贼澡藻 贼澡蚤则凿 责澡葬泽藻 憎葬泽 枣燥造造燥憎藻凿 遭赠 责则燥枣怎泽藻 早则燥憎贼澡 燥枣 贼澡藻 造蚤增藻
泽藻早皂藻灶贼泽 凿藻则蚤增藻凿 枣则燥皂 贼澡藻 增葬则蚤藻早葬贼藻凿 澡赠责澡葬袁 贼澡藻灶 贼澡藻 泽藻糟燥灶凿 葬责燥责贼燥泽蚤泽 燥枣 贼澡藻 皂赠糟藻造蚤葬 渊源愿澡冤 憎葬泽 燥糟糟怎则则藻凿 憎蚤贼澡 葬灶燥贼澡藻则
择怎蚤糟噪 早则燥憎贼澡袁 葬灶凿 泽责燥则怎造葬贼蚤燥灶 憎葬泽 燥糟糟怎则则藻凿 葬贼 怨远澡援 杂贼则葬蚤灶 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 澡葬凿 泽责蚤则葬造 泽责燥则燥贼则蚤糟澡蚤葬造 葬灶凿 则燥怎灶凿
糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻泽 憎蚤贼澡 泽责蚤噪藻袁 憎澡藻则藻葬泽 泽贼则葬蚤灶 耘鄄圆员怨 澡葬凿 造蚤灶藻葬则 泽责燥则燥贼则蚤糟澡蚤葬造袁 泽皂燥燥贼澡 葬灶凿 糟赠造蚤灶凿则蚤糟葬造 糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻援 栽澡藻
则藻泽怎造贼泽 燥枣 泽澡葬噪藻 枣造葬泽噪 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 泽责燥则藻泽 燥枣 耘鄄圆员怨 澡葬凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 憎澡藻灶 糟怎造贼怎则藻凿 燥灶 葬早葬则泽造葬灶贼
糟怎造贼怎则藻 皂藻凿蚤怎皂 葬灶凿 蚤灶糟怎遭葬贼藻凿 枣燥则 员园远澡 憎蚤贼澡 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 葬增蚤造葬皂赠糟蚤灶 怎责 贼燥 员圆园园皂早 辕 蕴援
运藻赠 憎燥则凿泽院杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽曰 皂燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶曰 葬早葬则泽造葬灶贼 糟怎造贼怎则藻 贼蚤皂藻曰 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 泽贼葬蚤灶蚤灶早曰
远远源
摇 猿 期 绿色产色链霉菌 耘鄄圆员怨 菌落的形态分化
葬早葬则泽造葬灶贼 糟怎造贼怎则藻 贼蚤皂藻
摇 摇 链霉菌属广泛分布于有机物丰富尧含水量适中的
偏碱性土壤中袁以其产生众多的次生代谢产物而备受
关注遥 链霉菌具有复杂的形态发育分化周期袁主要包
括孢子萌发出芽管尧形成基内菌丝尧产生白色气生菌
丝尧气生菌丝末端分化为单倍体孢子咱员暂 遥 形态分化和
次级代谢的发生在时间上有强相关性袁各自基因在表
达调控上更是密不可分袁斜面种子培养是决定发酵成
败的关键袁研究菌种菌落形态特征是工业发酵不可缺
少的重要基础性工作遥
阿维拉霉素 渊粤增蚤造葬皂赠糟蚤灶冤是由绿色产色链霉菌
渊杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽冤 发酵产生的一种正糖
霉素族寡糖类抗生素咱圆暂 遥 阿维拉霉素结构独特袁安全
性高袁不易被肠道吸收袁基本无残留袁毒性小袁不存在交
叉耐药性袁易降解袁对环境污染小袁同时还具有良好的
加工性咱猿暂 遥 郧葬蚤泽泽藻则 等报道了阿维拉霉素的生物合成
