为提高柑橘加工副产物用于果蔬保鲜的研究,开发新型的食品保鲜剂,以超临界二氧化碳萃取柑橘皮的柑橘精油为原料,采用柑橘精油、壳聚糖和溶菌酶的复合保鲜液对雪峰蜜桔进行保鲜效果的研究。结果表明:复合涂膜液试验组能很好地降低雪峰蜜桔腐烂率、失重率和呼吸强度;显著提高可溶性固形物、可滴定酸和Vc的含量,较好地保持果蔬的营养价值。通过正交试验表明,3种复合保鲜液的最佳组合为:壳聚糖2%、柑橘精油3%、溶菌酶0.075%、氯化钙2%,能对雪峰蜜桔起到很好的保鲜效果。
全 文 :核 农 学 报 2014,28(12):2208 ~ 2214
Journal of Nuclear Agricultural Sciences
收稿日期:2014⁃03⁃04 接受日期:2014⁃09⁃05
基金项目:湖南省高校产业化培育项目(11CY016)
作者简介:曾祥燕,男,副教授,主要从事食品生物技术的研究。 E⁃mail:zengxiangyan8@ 163. com
通讯作者:赵良忠,男,教授,主要从事食品生物技术的研究。 E⁃mail:sys169@ 163. com
文章编号:1000⁃8551(2014)12⁃2208⁃07
柑橘精油对雪峰蜜桔保鲜效果的影响
曾祥燕 赵良忠
(邵阳学院生物与化学工程系,湖南 邵阳 422200)
摘 要:为提高柑橘加工副产物用于果蔬保鲜的研究,开发新型的食品保鲜剂,以超临界二氧化碳萃取柑
橘皮的柑橘精油为原料,采用柑橘精油、壳聚糖和溶菌酶的复合保鲜液对雪峰蜜桔进行保鲜效果的研
究。 结果表明:复合涂膜液试验组能很好地降低雪峰蜜桔腐烂率、失重率和呼吸强度;显著提高可溶性
固形物、可滴定酸和 Vc的含量,较好地保持果蔬的营养价值。 通过正交试验表明,3 种复合保鲜液的最
佳组合为:壳聚糖 2% 、柑橘精油 3% 、溶菌酶 0 075% 、氯化钙 2% ,能对雪峰蜜桔起到很好的保鲜效果。
关键词:雪峰蜜桔;柑橘精油;保鲜;呼吸强度
DOI:10 11869 / j. issn. 100⁃8551 2014 12. 2208
随着科学技术的发展,农产品保鲜技术呈现多样
化,最常用的技术包括涂膜保鲜[1]、气调贮藏[2]、低温
技术[3]、微波和辐照技术[4 - 5]等。 从食品安全和营养
的角度考虑,天然保鲜剂的开发尤其重要。 柑橘精油
含有 85% ~99%的挥发成分和 1% ~15%的不挥发成
分。 挥发成分有单萜(柠檬烯)和倍半萜烯碳氢化合
物及其含氧衍生物醛(柠檬醛)、酮、酸、醇(芳樟醇)和
酯类[6]。 非挥发成分的黄酮、柠檬苦素等除具有良好
的抗氧化作用外,还可防止心血管疾病、抗病毒、抑菌、
抗炎、抗癌等[7]。 柑橘精油不仅适合在食品和化妆品
中使用,同时也通过了美国美国食品药物管理局
(FDA)的安全性评估,以直接的油状或蒸汽状态都对
一定范围的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌有抑制性,
因此可以作为食品工业需求的天然保鲜剂,并满足消
费者要求。 柑橘精油是一种安全的抗菌剂,对食品中
多种微生物都有较好的抑制效果[8 - 10]。 近年来,以天
然的动植物提取物替代人工化学合成的物质,成为食
品保鲜剂开发的热点[11]。 陈林林[12]以柑橘皮为原
料,采用水蒸气蒸馏法制备柑橘皮精油,对马铃薯褐变
及冷却猪肉保鲜进行了研究,结果表明与抑制剂柠檬
酸、CaCl2 和 Na2SO3 相比,浓度为 1 2% 精油的抑制褐
变效果较好,通过对猪肉进行 H2S、挥发性盐基氮和菌
落总数等指标的测定,研究橘皮精油对冷却猪肉保鲜
的影响,得出精油浓度为 2 4%时,可在保存期内保持
肉样的一级新鲜度,且精油与其他保鲜剂混合使用时,
对肉样保鲜效果具有协同增效的作用。 曲春阳等[13]
选用肉桂精油和大蒜精油组成的复合油处理水分含量
为 15 5%的大米,结果表明复合精油不但能显著抑制
大米霉变,还具有延缓大米陈化作用。 防霉效果随着
复合精油浓度的增加而提高,用 0 06 mg·mL - 1的复合
