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Preparation and in-vitro Antioxidant Activity of Proteins from the Larvae of Black Soldier Fly, Hermitia Illucens (Diptera: Stratiomyidae)

黑水虻幼虫蛋白质的制备及体外抗氧化活性


本文主要研究黑水虻幼虫蛋白质的制备及其体外抗氧化活性.以黑水虻幼虫为原料,采用碱提酸沉法提取黑水虻幼虫蛋白质,并于等电点沉淀,沉淀复溶后再浓缩、透析、冻干.分别测定了其总还原力,超氧阴离子自由基清除活性、羟基自由基清除活性、DPPH自由基清除活性、ABTS自由基清除活性、金属离子螯合能力及脂质体系中抗氧化能力,并将其体外抗氧化能力与维生素C(测定金属离子螯合能力时与EDTA)和卵清白蛋白进行比较.结果显示:BSFLP的等电点在4.8左右,并且该法所提蛋白纯度较高,表明利用碱提酸沉法对黑水虻幼虫进行蛋白的提取的方法可行.BSFLP的总还原力约是VC的0.013倍,是OVA的1.319倍;BSFLP的超氧阴离子自由基清除活性强于OVA,而弱于VC;其清除羟基自由基、清除DPPH自由基、清除ABTS自由基、螯合亚铁离子、亚油酸体系中抑制过氧化的IC50分别为2.577、3.965、0.228、0.876、5.050 mg ·mL-1,也均介于VC(或EDTA)和OVA之间,说明BSFLP具有较高的体外抗氧化活性.本文为黑水虻的进一步研究与综合利用及抗氧化功能蛋白食品的研发提供了一定的依据.


全 文 :摇 核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊员员冤院圆园园员 耀 圆园园怨允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄员圆鄄员远摇 接受日期院圆园员源鄄园远鄄圆愿
基金项目院西北农林科技大学科研合作项目渊圆园员猿 原 员怨冤
作者简介院许彦腾袁男袁主要从事食品营养与安全研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 曾怎赠葬灶贼藻灶早愿怨岳 早皂葬蚤造援 糟燥皂
通讯作者院张建新袁男袁教授袁主要从事食品营养与安全研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 扎澡葬灶早躁曾缘怨岳 枣燥曾皂葬蚤造援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤员员鄄圆园园员鄄园怨
黑水虻幼虫蛋白质的制备及体外抗氧化活性
许彦腾摇 张建新摇 宋真真摇 薛金丽摇 孙摇 勇
渊西北农林科技大学食品科学与工程学院袁陕西 杨凌摇 苑员圆员园园冤
摘摇 要院本文主要研究黑水虻幼虫蛋白质的制备及其体外抗氧化活性遥 以黑水虻幼虫为原料袁采用碱提
酸沉法提取黑水虻幼虫蛋白质袁并于等电点沉淀袁沉淀复溶后再浓缩尧透析尧冻干遥 分别测定了其总还原
力袁超氧阴离子自由基清除活性尧羟基自由基清除活性尧阅孕孕匀自由基清除活性尧粤月栽杂 自由基清除活性尧
金属离子螯合能力及脂质体系中抗氧化能力袁并将其体外抗氧化能力与维生素 悦渊测定金属离子螯合能
力时与 耘阅栽粤冤和卵清白蛋白进行比较遥 结果显示院月杂云蕴孕 的等电点在 源郾 愿 左右袁并且该法所提蛋白纯
度较高袁表明利用碱提酸沉法对黑水虻幼虫进行蛋白的提取的方法可行遥 月杂云蕴孕 的总还原力约是 灾悦
的 园郾 园员猿 倍袁是 韵灾粤的 员郾 猿员怨 倍曰月杂云蕴孕的超氧阴离子自由基清除活性强于 韵灾粤袁而弱于 灾悦曰其清除羟
基自由基尧清除 阅孕孕匀自由基尧清除 粤月栽杂自由基尧螯合亚铁离子尧亚油酸体系中抑制过氧化的 陨悦缘园分别
为 圆郾 缘苑苑尧猿郾 怨远缘尧园郾 圆圆愿尧园郾 愿苑远尧缘郾 园缘园 皂早窑皂蕴 原员袁也均介于 灾悦渊或 耘阅栽粤冤和 韵灾粤之间袁说明 月杂云蕴孕具有
较高的体外抗氧化活性遥 本文为黑水虻的进一步研究与综合利用及抗氧化功能蛋白食品的研发提供了
一定的依据遥
关键词院黑水虻曰 幼虫曰 蛋白质提取曰 碱提曰 酸沉曰 体外抗氧化
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 员员援 圆园园员
摇 摇 黑水虻渊匀藻则皂蚤贼蚤葬 蚤造造怎糟藻灶泽冤袁英文名为 月造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则
枣造赠袁学名为亮斑扁角水虻袁是双翅目渊凿蚤责贼藻则葬冤水虻科
渊泽贼则葬贼蚤燥皂赠蚤凿葬藻冤的一种昆虫袁陆生袁营腐食性生活袁在我
国主要分布于海南尧广东尧广西尧福建尧云南尧四川尧河北
及北京等地区咱员 原 圆暂 遥 通过建立黑水虻生态处理系统袁
可以将污染人类生存环境的有机废弃物高效尧安全地
转化为高附加值的昆虫蛋白咱猿 原 源暂 袁实现环境与经济可
持续协调发展遥 将天然蛋白质作为抗氧化剂的研究越
来越多袁但这些研究还主要集中在谷类尧野生植物种
子尧牛奶尧豆类尧水生动植物等咱缘 原 员员暂 遥 有关世界储量巨
大的昆虫蛋白质的抗氧化研究还比较少遥 目前有关黑
水虻的研究也主要局限于环境保护尧肥料与饲料的生
产等方面咱猿袁员圆 原 员猿暂 袁近年才有部分学者在黑水虻抗菌物
质咱员源 原 员苑暂与生物柴油咱员愿 原 员怨暂领域进行了初步探索袁而对
黑水虻幼虫蛋白质 渊 遭造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则 枣造赠 造葬则增葬 责则燥贼藻蚤灶泽袁
月杂云蕴孕冤制备与抗氧化活性的研究鲜见报道遥 在前期
研究咱猿源暂的基础上采用碱提酸沉法制备 月杂云蕴孕袁分别从
总还原力袁超氧阴离子自由基尧羟基自由基尧阅孕孕匀 自
