全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员猿袁圆苑渊猿冤院园猿园员 耀 园猿园远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员圆鄄园源鄄圆缘摇 接受日期院圆园员圆鄄园远鄄员苑
基金项目院农业部公益性行业科研专项渊圆园员员园猿园园苑冤袁无锡市政产学研合作项目渊悦再耘杂员园园圆冤
作者简介院王启钊渊员怨愿怨鄄冤袁男袁河南信阳人袁硕士研究生袁研究方向为水稻遗传与分子改良遥 耘鄄皂葬蚤造院憎葬灶早择蚤扎澡葬燥园远泽噪猿岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院舒庆尧渊员怨远缘鄄冤袁男袁浙江新昌人袁教授袁研究方向为水稻遗传育种与功能基因组学遥 耘鄄皂葬蚤造院择赠泽澡怎岳 扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员猿冤园猿鄄园猿园员鄄园远
水稻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源基因的分子表征
王启钊员袁圆袁猿 摇 赵海军员袁圆袁猿 摇 李文旭员袁圆袁猿 摇 刘国振源 摇 舒庆尧员袁猿
渊员浙江大学原子核农业科学研究所 辕农业部尧浙江省核农学重点实验室袁浙江 杭州摇 猿员园园圆怨曰
圆 无锡鄄浙大生物农业中心袁江苏 无锡摇 圆员源员园园曰 猿 浙江大学水稻生物学国家重点实验室袁浙江 杭州摇 猿员园园圆怨曰
源 河北农业大学生命科学学院袁河北 保定摇 园苑员园园员冤
摘摇 要院已有研究表明袁 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因很可能是控制水稻光叶性状的候选基因袁光叶性状可能是
该基因在第 圆 外显子的 缘忆端非翻译区的一个 粤寅栽 的单核苷酸变异造成遥 本研究利用 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 技
术证实 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 能够翻译成蛋白袁但发现光叶和毛叶水稻品种间蛋白表达量不存在显著差异遥
通过构建该基因与黄色荧光蛋白基因的融合基因载体袁并在水稻原生质体中的瞬时表达袁将该蛋白定位
在叶绿体中曰同时袁根据预测的二级结构尧跨膜特性和信号肽等信息袁推测该蛋白为一叶绿体跨膜蛋白遥
本研究首次试验验证了 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因可以翻译成蛋白袁并定位于叶绿体中袁但研究结果不支持
该基因控制水稻光叶特性遥
关键词院蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因曰光叶性状曰亚细胞定位曰叶绿体蛋白曰水稻
酝燥造藻糟怎造葬则 悦澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源
郧藻灶藻 蚤灶 砸蚤糟藻 渊韵则赠扎葬 杂葬贼蚤增葬 蕴援 冤
宰粤晕郧 匝蚤鄄扎澡葬燥员袁圆袁猿 摇 在匀粤韵 匀葬蚤鄄躁怎灶员袁圆袁猿 摇 蕴陨 宰藻灶鄄曾怎员袁圆袁猿 摇 蕴陨哉 早怎燥鄄扎澡藻灶源 摇 杂匀哉 匝蚤灶早鄄赠葬燥员袁猿
渊员 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 燥枣 在澡藻躁蚤葬灶早 孕则燥增蚤灶糟藻 葬灶凿 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻 辕 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁
在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园圆怨曰 圆 宰怎曾蚤 在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 月蚤燥鄄葬早则蚤糟怎造贼怎则藻 悦藻灶贼则藻袁 宰怎曾蚤袁 允蚤葬灶早泽怎 圆员源员园园曰
