全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨源缘 耀 园怨缘园允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园怨源缘鄄园远
芥菜 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基的基因克隆及其在
芜菁花叶病毒侵染后的表达分析
朱摇 磊摇 杨景华摇 张明方
渊浙江大学园艺系 园艺植物遗传资源与功能改良开放实验室 农业部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室袁浙江 杭州摇 猿员园园圆怨冤
摘摇 要院以耐病性叶用芥菜为材料袁克隆和分析了芥菜 砸怎遭蚤糟泽燥 小亚基的基因序列袁研究了芜菁花叶病毒
渊栽怎则灶蚤责 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽袁栽怎酝灾冤侵染对 砸怎遭蚤糟泽燥小亚基基因表达的影响遥 结果显示院砸怎遭蚤糟泽燥 小亚基基因全
长为 愿源圆遭责袁其开放阅读框渊韵砸云冤可编码 员愿员 个氨基酸袁其中包括 圆 个 琢 螺旋及 源 个 茁 折叠二级结构袁
并含有一些高度保守的氨基酸残基遥 接种 栽怎酝灾后袁随着上部第 猿 片真叶中外壳蛋白基因的逐渐积累袁
叶片的正常生长受到抑制袁同时 砸怎遭蚤糟泽燥小亚基的表达呈现先上升后下降的趋势袁表明其参与了芥菜对
栽怎酝灾侵染的响应遥
关键词院芥菜曰砸怎遭蚤泽糟燥小亚基曰抗病性曰叶绿素荧光曰栽怎酝灾
悦蕴韵晕陨晕郧 韵云 砸哉月陨杂悦韵 杂酝粤蕴蕴 杂哉月哉晕陨栽 郧耘晕耘 云砸韵酝 酝哉杂栽粤砸阅 粤晕阅 粤晕粤蕴再杂陨杂 韵云 陨栽杂
耘载孕砸耘杂杂陨韵晕 陨晕 砸耘杂孕韵晕杂耘 栽韵 栽哉砸晕陨孕 酝韵杂粤陨悦 灾陨砸哉杂 陨晕云耘悦栽陨韵晕
在匀哉 蕴藻蚤摇 再粤晕郧 允蚤灶早鄄澡怎葬摇 在匀粤晕郧 酝蚤灶早鄄枣葬灶早
渊蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 郧藻灶藻贼蚤糟泽 砸藻泽燥怎则糟藻泽 驭 云怎灶糟贼蚤燥灶葬造 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼 枣燥则 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则葬造 孕造葬灶贼袁 阅藻责葬则贼皂藻灶贼 燥枣 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则藻袁 在澡藻躁蚤葬灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 辕 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠
燥枣 匀燥则贼蚤糟怎造贼怎则葬造 孕造葬灶贼 郧则燥憎贼澡袁 阅藻增藻造燥责皂藻灶贼 驭 匝怎葬造蚤贼赠 陨皂责则燥增藻皂藻灶贼袁 酝蚤灶蚤泽贼则赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则藻袁 匀葬灶早扎澡燥怎袁 在澡藻躁蚤葬灶早摇 猿员园园圆怨冤
粤遭泽贼则葬糟贼院宰藻 糟造燥灶藻凿 贼澡藻 糟阅晕粤 藻灶糟燥凿蚤灶早 贼澡藻 砸怎遭蚤泽糟燥 泽皂葬造造 泽怎遭怎灶蚤贼 燥枣 造藻葬枣赠 皂怎泽贼葬则凿 葬灶凿 泽贼怎凿蚤藻凿 蚤贼泽 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬枣贼藻则
栽怎则灶蚤责 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽 渊栽怎酝灾冤 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援 栽澡藻 则藻泽怎造贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 枣怎造造鄄造藻灶早贼澡 糟阅晕粤 燥枣 砸怎遭蚤泽糟燥 泽皂葬造造 泽怎遭怎灶蚤贼 早藻灶藻 憎葬泽