由基及 粤月栽杂自由基清除活性袁金属离子螯合能力及
脂质体系中抗氧化能力共 苑 个方面对 月杂云蕴孕 进行体
外抗氧化活性的测定袁皆在为黑水虻昆虫资源的综合
利用及 月杂云蕴孕的深入研究提供一定的数据参考遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料与试剂
黑水虻幼虫院西安洁姆环保科技有限公司提供曰
月悦粤蛋白定量试剂盒院北京康为世纪生物科技有限公
司曰卵清白蛋白 渊 燥增葬造遭怎皂蚤灶袁 韵灾粤冤 渊蛋白质含量逸
愿园郾 园豫 冤院上海源叶生物科技有限公司曰员袁员鄄二苯基鄄圆鄄
苦基肼自由基渊阅孕孕匀冤渊纯度 跃 怨苑豫 冤院梯希爱渊上海冤
化成工业发展有限公司渊日本 栽悦陨 中国上海分公司冤曰
圆袁圆忆鄄连氮基鄄双鄄渊 猿鄄乙基苯并二氢噻唑啉鄄远鄄磺酸冤
渊粤月栽杂冤渊纯度 跃 怨愿豫 冤院上海如吉生物科技发展有限
员园园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
公司曰猿鄄渊圆鄄吡啶基冤鄄缘袁远鄄二苯基鄄员袁圆袁源鄄三嗪鄄源忆袁源义鄄二
磺酸钠盐渊 枣藻则则燥扎蚤灶藻冤 渊纯度逸怨苑豫冤院上海晶纯生化科
技股份有限公司曰液体十八碳鄄怨袁员圆鄄二烯酸渊亚油酸冤
渊纯度逸怨愿豫 冤院上海伊卡生物技术有限公司曰圆鄄硫代巴
比妥酸渊栽月粤冤渊纯度逸怨愿郾 缘豫 冤院 国药集团化学试剂有
限公司曰石油醚渊沸程院猿园 耀 远园益冤尧氢氧化钠尧抗坏血
酸渊灾糟冤尧焦性没食子酸渊邻苯三酚冤尧三羟甲基氨基甲
烷渊栽则蚤泽冤尧浓盐酸尧乙二胺四乙酸渊耘阅栽粤冤尧乙二胺四乙
酸二钠渊耘阅栽粤鄄圆晕葬冤尧水杨酸尧无水乙醇尧硫酸亚铁尧
猿园豫过氧化氢尧过硫酸钾尧甲醇尧铁氰化钾尧磷酸二氢
钠尧磷酸氢二钠尧三氯乙酸渊栽悦粤冤尧三氯化铁均为分析
纯遥
员郾 圆摇 仪器与设备
电热鼓风干燥箱袁员园员鄄圆 型渊北京科伟永兴仪器有
限公司冤曰高速多功能粉碎机袁允孕鄄员园园粤鄄圆 型渊上海市久
品工贸有限公司冤曰分析天平袁云粤圆园园源 型渊北京赛多利
斯仪器系统有限公司冤曰恒温磁力加热搅拌器袁匀允鄄猿 型
渊常州国华电器有限公司冤曰电热恒温水浴锅袁匀匀鄄圆 型
渊北京科伟永兴仪器有限公司冤曰自动电位滴定仪袁
在阅允鄄源粤型渊上海精密科学仪器有限公司冤曰低速离心
机袁杂悦鄄猿远员园 型渊安徽中科中佳科学仪器有限公司冤曰旋
转蒸发器袁砸圆缘园 型渊上海申生科技有限公司冤曰循环水
式多用真空泵袁杂匀月鄄芋型渊郑州长城科工贸有限公
司冤曰 原 远园益超低温冰箱渊杭州市中科生命科技股份有
限公司冤曰冷冻干燥机袁蕴郧允鄄员园园 型渊北京四环科学仪器
厂冤曰紫外 原 可见分光光度计袁哉灾鄄圆缘缘园渊日本岛津公
司冤曰数控超声波清洗器袁运匝鄄圆缘园阅耘 型渊昆山市超声仪
器有限公司冤遥
员郾 猿摇 方法
员郾 猿郾 员摇 月杂云蕴孕粗提液的制备摇 将黑水虻幼虫 源园 益烘
干至恒重袁粉碎袁源园 益索氏抽提 员圆 澡脱脂袁室温风干至
恒重袁过 员园园 目筛袁得脱脂粉遥 取 员园早脱脂粉袁加入 圆圆园
皂蕴的 圆郾 源源 早窑员园园皂蕴 原员 晕葬韵匀 溶液中袁于 缘猿 益恒温搅
拌提取 圆 澡遥 提取液经 源 愿园园 则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁留取
上清液袁得 月杂云蕴孕粗提液遥 根据之前试验结果可知该
粗提液中蛋白质含量为 圆猿郾 圆员 皂早窑皂蕴 原员遥
员郾 猿郾 圆摇 月杂云蕴孕等电点的确定摇 用 员 皂燥造窑蕴 原员 匀悦造溶液
将蛋白质粗提液调节至不同 责匀值的酸性溶液袁源 益静
置沉淀 圆 澡袁之后再经过 源 愿园园 则窑皂蚤灶 原员离心 员园 皂蚤灶袁取
上清液袁稀释袁采用 月悦粤法测定上清液中蛋白质含量遥
先将 月杂云蕴孕粗提液的 责匀 值分别调至 圆郾 缘 耀 远郾 园袁梯度
为 园郾 缘 个单位袁计算其沉淀率曰再将 月杂云蕴孕 粗提液 责匀
值分别调至 源郾 远 耀 缘郾 源袁梯度为 园郾 员 个单位袁计算其沉
淀率遥
蛋白质沉淀率 越 渊粗提液中蛋白质含量 原沉淀后
上清液中蛋白质含量冤 辕粗提液中蛋白质含量 伊员园园豫
员郾 猿郾 猿摇 月杂云蕴孕固体的制备摇 将酸沉后的沉淀用适量
蒸馏水复溶袁同时用 员 皂燥造窑蕴 原员 晕葬韵匀 调节 责匀 值至中
性袁得蛋白质盐溶液遥 将蛋白质盐溶液用已经处理好
的透析袋渊猿源 皂皂袁截留分子量 愿 园园园 耀 员源 园园园冤于 源
益袁用 源园 倍体积的蒸馏水进行透析遥 前 员圆 澡 内袁每隔
猿 澡换 员 次水袁之后每隔 员圆 澡 换 员 次水袁共透析 苑圆 澡遥
透析液于 缘园 益袁员园园 则窑皂蚤灶 原员条件下旋转蒸发 远 澡进行
浓缩遥 将浓缩液于 原远园 益冷冻过夜袁之后冷冻干燥 猿园
澡渊真空度 缘 孕葬冤袁得 月杂云蕴孕 固体遥 将该蛋白质用适量
蒸馏水溶解袁于 圆苑缘 耀 苑园园 灶皂 进行紫外 原可见光谱扫
描遥
员郾 源摇 月杂云蕴孕体外抗氧化活性的测定
分别配置一系列不同浓度的 月杂云蕴孕溶液袁采用 灾糟
渊测定金属离子螯合能力时采用 耘阅栽粤冤尧韵灾粤 作为阳
性对照遥
员郾 源郾 员摇 总还原力的测定摇 采用铁氰化钾法测定总还
原力咱圆园暂 遥 分别吸取样液尧园郾 圆 皂燥造窑蕴 原员磷酸盐缓冲液
渊责匀值 远郾 远冤尧员 早窑员园园皂蕴 原员铁氰化钾溶液各 员 皂蕴于具
塞比色管中袁振荡均匀袁缘园 益恒温水浴 圆园 皂蚤灶袁之后加
入 员 皂蕴 的 员园 早窑员园园皂蕴 原员三氯乙酸袁摇匀袁源愿园园 则窑
皂蚤灶 原员离心 缘 皂蚤灶遥 取 圆 皂蕴 上清液 与 圆 皂蕴 蒸馏水混
匀袁并加入的 源园园 滋蕴 的 园郾 员 早窑员园园皂蕴 原员三氯化铁溶
液袁振荡均匀后袁于 苑园园 灶皂处测定吸光度 粤载遥 用蒸馏
水代替铁氰化钾溶液做样品对照组渊粤载园 冤遥 则总还原
力可以表示为院粤苑园园 越 粤载 原 粤载园袁差值越大代表总还原