途径咱源 耀 远暂 袁郧葬遭则蚤藻造藻 等咱苑暂对相关基因进行克隆修饰袁获
得了阿维拉霉素衍生物遥 朱传合尧靳亮尧童应凯尧贺亚
南等则从菌种诱变和摇瓶发酵条件优化等方面来提高
菌株生产阿维拉霉素的能力咱愿 耀 员员暂 遥 本实验室咱员圆暂曾对
绿色产色链霉菌 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 及其远园 悦燥 酌 诱变突变
株 匀员缘 液体发酵过程中菌丝团发育分化周期做了初
步研究袁并对菌丝团发育分化过程与其次级代谢产物
之间的关系进行分析遥 在绿色产色链霉菌的菌落形
态尧斜面种子发育方面研究报道很少遥 本实验室在对
绿色产色链霉菌高产突变株 耘鄄圆员怨 的研究中发现袁其
菌落形态分化出现较大变化袁其种龄对发酵存在重大
的影响遥
粤灶早藻造 等咱员猿暂的研究表明袁菌丝形态分化和发育分
化过程中细胞凋亡的出现对抗生素的产生有一定影
响遥 本文通过分子荧光探针标记活细胞渊绿色冤和死
亡细胞渊红色冤袁对绿色产色链霉菌 耘鄄圆员怨 在固体基质
表面的发育分化周期进行研究袁总结菌落纵截面分化
发育和分生孢子形成规律袁首次在绿色产色链霉菌的
形态研究中发现初生菌丝中存在片段化的细胞凋亡现
象曰同时对斜面种龄对阿维拉霉素产量的影响进行比
较袁以为菌种工业应用提供理论指导遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员摇 菌种摇 杂贼则藻责贼燥皂赠糟藻泽 增蚤则蚤凿燥糟澡则燥皂燥早藻灶藻泽
悦郧酝悦悦源郾 员员员怨袁原始菌株购自中国微生物菌种保藏管理
委员会普通微生物中心遥 原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 经
远园悦燥 酌射线诱变后得突变菌株 匀员缘咱员圆暂 袁匀员缘 经原生质体
融合得到 耘鄄圆员怨渊具阿维拉霉素高产性状冤遥
员郾 员郾 圆摇 培养基摇 匀粤 培养基院员豫麦芽浸膏袁园郾 源豫酵母
浸出物袁园郾 源豫葡萄糖袁员皂皂燥造 辕 蕴 悦葬悦造圆袁责匀 苑郾 圆曰发酵培养
基院可溶性淀粉 圆园郾 园早 辕 蕴袁豆粕粉 圆园郾 园早 辕 蕴袁大豆蛋白胨
缘郾 园早 辕 蕴袁阅鄄木糖 苑郾 愿早 辕 蕴袁蕴鄄缬氨酸 圆郾 猿早 辕 蕴袁悦葬悦韵猿 园郾 缘早 辕蕴袁酝早杂韵源窑远匀圆韵 园郾 缘早 辕 蕴袁酝灶悦造圆 园郾 缘早 辕 蕴袁责匀 苑郾 圆 耀苑郾 源遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 孢子悬浮液的制备摇 用适量无菌水洗下斜面
孢子袁将该孢子悬浮液置于已灭菌并放有无菌玻璃珠
的三角瓶中袁充分振荡后用无菌脱脂棉过滤除去菌丝
片段袁得单孢子悬浮液咱员源暂 遥
员郾 圆郾 圆摇 固体菌种培养摇 将一定浓度的孢子悬浮液接
种于贴有玻璃纸的 匀粤培养基上使得最终孢子浓度为
员 伊 员园缘 个 辕平板袁圆愿益培养袁定时取样观察其形态遥
员郾 圆郾 猿摇 摇瓶发酵培养摇 将一定浓度的孢子菌悬液接
种于发酵培养基中袁使得最终孢子浓度为 员 伊 员园苑 个 辕
皂造袁圆愿益尧圆圆园则 辕 皂蚤灶振荡培养遥
员郾 圆郾 源摇 活细胞染色摇 将平板上的玻璃纸撕下固定于
载玻片上袁在玻璃纸上加入 杂再栽韵 怨 绿色荧光核酸染
料 渊 蕴陨灾耘 辕 阅耘粤阅 月葬糟鄄蕴蚤早澡贼 遭葬糟贼藻则蚤葬造 增蚤葬遭蚤造蚤贼赠 噪蚤贼袁 蕴鄄
源员员员怨圆曰 陨灶增蚤贼则燥早藻灶冤和 孕陨渊碘化丙啶冤等量混合的染料
员园园滋造袁混合均匀后在黑暗中避光 员缘皂蚤灶袁用荧光显微