精油处理的大米,比同等储藏条件下其他浓度处理的
大米具有更好的感官品质评价。
柑橘由于含水含糖量较高,在采摘和运输过程中
的机械和挤压作用下,容易造成组织破坏,营养损失,
微生物感染,采后损耗严重,影响后续加工工艺。 对柑
橘进行保鲜,能够避免桔子罐头加工季节性的影响,延
长加工时间。 研究以超临界二氧化碳萃取的柑橘精油
为原料,结合壳聚糖和溶菌酶,对雪峰蜜桔进行保鲜,
考察了保鲜过程中个理化指标的变化,并对保鲜剂进
行了优化,为雪峰蜜桔的储藏保鲜提供理论依据和技
术参考。
8022
12 期 柑橘精油对雪峰蜜桔保鲜效果的影响
1 材料与方法
1 1 材料与试剂
雪峰蜜桔,2012 年 10 月份采摘于湖南洞口县,同
批果实,大小、色泽基本一致,无病虫害和机械损伤,均
达到食用成熟度;柑橘精油由南通市飞宇科技开发有
限公司中试 CO2 超临界设备萃取制得。
壳聚糖(脱乙酰度≥90% )购自山东莱州市海力
生物制品有限公司;溶菌酶购自郑州华美生物工程公
司;氯化钙购自潍坊源通化工有限公司;其它试剂均为
分析纯。
1 2 仪器与设备
TD⁃65 手持数字糖度计购自北京金科利达电子科
技有限公司;3051H 果蔬呼吸测定仪购自北京均方理
化科技研究所;AUY220 电子天平购自日本岛津公司;
TGL⁃18MS台式高速冷冻离心机购自上海卢湘仪离心
机仪器有限公司;LabTech UV⁃2100 紫外可见分光光
度计购自北京莱伯泰科仪器有限公司;HH⁃1 数显恒温
水浴锅购自上海精风仪器有限公司。
表 1 因素水平表
Table 1 Factors level table / %
水平
Level
试验因素 Factor
壳聚糖
Chitosan
柑橘精油
Citrus peel essential oil
溶菌酶
Lysozyme
氯化钙
CaCl2
1 1 1 0 050 0 5
2 2 2 0 075 1 0
3 3 3 0 100 1 5
1 3 方法
1 3 1 雪峰蜜桔的保鲜试验 从同一批果实中,挑选
大小相近,成熟度和色泽基本一致,无病虫害和机械损
伤的样品,清洗干净后晾干,放入各配制好的溶液中浸
泡 2min,捞出晾干,装入薄膜保鲜袋,每袋装 40个果实,
每个处理 4 袋,置入冷柜中进行低温储藏(T: 8 ± 2℃,
RH: 85%左右),每 15d测量一次相关指标。
1 3 2 检测项目与方法[14 - 15] a)腐烂率: 观察记数
法,腐烂率 =腐烂个数 /总个数 × 100% ;2)失重率:称
重法。 失重率 = (贮藏后蜜桔质量 -初始蜜桔质量) /
初始蜜桔质量 × 100% ;3)可溶性固形物:采用手持折
光糖度仪测定,单位为°Brix;4)可溶性糖:蒽酮比色法
测定;5)Vc含量:2,6⁃二氯靛酚滴定法;6)可滴定酸含
量:酸碱滴定法;7)呼吸强度:果蔬呼吸测定仪。
1 3 3 对照保鲜涂膜液的制备 保鲜剂 A:对照组,
不对样品进行任何处理,直接储藏;保鲜剂 B:1 5%壳
聚糖的醋酸溶解液 + 0 05%溶菌酶 + 1%氯化钙;保鲜
剂 C:1 5%壳聚糖的醋酸溶解液 + 1%柑橘精油 + 1%
氯化钙;保鲜剂 D:1 5% 壳聚糖的醋酸溶解液 +
0 05%溶菌酶 + 1%柑橘精油 + 1%氯化钙;为增强溶
菌酶的保鲜效果,每组中均添加 0 03%的甘氨酸;醋
酸溶解浓度为 1% 。
1 3 4 复合壳聚糖涂膜液配方的优化 涂膜液配方
的优化采用四因素三水平进行试验设计见表 1。 各项
生理和品质指标来评价雪峰蜜桔贮藏效果的优劣见
表 2。
2 结果与分析
2 1 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔腐烂率的影响
腐烂率的高低反映了各保鲜剂对果实保鲜效果的
好坏。 由图 1 可知,对照组 A 在果实储藏 15d 时出现
一定数量的腐烂(5 7% ),储藏 75d,果实全部腐烂。 B
组和 C组在果实储藏 30d出现腐烂,到 90d 达到 20%
左右的腐烂,但是两者之间无显著性差异(P > 0 05)。