力越强遥
员郾 源郾 圆摇 超氧阴离子自由基清除活性的测定
采用邻苯三酚自氧化法测定超氧阴离子自由基清
除活性咱圆园 原 圆员暂 遥 分别吸取 员 皂蕴 样液与 猿 皂蕴 缘园
皂皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽鄄匀悦造 缓冲液渊含 园郾 员 皂皂燥造窑蕴 原员 耘阅栽粤鄄
圆晕葬袁责匀值 愿郾 圆冤于比色管中袁圆缘 益恒温水浴 圆缘 皂蚤灶遥
吸取 缘园 滋蕴 缘园 皂皂燥造窑蕴 原员邻苯三酚溶液渊员园 皂皂燥造窑蕴 原员
匀悦造溶液配置冤于各比色管中袁混匀袁圆缘 益反应 源 皂蚤灶袁
之后吸取 员 皂蕴的 员 皂燥造窑蕴 原员 匀悦造溶液于各比色管中终
止反应遥 用 栽则蚤泽鄄匀悦造缓冲液调零袁在 猿圆缘 灶皂处测定吸
光度 粤载袁模型对照组渊粤园冤用蒸馏水代替蛋白质溶液袁
再用 员园 皂皂燥造窑蕴 原员 匀悦造 代替邻苯三酚溶液作为样品对
照组渊粤载园冤遥
超氧阴离子自由基清除率 越 咱粤园 原 渊粤载 原 粤载园冤暂 辕粤园 伊 员园园豫 渊员冤员郾 源郾 猿摇 羟基自由基清除活性的测定摇 采用 云藻灶贼燥灶 法
测定羟基自由基清除活性咱圆圆暂 遥 依次吸取样液尧怨 皂皂燥造
圆园园圆
摇 员员 期 黑水虻幼虫蛋白质的制备及体外抗氧化活性
窑蕴 原员水杨酸 原乙醇溶液尧怨 皂皂燥造窑蕴 原员硫酸亚铁溶液与
愿郾 愿 皂皂燥造窑蕴 原员过氧化氢溶液各 员 皂蕴 于比色管中袁猿苑
益恒温水浴 猿园 皂蚤灶袁源 愿园园 则窑皂蚤灶 原员离心 缘 皂蚤灶袁取上清
液袁用蒸馏水调零袁于 缘员园 灶皂 处测定吸光度 粤载袁模型
对照组渊粤园冤用蒸馏水代替蛋白质溶液袁再用蒸馏水代
替过氧化氢溶液作为样品对照组渊粤载园 冤遥 羟基自由基
清除率的计算方法同公式渊员冤遥
员郾 源郾 源摇 阅孕孕匀 自由基清除活性的测定 摇 参照崔莉
等咱圆猿暂的方法测定 阅孕孕匀 自由基清除活性遥 分别吸取
员 皂蕴样液与 圆 皂蕴的 园郾 员 皂皂燥造窑蕴 原员 阅孕孕匀鄄怨缘豫乙醇溶
液于比色管中袁混匀后于 圆缘 益避光反应 猿园 皂蚤灶袁源愿园园
则窑皂蚤灶 原员离心 缘 皂蚤灶袁取上清液遥 用 怨缘豫乙醇调零袁在
缘员苑 灶皂 处测定吸光度 粤载袁模型对照组渊粤园冤用蒸馏水
代替蛋白质溶液袁用 怨缘豫乙醇代替 阅孕孕匀鄄怨缘豫乙醇溶
液作为样品对照组渊粤载园 冤遥 阅孕孕匀 自由基清除率的计
算方法同公式渊员冤遥
员郾 源郾 缘 摇 粤月栽杂 自由基清除活性的测定 摇 参照
陨灶贼葬则葬泽蚤则蚤泽葬憎葬贼等咱圆源暂的方法测定 粤月栽杂 自由基清除活
性遥 将 员源郾 愿 皂皂燥造窑蕴 原员 粤月栽杂 溶液与 缘郾 圆 皂皂燥造窑蕴 原员过
硫酸钾溶液等体积混合袁于黑暗环境中 圆缘 益反应过
夜袁获得母液遥 吸取 员 皂蕴母液袁用 缘园 皂蕴甲醇稀释袁取
在 苑猿源 灶皂处吸光度为 员郾 员 依 园郾 园圆 的溶液作 粤月栽杂 的
工作液遥 分别吸取 员 皂蕴样液与 猿 皂蕴 粤月栽杂 工作液于
比色管中袁混匀袁于 圆缘 益 避光反应 员园 皂蚤灶袁 源 愿园园
则窑皂蚤灶 原员离心 缘 皂蚤灶袁于 苑猿源灶皂 处测定上清液吸光度
粤载遥 模型对照组渊粤园冤用蒸馏水代替蛋白质溶液袁用甲
醇代替 粤月栽杂工作液作为样品对照组渊粤载园冤遥 粤月栽杂 自
由基清除率的计算方法同公式渊员冤遥
员郾 源郾 远摇 金属离子螯合能力的测定摇 采用亚铁离子螯
合法测定金属离子螯合能力咱圆源 原 圆缘暂 遥 分别吸取 员 皂蕴样
液尧缘园滋蕴的 圆 皂皂燥造窑蕴 原员硫酸亚铁溶液尧圆园园 滋蕴 的 缘
皂皂燥造窑蕴 原员 云藻则则燥扎蚤灶藻 溶液及 猿 皂蕴 蒸馏水于比色管中袁
混匀袁圆缘 益反应 员园 皂蚤灶袁于 缘远圆 灶皂处测定吸光度 粤载遥
模型对照组渊粤园冤用蒸馏水代替蛋白质溶液袁用蒸馏水
代替硫酸亚铁溶液作为样品对照组渊粤载园 冤遥 阳性对照
用 耘阅栽粤 代替 灾糟遥 亚铁离子螯合率的计算方法同公
式渊员冤遥
员郾 源郾 苑摇 脂质体系中抗氧化能力的测定 摇 参照 再怎
等咱圆远暂的方法测定脂质体系抗氧化能力遥 亚油酸分散
体系制备渊造蚤灶燥造藻蚤糟葬糟蚤凿 凿蚤泽责藻则泽蚤燥灶 泽赠泽贼藻皂袁蕴阅杂冤院 缘园园 滋蕴
亚油酸溶于 猿园 皂蕴 园郾 圆 皂燥造窑蕴 原员的磷酸盐缓冲液渊责匀
值为 苑冤袁于超声波清洗器中超声处理 员园 皂蚤灶得到均匀
的亚油酸分散液袁冰浴保存备用遥
栽悦粤鄄栽月粤鄄匀悦造溶液制备院员缘 早 栽悦粤袁园郾 猿愿 早 栽月粤袁
圆郾 员 皂蕴浓盐酸袁依次溶于 员园园 皂蕴水中遥
于各比色管中依次加入样液袁 蕴阅杂 与 园郾 源
皂皂燥造窑蕴 原员硫酸亚铁溶液各 员 皂蕴袁混匀袁避光 猿苑 益水浴
圆郾 缘 澡袁再加入 圆 皂蕴 栽悦粤鄄栽月粤鄄匀悦造袁沸水浴 员缘 皂蚤灶袁迅
速冷却袁源 愿园园 则窑皂蚤灶 原员离心 缘 皂蚤灶袁上清液于 缘猿圆 灶皂处
测吸光度 粤载遥 模型对照组渊粤园冤用蒸馏水代替蛋白质
溶液袁再用 栽悦粤 鄄匀悦造 代替 栽悦粤鄄栽月粤鄄匀悦造 作为样品对
照组渊粤载园冤遥 亚油酸过氧化抑制率的计算方法同公式渊员冤遥
员郾 源郾 愿摇 数据分析摇 所有试验均重复 猿 次袁结果数据以
野平均值 依标准偏差渊軃曾 依 泽冤冶的形式表示遥 采用软件
韵则蚤早蚤灶 苑郾 缘 进行数据处理和图形绘制遥 陨悦缘园表示所测
样品对各种自由基的清除率或过氧化的抑制率达到
缘园豫时所需最低有效浓度咱圆缘暂 遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 月杂云蕴孕等电点
由图 员 原 粤可知袁月杂云蕴孕沉淀率随着 责匀值的增加
逐步上升袁责匀值在 缘郾 园 左右时袁月杂云蕴孕沉淀率最大袁之
后急剧下降遥 由图 员 原 月 可知袁责匀 值为 源郾 愿 时袁月杂云蕴孕
具有最大沉淀率袁可初步推断 月杂云蕴孕 的等电点在 源郾 愿