镜在 源愿愿 和 缘远愿灶皂 的激发波长和 缘猿园 和 远猿园灶皂 的吸
收波长下进行观察遥 活细胞发出绿色荧光袁死细胞发
出红色荧光遥
员郾 圆郾 缘摇 样品扫描电镜 渊杂耘酝冤观察摇 将培养好的各菌
种连同培养基切成 园郾 猿糟皂 伊 园郾 猿糟皂 的正方形样品袁放
入 圆郾 缘豫的戊二醛溶液中 源益固定过夜曰倒掉固定液袁
用 园郾 员皂燥造 辕 蕴 的磷酸缓冲液渊责匀 苑郾 园冤漂洗样品 猿 次袁
每次 员缘皂蚤灶曰用 员豫的锇酸溶液固定样品 员郾 缘澡曰倒掉固
定液袁用 园郾 员皂燥造 辕 蕴袁 责匀 苑郾 园 的磷酸缓冲液漂洗样品 猿
次袁每次 员缘皂蚤灶曰用梯度浓度渊缘园豫 尧苑园豫 尧愿园豫 尧怨园豫和
怨缘豫 冤的乙醇溶液对样品进行脱水处理袁每种浓度处
理 员缘皂蚤灶袁再用 员园园豫乙醇处理 圆 次袁每次 圆园皂蚤灶曰用乙
醇与醋酸异戊酯的混合液 渊 灾 颐 灾 越 员 颐 员冤处理样品
猿园皂蚤灶袁再用纯醋酸异戊酯处理样品 员郾 缘澡袁临界点干
燥曰样品黏附在样品台上袁在 耘蚤噪燥陨月缘 型离子溅射仪中
喷镀 源 耀 缘皂蚤灶曰样品在荷兰 孕澡蚤噪责泽 公司的 载蕴猿园 型
耘酝耘杂渊环境扫描电镜冤中观察遥
员郾 圆郾 远摇 效价测定摇 采用 匀孕蕴悦 法遥 取一定量的发酵
苑远源
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
液袁用甲醇 猿苑益浸泡 圆澡 后离心取上清液袁经 园郾 圆圆滋皂
膜过滤后进行阿维拉霉素含量测定遥 液相条件院猿园益袁
波长 圆圆园灶皂袁色谱柱为 粤早蚤造藻灶贼 在燥则遭葬曾 杂月鄄悦员愿袁流速
员皂造 辕 皂蚤灶遥 流动相甲醇和水的比例为 远园颐 源园渊灾 辕 灾冤遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 菌株 耘鄄圆员怨 和原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 在 匀粤
固体基质表面发育分化规律的比较
链霉菌的发育周期大致包括孢子萌发出芽管尧形
成基内菌丝尧产生白色气生菌丝尧气生菌丝末端分化为
系列的单倍体孢子遥 本试验采用荧光标记技术对菌株
耘鄄圆员怨 在 匀粤培养基表面的发育分化过程进行详细研
究袁结果如图版 员渊见封三袁下同冤所示遥 第 员 阶段渊园 耀
员园澡冤院孢子萌发并形成初生菌丝遥 将一定浓度孢子悬
浮液接种于贴有玻璃纸的固体基质表面上袁大约 愿澡左
右孢子通过孢子萌发管开始萌发并形成初生菌丝渊图
版 员 原 葬袁愿澡冤袁员园澡左右初生菌丝出现细胞凋亡现象袁在
同一菌丝内出现了活菌丝片段和死亡菌丝片段交替排
列的现象袁称这种菌丝为杂色菌丝渊图版 员 原 遭 中箭头
所指袁员园澡冤遥 第 圆 阶段渊员园 耀 圆源澡冤院活性初生菌丝和杂
色菌丝呈放射状生长并出现结团形成菌落渊图版 员 原
糟袁圆圆澡冤遥 第 猿 阶段渊圆源 耀 猿源澡冤院初生菌丝中凋亡细胞
的自溶以及杂色菌丝中活菌丝片段快速生长发育遥 凋
亡细胞的自溶为具有生长活性的菌丝片段生长提供营
养条件袁使得此阶段中发育迟缓或杂色菌丝中具有活
性的菌丝片段开始快速生长发育遥 猿源澡 左右菌丝生长
发育达到最佳状态袁整个菌丝中未出现任何细胞凋亡
现象渊图版 员 原 凿袁猿源澡冤遥 第 源 阶段渊猿源 耀 缘园澡冤院基内菌
丝的第 圆 次凋亡遥 此次凋亡发生于菌落中心袁凋亡区
域逐渐扩大遥 猿远澡时菌丝团中心开始出现少量细胞凋
亡现象袁源愿澡 左右菌丝团中心细胞凋亡现象已相当显