D组在果实储藏到 45d 出现腐烂,到 90d 时腐烂率为
20 5% 。 A组分别与 B组、C 组和 D 组存在显著性差
异(P < 0 01)。
图 1 柑橘精油提取液对雪峰蜜桔腐烂率的影响
Fig. 1 Effect of orange essential oil on decay
incidence of Xuefeng honeyorange
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核 农 学 报 28 卷
表 2 雪峰蜜桔贮藏期间感官评分标准
Table 2 The sensory scoring standard of ‘Xuefeng’ orange during storage
项目 Project 评分标准 Standard 分值 Score
气味(20) 有柑橘特有的香味、无异味 20
有轻微的酒精味或其他异味 15
有重的酒精味或其他异味 10
微生物感染程度(30) 无任何微生物感染、表面无霉斑和腐败现象 30
有少量霉斑或一处出现腐败现象、且直径小于 0. 5cm 20
有大量霉斑、多处出现腐败现象,或一处腐败直径大于 0. 5cm 10
外观(30) 呈现柑橘特有的金黄色、形态饱满、失重率≤3%、 30
表皮颜色发生部分改变偏暗、形态较饱满、3% <失重率≤5% 20
表皮颜色呈褐色、形态扁瘪、脱水严重、失重率 > 5% 10
口感(20) 果肉饱满、色泽正常、柔软多汁、味清甜, 20
色泽变淡、有柑橘清甜味、咀嚼有渣质感 15
质地粗糙、柑橘清甜味较差、咀嚼渣质感强 10
2 2 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔失重率的影响
由图 2 可知,失重率最大的为对照组 A,最小的为
D组,各处理组与对照组之间差异显著(P < 0 01)。 B
组与 C组之间差异不显著(P > 0 05),D 组与 B 组、D
组 C组之间差异显著(P < 0 01)。 这是由于果实经过
涂膜处理,在其表面形成一层保护膜,在一定程度上抑
制了果实的呼吸作用和水分的蒸发。
图 2 柑橘精油提取液对雪峰
蜜桔失重率的影响
Fig. 2 Effect of orange essential oil on weight
loss of ‘Xuefeng’ honeyorange
2 3 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔可溶性固形物的影
响
由图 3 可知,固形物含量在储藏初期,呈现缓慢上
升,一段时间之后,固形物含量到达高峰,并开始下降。
对照组 A到达高峰的时间后,下降速度最快;B 组和 C
组到达高峰的时间相当,然后开始缓慢下降;D组到达
高峰的时间最长,下降速度最慢。 通过对各组之间进
行差异显著性分析,4 组之间存在显著性差异( P <
0 01),B组与 C组之间差异不显著(P > 0 05)。 果实
采摘时尚未完全成熟,在采后储藏逐渐达到完熟的过
程中,一些淀粉和其它物质在酶的作用下转化为可溶
性物质,使可溶性固形物含量增加,随着时间的延长,
呼吸作用消耗了部分能量物质,表现为可溶性固形物
的含量有所下降。
图 3 柑橘精油提取液对雪峰蜜桔
可溶性固形物含量的影响
Fig. 3 Effect of orange essential oil on soluble
solids content of ‘Xuefeng’ honeyorange
2 4 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔总糖的影响
由图 4 可知,雪峰蜜桔在储藏期间,总糖呈现先上
升,后下降的趋势,这是由于在储藏期间,淀粉转化为
葡萄糖,随着果实的完全成熟,总糖含量达到最大值,
后阶段,由于呼吸的作用,消耗部分糖原,使得总糖含
量下降。 通过对各组之间的数据进行分析,B 组与 C
组之间差异不显著(P > 0 05),D组与 B 组、D组 C 组