猿 杂贼葬贼藻 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 砸蚤糟藻 月蚤燥造燥早赠袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园圆怨曰 源 悦燥造造藻早藻 燥枣 蕴蚤枣藻 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 匀藻遭藻蚤 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁
月葬燥凿蚤灶早袁 匀藻遭藻蚤摇 园苑员园园员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院孕则藻增蚤燥怎泽 泽贼怎凿蚤藻泽 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 蕴韵悦 赃 韵泽园缘早园圆苑缘源 早藻灶藻 蚤泽 贼澡藻 糟葬灶凿蚤凿葬贼藻 早藻灶藻 糟燥灶贼则燥造造蚤灶早 贼则蚤糟澡燥皂藻
凿藻增藻造燥责皂藻灶贼 葬灶凿 贼澡藻 粤寅栽 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 皂怎贼葬贼蚤燥灶 蚤灶 贼澡藻 缘忆 怎灶贼则葬灶泽造葬贼藻凿 则藻早蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 圆灶凿 藻曾燥灶 燥枣 贼澡蚤泽 早藻灶藻 皂蚤早澡贼 遭藻
则藻泽责燥灶泽蚤遭造藻 枣燥则 贼澡藻 早造葬遭则燥怎泽 贼则葬蚤贼 蚤灶 则蚤糟藻援 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 葬灶葬造赠泽蚤泽 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蚤泽 贼则葬灶泽造葬贼藻凿 蚤灶贼燥
责则燥贼藻蚤灶袁 澡燥憎藻增藻则 蚤贼泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 造藻增藻造泽 蚤灶 则蚤糟藻 造藻葬增藻泽 憎藻则藻 灶燥贼 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼造赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 遭藻贼憎藻藻灶 早造葬遭则燥怎泽 葬灶凿 责怎遭藻泽糟藻灶贼 则蚤糟藻
糟怎造贼蚤增葬则泽援 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 憎葬泽 枣怎泽藻凿 憎蚤贼澡 赠藻造造燥憎 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻 葬灶凿 贼澡藻 澡藻贼藻则燥造燥早燥怎泽 早藻灶藻 憎葬泽 贼则葬灶泽蚤藻灶贼造赠
藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 则蚤糟藻 责则燥贼燥责造葬泽贼泽袁 贼澡藻 则藻泽怎造贼泽 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蚤泽 造燥糟葬造蚤扎藻凿 蚤灶 糟澡造燥则燥责造葬泽贼泽援 月蚤燥蚤灶枣燥则皂葬贼蚤糟泽
葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣 蚤贼泽 责则藻凿蚤糟贼藻凿 泽藻糟燥灶凿葬则赠 泽贼则怎糟贼怎则藻袁 贼则葬灶泽皂藻皂遭则葬灶藻 澡藻造蚤糟藻泽 葬灶凿 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻 葬造泽燥 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 蚤泽 葬 责则燥贼藻蚤灶 泽责葬灶灶蚤灶早 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 皂藻皂遭则葬灶藻援 栽澡藻 责则藻泽藻灶贼 泽贼怎凿赠 藻曾责藻则蚤皂藻灶贼葬造造赠 凿藻皂燥灶泽贼则葬贼藻凿 贼澡葬贼 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 早藻灶藻 蚤泽 贼则葬灶泽造葬贼藻凿 葬灶凿 蚤贼泽 责则燥贼藻蚤灶 蚤泽 造燥糟葬造蚤扎藻凿 蚤灶 糟澡造燥则燥责造葬泽贼援 匀燥憎藻增藻则袁 燥怎则 则藻泽怎造贼泽 凿燥 灶燥贼 泽怎责责燥则贼 贼澡藻