附近袁采用碱提酸沉法提取 月杂云蕴孕 时袁将 责匀 值调至
源郾 愿 进行沉淀即可遥
圆郾 圆摇 月杂云蕴孕紫外 原可见光谱扫描
由图 圆 可知袁月杂云蕴孕溶液仅在 圆愿缘 灶皂处有最大吸
收峰袁基本符合蛋白质溶液在 圆愿园 灶皂附近有最大吸收
峰的研究报道袁说明所提蛋白质杂质含量较低尧纯度较
高袁可以用来进行下一步研究遥
圆郾 猿摇 月杂云蕴孕体外抗氧化活性
圆郾 猿郾 员摇 总还原力摇 由图 猿 可知袁月杂云蕴孕尧灾糟和 韵灾粤均
具有一定的还原力袁且随着质量浓度的增加呈逐渐上
升趋势遥 其中 灾糟的质量浓度与其在 苑园园 灶皂处的吸光
度呈良好线性关系袁线性拟合方程为 赠 越 员猿郾 远员曾 垣
园郾 员园员远渊砸圆 越 园郾 怨怨怨苑冤曰对 月杂云蕴孕 和 韵灾粤 的质量浓度
与吸光度则进行二次模型拟合袁拟合方程分别为院
月杂云蕴孕 赠 越 原 园郾 园园苑愿曾圆 垣 园郾 圆员源苑曾 垣 园郾 员员缘圆 渊 砸圆 越
园郾 怨怨怨愿冤袁韵灾粤 赠 越 原 园郾 园园猿苑曾圆 垣 园郾 员缘愿怨曾 垣 园郾 员园远猿渊砸圆
越 园郾 怨怨怨苑冤遥 通过拟合方程分别计算出各样品在 粤苑园园
越 员 时的质量浓度院月杂云蕴孕 缘郾 园源远 皂早窑皂蕴 原员尧灾糟 园郾 园远远
皂早窑皂蕴 原员尧韵灾粤 远郾 远缘远 皂早窑皂蕴 原员遥 猿 种样品的总还原能
力大小依次为院灾糟 跃 月杂云蕴孕 跃 韵灾粤袁其中 月杂云蕴孕的总还
原能力约是 灾糟 的 园郾 园员猿 倍袁是 韵灾粤 的 员郾 猿员怨 倍遥 综
上袁月杂云蕴孕具有良好的总还原能力遥
猿园园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 员摇 不同 责匀值时 月杂云蕴孕沉淀率
云蚤早援 员摇 杂藻凿蚤皂藻灶贼葬贼蚤燥灶 则葬贼藻 燥枣 月杂云蕴孕 葬贼 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责匀 增葬造怎藻泽
图 圆摇 月杂云蕴孕溶液紫外 原可见光谱扫描图
云蚤早援 圆摇 哉灾鄄增蚤泽蚤遭造藻 泽责藻糟贼则葬 泽糟葬灶 燥枣 月杂云蕴孕 泽燥造怎贼蚤燥灶
圆郾 猿郾 圆摇 超氧阴离子自由基清除活性 摇 由图 源 可知袁
月杂云蕴孕尧灾糟尧韵灾粤 均具有一定的超氧阴离子自由基清
除活性遥 其中 灾糟随着质量浓度的增加超氧阴离子自
由基清除率逐渐上升袁在质量浓度仅有 园郾 园缘 皂早窑皂蕴 原员
时袁清除率就达到了 源员郾 园员豫 曰月杂云蕴孕 在质量浓度为
员 皂早窑皂蕴 原员 时袁 超氧阴离子自由基清除 率 达 到
猿园郾 缘圆豫 袁之后清除率随着质量浓度的增加基本保持不
变曰韵灾粤的超氧阴离子自由基清除率先随着其质量浓
度的增加而缓慢上升袁在质量浓度达到 愿 皂早窑皂蕴 原员时袁
清除率基本达到最大值渊员苑郾 苑怨豫 冤遥 因此袁猿 种样品的
超氧阴离子自由基清除活性大小依次为院灾糟 跃 月杂云蕴孕
跃 韵灾粤袁月杂云蕴孕的超氧阴离子自由基清除活性虽远不
及 灾糟袁但仍比 韵灾粤的活性高很多遥
圆郾 猿郾 猿摇 羟基自由基清除活性 摇 由图 缘 可知袁月杂云蕴孕尧
灾糟尧韵灾粤均表现出一定的羟基自由基清除活性遥 其中
月杂云蕴孕与 灾糟的羟基自由基清除率随着质量浓度的增
加而逐渐上升曰韵灾粤则随着质量浓度的增加先缓慢上
升袁在质量浓度达到 愿 皂早窑皂蕴 原员后趋于平缓袁最大清除
率基本为 猿远郾 猿缘豫 遥 对 灾糟 和 月杂云蕴孕 进行多项式模型
拟合袁拟合方程分别为院 月杂云蕴孕 赠 越 原 园郾 远源愿员曾圆 垣
员猿郾 圆园远曾 垣 圆园郾 圆苑源 渊 砸圆 越 员 冤袁 灾糟 赠 越 原 员源怨源郾 圆曾猿 垣
员源远圆郾 远曾圆 原 圆猿远郾 苑愿曾 垣 猿源郾 苑园怨渊砸圆 越 园郾 怨怨愿员冤遥 通过拟
合方程分别计算出 月杂云蕴孕的 陨悦缘园渊圆郾 缘苑苑 皂早窑皂蕴 原员冤和
灾糟的 陨悦缘园渊园郾 圆苑怨 皂早窑皂蕴 原员冤遥 猿 种样品的羟基自由基
清除活性大小依次为院灾糟 跃 月杂云蕴孕 跃 韵灾粤袁其中 月杂云蕴孕
的清除活性约是 灾糟 的 园郾 员园愿 倍袁但远高于 韵灾粤遥 所
源园园圆
摇 员员 期 黑水虻幼虫蛋白质的制备及体外抗氧化活性
图 猿摇 总还原力
云蚤早援 猿摇 栽燥贼葬造 则藻凿怎糟蚤灶早 责燥憎藻则
图 源摇 超氧阴离子自由基清除活性
云蚤早援 源摇 粤糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 泽怎责藻则燥曾蚤凿藻 葬灶蚤燥灶
以袁月杂云蕴孕具有较高的羟基自由基清除活性遥
圆郾 猿郾 源摇 阅孕孕匀自由基清除活性摇 由图 远 可知袁月杂云蕴孕尧
灾糟和 韵灾粤均具有一定的 阅孕孕匀 自由基清除活性袁且
随着质量浓度的增加 阅孕孕匀 自由基清除率逐渐上升遥
对 猿 种样品的质量浓度与 阅孕孕匀自由基清除率分别进
行线性或多项式模型拟合袁所得拟合方程分别为
月杂云蕴孕 赠 越 园郾 圆远缘愿曾猿 原 源郾 缘缘园缘曾圆 垣 圆苑郾 愿怨远曾 原 缘郾 远猿苑怨渊砸圆
图 缘摇 羟基自由基清除活性
云蚤早援 缘摇 粤糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 澡赠凿则燥曾赠造 则葬凿蚤糟葬造
越 园郾 怨怨员缘冤袁灾糟 赠 越 源园郾 苑猿远曾 垣 圆园郾 愿源怨 渊砸圆 越 园郾 怨怨怨怨冤袁
韵灾粤 赠 越 原 园郾 圆苑怨远曾圆 垣 怨郾 猿源苑愿曾 原 源渊砸圆 越 园郾 怨怨圆怨冤遥 对
拟合方程进行计算袁获得 猿 种样品的 陨悦缘园院 月杂云蕴孕
猿郾 怨远缘 皂早窑皂蕴 原员尧 灾糟 园郾 苑员远 皂早窑皂蕴 原员尧 韵灾粤 苑郾 源圆远
皂早窑皂蕴 原员遥猿 种样品的 阅孕孕匀 自由基清除活性大小依
次为院灾糟 跃 月杂云蕴孕 跃 韵灾粤袁其中 月杂云蕴孕的清除活性约是