愿源圆遭责 葬灶凿 糟燥灶贼葬蚤灶藻凿 葬灶 燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻 渊韵砸云冤 藻灶糟燥凿蚤灶早 员愿员 葬皂蚤灶燥 葬糟蚤凿泽袁 憎澡蚤糟澡 澡葬凿 贼憎燥 琢鄄澡藻造蚤曾藻泽袁 枣燥怎则 茁鄄泽澡藻藻贼泽袁
葬灶凿 泽燥皂藻 糟燥灶泽藻则增藻凿 则藻泽蚤凿怎藻泽援 宰蚤贼澡 贼澡藻 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶 燥枣 悦孕 蚤灶 怎责责藻则 泽赠泽贼藻皂蚤糟 造藻葬增藻泽 葬枣贼藻则 栽怎酝灾 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶袁 皂怎泽贼葬则凿
早则燥憎贼澡 憎葬泽 蚤皂责葬蚤则藻凿援 粤贼 贼澡藻 泽葬皂藻 贼蚤皂藻袁 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 砸怎遭蚤泽糟燥 泽皂葬造造 泽怎遭怎灶蚤贼 憎葬泽 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 遭藻枣燥则藻 远 凿葬赠泽 燥枣 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶
葬灶凿 贼澡藻灶 早则葬凿怎葬造造赠 凿藻糟则藻葬泽藻凿袁 憎澡蚤糟澡 泽怎早早藻泽贼藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 砸怎遭蚤泽糟燥 泽皂葬造造 泽怎遭怎灶蚤贼 责葬则贼蚤糟蚤责葬贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 则藻泽责燥灶泽藻 燥枣 皂怎泽贼葬则凿 贼燥
栽怎酝灾 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶援
运藻赠 憎燥则凿泽院皂怎泽贼葬则凿曰 砸怎遭蚤泽糟燥曰 增蚤则怎泽 则藻泽蚤泽贼葬灶糟藻曰 糟澡造燥则燥责澡赠造造 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻曰 栽怎则灶蚤责 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽
收稿日期院圆园员员鄄园源鄄园圆摇 接受日期院圆园员员鄄园愿鄄员园
基金项目院教育部新世纪优秀人才支撑计划渊允圆园园苑园圆园远冤
作者简介院朱摇 磊渊员怨愿员鄄冤袁男袁河南南阳人袁博士生袁主要从事芥菜抗 栽怎酝灾病害机理的研究遥 栽藻造院 园缘苑员鄄愿远园圆员源员怨曰耘鄄皂葬蚤造院 扎澡怎造藻蚤赃圆园缘岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院张明方渊员怨远远鄄冤袁男袁浙江湖州人袁教授袁主要从事西甜瓜种质资源的创新及芥菜遗传育种的研究遥 栽藻造院 园缘苑员鄄愿远怨苑员员圆猿曰 耘鄄皂葬蚤造院
皂枣扎澡葬灶早岳 扎躁怎援 藻凿怎援 糟灶
摇 摇 光合作用不仅和植物的生长发育有密切的关系袁
而且它在植物 原病毒互作中也发挥着十分重要的作
用咱员暂 遥 核酮糖 员袁缘鄄二磷酸羧化酶 辕加氧酶渊砸蚤遭怎造燥泽藻 员袁
缘鄄遭蚤泽责澡燥泽责澡葬贼藻 悦葬则遭燥曾赠造葬泽藻 辕 韵曾赠早藻灶葬泽藻袁简称 砸怎遭蚤泽糟燥冤
是光合作用中的关键酶咱圆暂 袁由多个大亚基渊 则遭糟蕴冤和小
亚基渊 则遭糟杂冤组成袁其中 则遭糟蕴由叶绿体基因编码袁则遭糟杂 由
核基因编码曰 则遭糟蕴 起催化作用袁而 则遭糟杂 具有调控
砸怎遭蚤泽糟燥活性的功能咱猿暂 遥 不同物种 则遭糟杂 基因的同源性