澡赠责燥贼澡藻泽蚤泽 贼澡葬贼 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 早藻灶藻 糟燥灶贼则燥造泽 贼澡藻 责怎遭藻泽糟藻灶贼 辕 早造葬遭则燥怎泽 贼则葬蚤贼 蚤灶 则蚤糟藻援
运藻赠 憎燥则凿泽院蕴韵悦 赃韵泽园缘早园圆苑缘源曰 郧造葬遭则燥怎泽 造藻葬枣 葬灶凿 澡怎造造曰 杂怎遭鄄糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶曰 悦澡造燥则燥责造葬泽贼 责则燥贼藻蚤灶曰 砸蚤糟藻 渊韵则赠扎葬
泽葬贼蚤增葬 蕴援 冤
员园猿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
摇 摇 表皮毛渊栽则蚤糟澡燥皂藻冤是大多数植物地上部分表皮组
织延伸出的一种毛状附属物结构遥 光叶水稻品种因其
叶片表面和稻谷颖壳缺失表皮毛而具有光叶尧光壳特
征遥 水稻的这一光叶尧光壳特性受隐性基因 早造员
渊郧造葬遭则燥怎泽 蕴藻葬枣 葬灶凿 匀怎造造 员冤控制咱员袁圆暂 遥 通过精细定位和
定位区段内部分基因的测序分析袁蕴蚤 等咱猿暂和洪隽等咱源暂
均发现 早造员 最有可能是由于 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因的
缘忆 端非翻译区的一个 粤寅栽单核苷酸变异引起遥 半定
量 砸栽鄄孕悦砸 分析未发现光叶和毛叶水稻的 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 在转录水平上存在显著差异咱猿暂 遥
为进一步明确 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因的功能袁特
别是其在表皮毛发育和调控中是否发挥作用袁本研究
利用免疫印迹方法首次在蛋白水平研究了该基因的表
达及其在光叶和毛叶水稻之间的差异曰利用其与黄色
荧光蛋白基因的融合基因在原生质体中的瞬时表达研
究了该基因的亚细胞定位曰同时袁利用生物信息学方法
对该蛋白的信号肽尧二级结构及跨膜区域等特性进行
了分析袁以期为该基因功能的进一步研究提供参考遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
本试验所用材料有光叶水稻 运葬赠遭燥灶灶藻贼 渊运月晕栽袁
美国品种冤尧蕴藻皂燥灶贼 渊美国品种冤曰毛叶水稻中 怨月尧云粳
员猿远尧托罗和日本晴遥 用到的大肠杆菌 渊 耘泽糟澡藻则蚤糟澡蚤葬
糟燥造蚤冤菌株 阅匀缘琢 由本实验室保存袁亚细胞定位载体
孕粤苑鄄再云孕由中国科学院上海植物生理生态研究所何
祖华研究员惠赠遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 蛋白质提取与免疫印迹摇 取新鲜的成株期水
稻剑叶并用液氮研磨至粉末状袁分装到预冷离心管中遥
每 圆缘皂早 粉末加入 愿园园滋蕴 蛋白质裂解液 渊 远圆郾 缘
皂皂燥造窑蕴 原员 责匀苑郾 源 栽则蚤泽窑匀悦造袁 员园豫 甘油袁 圆豫 杂阅杂袁
圆园皂皂燥造窑蕴 原员 晕葬云袁 圆皂皂燥造窑蕴 原员 耘阅栽粤袁 员 皂皂燥造窑蕴 原员
孕酝杂云袁缘豫 茁 原巯基乙醇冤袁迅速混匀并置于冰上孵育
员园皂蚤灶袁期间震荡混匀 源 耀 缘 次曰源益下袁员圆园园园 则窑皂蚤灶 原员离
心 圆园皂蚤灶袁取上清液袁转移到已消毒的 员郾 缘皂蕴 离心管
中袁用蛋白质定量试剂盒渊改良型 月悦粤 法蛋白质浓度
测定试剂盒袁上海生工生物工程有限公司冤测定浓度
并将样品调至相同浓度袁 原 苑园益保存备用遥
蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 多克隆抗体制备方法参照文献
咱缘袁远暂袁制备过程由北京华大蛋白质研发中心有限公
司完成遥 免疫印迹方法参照文献咱苑暂袁取约 猿园滋早 水稻
蛋白质进行 杂阅杂鄄孕粤郧耘 电泳袁然后用半干转印系统