0122
12 期 柑橘精油对雪峰蜜桔保鲜效果的影响
图 4 柑橘精油提取液对雪峰蜜桔总糖含量的影响
Fig. 4 Effect of orange essential oil on total
sugar content of ‘Xuefeng’ honeyorange
之间差异显著(P < 0 01)。
2 5 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔 Vc的影响
Vc 不但是果实营养成分之一,同时也是果实内清
除活性氧的一种重要的抗氧化剂,对延缓衰老有一定
效果。 由图 5 可知,4 种不同的处理方法,在整个雪峰
蜜桔的储藏过程中,果实 Vc 含量呈下降趋势。 但是
四组之间的下降趋势存在明显的差异,对照组下降最
快,这是由于对照组消耗的氧最多,D 组 Vc 下降最为
缓慢,呼吸强度越强,Vc 下降越快。 通过对各组之间
的数据进行分析,B 组与 C 组之间差异不显著(P >
0 05),D 组与 B 组、D 组 C 组之间差异显著 (P <
0 01),A组与 B 组、A 组与 C 组、A 组与 D 组之间差
异显著(P < 0 01)。
图 5 柑橘精油提取液对雪峰蜜桔 Vc含量的影响
Fig. 5 Effect of orange essential oil on Vc
content of ‘Xuefeng’ honeyorange
2 6 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔呼吸强度的影响
呼吸强度指每小时每千克鲜重的果蔬放出二氧化
碳或吸收氧的量(mg 或 mL),单位是 mg·kg - 1·h - 1或
mL·kg - 1·h - 1。 呼吸强度大,说明呼吸旺盛,组织体内
的营养物质消耗快,加速其成熟衰老,产品寿命短,贮
藏期就短。 因此,利用各种措施使果品缓慢呼吸,才能
延长贮藏期。 由图 6 可知,在整个储藏过程中,4 种不
同的处理方式对果实呼吸强度的变化趋势相同,在储
藏前期有一个下降过程,这是因为果实在进入冷库后,
有个降温的过程,低温抑制了呼吸作用;在后续的储藏
过程中,呼吸强度又上升,这是由于果实贮藏是一个成
熟衰老的过程,随着贮藏时间的延长,果实失水、腐烂、
褐变,衰老加剧,生物破坏,线粒体功能失调,导致能量
缺乏,为了补充能量,必然促进糖酵解和乙醇发酵途
径,从而释放更多二氧化碳。 A组分别与 B 组、C 组和
D组存在显著性差异(P < 0 01),B 组与 C 组之间差
异不显著(P > 0 05)。
图 6 柑橘精油提取液对雪峰蜜桔呼吸强度的影响
Fig. 6 Effect of orange essential oil on a
respiration rate of ‘Xuefeng’ honeyorange
2 7 对照保鲜涂膜液对雪峰蜜桔可滴定酸含量的影
响
可滴定酸是果实呼吸的重要基质,由图 7 可知,在
整个储藏期间,可滴定酸的含量为持续下降的,通过处
理的 3 组与对照组 A 相比较,可滴定酸下降缓慢,说
明复合涂膜和常规处理能在一定程度上延缓贮藏期间
果实中可滴定酸含量的下降,有利于保持果实的风味,
且与 A组差异著性(P < 0 01),但是 3 组之间差异不
显著性(P > 0 05)。
2 8 复合壳聚糖涂膜液配方的优化
在单因素对照组试验中,各组在不同的时间段,感
官得分如图 8 所示,在储藏 30d 时,D 组的评分为 100
分,果实新鲜完好,其它 3 组均有不同程度的腐烂,A
组最严重,B组和 C组没有明显区别,在储藏 60d时,4
组品质都发生变化,A组绝大多数果实已经腐烂,不能
食用,D 组储存效果最好,B 组和 C 组没有明显区别。
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核 农 学 报 28 卷
图 7 柑橘精油提取液对雪峰蜜桔可滴定酸的影响
Fig. 7 Effect of orange essential oil on TA