有较大的差异咱圆袁 源暂 袁并且有关 则遭糟杂 抗病机理的研究较
少遥 因此袁研究 则遭糟杂 的结构及功能袁不仅能了解光合
作用受病原物侵染的影响和机制袁还可为抗病研究提
供新思路遥
缘源怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
光照不但是病毒局部侵染和系统移动的必要条
件袁也是植物过敏反应渊匀赠责藻则泽藻灶泽蚤贼蚤增藻 则藻泽责燥灶泽藻袁 匀砸冤
和光合作用的前提咱缘暂 遥 有关植物光合系统的很多研
究指出袁接种病毒的叶片中袁病毒可以破坏光合系统域
进而影响植物的光合作用咱远袁 苑暂 曰而对于上部系统浸染
叶片光合机理的研究较少遥 本文着重研究了系统侵染
叶片光合机制和 则遭糟杂的变化遥
芜菁花叶病毒渊栽怎则灶蚤责 皂燥泽葬蚤糟 增蚤则怎泽袁 栽怎酝灾冤是马铃
薯 再病毒属的重要成员之一咱愿暂 遥 栽怎酝灾主要侵染十字
花科植物袁可严重侵染生长后期的叶用芥菜袁导致绝
收袁因此研究其侵染机理可为实际生产提供理论依据遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料及其处理
芜菁花叶病毒属于 悦匀在匀猿猿 分离种袁由陈集双教
授保存提供袁员源 号耐病芥菜品种由本实验室保存遥 以
草炭尧蛭石和珍珠岩 圆 颐 员 颐 员比例混合后的基质于温室
中培养芥菜幼苗遥 首先用 苑圆 孔穴盘育苗袁员园凿 后选择
大小一致尧长势良好的幼苗栽培于营养钵中袁每隔 员 周
浇施营养液一次遥 玻璃温室中的生长环境控制如下院
每天 员圆澡 光周期袁光强 远园园滋皂燥造窑皂 原圆窑泽 原员曰白天和黑
夜温度分别为院圆圆益 耀 圆缘益和 员缘益 耀 员苑益遥 三叶一心
期袁用 栽怎酝灾 病毒接种基部第一和第二片完全展开的
功能叶袁以磷酸缓冲液接种的植株渊酝燥糟噪冤为对照袁采
用传统的摩擦接种袁具体参照 栽葬灶等的方法咱怨暂 袁接种后
园尧猿尧远尧员圆 和 员缘凿 分别取上部第三片真叶测定相关指
标遥 试验每次选取 猿 株重复遥
员郾 圆摇 基因的克隆
砸怎遭蚤泽糟燥小亚基根据已经构建好的抗芜菁花叶病
毒 耘杂栽 文库中的 砸怎遭蚤泽糟燥 小亚基片段设计特异引物
杂孕猿袁同兼并引物 月圆远袁月圆缘渊英骏公司提供冤直接进行
巢式 孕悦砸反应袁扩增直接获得基因的 猿忆端遥 为了得到
基因的 缘忆端袁取反转录 糟阅晕粤袁纯化后用 栽凿栽试剂盒进
行 缘忆端加尾反应袁在 糟阅晕粤的 缘忆端加 责燥造赠悦遥 利用特异
引物 杂孕缘 和 粤粤孕袁粤粤孕郧渊英骏公司提供冤进行巢式孕悦砸反应扩增得到该基因的 缘忆端渊引物序列见表 员冤遥
得到的 孕悦砸 产物纯化处理后袁连接到 责酝阅员愿鄄栽 载体
渊栽葬运葬砸葬冤上袁然后转化到大肠杆菌感受态细胞 阅匀缘琢
中袁在涂有 陨孕栽郧 辕 载鄄早葬造 的含 粤皂责 的 蕴月 平板上尧猿苑益
避光恒温培养过夜袁随机挑取白色阳性克隆送由英骏
公司测序遥
用 阅晕粤酝粤晕缘郾 圆圆 软件对所得到的 猿忆和 缘忆端序列
进行分析和拼接袁得到该基因的全长袁然后根据全长序
列设计 缘忆和 猿忆端特异引物 杂孕遥 以 糟阅晕粤 为模板进行
全长的 孕悦砸 反应遥 将 孕悦砸 产物经过纯化尧克隆和双
向测序袁最后得到 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基 糟阅晕粤全长序列遥
表 员摇 引物列表
栽葬遭造藻 员摇 孕则蚤皂藻则泽
基因 早藻灶藻 描述 凿藻泽糟则蚤责贼蚤燥灶 登录号 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶燥援 引物序列 责则蚤皂藻则 责葬蚤则泽
杂孕猿 云院 缘忆鄄郧粤郧栽栽郧郧粤郧悦粤悦郧郧郧栽栽栽郧栽鄄 猿忆杂孕缘 云院 缘忆鄄栽栽悦郧郧栽粤粤郧郧栽悦粤郧郧粤粤郧郧栽粤粤郧粤鄄 猿忆
杂孕 云院 缘忆鄄 郧栽栽悦粤郧粤郧栽郧粤粤粤郧粤悦悦粤郧粤鄄 猿忆砸院 缘忆鄄 郧栽粤郧粤悦郧郧粤粤粤栽悦悦粤粤粤郧粤郧鄄 猿忆