灾糟的 园郾 员愿员 倍袁是 韵灾粤 的 员郾 愿苑猿 倍遥 故 月杂云蕴孕 具有
较高的 阅孕孕匀自由基清除活性遥
圆郾 猿郾 缘摇 粤月栽杂自由基清除活性摇 由图 苑 可知袁月杂云蕴孕尧
灾糟和 韵灾粤均表现出一定的 粤月栽杂 自由基清除活性袁
且 猿 种样品的 粤月栽杂自由基清除率随着质量浓度的增
加逐渐上升遥 对 猿 种样品的质量浓度与 粤月栽杂 自由基
清除率进行 猿 次模型拟合袁拟合方程分别为 月杂云蕴孕 赠
越 员园园郾 源苑曾猿 原 圆源缘郾 员源曾圆 垣 圆猿园郾 园源曾 垣 怨郾 员猿园怨渊砸圆 越 员冤袁
灾糟 赠 越 原 猿 伊 员园远曾猿 垣 员苑圆愿怨远曾圆 垣 远猿园郾 猿怨曾 垣 苑郾 员缘源缘渊砸圆
越 园郾 怨怨怨怨冤袁韵灾粤 赠 越 愿怨郾 愿远苑曾猿 原 圆员远郾 怨圆曾圆 垣 圆园远郾 愿愿曾 原
员源郾 员怨远渊砸圆 越 园郾 怨怨怨远冤遥 通过拟合方程分别计算出 猿
种样品的 陨悦缘园院月杂云蕴孕 园郾 圆圆愿 皂早窑皂蕴 原员尧灾糟 园郾 园员远 皂早窑
皂蕴 原员尧韵灾粤 园郾 缘苑圆 皂早窑皂蕴 原员遥 猿 种样品的 粤月栽杂 自由
基清除活性大小依次为院 灾糟 跃 月杂云蕴孕 跃 韵灾粤袁其中
月杂云蕴孕 的清除活性约是 灾糟 的 园郾 园苑员 倍袁是 韵灾粤 的
圆郾 缘园怨倍遥 综上袁月杂云蕴孕具有较高的 粤月栽杂自由基清除
活性遥
圆郾 猿郾 远摇 金属离子螯合能力摇 由图 愿 可知袁月杂云蕴孕
和 耘阅栽粤 均具有一定的金属离子螯合能力袁且随着质
量浓度的增加亚铁离子螯合率逐渐上升曰韵灾粤 不具有
缘园园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 远摇 阅孕孕匀自由基清除活性
云蚤早援 远摇 粤糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 阅孕孕匀 则葬凿蚤糟葬造
图 苑摇 粤月栽杂自由基清除活性
云蚤早援 苑摇 粤糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 泽糟葬增藻灶早蚤灶早 粤月栽杂 则葬凿蚤糟葬造
螯合亚铁离子的能力袁无论质量浓度多高袁亚铁离子螯
合率始终保持在 园豫附近遥 对 月杂云蕴孕和 耘阅栽粤的质量
浓度与亚铁离子螯合率进行 猿 次模型拟合袁所得拟合
方程分别为 月杂云蕴孕 赠 越 缘郾 园远远怨曾猿 原 圆苑郾 远园苑曾圆 垣 缘苑郾 愿员员曾
垣 员苑郾 员源员渊砸圆 越 园郾 怨怨缘冤袁耘阅栽粤 赠 越 猿 伊 员园远曾猿 原 员怨远猿猿圆曾圆
垣 缘猿缘愿曾 垣 员缘郾 园源猿渊砸圆 越 园郾 怨苑远远冤遥 对拟合方程进行计
算袁分别获得 月杂云蕴孕 和 耘阅栽粤 的 陨悦缘园院月杂云蕴孕 园郾 愿苑远
皂早窑皂蕴 原员尧耘阅栽粤 园郾 园园怨 皂早窑皂蕴 原员遥 月杂云蕴孕 的金属离子
螯合能力远低于 耘阅栽粤袁约是其 园郾 园员园 倍袁但仍旧比
韵灾粤的金属离子螯合能力高遥
图 愿摇 亚铁离子螯合能力
云蚤早援 愿摇 粤糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 糟澡藻造葬贼蚤灶早 枣藻则则燥怎泽 蚤燥灶
圆郾 猿郾 苑摇 脂质体系中抗氧化能力
由图 怨 可知袁月杂云蕴孕尧灾糟 和 韵灾粤 在脂质体系中均
表现出一定的抗氧化能力袁且随着质量浓度的增加亚
油酸过氧化抑制率逐渐上升遥 分别对 猿 种样品的质量
浓度与亚油酸过氧化抑制率进行 猿 次模型拟合袁所得
拟合方程为 月杂云蕴孕 赠 越 园郾 园园怨源曾猿 垣 园郾 源源源源曾圆 原 园郾 源怨愿曾
垣 猿怨郾 怨苑渊砸圆 越 园郾 怨愿愿苑冤袁灾糟 赠 越 原 员猿愿郾 怨怨曾猿 垣 圆愿缘郾 苑怨曾圆
原 员员员郾 怨源曾 垣 猿怨郾 圆愿渊砸圆 越 园郾 怨怨怨愿冤袁韵灾粤 赠 越 园郾 园苑缘曾猿 原
员郾 愿缘曾圆 垣 员愿郾 源愿怨曾 原 远郾 缘远远苑渊砸圆 越 园郾 怨怨怨苑冤遥 通过拟合
方程计算得 猿 种样品的 陨悦缘园院月杂云蕴孕 缘郾 园缘园 皂早窑皂蕴 原员尧
灾糟 园郾 远远员 皂早窑皂蕴 原员尧韵灾粤 缘郾 员愿圆 皂早窑皂蕴 原员遥 猿 种样品
在脂质体系中抗氧化能力的大小依次为院灾糟 跃 月杂云蕴孕
跃 韵灾粤袁其中 月杂云蕴孕 的抗氧化能力约是 灾糟 的 园郾 员猿员
倍袁是 韵灾粤的 员郾 园圆远 倍遥 综上袁月杂云蕴孕 在脂质体系中
具有良好的抗氧化能力遥
猿摇 讨论
蛋白质在等电点时分子净电荷为零袁分子颗粒在
溶液中因没有相同电荷的相互排斥袁造成分子之间相
互作用力减弱袁分子颗粒极易凝聚而产生沉淀遥 根据
前期结果袁利用碱提酸沉法提取 月杂云蕴孕袁测得 月杂云蕴孕
的等电点在 源郾 愿 附近袁经过紫外 原可见光谱扫描证明
所提 月杂云蕴孕纯度较高遥
远园园圆
摇 员员 期 黑水虻幼虫蛋白质的制备及体外抗氧化活性
图 怨摇 亚油酸体系中抗氧化能力
云蚤早援 怨摇 粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 蚤灶 造蚤灶燥造藻蚤糟 葬糟蚤凿 泽赠泽贼藻皂
总还原力的测定是检验样品供电子能力的强弱袁
是评价体外抗氧化活性的常用方法袁总还原力与体外
抗氧化活性一般呈正相关关系遥 抗氧化剂在一定条件
下可给出自身电子袁将 云藻猿 垣还原为 云藻圆 垣 曰同时还能与
自由基反应生成较为稳定的物质遥 因此袁可以根据
云藻猿 垣还原为 云藻圆 垣时颜色变化的程度来评价待测样品
的体外抗氧化活性遥 广泛存在于生物体内的超氧阴离
子自由基的氧化活性并不高袁但它能够衍生出许多其
他具有细胞毒性的自由基袁如黄嘌呤氧化酶尧过氧化物
酶等咱圆苑暂 遥 邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化产生超
氧阴离子自由基袁同时生成有色中间产物遥 抗氧化剂