content of ‘Xuefeng’ honeyorange
在单因素试验的基础上,通过四因素三水平正交试验,
储藏 45d后,对雪峰蜜桔的各项生理和品质指标进行
评价(表 3)。
表 3 复合壳聚糖涂膜液配方的优化试验
Table 3 Optimizimg experiments on composite chitosan coating treatment
试验号
Experiment number
壳聚糖
Chitosan / %
柑橘精油
Citrus peel essential oil / %
溶菌酶
Lysozyme / %
氯化钙
CaCl2 / %
分数
Score
1 1 1 1 1 70
2 1 2 2 2 90
3 1 3 3 3 85
4 2 1 2 3 90
5 2 2 3 1 85
6 2 3 1 2 80
7 3 1 3 2 85
8 3 2 1 3 80
9 3 3 2 1 95
K1 245 245 230 250
K2 255 255 275 255
K3 250 260 255 255
R 10 15 45 5
由极差分析可知,影响雪峰蜜桔保鲜效果的主要
因素依次为:溶菌酶 >柑橘精油 >壳聚糖 >氯化钙。
由于在该正交试验中,没有重复试验,又无空白项,取
其中一因素离差平方和最小项作为误差估计,利用
SPSS11 5 进行方差分析(表 4),溶菌酶的浓度对保鲜
效果差异显著(P < 0 05),而壳聚糖浓度和柑橘精油
浓度对保鲜效果差异不显著(P > 0 05),正交试验得
到的最佳组合为:壳聚糖 2% 、柑橘精油 3% 、溶菌酶
0 075% 、氯化钙 2% 。
图 8 雪峰蜜桔贮藏期间感官得分
Fig. 8 The sensory score of ‘Xuefeng’ orange during storage
3 讨论
壳聚糖用于果蔬的保鲜主要有两方面的作用:一
是由于壳聚糖溶液能在果蔬表面形成保护膜,抑制呼
吸作用和微生物的入侵,减少养分的消耗和能量的损
失;二是由于壳聚糖抗菌作用,根据前人研究结果,抗
菌机理主要是由于壳聚糖分子与微生物细胞表面的荚
膜多糖或磷壁质酸等物质相互作用,改变细胞膜的通
透性,使细胞内营养物质外渗[16 - 18];或者是由于小分
子壳聚糖进入细胞体内使带有阴离子的细胞质发生凝
聚作用,阻碍 DNA和 RNA的合成,从而抑制微生物的
生长[19 - 20]。 溶菌酶是由 129 个氨基酸构成的单纯碱
2122
12 期 柑橘精油对雪峰蜜桔保鲜效果的影响
表 4 正交试验方差分析
Table 4 Variance analysis for of orthogonal array design experimental results
方差来源
Source
平方和
Sum of sqaures
自由度
df
均方
Mean sqaures F P
校正模型 Corrected model 416 667 6 69 444 25 0 038957
截距 Intercept 64 177 778 1 64 177 778 23 104 4 33E - 05
壳聚糖 Chitosan 38 889 2 19 444 7 0 125
柑橘精油 Citrus peel essential oil 38 889 2 19 444 7 0 125
溶菌酶 Lysozyme 338 889 2 169 444 61 0 016129
误差 Error 5 556 2 2 778
总和 Sum 64 600 000 9
校正总和 Corrected Sum 422 222 8
性球蛋白。 在酸性环境下,溶菌酶对热的稳定性很强,
pH值 3 0 时 96℃加热处理 15min 仍能保持 87%的酶
活性[21 - 23]。 在自然条件下,大多数溶菌酶化学性质稳
定,即使当 pH 值在 1 2 ~ 1 3 范围内剧烈变化,其酶
结构仍维持不变,活性也不受影响,溶菌酶在酸性溶液
中稳定,有很好的抗菌活性;但碱很容易使酶活性遭到