著渊图版 员 原 藻袁源愿澡冤遥 第 缘 阶段渊缘园 耀 怨园澡冤院细胞凋亡
区域向外扩大的同时菌落中心凋亡区域中具有活性的
次生菌丝片段再次生长发育遥 怨园澡左右菌丝生长达到
最佳状态未出现任何细胞凋亡现象遥 第 远 阶段渊怨园 耀
员园远澡冤院菌落内发育成熟菌丝开始形成孢子丝遥 怨远澡 左
右出现直链孢子丝渊图版 员 原 早 中箭头所指袁怨远澡冤袁
员园远澡左右产生大量孢子袁具有活性的孢子进入下一个
发育分化循环遥
原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 在 匀粤 培养基表面发育
分化过程如图版 圆 所示袁可分为 缘 个阶段遥 第 员 阶段
渊园 耀 员园澡冤院孢子萌发遥 第 圆 阶段渊员园 耀 猿远澡冤院初生菌丝
呈放射状尧快速生长袁并结团形成单个菌落遥 第 猿 阶段
渊猿远 耀 源愿澡冤院菌落中心区域出现细胞凋亡现象渊图版 圆
原 糟袁源愿澡中红色部分冤遥 第 源 阶段渊源愿 耀 愿园澡冤院菌丝团
内细胞凋亡区域扩大的同时袁凋亡区域中活的菌丝片
段快速生长发育袁愿园澡 菌落内活菌丝率达到较高值遥
第 缘 阶段渊愿园 耀 怨圆澡冤院孢子的产生遥 愿愿澡左右发育分化
形成螺旋形孢子丝渊图版 圆 原 枣 箭头所指袁愿愿澡冤袁怨圆澡 左
右孢子丝断裂形成孢子遥 具有活性的孢子进入下一个
发育分化循环遥
与原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 菌丝发育分化过程相
比袁融合菌株 耘鄄圆员怨 菌丝发育分化过程发生了较为显
著的变化遥 在固体基质纵切面上的菌体发育分化过程
中原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 的整个发育分化周期可分
为 缘 个阶段袁融合菌株 耘鄄圆员怨 则包含 远 个阶段袁比
悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 多 员 个菌丝片段凋亡的阶段并且在孢
子萌发阶段形成杂色菌丝遥
摇 摇 对原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 和融合菌株 耘鄄圆员怨 在
匀粤培养基上培养后进行形态观察并通过环境扫描电
镜对其孢子丝和分生孢子进行观察发现袁与原始菌株
悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 相比袁耘鄄圆员怨 菌株无论是菌落尧孢子丝
还是分生孢子形态都发生了较大的变化袁具体如图 猿尧
图 源 和表 员 所示遥
表 员摇 原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 和 耘鄄圆员怨 菌落尧气生菌丝和分生孢子形态比较
栽葬遭造藻 员摇 悦燥皂责葬则蚤泽燥灶 燥灶 皂燥则责澡燥造燥早赠 燥枣 糟燥造燥灶赠袁 澡赠责澡葬藻 葬灶凿 糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻泽 遭藻贼憎藻藻灶 燥则蚤早蚤灶葬造
泽贼则葬蚤灶 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 葬灶凿 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶 耘鄄圆员怨
形态
皂燥则责澡燥造燥早赠
原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨
燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨
融合菌株 耘鄄圆员怨
皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶 耘鄄圆员怨
菌落 糟燥造燥灶赠 表面呈致密的丝绒状袁饱满袁菌落较大袁菌丝体初为白色袁后为灰绿色袁微有褶皱
干燥尧不透明袁菌落较小袁菌落中心有脐状凸起尧凸起部分
略带灰色袁边缘为丝状
孢子丝 泽责燥则藻 澡赠责澡葬藻 有隔膜袁断裂袁表面褶皱袁呈松螺旋状 有隔膜袁断裂袁表面光滑袁呈直线型
孢子 糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻泽 孢子呈椭圆形袁直径约 园郾 远滋皂袁表面带刺 孢子呈圆柱形袁直径约 员滋皂袁表面光滑袁无刺突
愿远源
摇 猿 期 绿色产色链霉菌 耘鄄圆员怨 菌落的形态分化
图 猿摇 原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 菌落及分生孢子的形态特征渊 伊 愿园园园冤
云蚤早援 猿摇 酝燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 糟燥造燥灶赠袁 糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻泽 燥枣 燥则蚤早蚤灶葬造 泽贼则葬蚤灶 悦郧酝悦悦 源郾 员员员怨
图 源摇 融合菌株 耘鄄圆员怨 的菌落和分生孢子形态特征渊 伊 愿园园园冤
云蚤早援 源摇 酝燥则责澡燥造燥早蚤糟葬造 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤泽贼蚤糟泽 燥枣 糟燥造燥灶赠袁 糟燥灶蚤凿蚤燥责澡燥则藻泽 燥枣 皂怎贼葬灶贼 泽贼则葬蚤灶 耘鄄圆员怨
圆郾 圆摇 斜面培养时间对阿维拉霉素产量的影响
斜面种龄对菌株发酵起着关键作用遥 不同斜面培
养时间对孢子形成以及孢子活性有较大影响遥 将不同
培养时间斜面上的菌体用生理盐水洗下接种于摇瓶
中袁圆愿益尧圆圆园则 辕 皂蚤灶震动培养 怨远澡后测定发酵液中阿维
拉霉素的产量遥 结果如图 缘 所示袁斜面种龄为 员园远澡
时袁阿维拉霉素的产量最高袁达到 员圆园园皂早 辕 蕴遥 当种龄
为 苑圆尧愿源尧怨远 和 员源愿澡时袁阿维拉霉素产量分别为 源怨圆 尧
远源缘尧苑怨愿 和 员园圆员皂早 辕 蕴袁与 员园远澡有显著差异遥 由图版 员
原 凿尧藻可知 苑圆尧愿源澡时袁耘鄄圆员怨 还未形成孢子袁整个菌落
正处于细胞凋亡和活菌丝片段生长发育的同时进行遥
怨远澡时袁耘鄄圆员怨 形成孢子丝袁孢子丝尚未断裂形成孢子遥
苑圆尧愿源尧怨远澡时袁菌体均未产生孢子袁不适于发酵生产阿
维拉霉素遥 而 员园远澡 时袁耘鄄圆员怨 产生大量活性孢子袁此
时孢子数量多袁活性高袁发酵能力强遥 员源愿澡 时袁斜面培
养时间较长袁孢子活性有所衰退袁不利于发酵遥 因此菌
种斜面种龄为 员园远澡较好遥
猿摇 讨论
一般认为链霉菌的发育分化循环是从基内菌丝到
气生菌丝的发育过程院即孢子接种到固体培养基表面
图 缘摇 斜面培养时间对阿维拉
霉素产量的影响
云蚤早援 缘摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 葬早葬则泽造葬灶贼 糟怎造贼怎则藻 贼蚤皂藻
燥灶 贼澡藻 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 葬增蚤造葬皂赠糟蚤灶