可提供电子与超氧阴离子自由基的单电子配对袁抑制
有色物质的生成袁故可通过待测样品抑制邻苯三酚自
氧化时产生的颜色变化对其清除超氧阴离子自由基的
活性进行评价遥 羟基自由基被认为是生物体内毒性最
强尧危害最大的自由基袁很容易与蛋白质和 阅晕粤 等重
要的生物大分子发生不可逆反应咱圆愿暂 遥 利用 云藻灶贼燥灶 体
系产生羟基自由基袁与水杨酸分子的苯环反应袁产生可
用分光光度法测定的羟化合物 圆袁猿 原二羟基苯甲酸袁
故可用该产物生成的多少来评价待测样品清除羟基自
由基的活性遥 阅孕孕匀 自由基是一种被广泛使用的人工
合成的较为稳定的自由基袁在有机溶液中呈紫色遥 抗
氧化剂可提供电子与 阅孕孕匀 自由基的孤对电子配对袁
使其颜色变浅咱圆怨暂 遥 因此袁可根据 阅孕孕匀 的乙醇溶液褪
色程度来评价待测样品对 阅孕孕匀 自由基的清除活性遥
粤月栽杂经氧化后生成稳定的蓝绿色的 粤月栽杂 自由基袁该
自由基可与抗氧化剂反应还原成没有颜色的
粤月栽杂咱猿园暂 袁故待测样品的 粤月栽杂自由基清除活性可利用
分光光度法进行测定遥 云藻圆 垣是生物体内的促氧化剂之
一袁它可以促进油脂自动氧化袁易导致心血管疾病遥
云藻则则燥扎蚤灶藻可定量地与 云藻圆 垣反应生成在 缘远圆 灶皂 处有最
大光吸收值的复合物遥 但当金属离子螯合剂存在时袁
该复合物的生成受到抑制袁使溶液吸光度降低遥 亚油
酸分子中含有两个双键袁在 猿苑 益尧避光的条件下容易
氧化袁经过一系列反应最终生成丙二醛渊酝阅粤冤袁栽月粤
可与 酝阅粤反应袁溶液吸收峰在 缘猿圆 灶皂 处遥 抗氧化剂
会阻碍 酝阅粤的产生袁降低溶液在 缘猿圆 灶皂处的吸光度遥
本试验分别从以上多个方面对 月杂云蕴孕 进行体外抗氧
化活性的测定遥 结果表明袁月杂云蕴孕 除超氧阴离子自由
基清除活性较低外袁其总还原力约是 灾糟 的 园郾 园员猿 倍袁
而羟基自由基清除活性尧阅孕孕匀自由基清除活性尧粤月栽杂
自由基清除活性尧金属离子螯合能力及脂质体系中抗
氧化能力的 陨悦缘园 分别为 圆郾 缘苑苑尧猿郾 怨远缘尧园郾 圆圆愿尧园郾 愿苑远尧
缘郾 园缘园 皂早窑皂蕴 原员袁虽然均低于 灾糟渊金属离子螯合能力
低于 耘阅栽粤冤袁但均高于 韵灾粤袁其中金属离子螯合能力
明显高于 韵灾粤遥 因此袁月杂云蕴孕 具有较高的体外抗氧化
活性遥 近年来袁关于自由基对机体的氧化损伤和毒性
越来越受到人们的关注遥 作为维持正常生命活动所必
需的自由基袁一旦含量过高便会造成生物体内脂质膜
及酶和核酸等重要生物大分子被不可逆氧化破坏袁进
而引起细胞凋亡尧组织衰败乃至诱发机体病变及死
亡咱猿员暂 遥 常用的人工合成抗氧化剂如丁基羟基茴香醚
渊月匀粤冤和二丁基羟基甲苯渊月匀栽冤水溶性差袁在乳化系
统中抗氧化活性低袁甚至有研究表明 月匀粤 和 月匀栽 可
能会损伤肝脏咱愿暂 遥 所以袁开发天然抗氧化剂具有重要
意义遥 在生物体细胞内有多种内源性蛋白质袁如超氧
化物岐化酶尧谷胱甘肽还原酶尧孕藻则燥曾蚤则藻凿燥曾蚤灶渊孕则曾冤 咱猿圆暂
等都具有抗氧化活性遥 虽然有关天然蛋白质抗氧化活
性的研究报道越来越多袁但关于昆虫蛋白这个巨大蛋
白质宝库的抗氧化活性研究还很少袁本试验选用的黑
水虻幼虫蛋白质更是缺乏相关报道遥 郭倩等咱圆园暂和聂
路等咱猿猿暂分别先将大麦虫和丰年虫蛋白质进行了分类
提取袁并以总还原力尧超氧离子自由基清除率尧羟基自
由基清除率及 阅孕孕匀 自由基清除率及为指标袁分别测
定了大麦虫和丰年虫水溶性蛋白尧碱溶性蛋白尧醇溶性
蛋白及酸溶性蛋白的体外抗氧化活性遥 结果均表明各
类蛋白质多少都具有一定的抗氧化活性袁其中水溶性
蛋白的活性最高袁但并未对丰年虫总蛋白的抗氧化活
性做出一个评价及与其他常见蛋白质或抗氧化剂进行
比较遥 该研究则分别从多个方面对 月杂云蕴孕 进行体外
苑园园圆
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
抗氧化活性的测定袁并证明 月杂云蕴孕 具有良好的体外抗
氧化活性遥 但 月杂云蕴孕 的体内抗氧化活性尧抗氧化机
理尧以及与其他具有抗氧化活性的昆虫蛋白的比较还
有待进一步研究遥
源摇 结论
本研究首次采用碱提酸沉法对黑水虻幼虫进行了
蛋白质的提取袁制备的 月杂云蕴孕 纯度较高遥 通过测定总
还原力尧超氧阴离子自由基清除活性尧羟基自由基清除
活性尧阅孕孕匀自由基清除活性尧粤月栽杂 自由基清除活性尧
金属离子螯合能力及脂质体系中抗氧化能力袁并以 灾糟
渊测定金属离子螯合能力时以 耘阅栽粤冤和 韵灾粤 为阳性
对照袁对 月杂云蕴孕的体外抗氧化活性进行了综合评价袁
结果表明 月杂云蕴孕具有较高的体外抗氧化活性袁适合作
为天然抗氧化剂或者用于抗氧化功能蛋白食品的研
发遥 本研究为黑水虻的进一步研究与综合利用提供了
依据袁有利于生态环境尧农业经济及人类健康的和谐发
展遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 柴志强袁 王付彬袁 郭明昉袁 魏庆辉袁 陈小凤援 水虻科昆虫及其资
源化利用研究 咱允暂 援 广东农业科学袁 圆园员圆袁 渊员园冤院 员愿圆 原 员愿远
咱 圆 暂摇 沈媛袁 徐齐云袁 安新城援 黑水虻幼虫及预蛹抗逆性的初步研究
咱允暂 援 环境昆虫学报袁 圆园员圆袁 猿源渊圆冤院 圆源园 原 圆源圆
咱 猿 暂 摇 晕藻憎贼燥灶 蕴袁 杂澡藻责责葬则凿 悦袁 宰葬泽贼燥灶 阅 宰袁 月怎则贼造藻 郧袁 阅燥增藻 砸援 哉泽蚤灶早 贼澡藻
遭造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则 枣造赠袁 匀藻则皂藻贼蚤葬 蚤造造怎糟藻灶泽袁 葬泽 葬 增葬造怎藻鄄葬凿凿藻凿 贼燥燥造 枣燥则 贼澡藻
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澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟葬造泽援 灶糟泽怎援 藻凿怎 辕 憎葬泽贼藻 赃 皂早贼 辕 泽皂蚤贼澡枣蚤藻造凿 赃 责则燥躁藻糟贼泽 辕