破坏,当处于碱性 pH值范围时,溶菌酶的热稳定性就
很差[24 - 25]。 用二氧化碳萃取的柑橘精油,通过对照保
鲜涂膜液试验证实,能有效防止腐烂、失水、降低呼吸
强度、延缓 Vc 的降解;与壳聚糖、溶菌酶作为保鲜剂,
一起协同使用,对雪峰蜜桔的保鲜可以起到协同增效
的作用。 本研究没有进一步探讨导致其贮藏效果原因
的试验设计,例如微生物指标在贮藏过程中的变化,且
所有试验均采用相同浓度的醋酸溶液作为载体,没有
考虑醋酸溶液对抑菌效果的影响,所有这些还有待进
一步研究。
4 结论
天然的柑橘精油可以作为一种很好的食品保鲜
剂,是一种可靠、安全的方法,通过复合壳聚糖涂膜液
配方的优化试验,影响雪峰蜜桔保鲜效果的主要因素
依次为:溶菌酶 >柑橘精油 >壳聚糖 >氯化钙,最佳组
合为:壳聚糖 2% 、柑橘精油 3% 、溶菌酶 0 075% 、氯
化钙 2% 。 柑橘精油能有效阻止空气中的微生物对雪
峰蜜桔的浸染,从而延长保鲜期。 因此,柑橘精油有良
好的保鲜效果,对提高柑橘精油的应用价值将具有重
要的意义;对其它鲜度指标如过氧化物酶( POD)活
性、多酚氧化酶(PPO)等活性仍有待进一步研究。
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Effect of Citrus Peel Essential Oil on the Preservation of Chilled
Pork ‘Xuefeng’ Honey orange
ZENG Xiang⁃yan ZHAO Liang⁃zhong
(Department of Biology and Chemical Engineering, Shaoyang University, Shaoyang, Hunan 422000)
Abstract:The essential oil from Citrus peel was extracted by supercritical CO2 . The effect of composite coating film with
chitosan, essential oil, lysozyme and CaCl2 on preservation of ‘Xuefeng’ honey orange was investigated. Results showed
that composite coating film D had a best preservative effect. It could evidently decreased decay incidence, a respiration
rate and weight loss of ‘Xuefeng’ honey orange, and increased soluble solids content, Vc content and TA content of
‘Xuefeng’ honey orange. At the same time,orthogonal test was carried out. The optimum conditions for preservation of
XueFeng honey orange are as follows: chitosan2% , essential oil3% , lysozyme 0 075% , CaCl22% , the experiment was
accomplished under optimum conditions, ‘Xuefeng’ honey orange had a best preservative effect.
Key words:‘Xuefeng’ honey orange; Citrus peel essential oil; Preservation; Respiration rate
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