渊宰藻葬造贼藻糟公司冤将蛋白电转移到 孕灾阅云 膜上遥 用 缘豫
脱脂奶粉封闭 孕灾阅云 膜袁在一抗溶液中室温孵育 猿澡袁
用 栽栽月杂渊圆 皂皂燥造窑蕴 原员 栽则蚤泽窑匀悦造 责匀苑郾 远袁 员猿郾 远 皂皂燥造窑蕴 原员
晕葬悦造袁园郾 员豫 栽憎藻藻灶 原 圆园冤洗膜 猿 次袁每次 缘皂蚤灶曰加入羊
抗兔二抗在室温下孵育 员澡袁 栽栽月杂 洗膜 猿 次袁每次
缘皂蚤灶袁加 耘悦蕴 孕造怎泽 检测液检测袁暗室曝光 缘皂蚤灶遥 以针
对 匀杂孕蛋白渊匀杂孕愿圆袁分子量 愿园噪阅冤的检测作为等量加
样的内标咱愿暂 遥 用 匝怎葬灶贼蚤贼赠 韵灶藻软件扫描 载光片上的目
标条带信号袁并比较其信号的相对强度遥
员郾 圆郾 圆摇 融合蛋白表达载体构建 摇 用 匝蚤葬早藻灶 植物总
砸晕粤提取试剂盒袁根据操作手册提取水稻叶片总
砸晕粤袁琼脂糖电泳检测 砸晕粤完整性遥 使用 糟阅晕粤反转
录试剂盒渊栽葬运葬砸葬冤进行反转录袁参照 郧则葬皂藻灶藻 网站公
布的水稻基因组序列袁设计用于扩增 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源
基因编码区的上下游引物袁并分别加 杂葬造玉及 月葬皂匀玉
酶切位点接头渊图 员冤袁引物序列渊缘忆 寅猿忆冤为院
上游引物渊孕员云冤院 早贼糟早葬糟栽郧悦粤粤郧郧栽郧栽栽郧栽郧郧粤粤鄄
郧粤郧郧郧粤粤 渊划线小写字母为 杂葬造玉酶切位点冤曰
下 游 引 物 渊 孕员砸 冤院 早早葬贼糟糟悦粤悦悦郧悦郧郧郧郧鄄
悦粤郧悦郧悦郧悦 渊划线小写字母为 月葬皂匀玉酶切位点冤遥
糟阅晕粤 的 孕悦砸 反应体系及程序如下院缘灶早 糟阅晕粤
渊员郾 缘滋蕴冤袁员园 伊 孕悦砸 月怎枣枣藻则 圆郾 缘滋蕴袁凿晕栽孕泽 圆滋蕴袁酝早杂韵源
员郾 愿滋蕴袁上下游引物渊员园滋皂燥造窑蕴 原员 冤各 园郾 愿滋蕴袁高保真
阅晕粤聚合酶 运韵阅鄄责造怎泽鄄灶藻燥渊栽韵再韵月韵 公司冤园郾 缘滋蕴袁加
凿凿匀圆韵 补足至 圆缘滋蕴遥 反应程序院怨源益预变性 圆皂蚤灶曰怨愿益变性 员园泽袁缘苑益退火 猿园泽袁远愿益延伸 远园泽袁源园 个循环曰
远愿益终延伸 缘皂蚤灶遥 孕悦砸 产物电泳割胶纯化后袁连至
孕酝阅员怨 原 栽 泽蚤皂责造藻 增藻糟贼燥则 中袁转化 阅匀缘琢 感受态细胞袁
蓝白斑筛选后袁采用质粒 阅晕粤 提取试剂盒渊粤曾赠孕则藻责冤
提取质粒 阅晕粤袁双酶切鉴定阳性克隆遥
阳性克隆的质粒 阅晕粤 经测序确定序列无突变后
用 杂葬造 陨和 月葬皂匀 陨双酶切袁目标片段用 栽源阅晕粤连接酶
连接到 孕粤苑鄄再云孕 载体袁得 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕 基因融合
表达载体渊图 员冤袁转化 阅匀缘琢曰蓝白筛选获阳性克隆袁
经测序验证后提取质粒 阅晕粤备用遥
员郾 圆郾 猿摇 水稻原生质体瞬时表达摇 日本晴种子消毒后袁
播于 员 辕 圆酝杂 培养基上袁圆愿益光照培养 愿凿袁用无菌刀片
将其幼苗切成长度为 园郾 圆糟皂 的小段袁参考 再燥燥 等咱怨暂的
方法 渊略 有 改 动 冤 分 离 原 生 质 体曰 取 员园滋早 的
韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕 质 粒 阅晕粤 渊 质 粒 浓 度 苑园园 耀
愿园园灶早窑滋蕴 原员冤和 圆圆园滋蕴 源园豫 孕耘郧 原 源园园园 加入到 圆园园滋蕴
的原生质体中袁轻柔混匀袁圆缘益避光培养 员远 耀 猿远澡袁激
光共聚焦显微镜下观察荧光遥
员郾 圆郾 源摇 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因的生物信息学分析摇 利
圆园猿
摇 猿 期 水稻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因的分子表征
图 员摇 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因结构尧糟阅晕粤 孕悦砸 所用引物
渊孕员云 辕 砸冤的位置 渊上图冤以及用于亚细胞定位的 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 和黄色荧光蛋白基因 渊再云孕冤 的重组载体