后袁基内菌丝生长发育袁出现气生菌丝袁气生菌丝通过
产生隔膜将菌丝分割成多个单核的隔室孢子丝袁孢子
丝分裂形成孢子咱员缘暂 遥 粤灶早藻造咱员缘暂 尧酝葬则蚤泽燥造等咱员远暂采用激光
共聚焦显微镜首次研究报道了抗生链霉菌菌落发育过
程中实际存在菌丝的二级凋亡和二级生长现象袁并提
出了抗生链霉菌发育循环周期新模型遥 菌株
悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 经过远园悦燥 酌诱变处理袁再经基因组重排
怨远源
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员圆袁圆远渊猿冤院园源远远 耀 园源苑园
育种所得高产菌株 耘鄄圆员怨 不仅菌落尧孢子形态发生重
大变化袁且菌落变为白色袁分生孢子表面光滑袁呈圆柱
形袁无刺突袁直径约为 员滋皂袁这与文献报道中高产突变
株 匀员缘 的表型类似咱员员暂 曰而且整个发育分化过程也发生
较大变化袁比原始菌株 悦郧酝悦悦源郾 员员员怨 多 员 个菌丝片
段凋亡的阶段并且在孢子萌发阶段形成杂色菌丝袁但
这些特征与高产性状的直接关联性还有待进一步研
究遥
斜面种龄对于发酵起着关键作用遥 对菌体发育分
化周期的研究将有助于判断斜面种子培养的最佳培养
时间遥 金英燕等咱员圆暂研究指出袁阿维拉霉素产生菌 匀员缘
在高氏 陨 号培养基上 圆愿益培养袁培养时间为 苑圆澡遥 靳
亮咱员苑暂指出卑霉素产生菌 栽晕鄄圆苑 采用高氏 陨 号培养基袁
圆愿益培养袁斜面种子生长 愿源澡 更有利于液体发酵咱员圆暂 遥
赵硕珍等咱员愿暂研究指出袁阿维拉霉素高产菌株 粤增造鄄员园源
在固体培养基渊包含玉米淀粉尧运晕韵猿尧运圆匀孕韵源尧悦葬悦造圆
和琼脂冤上袁圆愿益培养 员源愿澡遥 本研究表明袁菌株 耘鄄圆员怨
分生孢子成熟时间约 员园远澡袁菌落孢子呈粉状袁数量多袁
活性高袁用于摇瓶发酵生产阿维拉霉素的产量较高袁斜
面种子培养时间选定在 员园远澡 左右遥 这说明同种的不
同菌株由于遗传背景差异袁其生长发育周期也有所不
同袁因此对突变株开展发育周期研究有利于试验菌种
性能的发挥遥 员园远 和 员源愿澡 之间是否存在最适斜面种
子培养时间还需进一步验证遥
融合菌株 耘鄄圆员怨 孢子萌发阶段出现杂色菌丝及二
级生长袁因此推测绿色产色链霉菌在液体培养时菌丝
团形成及固体培养时菌落发育分化过程中袁杂色菌丝
及其二级生长可能是与其产量性状存在一定的关联
性咱员圆暂 遥 对种子质量的判断多基于简单肉眼观察与发
酵试验袁本研究表明采用荧光标记技术进行形态分化
研究有利于精细的观察和确切的判断遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 杨红文袁程彦伟袁张敬虎援 链霉菌次生代谢和形态分化调控研究
进展咱允暂 援绵阳师范学院学报袁圆园园怨袁圆愿渊员员冤院远猿 原 远愿
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产菌株的研究咱允暂 援微生物学通报袁圆园园苑袁猿源渊员冤院猿怨 原 源圆
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咱员苑暂摇 靳摇 亮援卑霉素产生菌的菌种选育与发酵工艺研究咱阅暂援 泰安院
山东农业大学袁圆园园远
咱员愿暂摇 赵硕珍袁张云峰袁姬胜利袁胡江林袁王永星援 阿维拉霉素高产菌株
的选育咱允暂 援中国生化药物杂志袁圆园园愿袁圆怨渊源冤院圆缘远 原 圆缘怨
渊责任编辑摇 王媛媛冤
园苑源