杂孕员 砸栽鄄孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 燥枣 栽怎酝灾鄄悦孕 粤月员愿园园圆员 云院 缘忆鄄 栽粤悦粤粤悦栽栽悦粤栽粤粤悦悦悦悦栽郧粤粤悦郧悦鄄 猿忆砸院 缘忆鄄 郧悦粤郧粤栽郧粤粤粤悦郧悦栽栽郧粤悦郧悦粤郧鄄 猿忆
杂孕圆 匝砸栽鄄孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 燥枣 栽怎酝灾鄄悦孕 粤月员愿园园圆员 云院 缘忆鄄 栽粤悦粤粤悦栽栽悦粤栽粤粤悦悦悦悦栽郧粤粤悦郧悦鄄 猿忆砸院 缘忆鄄 郧悦粤郧粤栽郧粤粤粤悦郧悦栽栽郧粤悦郧悦粤郧鄄 猿忆
杂孕猿 匝砸栽鄄孕悦砸 责则蚤皂藻则泽 燥枣 则遭糟杂 匀匝源园源猿远员 云院 缘忆鄄郧悦粤粤悦郧郧粤郧郧粤粤郧粤郧栽栽粤郧悦鄄 猿忆砸院 缘忆鄄悦粤悦栽栽郧栽栽郧悦郧郧粤郧粤粤郧郧栽粤鄄 猿忆
圆缘杂 砸藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻 粤云员圆愿园怨源 云院 缘忆鄄悦郧郧栽栽悦悦栽悦栽悦郧栽粤悦栽粤郧郧栽栽郧粤鄄 猿忆砸院 缘忆鄄悦悦郧栽悦郧栽郧粤郧粤悦粤郧郧栽栽粤郧栽栽栽栽鄄 猿忆
粤糟贼蚤灶 砸藻枣藻则藻灶糟藻 早藻灶藻 粤云员员员愿员圆 云院 缘忆鄄悦郧悦悦郧粤郧悦郧郧郧粤粤粤栽悦郧栽悦鄄 猿忆砸院 缘忆鄄郧郧粤粤粤郧栽郧悦栽郧粤郧郧郧粤栽郧悦鄄 猿忆
员郾 猿摇 叶绿素荧光参数的测定
使用脉冲可调制式荧光测定仪渊云酝杂鄄圆曰匀葬灶泽葬贼藻糟澡
陨灶泽贼则怎皂藻灶贼泽袁运蚤灶早爷 泽 蕴赠灶袁 哉运冤测定叶绿素荧光参数遥
试验前先将植株暗适应 猿园皂蚤灶袁并设定相关参数如下院
饱和脉冲时间长 愿园园皂泽袁脉冲频率为 圆园泽袁脉冲光强
猿园园园滋皂燥造窑皂 原圆窑泽 原员袁作用光强为 员缘园滋皂燥造窑皂 原圆窑泽 原员遥
测定 孕杂域反应中心的实际光化学效率渊孕杂域冤袁参照
悦澡藻灶早等的方法进行计算咱员园暂 遥
远源怨
摇 缘 期 芥菜 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基的基因克隆及其在芜菁花叶病毒侵染后的表达分析
员郾 源摇 基因转录水平分析与荧光定量 孕悦砸
总 砸晕粤提取使用小量 砸晕粤 提取试剂盒渊天根生
物公司冤袁基因组 阅晕粤污染使用 砸晕藻葬泽赠 清除渊天根冤袁
然后用 酝鄄酝蕴灾 逆转录酶和 燥造蚤早燥渊凿栽冤员愿引物渊栽葬噪葬则葬冤
反转录合成第一链 糟阅晕粤遥 荧光定量引物 杂孕圆尧杂孕猿 和圆缘杂 则砸晕粤 根据 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎郾 早藻灶藻泽糟则蚤责贼郾 糟燥皂 辕提供的软
件设计袁挑选靠近 缘忆端的特异引物用于检测基因的相
对表达量遥 使用芥菜 圆缘杂 则砸晕粤 作为内参基因袁所有
设计的引物如表 员遥
图 员摇 不同物种 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基氨基酸序列的同源比对
云蚤早援 员摇 粤造蚤早灶皂藻灶贼 燥枣 贼澡藻 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 葬皂蚤灶燥鄄葬糟蚤凿 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 则遭糟杂
拟南芥渊晕酝赃园园员员圆缘愿缘怨冤院粤郾 贼澡葬造蚤葬灶葬曰萝卜渊载园远缘缘愿冤院砸郾 泽葬贼蚤增怎泽曰鼠耳芥渊载酝赃园园圆愿远愿苑圆怨冤院粤郾 造赠则葬贼葬曰甘蓝渊载园苑猿远苑冤院月郾 灶葬责怎泽曰白
菜渊粤月源猿怨圆怨园冤院月郾 则葬责葬曰芥菜渊匀匝源园源猿远员冤院月郾 躁怎灶糟藻葬遥 横线区域为 琢螺旋 粤和 月袁虚线区域为 茁折叠袁鄢 代表已知物种中高度保
守的氨基酸袁赞 代表 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基野类红冶和野类绿冶型高度差异位点遥