摇 摇 摇 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕的结构示意图渊下图冤
云蚤早援 员 摇 杂糟澡藻皂葬贼蚤糟 凿蚤葬早则葬皂 燥枣 贼澡藻 泽贼则怎糟贼怎则藻 燥枣 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 早藻灶藻 葬灶凿 责燥泽蚤贼蚤燥灶 燥枣 责则蚤皂藻则泽 渊孕员云 辕 砸冤 怎泽藻凿
枣燥则 糟阅晕粤 孕悦砸 渊 怎责责藻则 责葬灶藻造冤 葬灶凿 燥枣 贼澡藻 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼
增藻糟贼燥则 燥枣 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 早藻灶藻 葬灶凿 赠藻造造燥憎 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻
责则燥贼藻蚤灶 渊再云孕冤 早藻灶藻 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕 枣燥则 泽怎遭鄄糟藻造造怎造葬则
摇 摇 摇 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 渊遭燥贼贼燥皂 责葬灶藻造冤
用 孕杂陨孕砸耘阅咱员园暂 渊 澡贼贼责院 辕 辕 遭蚤燥蚤灶枣援 糟泽援 怎糟造援 葬糟援 怎噪 辕 责泽蚤责则藻凿 辕 冤
进行蛋白质二级结构分析曰利用以下网站进行跨膜
分咱员员暂 院 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 早则葬皂藻灶藻援 燥则早 辕 韵则赠扎葬 赃 泽葬贼蚤增葬 辕
栽则葬灶泽糟则蚤责贼 辕 阅燥皂葬蚤灶泽 辕 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕
栽酝匀酝酝 原 圆郾 园 辕 曰 利 用 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕
泽藻则增蚤糟藻泽 辕 悦澡造燥则燥孕 辕网站进行信号肽分析咱员圆暂 遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白表达及特性
在成株期水稻叶片中袁光叶和毛叶品种均可检测
到 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白表达袁且其分子量大小与预
测值渊大小约 员远噪阅葬冤基本一致渊图 圆冤遥 本试验中袁中
怨月尧运葬赠遭燥灶灶藻贼尧云粳 员猿远尧托罗和 蕴藻皂燥灶贼 中 匀杂孕 蛋白
渊内参冤表达强度之比约为 怨院怨院员猿院苑院苑曰而利用 蕴韵悦赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 抗体对上述品种的叶片总蛋白进行免疫
印迹分析袁该蛋白的信号强度之比与 匀杂孕蛋白渊内参冤
表达强度接近袁由此表明以上 缘 个品种 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白表达量无差异遥
圆郾 圆摇 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 亚细胞定位
利用日本晴叶片总 砸晕粤 通过 砸栽鄄孕悦砸 获得
糟阅晕粤曰以 糟阅晕粤为模板袁以 缘忆端添加加限制性酶切位
点 杂葬造 陨 和 月葬皂匀 陨 的引物 孕员云 和 孕员砸 扩增 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 目标片段渊图 员冤袁进而用 栽源 阅晕粤 连接酶
连 接 到 孕粤苑鄄再云孕 载 体袁 构 建 融 合 表 达 载 体
韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕渊图 员冤遥 杂葬造 陨和 月葬皂匀 陨双酶切后电
图 圆摇 水稻成株期叶片中 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源
蛋白免疫印迹分析