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灾蚤灶灶藻则覽泽 月援 云葬藻糟葬造 泽造怎凿早藻 皂葬灶葬早藻皂藻灶贼 憎蚤贼澡 贼澡藻 造葬则增葬藻 燥枣 贼澡藻 遭造葬糟噪
泽燥造凿蚤藻则 枣造赠 渊 匀藻则皂藻贼蚤葬 蚤造造怎糟藻灶泽冤 原 云则燥皂 葬 澡赠早蚤藻灶藻 葬泽责藻糟贼 咱 允 暂 援
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咱 缘 暂 摇 砸葬皂葬则葬贼澡灶葬皂 晕袁 韵泽葬憎葬 栽袁 韵糟澡蚤 匀袁 运葬憎葬噪蚤泽澡蚤 杂援 栽澡藻 糟燥灶贼则蚤遭怎贼蚤燥灶
燥枣 责造葬灶贼 枣燥燥凿 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼泽 贼燥 澡怎皂葬灶 澡藻葬造贼澡 咱 允暂 援 栽则藻灶凿泽 蚤灶 云燥燥凿
杂糟蚤藻灶糟藻 驭 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 员怨怨缘袁 远渊猿冤院 苑缘 原 愿圆
咱 远 暂 摇 再怎 匀 匀袁 蕴蚤怎 载 郧袁 载蚤灶早 砸 耘袁 蕴蚤怎 杂袁 郧怎燥 在 再袁 宰葬灶早 孕 月袁 蕴蚤 悦 孕袁
蕴蚤 孕 悦援 陨灶 增蚤贼则燥 凿藻贼藻则皂蚤灶葬贼蚤燥灶 燥枣 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 责则燥贼藻蚤灶泽 枣则燥皂
躁藻造造赠枣蚤泽澡 砸澡燥责蚤造藻皂葬 藻泽糟怎造藻灶贼怎皂 咱允暂 援 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园远袁 怨缘渊员冤院
员圆猿 原 员猿园
咱 苑 暂 摇 粤则糟葬灶 陨袁 再藻皂藻灶蚤糟蚤燥早造怎 粤援 粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 藻曾贼则葬糟贼泽
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咱允暂 援 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园苑袁 员园猿渊圆冤院 猿园员 原 猿员圆
咱 愿 暂摇 李翠萍袁 于华华袁 陈晓琳袁 刘松袁 冯金华袁 李鹏程援 白色霞水母
蛋白抗氧化活性的初步研究 咱允暂 援 海洋科学袁 圆园园愿袁 猿圆渊苑冤院 远缘
原 苑园
咱 怨 暂摇 钱晓婕袁 陈舜胜袁 付杰援 坛紫菜中藻胆蛋白的提取及其抗氧化
活性研究 咱允暂 援 中国海洋药物杂志袁 圆园园愿袁 圆苑渊圆冤院 源圆 原 源缘
咱员园暂摇 姚兴存袁舒留泉袁 盘赛昆袁王洪斌援 条斑紫菜蛋白提取与抗氧化
活性 咱允暂 援 食品科学袁 圆园员圆袁 猿猿渊圆园冤院 员员猿 原 员员愿
咱员员暂摇 赵艳景袁 裴波袁 胡虹袁 王颖援 缢蛏 再悦 原 圆 蛋白的提取及抗氧化
作用研究 咱允暂 援 海洋科学袁 圆园员园袁 猿源渊远冤院 猿源 原 猿怨
咱员圆暂摇 阅蚤藻灶藻则 杂袁 在怎则遭则俟早早 悦袁 栽燥糟噪灶藻则 运援 悦燥灶增藻则泽蚤燥灶 燥枣 燥则早葬灶蚤糟 皂葬贼藻则蚤葬造 遭赠
遭造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则 枣造赠 造葬则增葬藻院 藻泽贼葬遭造蚤泽澡蚤灶早 燥责贼蚤皂葬造 枣藻藻凿蚤灶早 则葬贼藻泽 咱 允暂 援
宰葬泽贼藻 酝葬灶葬早藻皂藻灶贼驭砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园园怨袁 圆苑渊远冤院 远园猿 原 远员园
咱员猿暂摇 喻国辉袁陈燕红袁 喻子牛袁程萍援 黑水虻幼虫和预蛹的饲料价值
研究进展 咱允暂 援 昆虫知识袁 圆园园怨袁 源远渊员冤院 源员 原 源缘
咱员源暂摇 耘则蚤糟噪泽燥灶 酝 悦袁 陨泽造葬皂 酝袁 杂澡藻责责葬则凿 悦袁 蕴蚤葬燥 允袁 阅燥赠造藻 酝 孕援
砸藻凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬 糟燥造蚤 匝员缘苑院 匀苑 葬灶凿 杂葬造皂燥灶藻造造葬 藻灶贼藻则蚤糟葬
泽藻则燥增葬则 藻灶贼藻则蚤贼蚤凿蚤泽 蚤灶 糟澡蚤糟噪藻灶 皂葬灶怎则藻 遭赠 造葬则增葬藻 燥枣 贼澡藻 遭造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则
枣造赠 咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 云燥燥凿 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园园源袁 远苑渊源冤院 远愿缘 原 远怨园
咱员缘暂摇 在澡藻灶早 蕴 再袁 蕴蚤 匝袁 在澡葬灶早 允 月袁 再怎 在 晕援 阅燥怎遭造藻 贼澡藻 遭蚤燥凿蚤藻泽藻造 赠蚤藻造凿院
砸藻葬则蚤灶早 遭造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则 枣造赠 造葬则增葬藻袁 匀藻则皂藻贼蚤葬 蚤造造怎糟藻灶泽袁 燥灶 泽燥造蚤凿 则藻泽蚤凿怎葬造
枣则葬糟贼蚤燥灶 燥枣 则藻泽贼葬怎则葬灶贼 憎葬泽贼藻 葬枣贼藻则 早则藻葬泽藻 藻曾贼则葬糟贼蚤燥灶 枣燥则 遭蚤燥凿蚤藻泽藻造
责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 咱允暂 援 砸藻灶藻憎葬遭造藻 耘灶藻则早赠袁 圆园员圆袁 源员院 苑缘 原 苑怨
咱员远暂摇 悦澡燥蚤 宰 匀袁 再怎灶 允 匀袁 悦澡怎 允 孕袁 悦澡怎 运 月援 粤灶贼蚤遭葬糟贼藻则蚤葬造 藻枣枣藻糟贼 燥枣