粤郾 贼澡葬造蚤葬灶葬院 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 渊晕酝赃园园员员圆缘愿缘怨冤曰 砸郾 泽葬贼蚤增怎泽院 砸葬责澡葬灶怎泽 泽葬贼蚤增怎泽 渊载园远缘缘愿冤曰 粤郾 造赠则葬贼葬院 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 造赠则葬贼葬 渊载酝赃
园园圆愿远愿苑圆怨冤曰 月郾 灶葬责怎泽院 月则葬泽泽蚤糟葬 灶葬责怎泽 渊载园苑猿远苑冤曰 月援 则葬责葬院 月则葬泽泽蚤糟葬 则葬责葬 渊粤月源猿怨圆怨园冤曰 月援 躁怎灶糟藻葬院 月则葬泽泽蚤糟葬 躁怎灶糟藻葬 渊匀匝源园源猿远员冤援
哉灶凿藻则造蚤灶藻凿 则藻泽蚤凿怎藻泽 糟燥皂责则蚤泽藻 燥枣 澡藻造蚤曾藻泽 粤 葬灶凿 月袁 葬灶凿 贼澡燥泽藻 贼澡葬贼 糟燥皂责则蚤泽藻凿 燥枣 茁鄄泽澡藻藻贼泽 葬则藻 凿则葬憎灶 遭赠 凿燥贼贼藻凿 造蚤灶藻援 栽澡藻 则藻泽蚤凿怎藻泽 糟燥灶泽藻则增藻凿 蚤灶
早则藻葬贼藻则 贼澡葬灶 怨缘豫 燥枣 葬造造 噪灶燥憎灶 泽皂葬造造鄄泽怎遭怎灶蚤贼 泽藻择怎藻灶糟藻泽 葬则藻 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 憎蚤贼澡 渊 鄢冤 遭藻造燥憎 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽援 栽澡燥泽藻 贼澡葬贼 泽澡燥憎 贼澡藻 早则藻葬贼藻泽贼
凿蚤增藻则早藻灶糟藻 遭藻贼憎藻藻灶 耶早则藻藻灶鄄造蚤噪藻爷 葬灶凿 耶则藻凿鄄造蚤噪藻爷 泽皂葬造造 泽怎遭怎灶蚤贼泽 葬则藻 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 憎蚤贼澡 渊 赞冤 遭藻造燥憎 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽援
杂贼藻责韵灶藻孕造怎泽荧光定量 孕悦砸渊匝砸栽鄄孕悦砸冤检测仪用
于采集和检测荧光表达遥 反应体系为 圆园滋造袁包括 员园滋造
的 杂再月砸 郧则藻藻灶 混合液 渊 栽葬噪葬则葬袁日本冤袁 员滋造 糟阅晕粤
渊猿园灶早 辕 滋造冤和 园郾 员滋造 的引物渊员园责皂燥造 辕 滋造冤遥 反应条件
为院怨缘益 猿皂蚤灶曰怨缘益 员园泽 和 缘怨益 源缘泽袁都 源园 个循环曰荧
光的采集在 缘怨益遥
员郾 缘摇 病毒外壳蛋白 砸栽鄄孕悦砸的表达分析
用 圆滋造提取的总 砸晕粤为模板进行反转录袁反转录
体积为 员园滋造遥 取 员滋造 为模板进行 孕悦砸 扩增 栽怎酝灾鄄悦孕
和 粤糟贼蚤灶袁所用 杂孕员 和 粤糟贼蚤灶引物见表 员遥 孕悦砸反应条件
如下院 怨源益预变性 圆皂蚤灶曰怨源益变性 猿园泽曰缘猿益退火 猿园泽曰
苑园益延伸 猿皂蚤灶曰圆愿 个循环袁最后 苑圆益延伸 员园皂蚤灶遥
员郾 远摇 数据分析
每个试验测定重复 猿 次袁求其均值遥 试验数据采
用 耘曾糟藻造软件进行标准误差的计算袁并用 韵则蚤早蚤灶孕则燥 苑郾 缘
作图软件绘图遥 采用 杂孕杂杂 员远郾 园 软件进行方差分析
渊粤晕韵灾粤冤和显著性分析渊蕴杂阅冤遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 芥菜 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基的克隆与分析
根据芥菜耐病品种 员源 号构建的抗 栽怎酝灾 文库中
的 耘杂栽 片段设计 猿忆和 缘忆砸粤悦耘渊 则葬责蚤凿 葬皂责造蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣
苑源怨
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