云蚤早援 圆摇 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 燥枣 贼澡藻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源
责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 则蚤糟藻 造藻葬增藻泽 葬贼 皂葬贼怎则藻 泽贼葬早藻
上部图片为用 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 抗体检测叶片总蛋白质的 宰月 结
果曰 下部为用热激蛋白 愿圆渊匀杂孕愿圆冤抗体检测的 宰月结果遥 泳道 员 耀
缘 分别代表院中 怨月渊毛叶冤尧运葬赠遭燥灶灶藻贼渊光叶冤尧云粳 员猿远渊毛叶冤尧托罗
渊毛叶冤和 蕴藻皂燥灶贼渊光叶冤遥 斜体数据院光叶和毛叶品种 蕴韵悦赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白相对于 匀杂孕愿圆 的蛋白表达强度相对值
哉责责藻则 责葬灶藻造院 宰月 燥枣 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源曰 月燥贼贼燥皂 责葬灶藻造院 宰月 燥枣 匀杂孕援
悦怎造贼蚤增葬则泽 蚤灶 造葬灶藻泽 员 耀 缘院 在澡燥灶早 怨月 渊 责怎遭藻泽糟藻灶贼 冤袁 运葬赠遭燥灶灶藻贼
渊早造葬遭则燥怎泽冤袁 再怎灶躁蚤灶早员猿远 渊 责怎遭藻泽糟藻灶贼冤袁 栽怎燥造怎燥 渊 责怎遭藻泽糟藻灶贼冤袁 蕴藻皂燥灶贼
渊早造葬遭则燥怎泽冤 援 陨贼葬造蚤糟 枣蚤早怎则藻泽院 增藻则葬早藻 葬灶凿 泽贼葬灶凿葬则凿 凿藻增蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 贼则蚤责造蚤糟葬贼藻泽
葬遭燥怎贼 则藻造葬贼蚤增藻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 责则燥贼藻蚤灶 造藻增藻造泽 葬早葬蚤灶泽贼 匀杂孕愿圆 蚤灶 摇 摇 摇
责怎遭藻泽糟藻灶贼 葬灶凿 早造葬遭则燥怎泽 则蚤糟藻 造藻葬增藻泽
泳检测表明 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕 载体中插入了 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 片段渊缘苑园遭责冤渊图 猿冤遥 对插入片段测序分
析表明袁该片段与日本晴的基因序列一致袁表明在载体
构建过程中没有出现碱基突变遥
孕粤苑鄄再云孕质粒导入水稻原生质体后可高效瞬时
表达袁在细胞核及细胞质中均观察到黄色荧光信号
渊图 源鄄粤冤遥 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕 融合质粒也可在原生质
体中表达袁但黄色荧光信号分布与 孕粤苑鄄再云孕 不同袁可
能集中于叶绿体上渊图 源鄄月冤遥 在一定的波长下叶绿体
可以自发红色荧光信号渊图 源鄄悦冤袁与 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕
融合蛋白的黄色荧光能够很好地叠加渊图 源鄄阅冤遥 由此
表明 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白主要定位在叶绿体中遥
圆郾 猿摇 生物信息学分析
将 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 推定的氨基酸序列用 澡贼贼责院 辕 辕
憎憎憎援 糟遭泽援 凿贼怎援 凿噪 辕 泽藻则增蚤糟藻泽 辕 悦澡造燥则燥孕 辕程序分析袁结果显
示该蛋白含有一段由 员愿 个氨基酸组成的叶绿体信号
肽序列袁这与本试验将其定位于叶绿体中的结果一致遥
利用 孕杂陨孕砸耘阅网站对 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白二级结构
进行预测袁发现该蛋白质存在大约由 圆源 个氨基酸组成
的螺旋渊匀袁 澡藻造蚤曾冤和 猿苑 个氨基酸组成的折叠片段渊耘袁
猿园猿
核摇 农摇 学摇 报 圆苑 卷
摇 摇 摇 摇