藻曾贼则葬糟贼泽 燥枣 匀藻则皂藻贼蚤葬 蚤造造怎糟藻灶泽 渊阅蚤责贼藻则葬院 杂贼则葬贼蚤燥皂赠蚤凿葬藻冤 造葬则增葬藻 葬早葬蚤灶泽贼
郧则葬皂鄄灶藻早葬贼蚤增藻 遭葬糟贼藻则蚤葬 咱 允暂 援 耘灶贼燥皂燥造燥早蚤糟葬造 砸藻泽藻葬则糟澡袁 圆园员圆袁 源圆
渊缘冤院 圆员怨 原 圆圆远
咱员苑暂摇 夏嫱袁 赵启凤袁 廖业袁 朱伟袁 喻国辉袁 陈远凤袁 宋明英援 黑水虻
抗菌肽诱导条件优化及粗提物活性研究 咱 允暂 援 环境昆虫学报袁
圆园员猿袁 猿缘渊员冤院 源源 原 源愿
咱员愿暂摇 蕴蚤 匝袁 在澡藻灶早 蕴 再袁 悦葬蚤 匀袁 郧葬则扎葬 耘袁 再怎 在 晕袁 在澡燥怎 杂 阅援 云则燥皂
燥则早葬灶蚤糟 憎葬泽贼藻 贼燥 遭蚤燥凿蚤藻泽藻造院 月造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则 枣造赠袁 匀藻则皂藻贼蚤葬 蚤造造怎糟藻灶泽袁
皂葬噪藻泽 蚤贼 枣藻葬泽蚤遭造藻 咱允暂 援 云怎藻造袁 圆园员员袁 怨园渊源冤院 员缘源缘 原 员缘源愿
咱员怨暂摇 蕴蚤 匝袁 在澡藻灶早 蕴 再袁 匝蚤怎 晕袁 悦葬蚤 匀袁 栽燥皂遭藻则造蚤灶 允 运袁 再怎 在 晕援
月蚤燥糟燥灶增藻则泽蚤燥灶 燥枣 凿葬蚤则赠 皂葬灶怎则藻 遭赠 遭造葬糟噪 泽燥造凿蚤藻则 枣造赠 渊 阅蚤责贼藻则葬院
杂贼则葬贼蚤燥皂赠蚤凿葬藻冤 枣燥则 遭蚤燥凿蚤藻泽藻造 葬灶凿 泽怎早葬则 责则燥凿怎糟贼蚤燥灶 咱 允 暂 援 宰葬泽贼藻
酝葬灶葬早藻皂藻灶贼袁 圆园员员袁 猿员渊远冤院 员猿员远 原 员猿圆园
咱圆园暂摇 郭倩袁 张建新袁何桂梅袁刘娜援 大麦虫蛋白质的提取分离及抗氧
化性研究 咱允暂 援 西北农业学报袁 圆园员员袁 圆园渊圆冤院 员愿愿 原 员怨圆
咱圆员暂摇 赖冬花袁傅红袁杨琳袁 王志伟援 菠菜色素蛋白复合物的抗氧化性
研究 咱允暂 援 食品研究与开发袁 圆园员猿袁 猿源渊猿冤院 员员远 原 员圆园
咱圆圆暂摇 陈根洪援 藤茶总多酚的提取及其抗氧化活性研究 咱允暂 援 圆园员员袁 猿圆
渊远冤院 员圆苑 原 员猿园
咱圆猿暂摇 崔莉袁 刘春袁 李大婧袁 宋江峰袁 江 宁袁 刘春菊袁 吴海虹袁 朱丹
宇援 发酵莴苣茎叶功能活性研究 咱允暂 援 核农学报袁 圆园员员袁 圆缘渊猿冤院
缘圆猿 原 缘圆愿
咱圆源暂摇 陨灶贼葬则葬泽蚤则蚤泽葬憎葬贼 砸袁 月藻灶躁葬噪怎造 杂袁 灾蚤泽藻泽泽葬灶早怎葬灶 宰袁 宰怎 允 孕援
粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬贼蚤增藻 葬灶凿 枣怎灶糟贼蚤燥灶葬造 责则燥责藻则贼蚤藻泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 澡赠凿则燥造赠泽葬贼藻 枣则燥皂
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圆园员圆袁 员猿缘渊源冤院 猿园猿怨 原 猿园源愿
咱圆缘暂摇 刘洪对袁 于丽娜袁 高俊安袁 孙杰袁 朱凤袁 毕洁袁 张初署袁 刘少芳援
五种花生抗氧化肽体外抗氧化活性比较 咱允暂 援 核农学报袁 圆园员猿袁
圆苑渊愿冤院 员员远圆 原 员员远苑袁 员员苑圆
咱圆远暂摇 再怎 蕴 晕袁 杂怎灶 允袁 蕴蚤怎 杂 云袁 月蚤 允袁 在澡葬灶早 悦 杂袁 再葬灶早 匝 蕴援 哉造贼则葬泽燥灶蚤糟鄄
葬泽泽蚤泽贼藻凿 藻灶扎赠皂燥造赠泽蚤泽 贼燥 蚤皂责则燥增藻 贼澡藻 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣 责藻葬灶怎贼
渊粤则葬糟澡蚤灶 糟燥灶葬则葬糟澡蚤灶 蕴援 冤 葬灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 澡赠凿则燥造赠泽葬贼藻 咱 允暂 援 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造
允燥怎则灶葬造 燥枣 酝燥造藻糟怎造葬则 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 圆园员圆袁 员猿渊苑冤院 怨园缘员 原 怨园远愿
愿园园圆
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员源袁圆愿渊员员冤院圆园园员 耀 圆园园怨
咱圆苑暂摇 阅怎葬灶 载 宰袁 允蚤葬灶早 再 酝袁 杂怎 载 郧袁 在澡葬灶早 在 匝袁 允燥澡灶 杂援 粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼
责则燥责藻则贼蚤藻泽 燥枣 葬灶贼澡燥糟赠葬灶蚤灶泽 藻曾贼则葬糟贼藻凿 枣则燥皂 造蚤贼糟澡蚤 渊 蕴蚤贼糟澡蚤 糟澡蚤灶藻灶藻泽蚤泽
杂燥灶灶援 冤 枣则怎蚤贼 责藻则蚤糟葬则责 贼蚤泽泽怎藻泽 蚤灶 则藻造葬贼蚤燥灶 贼燥 贼澡藻蚤则 则燥造藻 蚤灶 贼澡藻 责藻则蚤糟葬则责
遭则燥憎灶蚤灶早 咱允暂 援 云燥燥凿 悦澡藻皂蚤泽贼则赠袁 圆园园苑袁 员园员渊源冤院 员猿远缘 原 员猿苑员
咱圆愿暂摇 允藻 允 再袁 孕葬则噪 孕 允袁 运蚤皂 杂 运援 粤灶贼蚤燥曾蚤凿葬灶贼 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 葬 责藻责贼蚤凿藻 蚤泽燥造葬贼藻凿
枣则燥皂 粤造葬泽噪葬 孕燥造造葬糟噪 渊 栽澡藻则葬早则葬 糟澡葬造糟燥早则葬皂皂葬 冤 枣则葬皂藻 责则燥贼藻蚤灶
澡赠凿则燥造赠泽葬贼藻 咱允暂 援 云燥燥凿 砸藻泽藻葬则糟澡 陨灶贼藻则灶葬贼蚤燥灶葬造袁 圆园园缘袁 猿愿渊员冤院 源缘 原
缘园
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