糟阅晕粤 藻灶凿泽袁糟阅晕粤末端快速扩增冤引物袁分别扩增得到
了 猿忆和 缘忆序列袁均约为 猿园园遭责 左右遥 通过比对和分析
重叠的区域袁我们利用 阅晕粤酝粤晕软件拼接得到了全长
糟阅晕粤序列曰根据得到的 糟阅晕粤 序列袁设计两端引物袁
用宝生物高保真酶扩增全部 悦阅杂遥 通过比对以上两条
序列发现袁结果完全一致遥
芥菜 砸怎遭蚤泽糟燥 小亚基渊匀匝源园源猿远员冤总长 愿源圆遭责袁根
据 阅晕粤酝粤晕 软件和 澡贼贼责院 辕 辕 憎憎憎郾 藻曾责葬泽赠郾 燥则早 辕 贼燥燥造泽 辕网
站对全序列进行分析袁该 糟阅晕粤 包括一个 缘源猿遭责 的开
放阅读框渊燥责藻灶 则藻葬凿蚤灶早 枣则葬皂藻袁 韵砸云冤袁其中起始密码子
粤栽郧从 员员缘遭责 开始袁终止密码子 栽粤粤 在 远缘愿遭责 处袁两
侧为非编码区遥 韵砸云 编码 员愿员 个氨基酸袁分子量为
圆园郾 员噪阅葬袁等电点为 愿郾 缘远袁包括 圆 个 琢 螺旋区域 粤 和
月袁源 个 茁折叠区域袁部分高度保守的氨基酸残基和不
同构像的差异位点遥 另外用芥菜 则遭糟杂 同已经发布的
相近物种 则遭糟杂 进行蛋白质序列同源比对发现袁芥菜
则遭糟杂同萝卜尧拟南芥尧甘蓝尧白菜和鼠耳芥的同源性分
别为院怨园郾 源豫 尧愿愿豫 尧怨圆郾 愿豫 尧怨源郾 缘豫和 怨园郾 源豫 渊图 员冤曰
同时根据以上物种的系统进化树的分析表明袁芥菜
则遭糟杂同甘蓝和白菜亲缘关系较近渊图 圆冤遥
图 圆摇 不同物种 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基的系统进化树
云蚤早援 圆摇 孕澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 贼则藻藻 葬灶葬造赠泽蚤泽 燥枣
则遭糟杂 枣则燥皂 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 泽责藻糟蚤藻泽
圆郾 圆摇 栽怎酝灾接种对芥菜上部叶片表观症状和病毒外
壳蛋白变化的影响
用荧光测定仪对上部侵染叶片的表观症状进行了
拍摄渊图 猿鄄粤冤袁同时测定了实际光化学效率渊椎孕杂域冤
的变化渊图 猿鄄月冤遥 结果显示袁随着接种时间的增加袁
椎孕杂域逐渐下降袁在接种第 员圆 天时显著下降且 员缘凿 时
达到最低袁椎孕杂域值约为 源援 远远曰而 酝燥糟噪 中 椎孕杂域值基
本保持稳定渊图 猿鄄粤袁月冤遥 说明 栽怎酝灾侵染影响了照光
下 孕杂域反应中心部分关闭情况下的实际光化学效率遥
此外袁栽怎酝灾接种后袁病毒外壳蛋白在上部未接种叶片
中的积累量呈现逐渐上升的趋势袁而 酝燥糟噪 中未检测
到 栽怎酝灾鄄悦孕 积累曰接种后 猿 耀 远凿袁栽怎酝灾鄄悦孕 的积累速
度较慢袁而 怨 耀 员缘凿袁栽怎酝灾鄄悦孕 的积累量迅速上升渊图
猿鄄悦冤遥
圆郾 猿摇 栽怎酝灾接种对上部叶片中 砸怎遭蚤泽糟燥 小亚基表达
水平的影响
用 匝砸栽鄄孕悦砸 的方法检测 栽怎酝灾 侵染后上部叶片
中 则遭糟杂相对表达量的动态变化情况遥 结果表明渊图
源冤袁则遭糟杂在接种后呈现先上升后下降的表达趋势袁在接
种 远凿后表达量显著增高袁约为 园凿 的 员圆援 愿 倍袁其后逐
渐下降袁在 员缘凿 时 则遭糟杂 下调表达到最低袁约为当天的
园郾 怨愿 倍遥
猿摇 讨论
砸怎遭蚤泽糟燥酶是光合作用中固定 悦韵圆 的关键酶袁同
时也参与植物的光呼吸代谢袁因此它调控和影响植物
光合作用效率遥 近年来袁有关光合作用的研究越来越
多咱员员暂 袁但有关芥菜 则遭糟杂 基因的研究尚未报道袁因此克
隆和分析芥菜 则遭糟杂袁可以为以后光合机制的研究奠定
基础遥 则遭糟杂的 圆 个 琢 螺旋位于结构域中的活性位点
上袁源 个 茁 折叠几乎在所有的 则遭糟杂 中都存在渊茁粤尧茁月尧
茁耘和 茁云冤曰 则遭糟杂 的空间折叠可以形成野类红冶和野类
绿冶圆 种活性的酶袁调控二氧化碳的固定曰此外袁那些位
于功能域中高度保守的氨基酸残基多存在于小亚基
中袁且多数保守残基与类红和类绿型小亚基的特性有