图 猿摇 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕重组质粒的
月葬皂匀 陨 垣 杂葬造 陨双酶切鉴定
云蚤早援 猿摇 月葬皂匀 陨 垣 杂葬造 陨 凿燥怎遭造藻 藻灶扎赠皂藻
凿蚤早藻泽贼蚤燥灶 燥枣 则藻糟燥皂遭蚤灶葬灶贼 责造葬泽皂蚤凿 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕
左边为 阅晕粤分子量标记袁右边 圆 条的下方条
带为插入载体的 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 片段
栽澡藻 造藻枣贼 造葬灶藻 蚤泽 阅晕粤 皂葬则噪藻则曰 贼澡藻 遭燥贼贼燥皂 遭葬灶凿泽 燥枣 则蚤早澡贼 贼憎燥
造葬灶藻泽 则藻责则藻泽藻灶贼 贼澡藻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 枣则葬早皂藻灶贼
泽贼则葬灶凿冤袁其余为卷曲片段渊悦袁 糟燥蚤造冤遥
图 源摇 水稻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白的原生质体亚细胞定位
云蚤早援 源摇 杂怎遭鄄糟藻造造怎造葬则 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 则蚤糟藻 责则燥贼燥责造葬泽贼泽
粤院 孕粤苑鄄再云孕空载体所发黄色荧光渊对照冤曰 月院韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕融合蛋白产生的黄色荧光曰 悦院叶绿体自发红色荧光曰
阅院叶绿体自发荧光与融合蛋白所发荧光的叠加
粤院 再藻造造燥憎 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 遭赠 再云孕 燥枣 贼澡藻 糟燥灶贼则燥造 增藻糟贼燥则 孕粤苑鄄再云孕曰 月院 再藻造造燥憎 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 遭赠 韵泽园缘早园圆苑缘源鄄再云孕 枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶曰
悦院 粤怎贼燥鄄枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 渊则藻凿冤 燥枣 糟澡造燥则燥责造葬泽贼泽曰 阅院 栽澡藻 燥增藻则造葬责责藻凿 蚤皂葬早藻 燥枣 糟澡造燥则燥责造葬泽贼 葬怎贼燥鄄枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 葬灶凿 再云孕 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻
利用 栽酝匀酝酝鄄圆郾 园 网站及 憎憎憎援 早则葬皂藻灶藻援 燥则早 网站
对 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白跨膜区域进行预测袁结果显
示蛋白在第 怨源葬葬鄄员员远葬葬区段存在一个跨膜区域袁 表明
该蛋白可能为一个叶绿体跨膜蛋白渊图 缘冤遥
猿摇 讨论
本研究首次试验证实了 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 可以翻
译成与预期大小一致的蛋白分子袁但半定量分析不支
持该基因与光叶特性有关袁因为光叶和毛叶水稻品种
叶片中该基因的蛋白表达水平不存在显著差异袁而先
前认为该基因非翻译区的一个 粤寅栽单核苷酸变异可
能会影响该转录产物的稳定进而影响蛋白的产量咱猿暂 遥
此前的研究者在对光叶和毛叶性状研究时袁通过精细
定位将控制光叶特性的基因限制在某一区间袁然后对
该区间的部分基因进行测序分析袁发现光叶品种与毛
叶品种 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 存在一个碱基的差异袁而未
对定位区间内其他基因以及基因间隔区进行序列分
析袁因而误认为 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因很可能是控制
水稻光叶性状的候选基因遥
在现有数据库中袁尚未报导与 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源
蛋白存在高度同源的其他蛋白和 耘杂栽 序列袁只在一种
源园猿
摇 猿 期 水稻 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 基因的分子表征
图 缘摇 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白跨膜区域分析
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微生物和卷柏中发现同源性约 源圆豫的氨基酸片段曰进
一步利用 陨灶贼藻则责则燥 以及 杂酝粤砸栽 等程序也未在该蛋白
中找到保守区域遥 这些均表明袁蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 是一
个未知功能的重要基因遥 值得指出的是袁 蕴韵悦 赃
韵泽园缘早园圆苑缘源 实际上与根际耐铝基因 圆 渊 杂栽粤砸 圆袁 由
蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘园 基因编码冤共享一段 阅晕粤片段袁后者
为前者的部分反义链片段所编码咱员猿暂 遥
叶绿体前体蛋白多数具有叶绿体转运肽序列袁是
叶绿体前体蛋白的定位信号遥 本研究中袁采用与 再云孕
融合基因的瞬时表达证明了 蕴韵悦赃韵泽园缘早园圆苑缘源 蛋白定
位在叶绿体上袁与利用生物信息技术预测的该蛋白存
在一段叶绿体转运肽序列结果完全一致遥 叶绿体内共
有外膜尧内膜尧类囊体膜 猿 层膜结构袁叶绿体前体蛋白
因此也有 远 种不同的定位袁分别定位于叶绿体外膜袁膜
间质袁叶绿体内膜袁叶绿体基质袁类囊体膜和类囊体腔遥
杂怎灶等咱员源暂研究表明叶绿体内膜转运蛋白具有以下 源
个共同特点院渊员冤包含叶绿体转运多肽曰渊圆冤砸藻泽 辕 栽酝阅
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白预测结果为院 责陨 越 怨郾 缘远 渊 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎援 藻曾责葬泽赠援 燥则早 辕
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由此可以推定该蛋白不是叶绿体内膜转运蛋白遥
参考文献院
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的精细定位与候选基因分析咱允暂 援 核农学报袁 圆园员员袁 圆缘渊远冤院员园愿愿
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振援 水稻类 栽怎遭遭赠蛋白质在叶片生长和白叶枯病抗性反应中的
表达咱允暂 援 植物学报袁 圆园员员袁 源远渊缘冤院 员 原 怨
咱 远 暂摇 兰金苹袁李莉云袁贾霖袁曹英豪袁白辉袁陈浩袁刘胜南袁吴 琳袁刘国
振援 叶绿体基因编码蛋白质在水稻叶片生长过程中的表达研究
咱允暂 援 生物化学与生物物理进展袁 圆园员员袁 猿愿渊苑冤院 远缘圆 原 远远园
咱 苑 暂摇 陈 浩袁李莉云袁白 辉袁曹英豪袁王宪云袁刘国振援 水稻 哉鄄月燥曾蛋白
质在不同发育时期的表达分析咱允暂 援 生物化学与生物物理进展袁
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术质量袁出精品学报冶的宗旨遥 本刊发布 员园 个国家和地区袁个人读者分布 员怨 个国家和地区袁已成为国内农业生物
技术及相关研究领域研究成果发表和交流的最重要学术平台袁在国际农业生物技术领域也具有一定影响力袁被国
内多家机构评为中国核心期刊袁并为国内外多家数据库刊源并收录遥
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摇 摇 全国各地邮局订购 国外发行代码院月酝员远苑猿
摇 摇 国内定价院全年 预 猿远园援 园园 渊员圆 期冤 国外定价院全年 溢 猿远园援 园园 渊员圆 期冤
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