关袁部分残基也有在大亚基中发现咱员圆袁 员猿暂 遥
病毒侵染能够降低 椎孕杂域袁因此 椎孕杂域的变化也
被用来反映植物的伤害程度和抗性反应咱员源 耀 员远暂 遥 病毒
可以通过维管束进行系统移动侵染其他部位的植物组
织袁本研究发现 栽怎酝灾鄄悦孕在侵染后 员缘凿的系统叶片中
大量积累袁而 椎孕杂域逐渐下降袁表明 栽怎酝灾鄄悦孕 在上部
叶片中的积累可以破坏或抑制芥菜的正常生长遥 彭晏
辉等人指出袁孕灾再 侵染后袁马铃薯叶绿体结构受损和
叶绿素含量下降袁说明病毒侵染可以通过破坏光合机
构影响光合作用咱员苑暂 遥
砸怎遭蚤泽糟燥酶必须由大小亚基共同作用才能组合成
有功能的复合体袁而且其破坏和修复处于动态平
衡咱圆袁 员愿暂 遥 病毒侵染可以造成 椎孕杂域下降同时抑制
愿源怨
摇 缘 期 芥菜 砸怎遭蚤泽糟燥小亚基的基因克隆及其在芜菁花叶病毒侵染后的表达分析
图 猿摇 椎孕杂陨陨的实际光化学效率和 栽怎酝灾鄄悦孕积累水平在 栽怎酝灾接种后的差异变化
云蚤早援 猿摇 栽蚤皂藻糟燥怎则泽藻 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 责澡燥贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 择怎葬灶贼怎皂 赠蚤藻造凿 葬贼 责澡燥贼燥泽赠泽贼藻皂 陨陨 渊孕杂陨陨冤 渊椎孕杂陨陨冤 葬灶凿 栽怎酝灾鄄
糟燥葬贼 责则燥贼藻蚤灶 渊悦孕冤 早藻灶藻 贼则葬灶泽糟则蚤责贼蚤燥灶 葬枣贼藻则 蚤灶燥糟怎造葬贼蚤燥灶
粤院陨酝粤郧陨晕郧鄄孕粤酝拍摄的 椎孕杂陨陨表观图曰月院椎孕杂陨陨参数的动态变化图曰悦院病毒外壳蛋白积累水平的动态变化遥 粤 图圆圈代表荧光数据采
集的区域袁且测定数值标注在每幅图中曰白色横线图例约为 园援 缘 厘米曰彩色梯度标尺的不同颜色代表荧光信号的强度曰鄢代表在 园援 园缘豫
水平差异显著袁下同遥
粤院 砸藻责则藻泽藻灶贼葬贼蚤增藻 椎孕杂陨陨 蚤皂葬早藻泽 燥枣 枣则燥皂 贼澡藻 陨酝粤郧陨晕郧鄄孕粤酝曰 月院 栽蚤皂藻糟燥怎则泽藻 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 椎孕杂陨陨 责葬则葬皂藻贼藻则曰 悦院 糟澡葬灶早藻泽 燥枣 栽怎酝灾鄄悦孕 葬糟糟怎皂怎造葬贼蚤燥灶
造藻增藻造泽援 陨灶 枣蚤早怎则藻 粤 贼澡藻 糟蚤则糟造藻 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 贼澡藻 泽责燥贼 憎澡藻则藻 贼澡藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 葬灶凿 葬责藻则贼怎则藻 皂藻葬泽怎则藻皂藻灶贼泽 憎藻则藻 责藻则枣燥则皂藻凿 泽澡燥憎灶 葬泽 贼澡藻 凿葬贼葬 蚤灶 藻葬糟澡 枣蚤早怎则藻袁
杂糟葬造藻 遭葬则 越 园援 缘 糟皂曰 栽澡藻 糟燥造燥则 早则葬凿蚤藻灶贼 泽糟葬造藻 遭藻造燥憎 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 贼澡藻 皂葬早灶蚤贼怎凿藻 燥枣 贼澡藻 枣造怎燥则藻泽糟藻灶糟藻 泽蚤早灶葬造 则藻责则藻泽藻灶贼藻凿 遭赠 藻葬糟澡 糟燥造燥则曰 粤泽贼藻则蚤泽噪 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽
泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼 凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 缘豫 造藻增藻造袁 葬灶凿 贼澡藻 泽葬皂藻 葬泽 枣燥造造燥憎蚤灶早 枣蚤早怎则藻泽援
怨源怨
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员员袁圆缘渊缘冤院园怨源缘 耀 园怨缘园
图 源摇 栽怎酝灾侵染芥菜后上部叶片中
砸怎遭蚤泽糟燥小亚基的相对表达量
云蚤早援 源摇 砸藻造葬贼蚤增藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 则遭糟杂 蚤灶
怎责责藻则 造藻葬增藻泽 燥枣 皂怎泽贼葬则凿 葬枣贼藻则 栽怎酝灾 蚤灶枣藻糟贼蚤燥灶
砸怎遭蚤泽糟燥酶活性和光合作用咱远袁 员怨暂 遥 栽怎酝灾 侵染后 则遭糟杂
上调表达袁表明 则遭糟杂 响应了病毒的侵染袁而 则遭糟杂 的大
量表达则有利于维持和稳定 砸怎遭蚤泽糟燥 酶的活化构像曰
接种后 员缘凿时 则遭糟杂表达降低袁可能是由于 栽怎酝灾 侵染
造成的破坏抑制了 则遭糟杂修复曰同时 则遭糟杂 表达受抑制必
然会影响 砸怎遭蚤泽糟燥 的活性袁因此 则遭糟杂 可能参与到芥菜
受 栽怎酝灾 侵染后的抗性反应中遥 此外袁则遭糟杂 受细胞核
基因的编码和调控袁在受病毒侵染后不同程度的响应
说明该基因参与了植物与病原菌的互作遥 然而袁有关
则遭糟杂在抗病中的具体功能仍有待深入的分析和研究遥
源摇 结论
综上分析袁芥菜 则遭糟杂 包括 圆 个 琢 螺旋袁源 个 茁 折
叠袁及一些高度保守的氨基酸残基袁其序列同白菜和甘
蓝的 则遭糟杂同源性较高遥 栽怎酝灾侵染后袁随着 悦孕在上部
未接种叶片积累量的上升袁实际光化学效率 椎孕杂域下
降袁而 则遭糟杂 的表达呈现先上升后下降的趋势遥 表明
则遭糟杂参与了芥菜对 栽怎酝灾侵染的响应遥
参考文献院
咱 员 暂 摇 沈摇 喜袁 李红玉援 病毒侵染后植物叶绿体光合作用变化的分子
机制咱允暂 援 植物病理学报袁 圆园园猿袁 猿猿院 圆愿怨 原 圆怨员
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孕造葬灶贼 允袁 圆园园远袁 源缘院 猿圆园 原 猿猿源
咱 远 暂摇 王春梅袁 施定基袁 朱水芳袁 田 波袁 魏宁生援黄瓜花叶病毒对烟草
叶片和叶绿体光合活性的影响咱 允暂 援 植物学报袁 圆园园园袁 源圆渊源冤院
猿愿愿 原 猿怨圆
咱 苑 暂摇 郭兴启袁 温孚江袁 朱汉城援烟草感染马铃薯 再 病毒渊孕灾再冤后光
合作用的变化规律咱允暂 援 浙江大学学报袁 圆园园园袁 圆远渊员冤院 苑缘 原 苑愿
咱 愿 暂摇 赵建平袁 周钗美袁 陈集双袁 郭得平援芜菁花叶病毒渊栽怎酝灾冤特性
的研究进展咱允暂 援 微生物学通报袁 圆园园源袁 猿员渊远冤院 员园园 原 员园源
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咱员员暂摇 朱雪云袁 王 燕袁 陈利萍援 榨菜和紫甘蓝种间周缘嵌合体光合特
性研究咱允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊圆冤院源园员 原 源园远
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咱员缘暂摇 付东亚袁洪 健袁陈集双袁 吴建祥援芜菁花叶病毒外壳蛋白在寄主
植物叶绿体中的积累及其对光系统域活性的影响咱 允暂 援 植物生
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圆园员园袁 圆猿院 猿怨 原 源愿
咱员苑暂摇 彭晏辉袁 雷娟利袁 黄黎锋袁 喻景权援马铃薯 再病毒侵染对叶绿体
超微结构尧光合和荧光参数的影响咱 允暂 援 植物病理学报袁 圆园园源袁
猿源渊员冤院 猿圆 原 猿远
咱员愿暂摇 栽葬噪葬澡葬泽澡蚤 杂袁 酝怎则葬贼葬 晕援 匀燥憎 凿燥 藻灶增蚤则燥灶皂藻灶贼葬造 泽贼则藻泽泽藻泽 葬糟糟藻造藻则葬贼藻
责澡燥贼燥蚤灶澡蚤遭蚤贼蚤燥灶钥 咱允暂 援 栽则藻灶凿泽 孕造葬灶贼 杂糟蚤袁 圆园园愿袁 员猿院 员苑愿 原 员愿圆
咱员怨暂摇 冯 岩袁 侯喜林袁马景蕃袁 杨学东援芜菁花叶病毒侵染对不结球白
菜光合及荧光特性的影响 咱 允暂 援 江苏农业学报袁 圆园员园袁 圆远渊猿冤院
缘园愿 原 缘员员
渊责任编辑摇 高美须摇 裴颖冤
园缘怨